UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS (UNIVERSIDAD DEL PERÚ, DECANA DE AMERICA) FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ENSAYO DE EFICACIA EN PRODUCTOS DESINFECTANTES
CÁTEDRA DE MICROBIOLOGÍA

CURSO: MICROBIOLOGÍA APLICADA

INTEGRANTES
Cardenas Camacho Cynthia Castillo Laborio Mayrelli Cieza Heredia Maria del Rosario Chaupis Pahuachon Kenneth David Loayza Sosa Luis Salvador Valdivia Angulo Rosa Villar Arias Mayra

MICROBIOLOGÍA APLICADA

agentes activos sobre la pared celular y material nuclear. El rotulo suele indicar los grupos de microorganismos contras los que actúa de manera eficaz el desinfectante. Objetivos Específicos: 1. Para la mayoría de los propósitos las tres bacterias utilizadas en esta prueba son Salmonella choleraesuis. Agentes activos sobre la membrana celular. Tiempo de contacto: los m. el estándar actual es la prueba de utilidad de la dilución de la American Official Analytical Chemist. Existe la necesidad de evaluar la eficacia de los desinfectantes y los antisépticos. INTRODUCCIÓN MICROBIOLOGÍA APLICADA Se define como desinfección proceso mediante el cual se produce la eliminación o destrucción de agentes infecciosos y contaminantes que se encuentran fuera del organismo. álcalis. Es necesario recordar que la concentración de un desinfectante influye en su actividad. produce desorganización de la membrana. Determinar la eficacia bactericida de la solución QUATVET con respecto al tiempo óptimo requerido frente a cepas de Staphylococcus aureus ATCC. reacción del medio (pH). no mueren instantáneamente ni simultáneamente.[ENSAYO DE EFICACIA EN PRODUCTOS DESINFECTANTES] I. de modo que siempre se lo debe diluir exactamente según las indicaciones del fabricante. La concentración.o. Staphylococcus aureus y Pseudomona aeroginosa. sigue una curva con pendiente constante en la que el número de m. muertos en cada fracción de tiempo es un porcentaje constante del número de m. influencia de sustancias presentes son algunas de los factores. Lamentablemente son pocos los agentes químicos que logran la esterilidad. Existen factores que inciden sobre la actividad antimicrobiana. alcoholes. agentes oxidantes.o. No existe un desinfectante único que sea apropiado para todas las circunstancias. realizando la prueba de dilución “in use” en condiciones controladas de tiempo. temperatura. La cinética de muerte de un tipo de m. El mecanismo de acción de los desinfectantes suelen ser complejos. Durante muchos años la prueba de referencia fue la prueba del coeficiente fenólico. metales pesados y agentes alquilantes (formaldehído y glutaraldehído). vivos al comienzo del período. Los agentes químicos se utilizan para el control del crecimiento microbiano tanto en tejidos vivos como en objetos inanimados. por la aplicación directa de medios físicos y químicos. halógenos. ácidos. Un problema frecuente en la desinfección es la selección de un agente. la mayor parte de ellos sólo reducen las poblaciones microbianas a niveles seguros o eliminan las formas vegetativas de los patógenos. Sin embargo. que comparaba la actividad de un desinfectante dado con la del fenol. OBJETIVOS Objetivo general: Evaluar la eficacia letal del desinfectante QUATVET en cepas bacterianas ATCC. 6538 1 . sales de metales pesados dentro de un grupo enzimático o proteínas encontramos a los agentes oxidantes. alcoholes. fenoles y derivados.o. II.o. Mediante la lectura del rotulo del envase es posible obtener bastante información acerca de las propiedades de un desinfectante.

3. Determinar la eficacia bactericida de la solución QUATVET con respecto al tiempo óptimo requerido frente a cepas de Pseudomona aeruginosa ATCC 8735. Determinar la eficacia bactericida de la solución QUATVET con respecto al tiempo óptimo requerido frente a cepas de Escherichia coli ATCC 5922. 5. Se evalúa la eficacia porcentual del desinfectante variando el tiempo de exposición (se toma 4 puntos 0. Determinar la eficacia bactericida de la solución QUATVET con respecto al tiempo óptimo requerido frente a cepas de Bacillus subtilis (ATCC 6633).[ENSAYO DE EFICACIA EN PRODUCTOS DESINFECTANTES] MICROBIOLOGÍA APLICADA 2. DISEÑO METODOLÓGICO a) Materiales: Desinfectante: QUAVET® Microorganismo: Staphylococcus aures. Escherichia Pseudomona aeruginosa. Las cepas evaluadas fueron: Staphylococcus aureus ATCC 6538. Beaker 250 mL Pipetas 1mL y de 2mL Bombilla Estufa a 36°C + 2 Asa de col Pipetas estériles Cronometro Matraz Erlenmeyer Materiales de protección ( gorro. Bacillus subtilis ATCC 6633.1 La determinación de la actividad antimicrobiana se efectuó poniendo en contacto los microorganismos en concentraciones de 106ufc/mL con el producto en estudio. c) Método de Dilución en Uso 1º Descripción: 2 . Escherichia coli ATCC 25922. 4. Pseudomona aeruginosa ATCC 8735. en volúmenes iguales (1mL de microorganismo y 1mL del desinfectante) sacando una alícuota de la suspensión a los tiempos establecidos y sembrando en medio de cultivo TSA con incubación a 36°C + 2 durante 18 a 24 horas. b) Metodología Para comprobar la eficacia de los desinfectantes se utiliza el método de dilución “in use” para la evaluación de la actividad bactericida. III. Bacillus subtilis. se aplicará la eficacia porcentual a los tres últimos puntos). guantes y mascarilla) Piseta Agua destilada Placas petri con medio de cultivo TSA coli.10 y 15 minutos. Se trabajó con Glutaraldehído diluido al 1% mezclado con sales de amonio cuaternario.

Mientras transcurre los 5 minutos. Lugo de realizado este procedimiento. Dividir la placa petri con TSA en 4 partes iguales. Agregar 1 mL de la solución al 1% que preparamos a partir del QUAVET®. 6. 3. respectivamente. Dividir la placa petri con TSA en 4 partes iguales. Agregar al 2do cuadrante la mezcla del microorganismo-solución desinfectante. En el primer cuadrante. • Amonio Cuaternario: 6 gr • Formaldehído: 3 gr • excipientes c. 4. Lugo de realizado este procedimiento. llevar a la estufa a 35 +/. Agregar al 2do cuadrante la mezcla del microorganismo-solución desinfectante. 4. 3º Acción del desinfectante QUATVET®: 1. llevar a la estufa a 35 +/. Ya transcurrido los 5 minutos. Agregar 1 mL de la solución al 1% que preparamos a partir del QUAVET®. Marcar cada cuadrante para evitar cualquier error. 6. Empezar el conteo de 5 minutos.s. Empezar el conteo de 5 minutos.2 x 24 horas 2º Preparación del Glutaraldehído al 1 %: • Cada 100 mL contiene: • Gluraldehído : 12 gr. 2.2 x 24 horas. Realizar el mismo procedimiento descrito en el punto 4 a los 10 y 15 minutos en el 3er y 4to cuadrante. Realizar el mismo procedimiento descrito en el punto 4 a los 10 y 15 minutos en el 3er y 4to cuadrante. Ya transcurrido los 5 minutos. 3. Mientras transcurre los 5 minutos. inocular el microorganismo. 5. En el primer cuadrante.p 100 mL Composición Hallar los cálculos respectivos Preparación • Agregar 8. 2. respectivamente. Marcar cada cuadrante para evitar cualquier error. 3 .3 mL de la Soluciñon de QUAVET a 100mL de agua destilada. inocular el microorganismo.[ENSAYO DE EFICACIA EN PRODUCTOS DESINFECTANTES] MICROBIOLOGÍA APLICADA 1. 5.

I II IV • Tiempo: 15 minutos • Se sembró la solución de microorganismo-solucion al 1% de QUATVET • Se observó que no habia presencia de ningun microorganismo. establecidas según normas vigentes. Bacillus subtilis. RESULTADOS A. Acción del desinfectante QUATVET® al Staphylococcus aureus • Tiempo: 0 minutos • Siembra solo del microorganismo • se observó creciemiento de 16 colonias de Staphylococcus aureus • Tiempo: 5 minutos • Se sembró la solución de microorganismo-solucion al 1% de QUATVET • Se observó que no habia presencia de ningun microorganismo. excepto a la de Bacillus subtilis. B.[ENSAYO DE EFICACIA EN PRODUCTOS DESINFECTANTES] MICROBIOLOGÍA APLICADA IV. Realizando la prueba de Dilución en uso. En el presente trabajo se ha evaluado la eficacia letal del Glutaraldehído diluido al 1% frente a cuatro cepas de referencia ATCC (ya que estos cumplen la condición de ser sensibles a los agentes químicos): Staphylococcus aureus. desinfección de áreas o ambientes de fabricación de productos estériles. III • Tiempo: 10 minutos • Se sembró la solución de microorganismo-solucion al 1% de QUATVET • Se observó que no habia presencia de ningun microorganismo. Escherichia coli. Pseudomona aeruginosa. con la empleada en este estudio frente a todas las cepas. Podemos observar muy poca diferencia entre las concentraciones establecidas como óptimas de Glutaraldehído utilizadas en la esterilización de material clínico delicado y de superficies de alto riesgo hospitalario. 4 .

5 . se observa que el Glutaraldehído 1%. Acción del desinfectante QUATVET® a Escherichia coli . T0:0 T0:5 Tiempo de exposición Resultado en UFC 0 minutos 5 minutos 10 minutos 15 minutos T0:15 52 ---------------------------------------------------------------------- . presenta una adecuada eficacia bactericida y con tiempos de exposición superiores a los 5 minutos para Pseudomona aeruginosa ATCC 8735. D. TIEMPO (minutos) GLUTARALDEHÍDO 1% . T0:10 . . T0:0 T0:5 Ufc/placa 0 5 10 15 17 1 1 0 T0:15 T0:10 .[ENSAYO DE EFICACIA EN PRODUCTOS DESINFECTANTES] MICROBIOLOGÍA APLICADA C. Acción del desinfectante QUATVET® a Pseudomona aeruginosa De acuerdo a la tabla.

6 . Los agentes antimicrobianos designados como desinfectantes son a veces utilizados alternativamente como agentes esterilizadores. la adición de surfactantes permite una mayor penetración del aldehído a través de la pared celular. muy eficiente en el control de los microorganismos patógenos usuales y muy efectivo con un correcto programa de higiene. En un estado ácido. incrementado su actividad. El mecanismo de acción microbicida del glutaraldehído se basa en sus dos grupos toxofóricos (aldehídos) los cuáles pueden interaccionar con los constituyentes de la célula microbiana. MICROBIOLOGÍA APLICADA TIEMPO (MINUTOS) 0 5 10 15 QUATVET Ufc/placa 50 42 38 34 V. QUAVET ®. agentes de saneamiento o antisépticos. De los resultados obtenidos podemos observar que el QUAVET®.[ENSAYO DE EFICACIA EN PRODUCTOS DESINFECTANTES] E. amonio cuaternario y formaldehido (en proporción de 4:2:1) que también son desinfectantes los tres tienen un amplio espectro de acción. Acción del desinfectante QUATVET® a Bacillus subtilis. como por ejemplo los grupos amino y tiol de las proteínas. DISCUSIÓN La desinfección es el proceso que consiste en eliminar a microorganismos infecciosos mediante el uso de agentes químicos o físicos. deseábamos comprobar la eficacia de un desinfectante. Dentro de los surfactantes disponibles para la combinación con aldehídos están incluidos los agentes catiónicos. En la práctica se trabajó con QUATVET desinfectante concentrado que en su composición contiene glutaraldehído. en nuestro caso. no están influenciados por la temperatura y son apto para todo tipo de superficie. tienen una gran acción antimicrobiana debido a que no se observó ningún crecimiento de Staphylococcus aureus en ningún cuadrante. En la práctica presente. en especial el Glutaraldehído y los demás componentes.

aeruginosa en menos de 1 minuto. aeruginosa. capaz de aniquilar cepas de P. realizando pruebas “in vitro”. en 20 minutos de exposición a esta baja concentración se inactivó más de 104 ufc. que tiene la capacidad de formar endosporas de gran resistencia . cuyo mecanismo de acción es la alquilación de los grupo amino. definiendo experimentalmente el tiempo de exposición del desinfectante.10 y 15 minutos.que le proporciona una gran ventaja para subsistir en condiciones extremas. 4. Demostró la eficacia de una solución de Glutaraldehído al 0. Se han hecho estudios donde se midieron las concentraciones mínimas inhibitorias (CIM) que presentan tanto las Gram positivas como las Gram negativas.como se evidenció en la práctica frente al glutaraldehído.6 La rápida actividad bactericida de la solución del Glutaraldehído a 2% está bien reportada.Pseudomonas aeruginosa es más resistente a la mayoría de estos agentes. La mayoría de estudios indican que el Glutaraldehído al 1 – 1.10 En la práctica se trabajó con glutaraldehido al 1% en tiempos de 5. El glutaraldehído es un desinfectante de alto nivel ampliamente aceptado.02% alcalinizada sobre P..7 Un estudio realizado por Rubbo eat col. debido a que el Glutaraldehído se va diluyendo con el uso. La solución QUATVET es eficaz frente a las colonias de Staphylococcus aureus durante un tiempo mayor o igual a 15 minutos.9 Esta forma de vida microbiana (endospora) tiene una alta resistencia frente a los desinfectantes . VI. y se estableció que hay diferencias marcadas entre Staph. 2. La solución QUATVET es eficaz frente a las colonias de Escherichia coli durante un tiempo mayor o igual a 15 minutos. CONCLUSIONES 1. diamidinas y triclosán. Se evaluó la eficacia letal de la solución QUATVET. hexaclorofeno. altera el ARN y ADN y síntesis de proteínas.8 El Bacillus subtilis está considerado como un microorganismo ubicuo. 7 .5 % es la Concentración Mínima Eficaz (CME) y al 2% si se usa como desinfectante de alto nivel en instrumental médico. De acuerdo a artículos encontrados las bacterias Gram negativos son por lo general son más resistentes a los antisépticos y desinfectantes que las gran positivas. aeruginosa durante un tiempo mayor o igual a 15 minutos. 3. Dichas condiciones no fueron las apropiadas para la correcta acción del desinfectante frente a las cepas de Bacillus subtilis. aureus y E. coli a los compuestos de amonio cuaternario (CAC). con un nivel alto de desinfección a los 30 minutos y es inactivado por dilución. saprófito y no patógeno humano. pero poca diferencia en la susceptibilidad a la clorhexidina.[ENSAYO DE EFICACIA EN PRODUCTOS DESINFECTANTES] MICROBIOLOGÍA APLICADA En cuanto a Escherichia coli el ensayo demostró la efectividad del desinfectante hasta el minuto 15 (no fue evaluado a mayor tiempo) ya que no hubo crecimiento de Escherichia coli (microorganismo en evaluación) esto se pudo deber a que los tres componentes antes mencionados se potencian actuando sinérgicamente proporcionando una amplia acción antimicrobiana que evita el crecimiento de dicha bacteria. cuya concentración de uso no puede ser inferior al 2%. La solución QUATVET es eficaz frente a las colonias de P. reforzando la necesidad que los equipos semicríticos se desinfecten con una concentración mínima eficaz. incluyendo la clorhexidina es por ello que es necesario su sinergismo para obtener mejores resultados.

30: 78 – 87. Christine L. Bogotá. María Pilar. Ed.com/Archivos%20zip/Desinfectantes%20y%20Antis%C3%A9ptico s. durante un tiempo mayor o igual a 15 minuto. Quintero.scielo. visto en: http://www. J. pdf revisado el 06/04/2013. Appl Microbial.html 4. Argentina. Pp 46. 8. Desinfectantes Y Antisépticos. Julio Alberto Nieto. 10.1967.edu. Borick PM. C. La resistencia de bacterias a antibióticos. Berdell R. Buenos Aires.04 6. AOAC International. Tortora. Lerma. Gustavo A. 2005.org. 7. Cristina.Zillmann Geerdts. 5. antisépticos y desinfectantes una manifestación de los mecanismos de supervivencia y adaptación. Javier. Gisela. 2006. Adv.pdf 8 . novena edición. Wilfried Paulus . Gerard J. Gardner JF. Use Dilution Method. Gallardo.a. 3. Rubbo SD.Núñez Asecio. Chemical sterilizer (chemosterilizers).1993.agro. Nº 361.ar/catedraspdf/AGENTES-ANTIMICROBIANOS. disponible en: http://www. Juan Enrique.c. vol. Médica Panamericana. 35-42. Andrés Edmundo. Pág: 200-204 11. editorial medica panamericana. 1968. 2001. Med. Testing Disinfectants.corporationss. Webb RL.38 no. ISSN 0300-5755.unlpam. Zúñiga. Biocidal activities of glutaraldehyde and related compounds.Cortés Jorquera. Control in vitro de la eficacia del glutaraldehído como desinfectante de alginato. Funke. 10: 291 – 312 9. VII. 2007. 2007.elgotero.pharmavetcorporation. Introduccion a la microbiología. Infección en cirugía. Rommel. Agentes antimicrobianos. Colomb.2. BIBLIOGRAFÍA 1.. Carlos H. Fabián Gómez. págs.[ENSAYO DE EFICACIA EN PRODUCTOS DESINFECTANTES] MICROBIOLOGÍA APLICADA 5.2 Cali Jan. Case. Disponible en: http://www. 2.15. González. Estudio de la efectividad de desinfectantes de amonio cuaternario y glutaraldehído frente a cepas de origen alimentario. Cabrera.6. J Appl Bacteriol. S. Disponible en: http://www. p.net/products.co/scielo. AOAC Official Method 955. La solución QUATVET es eficaz frente a las colonias de Bacillus subtilis./Mar. A. Pfister R. Pharma –vet. 50-5.Microbicides for the protection of material.php?pid=S165795342007000200008&script=sci_arttext.