UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA Memento ascendere semper MICROBIOLOGÍA II INTEGRANTES:    González Muñoz Yadira Alexandra Jaramillo Riofrio

Andrea Carolina Saritama Ramírez Gabriela Alejandra PRACTICA II TÉCNICA ASÉPTICA DE AISLAMIENTO INTRODUCCIÓN Métodos de inoculación Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el medio de cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el cultivo. (Espinal G. 2005.) Las técnicas microbiológicas se utilizan para detectar si hay microorganismos sobre una muestra y para identificarlos y cuantificarlos. Por tanto, el primer paso en el estudio microbiológico será aislar las diferentes especies de microorganismos que haya en la muestra. La técnica para el aislamiento comienza preparando un inóculo de siembra, que es la deposición de una pequeña porción de la muestra en el medio o en los medios de cultivo adecuado, en función de las especies microbianas que se espera encontrar. (P. García M. 2009) (Espinal G. 2005.) La inoculación consiste en tomar una pequeña porción de la muestra y diluirla para dispersarla y que crezca con más facilidad en el medio de cultivo adecuado. Se puede inocular en medio líquido o en medio sólido. Hay diferentes métodos dependiendo del objetivo que se persiga con la siembra. (Prats G. 2006.) OBJETIVOS    Familiarizarse con el manejo de microorganismos y con las técnicas d aislamiento en placa de Petri y tubos. Obtener colonias separadas, utilizando uno o más métodos. Aprender a inocular distintos medios de cultivo contenidos en tubo: caldo, agar inclinado y medio semisólido sembrado en profundidad. GRUPO: 5

. Flameamos la boca del tubo para evitar contaminaciones. Tomamos el tubo de tal manera que los dedos índice y meñique de la mano destapen el tubo.UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA Memento ascendere semper MATERIALES           Agar sangre con varios tipos de colonias Agar nutritivo Agar inclinado (manitol o Kligler) Cultivo mixto en un tubo con caldo TS (gram negativos y gram positivos) Tubos con caldo TS Tubo con cultivo en caldo Agar inclinado con cultivo bacteriano (Manitol o Kligler) Asa Bacteriológica Mechero Bunsen Estufa FLUJOGRAMA TÉCNICA DE AISLAMIENTO EN TUBOS Para todas estas técnicas se debe partir de sepas aislada TOMA DE MEDIO LÍQUIDO DE UN TUBO CON CULTIVO Esterilizamos la aza bacteriológica con la ayuda de una lámpara de alcohol hasta que esta se torne de color rojo vivo. Tomamos el inoculo con el aza bacteriológica previamente enfriada y sin asentar sobre ninguna superficie la tapa de tubo Finalmente flameamos nuevamente la boca del tubo y el asa para evitar contaminaciones y tapamos el tubo de la misma manera en que fue abierto.

El proceso se inicia en el fondo sin picar el mismo y se va avanzando hacia arriba por el área inclinada.UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA Memento ascendere semper INOCULACIÓN EN UN TUBO CON MEDIO LÍQUIDO Una vez tomado el inoculo procedemos a sembrarlo en el medio liquido correspondiente. Finalmente flameamos el asa antes de colocarla en su lugar para evitar contaminaciones . Inclinamos el tubo de tal manera que formemos un ángulo de 45° dentro del mismo Precisamente en el vértice del ángulo formado es en donde vamos a inocular el microorganismo deseado Agitamos tubo un poco el Finalmente retiramos el aza y la flameamos antes de ponerla en su lugar y colocamos e tubo en forma vertical. INOCULACIÓN EN UN TUBO CON MEDIO SÓLIDO (AGAR POSICIÓN PICO Y FLAUTA) Con el asa de siembra estéril tomar los microorganismos de la muestra Inoculamos en el tubo realizando un movimiento de zig-zag en la superficie.

UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA Memento ascendere semper INOCULACIÓN EN UN TUBO MEDIO SÓLIDO (AGAR POSICIÓN PICO Y FLAUTA Y FONDO) Con el asa de siembra estéril tomar los microorganismos de la muestra Inoculamos en el tubo realizando un movimiento de zigzag en la superficie. . Finalmente flameamos el asa antes de colocarla en su lugar para evitar contaminaciones INOCULACIÓN EN UN TUBO MEDIO SÓLIDO (AGAR FONDO) Con el asa de siembra estéril tomar los microorganismos de la muestra Inoculamos en el tubo realizando un picado profundo en el fondo del tubo (aquí no hay necesidad de inclinar el tubo) Se saca la asa bacteriológica por el mismo lugar que la introducimos Finalmente flameamos el asa antes de colocarla en su lugar para evitar contaminaciones. El proceso se inicia picando el fondo y se va avanzando hacia arriba por el área inclinada.

tocando las estrías del Area 1 en varias ocasiones. MÉTODO DE LOS CUADRANTES (MÉTODO A) Dividimos la caja Petri en 4 cuadrantes Estriamos con ayuda del asa los microorganismos hacia delante y hacia atrás sobre el Area 1. rotamos la caja y estriamos al Area 3 en varias ocasiones Rotamos la caja 90 grados mientras la mantenemos cerrada. Flameamos el asa y la dejejamos enfriar por 5 segundos. Flameamos el asa nuevamente y realizamos 6-7 estrías desde el Area 2 con dirección al Area 3. Flameamos el asa nuevamente y hacemos tantas estrías como sea posible desde el Area 3 al Area 4 utilizando la superficie restante del medio de cultivo. Flameamos el asa nuevamente. Teniendo cuidado de no lastimar la superficie del agar. Finalmente flameamos el asa antes de colocarla en su lugar para evitar contaminaciones . Estriamos el Area 2 hacia delante y hacia atrás. Teniendo cuidado de no lastimar la superficie del agar.UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA Memento ascendere semper MÉTODO DE LOS CUADRANTES (MÉTODO B) TÉCNICAS DE AISLAMIENTO EN CAJA Dividimos la caja Petri en 4 cuadrantes Estriamos con ayuda del asa los microorganismos sobre el área 1 cerca del borde de la caja. Tocamos la superficie del agar para asegurarse que se encuentra fría el asa. rotando la caja y estriamos Flameamos el asa nuevamente. Flameamos el asa y dejejamos enfriar por unos 5 segundos para luego realizar 5-6 estrías desde el Area 1 al Area 2 Finalmente flameamos el asa antes de colocarla en su lugar para evitar contaminaciones.

UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA Memento ascendere semper . dejamos enfriar y realice estrías que crucen las anteriores empezando cerca del Area 1. Finalmente flameamos el asa antes de colocarla en su lugar para evitar contaminaciones. Flameamos el asa y dejamos enfriar por 5 segundos. Flameamos el asa nuevamente. Rotamos la caja 180 grados de manera que la superficie no inoculada se encuentre en la parte superior de la misma. Sin flamear el asa. RADIADO MÉTODO Distribuimos una asada del inoculo de microorganismos sobre una pequeña área cerca del borde de la caja en el Area 1. MÉTODO CONTINUO Iniciamos en el borde de la caja (Area A) con una asada de microorganismos distribuyéndola con un movimiento único y contínuo hacia el centro de la caja. ejecutamos un movimiento único y contínuo hasta llegar al centro de la caja teniendo cuidado de no topar las estrías del Area A . Finalmente flameamos el asa antes de colocarla en su lugar para evitar contaminaciones. Desde el Area 1 haga 7 u 8 estrías hacia el lado opuesto de la caja.

. 2006. P. Prats G. debido a que se podrá manipular. Segunda Edición. inocular y transferir microrganismos de manera correcta y sin destruir el medio del cultivo en donde trabajamos. BIBLIOGRAFÍA    Espinal G. Microbiología Clínica Práctica. Santo Domingo (Instituto Tecnologico de Santo Domingo). fue exitosa ya que la experiencia adquirida servirá mucho en posteriores trabajos o practicas. Editorial Panamericana. Estriamos el inoculo por toda la superficie de la caja de borde a borde con un movimiento único y continuo RESULTADOS Y CONCLUSIONES    En la practica realizada aprendimos la buena manipulación de las diferentes técnicas de aislamiento de microrganismos Se obtuvieron colonias separadas. Editorial Médica Panamericana S. cada una inoculada con su respectivo método o métodos en los diferentes agares.A. 2009.UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA Memento ascendere semper MÉTODO PARA ORINA Colocamos una gota de orina en el centro del agar con ayuda de asa Trazamos una línea vertical en el centro del agar Finalmente flameamos el asa antes de colocarla en su lugar para evitar contaminaciones. México. Microbiología Clínica. El objetivo de la práctica sobre inoculación. García M. Manual de Practicas Microbiologícas I. Primera Edición. Editorial BUHO. 2005.