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15/03/2010

E Espectrofotometría f í
Daniel Olave
Tecnología Médica 2007

„

INTRODUCCIÓN Espectrofotometría
Es la medida de la cantidad de energía radiante absorbida por las moléculas a longitudes de onda específicas. La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones biológicas.

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La espectrofotometría de emisión atómica La espectrofotometría absorción atómica La espectrofotometría p de masas La espectrofotometría de fluorescencia de rayos X Espectrofotómetro „ El espectrofotómetro es un instrumento usado en la fí i ó física óptica ti que permite it comparar la l radiación di ió absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto.15/03/2010 Tipos de Espectrofotometría „ „ „ „ „ „ „ La espectrofotometría de absorción de infrarrojos La espectrofotometría por resonancia magnética nuclear l (RMN) La espectrofotometría de fluorescencia. y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia en función de la longitud de onda 2 .

15/03/2010 Los componentes esenciales de un espectrofotómetro son : „ „ „ „ „ „ „ Una fuente estable de energía radiante Un sistema de lentes. que definan. Espectrofotómetro 3 . Un componente transparente a la radiación que contenga la muestra Un detector de radiación o transductor que recibe la señal de radiación electromagnética y la convierte en una señal eléctrica de magnitud proporcional a la intensidad de la radiación recibida. Un sistema amplificador que produzca o genere una señal eléctrica mucho mayor a la señal recibida Un sistema de lectura tal como: Una escala de aguja. un sistema de dígitos o una computadora. que transforme la señal eléctrica en una señal que el operador pueda interpretar. colimen (hagan g paralelo) y enfoquen el haz de radiación y un monocromador que separe la radiación de bandas estrechas de longitud de onda. un registrador. espejos y aberturas (Slits ).

15/03/2010 Esquema de un espectrofotómetro de un solo haz y de doble haz CELDAS 4 .

eléctrica.15/03/2010 Diagrama de funcionamiento del espectrofotómetro de un solo haz. Métodos Espectroscópicos „ Los métodos espectroscópicos de análisis se basan en la medida de la radiación electromagnética emitida o absorbida por la materia. Los métodos de emisión utilizan la radiación emitida cuando un soluto es excitado por energía térmica. o energía radiante. „ 5 .

6 . están basados en la disminución de la potencia (o atenuación) ió ) de d la l radiación di ió electromagnética l é i como consecuencia de la absorción que se produce en su interacción con el soluto. „ Métodos Espectroscópicos „ Los métodos espectroscópicos se consideran como una de las mejores y más utilizadas técnicas instrumentales a disposición del científico.15/03/2010 Métodos Espectroscópicos „ Los métodos de absorción. para la adquisición de información tanto cuantitativa como cualitativa. por el contrario. Los métodos de absorción poseen la considerable ventaja de producir prod cir poca o ninguna ning na alteración en el sistema estudiado.

i d l las más á i importantes l las regiones i d de: rayos X. infrarroja infrarroja. microondas Radiofrecuencia. El Espectro Electromagnético 7 . ultravioleta.15/03/2010 „ „ „ „ „ „ „ Los métodos espectroscópicos se clasifican según la región del espectro electromagnético que esté i li d siendo implicada. visible.

15/03/2010 Color de la sustancia „ El color de las sustancias se debe a que éstas absorben b b ciertas i t l longitudes it d de d onda d de d la l luz l blanca bl que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida COLORES DE LA LUZ VISIBLE 8 .

la cantidad de energía luminosa absorbida por el medio varía en forma directamente proporcional a la distancia recorrida. Leyes Fundamentales de la Absorción „ Ley de Lambert: cuando un haz de luz atraviesa un medio absorbente de concentración constante. Energía absorbida α b 9 . capta selectivamente ciertas frecuencias de la radiación electromagnética. en un medio transparente.15/03/2010 Leyes Fundamentales de la Absorción „ Se denomina absorción al proceso por el cual una especie.

la cantidad de energía luminosa absorbida por el medio varia en forma directamente proporcional a la concentración del absorbente en el medio Energía absorbida α [C] Transmitancia „ es la fracción de radiación insidente transmitida por la l solución. l ió por l lo general ll la transmitancia i i se expresa en porcentaje.15/03/2010 Leyes Fundamentales de la Absorción „ Ley y de Beer: cuando un haz de luz atraviesa un medio absorbente de espesor constante. Esta definida por la ecuación: T= P / P0 T= 1010-A %T= T * 100 10 .

la absorbancia de una solución que aumenta la atenuación del haz esta definida por la ecuación: A= Log P0 / P A= Log 1/T Absorvatividad y Absorvatividad Molar „ la absorbancia es directamente proporcional a la trayectoria de la radiación a través de la solución y a la concentración de la especie que produce la absorbancia.15/03/2010 Absorbancia „ Es la medida de la energía radiante que es absorbida b b d por un material l o una superficie f como función de la longitud de onda de dicha energía. Esta definida por la ecuación: A= abC ( g/lt ) a= A/bC 11 . A diferencia de la transmitancia.

la absorvatividad se denomina absorvatividad molar y se representa con el símbolo “Є”. b ti id d Cuando C d se expresa l la concentración t ió en moles / litro y la trayectoria a través de la celda en cm. En consecuencia cuando “b” se expresa en cm.. lit A= ЄbC (mol/lt) Є= A/ bC C= A/ Єb Curva Estandar 7 6 Absorbancia 5 4 3 2 1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Concnetración (moles/lt) 12 . y “C” en moles/ l / litro.15/03/2010 Donde: a: constante de proporcionalidad llamada absorvatividad.