UNIVERSIDAD DE LA FRONTERA FACULTAD DE INGENIERÍA, CIENCIAS Y ADMINISTRACIÓN DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA

“EFECTO DE LA DENSIDAD Y TEMPERATURA DE CO2 SOBRE LA EXTRACCIÓN SUPERCRÍTICA DE ACEITE DE MICROALGA (Botryococcus braunii)”

LETICIA ALEJANDRA DURÁN MANOSALVA 2012

UNIVERSIDAD DE LA FRONTERA FACULTAD DE INGENIERÍA, CIENCIAS Y ADMINISTRACIÓN DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA

“EFECTO DE LA DENSIDAD Y TEMPERATURA DE CO2 SOBRE LA EXTRACCIÓN SUPERCRÍTICA DE ACEITE DE MICROALGA (Botryococcus braunii)”

TRABAJO PARA OPTAR AL TÍTULO DE INGENIERO EN ALIMENTOS

Profesor Guía: Dr.Edgar Uquiche Carrasco

LETICIA ALEJANDRA DURÁN MANOSALVA 2012

“EFECTO DE LA DENSIDAD Y TEMPERATURA DE CO2 SOBRE LA EXTRACCIÓN SUPERCRÍTICA DE ACEITE DE MICROALGA (Botryococcus braunii)”

LETICIA ALEJANDRA DURÁN MANOSALVA 2012

COMISIÓN EXAMINADORA

EDGAR UQUICHE CARRASCO Profesor guía

CAROLINA SHENE DE VIDTS Profesor examinador

XIMENA INOSTROZA HOFFMANN Profesor examinador

Nota trabajo escrito : Nota examen Nota final : :

Se agradece al Proyecto Corfo Desert Bioenergy 09CTEI-6860 por el financiamiento para la realización de este trabajo. . De acuerdo a los resultados obtenidos. En cuanto a la concentración de esteroles.0 g tocoferoles/ kg aceite. aminoácidos. En carotenoides el mayor rendimiento fue 1550. entre otros. 2 axiales y 1 punto central. etc. esteroles y tocoferoles presentes en el extracto. se realizaron extracciones basadas en un diseño central compuesto rotatorio con 5 niveles de cada variable independiente (temperatura de extracción y densidad SC-CO2).0 g esteroles/ kg aceite obtenida a 41°C y 957 kg CO2/m3 Las variables densidad SC-CO2 y temperatura de extracción afectaron significativamente (p≤0. cosmética y alimentaria. obtenido a 69 °C y 957 kg CO2/m3.0 g car/kg aceite. ser una tecnología amigable con el medio ambiente y limpia. Para ello. la mayor concentración fue 23. La mayor concentración de carotenoides se obtuvo a 69 °C y una densidad de 957 kg CO2/m3 y fue 17. ácidos grasos. El objetivo principal de este trabajo fue estudiar el efecto de la temperatura y la densidad del SCCO2 sobre la velocidad y el rendimiento de extracción de aceite de microalga Botryococcus braunii junto con evaluar el rendimiento y concentración de carotenoides. Dentro de los factores que se deben considerar para este tipo de extracción se encuentran la densidad del fluido. Actualmente. por ser más seguro que el hexano (sin dejar restos de solvente). el mayor rendimiento de extracción de aceite fue 87.36% de contribución a la respuesta. ofreciendo una alta calidad del producto final en comparación a los extractos obtenidos a través de técnicas convencionales. la tecnología de extracción con CO2 supercrítico (SC-CO2) se perfila como una técnica innovadora para extraer y aislar estas sustancias. En tocoferoles se observó la mayor concentración a 41 °C y 957 kg CO2/m3 siendo ésta 18. Estos componentes pueden ser aislados y empleados como ingredientes funcionales en la industria farmacéutica.0 g aceite/kg SS.0 mg car/kg SS obtenido a 69 °C y 957 kg CO2/m3. presión. pigmentos carotenoides.05) el rendimiento de extracción de aceite explicando su comportamiento en un 89% siendo la temperatura el factor que más afectó el rendimiento con un 46.RESUMEN Las microalgas son una fuente importante de componentes naturales de alto valor biológico como proteínas. temperatura. con 2 factoriales.

.... INTRODUCCIÓN .........................................1..............................................................1.............2....................................... Materiales...................8..............................................................................................................................INDICE DE CONTENIDOS Página CAPÍTULO 1...........1 Carotenoides ......2 Lípidos ......................................5 Fluidos Supercríticos y sus propiedades ....10 2............................................................. 14 CAPÍTULO 3: MATERIALES Y MÉTODOS .......... 6 2.................................................... 13 2.... 3 1......6 Extracción con FSC .........................................................................2 Fraccionamiento de la grasa láctea...... Equipos e instrumentos .....................................................4..3 Tocoferoles ........................ ANTECEDENTES GENERALES ..4 2................................1................1 Extracción de aceites esenciales ...............1......... 15 3.......................................................................... Objetivos ................................................................................................... ............8............................................................................. 15 3................4............. Objetivo general ............................................................................................................2 Esteroles ........................... Objetivos específicos............ 7 2........................................1................................. 1 1...............................................8 Aplicación industrial de FSC....5 2........... .............................3 Antioxidantes naturales.......................11 2..........1......................................2... 15 ..................................... 8 2.................................................................................. 3 CAPÍTULO 2......................9 2...................................................................15 3...............1 Materia prima ......... esteroles y tocoferoles en la nutrición.7 Antecedentes de extracción con SC-CO2 en microalgas........................6 2.......................................................................1...3 1...................................................... 4 2..................................................................................4 Obtención de sustancias antioxidantes a partir de microalgas.................................4 Importancia de los carotenoides........................................ .............................................................................. ... .............................8.......... 12 2...................... 13 2...............................................................8...............................1 Microalga (Botryococcus braunii)........4.......................................................3 Desalcoholización de bebidas alcohólicas ...................................................5 2....................................................................................................11 2............

..................... 39 BIBLIOGRAFÍA ..................4 Análisis de concentración de tocoferoles ................................................ 34 4..................................................7 Rendimiento de extracción de tocoferoles ............ Extracción de aceites utilizando SC-CO2 .22 4... RESULTADOS Y DISCUSIÓN ......................................................................5 Análisis de rendimiento de extracción de carotenoides ................. Análisis del aceite ....... 17 3................................................3.................................................3 Análisis de concentración de esteroles ...................................................................................3.......................3.................................6 Rendimiento de extracción de esteroles .................16 3............ Análisis del rendimiento de extracción de aceite ................... CONCLUSIONES ......................4 Discusión General .....................3..................................3..................17 3......................................... 18 3............2.......... 16 3....................... 20 CAPÍTULO 4........................................ 31 4....3 Análisis estadístico .............. Reactivos ............................................................20 3................3......... 19 3....2...................................................... 16 3................................................................................................................................................................ 32 4.....................................................................................2.......................................... 17 3.......... 29 4...........37 CAPÍTULO 5...................................4....................................................................................................................................................2 Métodos de análisis ....3............................................3.............................................4 Diseño de experimentos ...........1.........................................................1 Contenido de carotenoides totales ..........................................................24 4............................. 22 4................................ Determinación de humedad .............. 35 4....1 Contenido de humedad de la muestra inicial ................................22 4.......................... 26 4....................3............................................3...........................1..........1.................................................. Material de vidrio y otros ............................................................................. 28 4...........................................................1...........4...................................................2 Contenido de esteroles ........... 42 .........3 Contenido de tocoferoles .......3......................................................2 Efecto de las variables independientes temperatura y densidad del CO2 sobre el comportamiento de las respuestas.....3...3.................................2 Análisis de concentración de carotenoides........................................................ 15 3..................................1 Análisis estadístico ........................................................

. .......................... 51 Anexo A................ D Análisis del extracto de aceite de microalga (Botryococcus braunii)........... ............67 .......................58 Anexo.52 Anexo C...ANEXOS .................... .. braunii...................... Determinación de la cinética de extracción de aceite de microalga (Botryococcus braunii). ¡Error! Marcador no definido............. Determinación de la humedad del sustrato ...………………………......51 Anexo B.. Determinación del rendimiento de extracción de aceite de microalga B........64 Anexo E Análisis Estadístico….........¡Error! Marcador no definido..........................……………………………………………...................

.....52 Tabla B-3.....…………………………………………………………………..........……………………………………………………………....Extracción de aceite de microalga B..........3........ braunii a 41 °C y 900 kg CO2/m3 (Punto de diseño 5)………........…………………………………………………………………………..... Extracción de aceite de microalga B... braunii a 45 °C y 860 kg CO2/m3 (Punto de diseño 1…………………………………………………………………………….. braunii a 45 °C y 940 kg CO2/m3 (Punto de diseño 3)…………...1... Indicadores estadísticos para el modelo de superficie de respuesta ......………………………………………………………………............52 Tabla B-2... 12 Tabla 3.............Condiciones de extracción con CO2 supercrítico utilizadas en algunas especies de algas y microalgas.......... braunii a 55 °C y 900 kg CO2/m3 (Punto de diseño 9)……….. braunii a 65 °C y 860 kg CO2/m3 (Punto de diseño 2)........1.... 26 Tabla A-1.. Extracción de aceite de microalga B. Extracción de aceite de microalga B...55 Tabla B-8. 23 Tabla 4....54 Tabla B-7. Extracción de aceite de microalga B.......... braunii a 69 °C y 900 kg CO2/m3 (punto de diseño 6)……………........ 24 Tabla 4........ Extracción de aceite de microalga B. Extracción de aceite de microalga B........... .... Extracción de aceite de microalga B.... Tabla de análisis de varianza para el modelo cuadrático ............. Diseño experimental Central Compuesto Rotatorio..... braunii a 55 °C y 957 kg CO2/m3 (Punto de diseño 8)………..53 Tabla B-4....... Determinación de la humedad del sustrato………………………………............ ...............……………………………………………………………….55 Tabla B-9............................. braunii a 65 °C y 940 kg CO2/m3 (Punto de diseño 4)…………………............………………………………………………………………….....2. Extracción de aceite de microalga B....53 Tabla B-5.………………………………………………………………….......................……………………………………………………….54 Tabla B-6.INDIDE DE TABLAS Página Tabla 2........... esteroles y tocoferoles con CO2 supercrítico............1 Rendimiento de extracción y concentración de carotenoides.......... 22 Tabla 4..........………............51 Tabla B-1....56 ............ braunii a 55 °C y 843 kg CO2/m3 (Punto de diseño 7)………….........

....………………. …………..…………………………….. ………………………….71 Tabla E-4.....…………………....………….. Análisis del rendimiento de tocoferoles…………………………………………….56 Tabla B-11 Extracción de aceite de microalga B. Extracción de aceite de microalga B...…….…. braunii a 55 °C y 900 kg CO2/m3 (Punto de diseño 11)…………….71 Tabla E-3.....65 Tabla D-3 Datos curva de calibración para la concentración de tocoferoles en aceite de microalga (Botryococcus braunii)……….……66 Tabla E-1. Análisis de varianza para el rendimiento de extracción de aceite…………………. Análisis de varianza para la concentración de carotenoides en el aceite.73 Tabla E-7.70 Tabla E-2.64 Tabla D-2 Datos curva de calibración para la concentración de esteroles en el aceite de microalga B.57 Tabla D-1 Datos curva de calibración para la concentración de carotenoides en el aceite de microalga B.Tabla B-10.……57 Tabla B-12 Extracción de aceite de microalga B. braunii……………………………………………. Análisis de varianza para la concentración de esteroles en el aceite………………. braunii a 55 °C y 900 kg CO2/m3 (Punto de diseño 12)………….……………………………………………………..72 Tabla E-5.73 ..……………….. braunii.………………………………………………………. Análisis de varianza para la concentración de tocoferoles en el aceite……………...……………………………………………………………………. Análisis del rendimiento de carotenoides……………………………………………72 Tabla E-6.………………. braunii a 55 °C y 900 kg CO2/m3 (Punto de diseño (10)…... Análisis del rendimiento de esteroles……………………………………………….

............58 Figura C-2. 29 Figura 4.3.……….... Superficie de respuesta de la concentración de esteroles (Y3) como función de la temperatura (°C) y densidad (kg CO2/m3).......................... Curva cinética de extracción a 45 °C y 860 kg CO2/m3 (Punto de diseño 1)…….........…............2............. Curva cinética de extracción a 45 °C y 940 kg CO2/m3 (Punto de diseño 3)……......9 Figura 4.............................. .......... 30 Figura 4. 36 Figura C-1......4 Figura 2....................5................................. 32 Figura 4..6.... Superficie de respuesta de la concentración de carotenoides (Y2) como función de la temperatura (°C) y densidad (kg CO2/m3)...........59 Figura C-5..........…...... 33 Figura 4. Curva cinética de extracción a 65 °C y 940 kg CO2/m3 (Punto de diseño 4)….INDICE DE FIGURAS Página Figura 2.4.60 Figura C-7. . Superficie de respuesta de la rendimiento de extracción esteroles (Y6) como función de la temperatura (°C) y densidad (kg CO2/m3)...... 35 Figura 4.............………………………………………. Curva cinética de extracción a 69 °C y 900 kg CO2/m3 (Punto de diseño).........................…............7............................... . Curva cinética de extracción a 41 °C y 900 kg CO2/m3 (Punto de diseño 5)…..................60 Figura C-6..…….... Superficie de respuesta del rendimiento de extracción de carotenoides (Y5) como función de la temperatura (°C) y densidad (kg CO2/m3) .......... Curva cinética de extracción a 55 °C y 843 kg CO2/m3 (Punto de diseño)...... Curva cinética de extracción a 65 °C y 860 kg CO2/m3 (Punto de diseño 2)……............ .......61 ...... Forma estructural B........... Diagrama de fases que muestra la región de un fluido supercrítico………………….......2.......... Superficie de respuesta del rendimiento de tocoferoles (Y7) como función de la temperatura (°C) y densidad (kg CO2/m3).......... Superficie de respuesta de la concentración de tocoferoles (Y4) como función de la temperatura (°C) y densidad (kg CO2/m3)............................58 Figura C-3....1......1 Superficie de respuesta del rendimiento de extracción de aceite (Y1) como función de la temperatura (ºC) y densidad (kg CO2/m3).59 Figura C-4......... 27 Figura 4........ braunii……………….. .......... .

................ ¡Error! Marcador no definido....64 Figura D-2.......63 Figura D-1..67 Figura E-3................................ ¡Error! Marcador no definido....................... Curva de calibración esteroles totales………………………………………………65 Figura D-3. ...67 Figura E-2... Curva cinética de extracción a 55 °C y 957 kg CO2/m3 (Punto de diseño 8)………61 Figura C-9... Valores actuales y predichos para la respuesta concentración de tocoferoles (Y4).............. Curva cinética de extracción a 55 °C y 900 kg CO2/m3 (Punto de diseño 12)…..................................68 Figura E-4........................................................70 .... ¡Error! Marcador no definido............ Curva calibración carotenoides totales…………………………………………….................................... Curva de calibración para tocoferoles totales………………………………………66 Figura E-1............. Curva cinética de extracción a 55 °C y 900 kg CO2/m3 (Punto de diseño 10)……62 Figura C-11...................... 69 Figura E-6... ....... Valores actuales y predichos para la respuesta concentración de esteroles (Y3)....... Valores actuales y predichos para la respuesta concentración de carotenoides (Y2)........ Valores actuales y predichos para la respuesta rendimiento de carotenoides (Y5)........Figura C-8........ 69 Figura E-7..... Valores actuales y predichos para la respuesta rendimiento de extracción de aceite (Y1)……………………………………………………………………………………………….......63 Figura C-12..... ¡Error! Marcador no definido........................ ......68 Figura E-5.….............. ....... Valores actuales y predichos para la respuesta rendimiento de tocoferoles (Y7).... Curva cinética de extracción a 55 °C y 900 kg CO2/m3 (Punto de diseño 11).62 Figura C-10.......................................... Curva cinética de extracción a 55 °C y 900 kg CO2/m3 (Punto de diseño 9)…….... Valores actuales y predichos para la respuesta rendimiento de esteroles (Y6) .

CAPÍTULO 1 INTRODUCCIÓN .

Introducción CAPÍTULO 1. 2008). las cuales están recibiendo mucha atención. saludables y atractivos a la vista. 2005). INTRODUCCIÓN Actualmente existe una tendencia del consumidor por cambiar continuamente de gustos y escoger productos innovadores. Estos cambios en la densidad son la base de las propiedades solventes de un fluido supercrítico.1 °C y 7. por ser más seguro que el hexano. β-caroteno y otros pigmentos (antioxidantes).. la cual puede ajustarse fácilmente combinando las variables presión y temperatura. carotenoides. Tiene las características tanto de un gas como de un líquido. ser una tecnología amigable con el medio ambiente y limpia. 2006). que resulta necesario buscar nuevas metodologías para desarrollar y extraer compuestos altamente beneficiosos. 2005).. tocoferoles. por ejemplo: esteroles. pueden ser empleadas como fuente de ingredientes funcionales. de modo específico y positivo.. Las algas en general han desarrollado compuestos de gran interés para la industria alimentaria. ya que. la selectividad del fluido puede ser modificada de acuerdo a los componentes que se requieran Efecto de la densidad y temperatura deCO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii) 1 . contribuyendo a mantener y/o mejorar el estado de salud y reducir el riesgo de sufrir determinadas enfermedades o alteraciones (Palou et al. la tecnología con CO2 supercrítico (SC-CO2) se mira con interés.9 MPa). La extracción con fluido supercrítico (EFS) es una operación unitaria que aprovecha el poder solvente de los fluidos supercríticos en condiciones por encima de su temperatura y presión crítica (31. debido a su capacidad de realizar fotosíntesis y a su adaptación a la vida en medios marinos o en aguas continentales (Mendiola. entre otros a partir de sustancias naturales. lo cual es una señal de alerta en la industria alimentaria que día a día busca la forma de satisfacer las demandas del mercado. su poder solvente depende sólo de su densidad. ya que son reconocidas como una importante fuente renovable de lípidos bioactivos con una alta proporción de ácidos grasos poliinsaturados (PUFA. Es por ello. polisacáridos sulfatados (antivirales) y esteroles) (Herrero et al. ofreciendo un tiempo de extracción corto y alta calidad del producto final (Andrich et al. están ligados a la solubilidad y de este modo. tales como plantas. Estos ingredientes son preferidos por los consumidores debido a su origen natural. Estos compuestos actúan en una o varias funciones del organismo.Capítulo 1. Para la extracción de aceite a partir de microalgas. subproductos de alimentos o incluso algas y microalgas.

los que serán analizados con la Metodología Superficie de Respuesta. Además. se ha señalado que la solubilidad de los carotenoides. Por otra parte. esteroles y tocoferoles en el SC-CO2 aumenta con la densidad a temperatura constante y viceversa (Saldaña et al. Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). Se espera que a mayor temperatura.Capítulo 1. Introducción extraer y para ello es necesario realizar pequeños cambios en las variables de presión y temperatura del flujo solvente. se aumente la presión de vapor del soluto y de esta forma se mejore la transferencia del soluto a la fase supercrítica. sobre el rendimiento de extracción de aceite y velocidad de extracción de microalga (Botryococcus braunii) incluyendo las características químicas del extracto obtenido mediante la determinación del contenido de carotenoides. esteroles y tocoferoles. 2 . la temperatura tiene un efecto positivo sobre la volatilidad del soluto.. El presente trabajo de título tiene como objetivo estudiar el efecto de la temperatura de extracción y densidad del CO2 supercrítico. 2010). Se empleará un diseño central compuesto rotatorio para la realización de los ensayos de extracción y obtención de resultados experimentales.

 Caracterizar el aceite de microalga obtenido bajo condiciones de extracción seleccionadas.1.1. esteroles y tocoferoles.1. esteroles y tocoferoles. Objetivos específicos  Estudiar el efecto de la temperatura de extracción y densidad de CO2 sobre la velocidad y el rendimiento de extracción de aceite de microalga (Botryococcus braunii). 3 .Capítulo 1. Objetivo general Estudiar el efecto de la temperatura y densidad del CO2 sobre el comportamiento de la velocidad y rendimiento de extracción de aceite de microalga (Botryococcus braunii) usando CO2 supercrítico.2.  Estudiar el efecto de la temperatura y densidad de CO2 sobre la velocidad y el rendimiento de extracción de carotenoides. Efecto de la densidad y temperatura de CO2sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).1.  Estudiar el efecto de la temperatura y densidad de CO2 sobre la concentración de carotenoides. Introducción 1. 1. Objetivos 1.

CAPÍTULO 2 ANTECEDENTES GENERALES .

pero sólo unas cuantas son de importancia comercial donde se incluyen: Chlorella. posee niveles inusualmente altos de ácidos grasos libres. algunas especies marinas como Isochrysis. Spirulina.. pigmentos. Dunaliella. Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). Chaetoceros etc. Antecedentes generales CAPÍTULO 2. Haematococcus. 2012). (2004). enzimas y ácidos grasos. ANTECEDENTES GENERALES 2.1 Microalga (Botryococcus braunii). El verde alga colonial de esta microalga (Figura 2. minerales. 4 . que puede ser en agua de mar. creciendo en una amplia variedad de climas no compitiendo por el agua dulce ni suelos requeridos para la producción de alimentos (Loera-Quezada y Olguín. 2010). Botryococcus. El número de especies de color azul-verde es muy grande y se caracteriza por tener un alto contenido de lípidos (Loera-Quezada y Olguín. Existen al menos 30. 2009). y se ha propuesto como una fuente renovable para las necesidades futuras de energía en beneficio de la protección del medio ambiente.1.Capítulo 2. entre otras. además. vitaminas.braunii (Barker et al. Nannochloropsis.1) es bien conocido por su alto contenido de hidrocarburos.. tanto de agua dulce como salada. ya que dentro de sus ventajas se encuentra su cultivo. a partir de las cuales se extraen componentes de alto valor biológico como proteínas. Forma estructural B. en agua salobre o en aguas residuales.000 especies conocidas de microalgas. Skeletonema.. La microalga verde Botryococcus braunii es una especie de agua dulce perteneciente a la familia Chlorophyceae. 2010). se distribuye en oligotróficos y eutróficos y según Fang et al. también se utilizan para la alimentación de moluscos u otros propósitos de acuicultura (Bruton et al. Figura 2.

hojas. braunii estos son: 2.. concentración de dióxido de carbono. Se han determinado los principales ácidos grasos que constituyen los lípidos de la microalga verde B. Antecedentes generales 2. llegando a alcanzar un 70% de la biomasa seca cuando las células están sometidas a condiciones de estrés fisiológico o un medio ambiente desfavorable en cuanto a la limitación de nutrientes (Li et al. tocoferoles. raíces. Las familias ω-6 y ω-3 destacan por sus importantes funciones fisiológicas. salinidad. Encontraron altas cantidades de ácidos grasos de 18 carbonos de la familia ω-3 y ω-6. etc. Se determinó una relación ω3/ω6 más alta en las algas en la fase de crecimiento exponencial. La investigación realizada por Dayananda et al.. (1992) analizaron los ácidos grasos en 24 muestras de microalgas de un grupo verde-azul (por ejemplo. flavonoides. en el grupo de flagelados (grupo taxonómicamente diverso) encontraron altas cantidades de ácidos grasos poliinsaturado de cadena larga (20-22 carbonos).32% ácido esteárico (C18:0).2% ácido linolénico (C18:3). 2007). 2009). Ahlgren et al. como por ejemplo.3 Antioxidantes naturales Los antioxidantes naturales están ampliamente distribuidos en la naturaleza formando parte de semillas. su composición y las proporción de los diversos ácidos grasos en una microalga puede variar. concentración de nitrógeno. (2004) ya que ambas informan que el ácido palmítico y ácido oleico son los principales ácidos grasos presentes en la microalga Botryococcus braunii.6% de ácido palmítico (C16:0) (Dayananda et al. así como también. 5 .Capítulo 2. son necesarios para el crecimiento y desarrollo del sistema nervioso central y la retina. 22.87% ácido mirístico (C14:0).. de una amplia variedad de plantas (Valenzuela et al.. 13. 14. fósforo y la intensidad de la radiación UV-B (Mansour et al.. 4. 2000) presentándose como compuestos fenólicos.5% ácido linoleico (C18:2).3% ácido láurico (C12:0). y el correcto funcionamiento del sistema cardiovascular (Sahena et al. compuestos nitrogenados. temperatura. 2008. 2003). 2009). 2. (2007) fue similar a las observaciones realizadas por Fang et al. El contenido de lípidos. Dorval et al.3% ácido oleico (C18:1) y finalmente 40. 2.. ya que éstos pueden ser afectados por una serie de variables ambientales como: intensidad de luz y fotoperiodo. frutos.2 Lípidos El contenido de lípidos en las microalgas oleaginosas se encuentra dentro de un 20 a 50%. Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). Oscillatoria y Microcystis) procedentes de diferentes lotes de cultivos continuos y en diversas fases de crecimiento. especialmente del tipo ω-3.

el calor también favorece reacciones térmicas de degradación y finalmente el aire debido al oxígeno favorece la oxigenación de los enlaces dobles a funciones epóxido. 2. siendo las algas marinas uno de los recursos potenciales de dichos compuestos. polifenoles. esteroles y tocoferoles en la nutrición. amarillo y naranjo en muchos vegetales son originados por la presencia de carotenoides. mientras que las xantofilas contienen además oxígeno (por ejemplo la luteína). Los carotenoides debido a la alta conjugación de enlaces dobles presentes en sus moléculas se descomponen por efecto de la luz. para evitar la degradación por la acción conjunta de estos factores adversos. 1997). a temperatura ambiente o menor. la temperatura y el aire. Los carotenoides o tetraterpenoides son una clase de pigmentos terpenoides con 40 átomos de carbono. pigmentos de origen vegetal que se clasifican dentro de los pigmentos liposolubles. 2012). o carotenoides. Entre las Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). etc. principalmente en la industria farmacéutica. en su mayoría son solubles en solventes apolares. el licopeno. tocoferoles y vitamina C (Díaz. Los carotenoides son muy utilizados como pigmentos y antioxidantes en diversos sectores industriales.4 Importancia de los carotenoides. nutracéutica y alimentaria. Es debido a estas razones que la extracción de carotenoides se debe realizar preferentemente en condiciones de ausencia de luz. (Yeverino. En los últimos años se ha conducido a estimular la producción de carotenoides procedentes de microalgas para su uso como colorantes y aditivos naturales (Mendiola 2008). hidroxilos y peróxidos.). 2.1 Carotenoides Los colores rojo. Los carotenos solo contienen carbono e hidrógeno (por ejemplo el ß-caroteno. realizándose a partir de tejidos frescos. Una fuente inagotable de exploración es el mar y su biodiversidad. ya que se ha informado que la actividad antioxidante de los extractos de algas depende de los componentes químicos de los extractos que principalmente consisten en carotenoides. Antecedentes generales aminas.4.Capítulo 2. entre otros (Martínez. se clasifican en dos grupos: carotenos y xantofilas. 2003). La luz favorece reacciones fotoquímicas que cambian la estructura original del carotenoide (por ejemplo isomerismo cis y trans). 6 . y en ausencia de oxígeno.

Entre las principales fuentes naturales de astaxantina está la microalga Haematococcus pluvialis que tiene la capacidad de acumularla en altas concentraciones (2 a 5% en base seca) (Borowitzka et al. 2. cordata Pyramimonas. cantaxantina.) estudiaron el contenido de esteroles en cinco especies de algas y microalgas (viz. 2005). Micromonas aff pusilla. Antecedentes generales microalgas con mayor potencial para la producción de carotenoides se encuentran.. evitando que los glóbulos blancos (leucocitos polimorfonucleares) viajen a la zona de inflamación del cuerpo (Molina y Morales. 1998). Por lo tanto. mixoxantina y zeaxantina (Marquez et al. se caracterizan por ser sustancias esteroideas en cuya estructura química aparece una agrupación de cuatro anillos. β caroteno. pusilla Micromonas. luteína.2 Esteroles Los esteroles se encuentran ampliamente distribuidos en los reinos animal y vegetal.4. como ésteres o como glicósidos. La mayoría de esteroles naturales poseen una cadena lateral de 8 a 10 átomos de carbono y un enlace doble en el C-5. En cuanto a las microalgas existen estudios que señalan que a partir de las especies Scenedesmus obliquus y Navicula pelliculosa se obtienen esteroles precursores de la hormona cortisona. Tetraselmis chui. Volkman et al. neoxantina. (1994. 2008). a que disminuyen las concentraciones sanguíneas de colesterol. específica del sistema fenantreno.. El gran interés despertado por los alimentos enriquecidos con esteroles vegetales se debe.. hormona que reduce la inflamación.. equinenona. Otro estudio realizado en Spirulina platensis informa que contiene 5. y se les encuentra en forma libre. Haematococcus y Chlorococcum (García. (Abrahamsson et al. sin efectos adversos colaterales. 1991).. Dunaliella salina. 1995). equinenona. causa principal de la mortalidad en las sociedades más desarrolladas (Palou et al. el aumento de la cantidad de esteroles vegetales en una variedad de alimentos puede ser una ayuda importante en la protección de las personas con hipercolesterolemia frente a la aterosclerosis y las enfermedades cardiovasculares relacionadas. principalmente. Los carotenoides que se encuentran frecuentemente en las microalgas incluyen: astaxantina.Capítulo 2. 2012). violaxantina y zeaxantina. 2000). Dunaliella viridis. 7 . portador del grupo OH en posición C-3 que le permite estar enlazado a moléculas de ácidos grasos (Bello. y provasolii Pycnococcus) las cuales se analizaron por cromatografía de gases y Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).53 mg/g de carotenoides totales dentro de los cuales se identificaron cantaxantina.

estos compuestos se denominan como α-. El α-tocoferol es el más abundante en la dieta y el que presenta mayor actividad antioxidante in vivo. 8 .Capítulo 2.γ y σ. ayuda a reducir los niveles de colesterol en la prevención de trombos en las arterias es aún discutible (Belitz y Grosch. 1997). 2. donde.3 Tocoferoles Solamente los organismos fotosintéticos sintetizan tocoferoles. Los tocoferoles tienen una estructura química que consiste en dos anillos. uno fenólico y otro heterocíclico y una cadena lateral de 16 átomos de carbono saturada. presenta un gran interés debido a que es una vitamina liposoluble que actúa como antioxidante. es decir. encontrándose presentes en semillas oleaginosas.4. β. además pudo predecir un aumento de la producción de α-tocoferol durante el ciclo de vida debido a la necesidad de la microalga por obtener antioxidantes durante el proceso de envejecimiento. La vitamina E o α -tocoferol.014 mg de tocoferol/g Spirulina seca. (2008) determinaron el contenido de α-tocoferol en Spirulina platensis. hojas y otras partes de plantas verdes de plantas superiores. Además.. 24 (28)-dien-3β-ol. estimula el sistema inmunológico y se ha comprobado que detiene el desarrollo del Alzheimer. (2007) evaluó el contenido de α-tocoferol en la microalga Nannochloropsis oculata registrando una concentración de 2326 ± 39 mg g-1 (peso seco). Dependiendo del número y la posición de los grupos metilo en el anillo fenólico.tocoferoles (Calvo et al. con carácter esencial reconocido hace más de 40 años. Antecedentes generales espectrometría de masa. Los tocoferoles y tocotrienoles engloban un grupo de 8 compuestos liposolubles que reciben el nombre genérico de vitamina E. 2011). Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). 24-methylcholest-5-en-3β-ol y 24-ethylcholesta-5 y 24 Methylcholest-5-en-3β-ol entre otros. defiende las células reduciendo el estrés oxidativo. El contenido de α-tocoferol en microalgas se ve afectado tanto por la fuente de nitrógeno de la cual se alimenta y el tiempo de cosecha. Durmaz. La “vitamina E” es un término genérico que describe un grupo de antioxidantes que incluye los tocoferoles y tocotrienoles. con valores que van desde 0. Otra investigación realizada por Mendiola et al.011 hasta 0. Los principales esteroles encontrados fueron: 24-methylcholesta-5.

viscosidad y difusividad.2. la fuerza disolvente del fluido puede ser modificada. Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). 1999). pueden obtener mejores rendimientos de extracción. cambiando la presión y/o temperatura. 9 . por lo tanto. entre las que destaca: densidad. ya que la densidad está directamente relacionada con la solubilidad (del Valle y Aguilera. las que se encuentran en rangos de valores intermedios entre líquidos y gases (Figura 2.5 Fluidos Supercríticos (FSC) y sus propiedades Un FSC es un material que se encuentra en condiciones de presión y temperatura por encima de sus valores correspondientes de presión crítica (pc) y temperatura crítica (Tc). una de las principales características de un FSC es la posibilidad de modificar la densidad del fluido. Figura 2. difusividad relativamente alta y poder solvente que los líquidos supercríticos tienen mejores propiedades de transporte y penetrabilidad que los líquidos y.2). La pc es la presión por encima de la cual el gas no condensa al disminuir la temperatura isobáricamente y la Tc es la temperatura por encima de la cual el gas no condensa al aumentar la presión isotérmicamente (del Valle y Aguilera. por lo tanto. es debido a su baja viscosidad. 1999). Los FSC poseen diferentes propiedades físico-químicas. Diagrama de fases que muestra la región de un FSC.Capítulo 2. mediante la alteración de la presión de extracción. Antecedentes generales 2.

En la EFS. se elimina fácilmente. 10 . tamaño de partícula.. Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). y alta eficiencia del proceso de extracción (en términos de aumento de los rendimientos y la posibilidad de acoplamiento directo con técnicas de análisis cromatográficas tales como cromatografía de gases (GC) o cromatografía de FSC) (Herrero et al. en comparación a otras técnicas de extracción. 1999). la selectividad del fluido puede ser modificada de acuerdo a los componentes que se requieran extraer. La densidad del fluido por sobre sus condiciones supercríticas (31. por la selectividad que se puede llegar a obtener de acuerdo a las condiciones de extracción y además. 1993). se puede trabajar a baja temperatura. 2010). no inflamable. Esta propiedad hace que los FSC sean solventes muy versátiles y que se pueden aplicar en la extracción de diversos componentes naturales de materiales biológicos (Luque de Castro et al. 2006). Las principales variables a tener en cuenta son: presión y temperatura que determinan la densidad del fluido. incoloro. la EFS en lugar de extracciones tipo Sohxlet es justificada por la reducción de los tiempos de extracción.. además de seleccionar el solvente (fluido supercrítico). Antecedentes generales Otras ventajas.1 °C y 7. En general. no deja residuos. humedad de la muestra. entre otros. velocidad del fluido.Capítulo 2. está estrechamente relacionada con los cambios de presión y temperatura. sus condiciones críticas son relativamente fáciles de alcanzar y se consigue con diferentes grados de pureza. son el uso de disolventes generalmente reconocido como seguro (GRAS)..9 MPa). no corrosivo. por tanto. no es costoso. 2. 2008). se deben considerar diversas variables que influyen significativamente en la operación de extracción. la densidad está ligada a la solubilidad y de este modo.6 Extracción con FSC El CO2 es el FSC más utilizado en EFS debido a que es no tóxico. se pueden separar compuestos termo-sensibles (del Valle y Aguilera. Estos cambios en la densidad son la base de las propiedades solventes del FSC ya que. la eliminación de posibles compuestos que puedan intervenir en el análisis (Mendiola. El efecto significativo de la presión sobre el rendimiento de extracción (g soluto/g sustrato seco) se debe al aumento de la solubilidad de aceites y pigmentos carotenoides como también al incremento del poder solvente del SC-CO2 (Li et al. debido a que un cambio en estas variables modifica su magnitud.

evitar la variabilidad originada por la frecuente diferencia en composición de las porciones que tienen distinto tamaño (Luque de Castro et al. En la Tabla 2. puesto que el agua reduce el poder solvente del CO2 a condiciones supercríticas inhibiendo el contacto entre el SC-CO2 y el sustrato (Li et al. y. Esto se puede lograr a través de la molienda de la matriz. en la gran mayoría se necesitan extraer componentes termolábiles y a esta temperatura no van a ser perjudicados. se tiene que ofrecer al disolvente superficies de intercambio grandes y recorridos de difusión cortos.. aumenta la solubilidad permitiendo una mejor transferencia desde el sustrato hacia la fase supercrítica. 11 .. en cambio.8 Aplicación industrial de FSC. los cuales tienen un alto peso molecular. farmacéutico.7 Antecedentes de extracción con SC-CO2 en microalgas. Se ha recomendado que los sustratos posean una baja humedad.Capítulo 2. Para conseguir una mejor velocidad de extracción y más completa posible del sustrato sólido. ya que. Antecedentes generales Al aumentar la temperatura permite aumentar el rendimiento de extracción debido al incremento en la presión de vapor del soluto. (2005) utiliza un rango de presión 550-700 bar para la extracción de lípidos. 2. el consumo específico de solvente. por ende. temperatura y densidad de CO2 que se han utilizado para extraer y analizar el aceite de diferentes microalgas. Se observa que las temperaturas utilizadas están dentro de un rango de 40-85 ºC siendo las temperaturas cercanas a 40 ºC las más utilizadas. Andrich et al. Entre otras aplicaciones se dirigen a la obtención de Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). químico. lo cual se debe a los componentes que se desean extraer. (2003) utilizan presiones entre 125 y 300 bar para la extracción de hidrocarburos los cuales son altamente volátiles y por lo tanto de menor peso molecular. 2010). y cosmético. aumentando la velocidad de extracción (del Valle et al. por ejemplo. Las investigaciones expuestas utilizan diferentes rangos de presión. en el caso de Mendes et al. 2001). Los FSC se están utilizando a escala industrial principalmente en los sectores agroalimentario. Otras variables que influyen son la humedad y el tamaño de partícula del sustrato.1 se observan algunas condiciones de las variables presión. Las muestras sólidas de diferente granulometría deben ser molturadas para homogeneizar el tamaño de partícula. 2. la velocidad de flujo de solvente. 1993)..

Flavex. En España. Esta planta dispone de instalaciones de extracción y cromatografía en SC-CO2 produciendo 50 toneladas anuales de EPA y DHA mediante cromatografía supercrítica a partir de aceite de pescado. 2. el Sudeste Asiático y Nueva Zelanda (Cocero. una instalación para la producción de alimentos funcionales mediante SC-CO2 en Mallén (Zaragoza). 2011).000 ton/año por esta tecnología. 12 .8. existiendo plantas industriales en Europa. de extractos de especias para colorantes alimentarios. EEUU. aceites esenciales. Entre los extractos obtenidos destacan: extracto de jengibre (40% aceites Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). Canadá. 2006). la empresa Solutex construyó.Capítulo 2.1 Extracción de aceites esenciales La extracción de aceites esenciales y especias con SC-CO2 es la aplicación industrial más extendida. (Tornero. produciéndose más de 60. en el año 2004. etc. Antecedentes generales extractos herbales a partir de plantas aromáticas. otra destacada compañía ubicada en Rehlingen (Alemania) produce ingredientes botánicos activos desde 1986 y en la actualidad produce más de 50 extractos obtenidos con SCCO2 operando con una presión máxima de diseño de 500 bar y logrando una producción anual de 1000 toneladas.

5. Condiciones de extracción con CO2 supercrítico utilizadas en algunas especies de algas y microalgas.4-914. 2009 .911. Antecedentes generales Mendes et al.. 2006 Mendes et al. 2005 Sargassum hemiphyllum Arthrospira maxima Nannochloropsis oculata Dunaliella salina 40-50 50-60 40 40-60 241-379 250-350 250-300 100-500 874. 2005 Mendiola et al.897.2-863.. 1998 Capítulo 2.9-934. 2006 Liau et al.. 2011 Andrich et al... Tipo de microalga Temperatura (°C) Haematococcus pluvialis Botryococcus braunii Chlorella vulgaris Nannochloropsis sp Spirulina platensis 40-80 40 40 40-55 83.4 731.8 880.1.Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).. 2003 Palavra et al..5. 12 Tabla 2.3 785.1 911.1.1 625.1009.1 1007.4 Carotenoides y clorofila Macías-Sánchez et al.9-934.6 Componentes de interés extraídos Astaxantina Hidrocarburos Carotenoides Lípidos Vitamina E Fuente Machmudah et al. 2011 Macías-Sánchez et al.7-911.. 2008 Nannoclhoropsis gaditana 40-60 100-500 625.7 835..3 Presión (bar) 200−550 125-300 300 550-700 361 Densidad (KgCO2/m3) 841..4 Ácidos grasos poliinsaturados ácido γ-linolénico Zeaxantina Carotenoides y clorofilas Cheung et al.

orégano y pimienta con una producción de una tonelada al año aproximadamente (Tornero. 2. En el fraccionamiento de la grasa de leche con SC-CO2 generalmente se obtienen 3 fracciones de triglicéridos de peso molecular elevado (C54-42). reduciendo progresivamente la presión de 240 a 34 bar y aumentando gradualmente la temperatura de 40 a 70 °C.5 y un 1% en volumen y ha tenido éxito en bebidas de bajo contenido alcohólico como cerveza. 2.8. es rico en triglicéridos insaturados y antioxidantes como β-caroteno. La bebida fluye descendiendo y se pone en contacto con la corriente ascendente del CO2. Antecedentes generales esenciales y 30% gingeroles). Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii) 13 . medio (C40-36) y bajo (C34-24). Las condiciones de fraccionamiento se realizan después de mezclarlos en el extractor (en 3 o 4 separadores).8. 2005). Resulta ser muy apreciado en leches funcionales enriquecidas. Los puntos de fusión están entre -40 y 40 °C y esto hace que su utilización sea muy reducida. Las condiciones óptimas para la extracción del etanol dependen del tipo de bebida. pero generalmente los valores oscilan entre los 80 y 120 bar a temperaturas de 15 y 40 ºC (Carretero.Capítulo 2. 2011). El proceso de extracción del etanol de una bebida con este método se realiza normalmente en continuo. Se realiza en columnas extractoras de etapas de contacto múltiple donde se introducen. vino y licores de aromas. bombeados continuamente. sidra. helados y quesos (Raventós.3 Desalcoholización de bebidas alcohólicas El contenido final de alcohol con EFS en estos productos oscila entre un 0. extracto de vainilla (10 veces más concentrado que mediante técnicas convencionales) y otros extractos como: cúrcuma. extracto de romero rico en ácido carnosílico. De este modo se obtiene un producto lácteo refinado que contiene menos colesterol. 2012). mantequillas. sin tiempos muertos y con menos costes que el sistema discontinuo.2 Fraccionamiento de la grasa láctea La grasa láctea es una mezcla de triglicéridos saturados (70%) e insaturados (30%) y contiene también un pequeño porcentaje de colesterol. el SC-CO2 y la bebida alcohólica.

En Chile más específicamente en la Región de Tarapacá se encuentra la empresa biotecnológica Atacama Bio Natural products S. Antecedentes generales 2. la cual utiliza SC-CO2 para extraer complejo de Astaxantina natural a partir de oleorresinas de biomasa de microalga Haematococcus pluvialis.. Esta empresa elabora dos productos: Supreme Asta Oil y Products. Supreme Asta Powder (Atacama Bio Natural Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii) 14 .A.Capítulo 2.8. 2012).4 Obtención de sustancias antioxidantes a partir de microalgas.

CAPÍTULO 3 MATERIALES Y MÉTODOS .

Estados Unidos)  Espectrofotómetro (Bausch & Lomb Spectronic. Fue secada por convección con aire caliente y molida hasta obtener un diámetro de partícula menor a 1 mm. China)  Agitador tubos vortex (VELP Scientifica. Materiales y Métodos CAPÍTULO 3. se almacenó bajo refrigeración (5 °C) hasta su posterior uso en ensayos de extracción y análisis. INC Allentown.1. modelo 7071. Material de vidrio y otros  Desecador con sílica gel  Frascos de vidrio (viales) 15 mL Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). modelo FRD22. 3. modelo AUX 220. 3. sensibilidad ± 0.1.1. Equipos e instrumentos  Extractor supercrítico (Applied Separation Spe-ed SFE-2.1. Japón)  Balanza granataria (Shimadzu. la cual fue proporcionada por la Universidad de Antofagasta. MATERIALES Y MÉTODOS 3. Materiales 3. Japón)  Balanza analítica. Ésta viene en suspensión acuosa con 20% de sólidos totales. China)  Cronómetro digital (Q&Q HS45. Finalmente.2. La muestra fue tamizada para trabajar con el mismo diámetro de partícula en todas las extracciones. modelo DHG-9037A.1 Materia prima Se utilizó como sustrato microalga Botryococcus braunii.Capítulo 3. modelo SP-2000 UV. Estados Unidos)  Estufa rango 30-220 ºC (Electron Thermostatic Oven.0001 g (Shimadzu. modelo ELB600S. 15 . Japón)  Refrigerador (Frigidaire. Italia).3.

A. Reactivos  CO2 99 % de pureza. Argentina  Tolueno p. A.4. AGA.1.a. AcrosOrganics. 3. Baker. 16 . New Jersey.a. Este análisis se realizó en duplicado tanto al sustrato inicial como al agotado obtenido luego de la extracción.a. 100. Merck Chemicals. Chile  Cloroformo p. Alemania  Etanol p. 250 mL  Mortero y pistilo 3.2’-bipiridina.S. 3.Capítulo 3. Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).S. 1990).  2. México  Estigmasterol. Merck Chemicals.1. Materiales y Métodos  Matraz aforado de 10 mL y 25 mL  Cubetas de cuarzo y vidrio  Matraz Erlenmeyer 250 mL  Pipeta total de 1. Determinación de humedad La humedad del sustrato se determinó a través del método gravimétrico (AOAC. 95%. San Lorenzo. A.S. JT.C. 5 y10 mL  Micropipeta 10:100 μL y 100:1000 μL  Probeta de 50 mL y 100 mL  Vasos precipitados de 50.. Merck Chemicals. Estados Unidos.C. Sigma.C. Alemania  Ácido sulfúrico p.C.a. Alemania  Anhídrido acético p..2. A..a.2 Métodos de análisis 3. Estados Unidos. Cicarelli. el cual se basa en la deshidratación de la muestra hasta peso constante mediante el secado en estufa a 105 °C.S..

Capítulo 3. presentadas en la Tabla 3. Las extracciones se realizaron bajo condiciones de extracción que combinan distintos niveles de temperatura (41-69 °C) y densidad de CO2 (843-957 kg CO2/m3). Análisis del aceite 3.1).1) 3. braunii en un extractor supercrítico de capacidad de 50 mL y un diámetro interno de 14 mm. Figura D-1 se observa la curva de calibración del método de carotenoides totales.3. rendimiento de esteroles (mg est/kg sólido seco) y rendimiento de tocoferoles (mg toc/kg sólido seco). Las muestras de aceite obtenidas fueron disueltas en cloroformo y a continuación fueron llevadas al espectrofotómetro UV donde se estableció la absorbancia a una longitud de onda de 452 nm. basado en la metodología informada por Malaysian Palm oil Board. rendimiento de carotenoides (mg car/kg sólido seco).2. 3. 17 . concentración de tocoferoles (g toc/kg aceite). Los extractos obtenidos se recuperaron en viales de vidrio de 60 mL de capacidad previamente pesados para obtener la cantidad de aceite extraído por diferencia de masa entre el vial con aceite y el vial vacío.2. concentración de esteroles (g est/kg aceite). (2005).3. ( ) Donde: mH: masa muestra húmeda (g) mS: masa muestra seca (g) (m -mS ) m 100 (3. El rendimiento de extracción de aceite se expresó como g aceite/kg sustrato seco (Anexo B. Tabla B-1 a B-12) y el análisis del extracto consta de: concentración de carotenoides (g car/kg aceite). Materiales y Métodos Se expresó el peso perdido por la muestra como el porcentaje de humedad en base húmeda (bh) mediante la Ecuación (3. Extracción de aceites utilizando SC-CO2 Los ensayos de extracción de aceite se realizaron cargando 7 g de sustrato seco de B.1.1 Contenido de carotenoides totales El contenido de carotenoides totales se determinó por espectrofotometría UV. Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). En el Anexo D.

Capítulo 3. Materiales y Métodos

Cd
Donde:

(mA) FD V g

100

(3.2)

Cd: Concentración de carotenoides totales (mg carotenoides/kg aceite) m: pendiente de la curva patrón β-caroteno A: absorbancia de la muestra analizada en longitud 452 nm FD: factor de dilución de la muestra V: volumen del solvente utilizado en la preparación del extracto (mL) g: masa de aceite analizado (g)

3.3.2 Contenido de esteroles La concentración de esteroles se determinó a través del método espectrofotométrico informado por Sabir et al. (2003). Para este análisis se prepararon los siguientes reactivos:  Solución patrón de estigmasterol: Se disolvieron 10 mg de patrón estigmasterol en 10 mL de cloroformo y luego se agitó.  Reactivo Liberman-Burchard: Se disolvieron 0,5 mL de ácido sulfúrico en 10 mL de anhídrido acético. La solución se cubrió con papel aluminio para protegerla de la luz.

En primer lugar, se preparó una curva de calibración, adicionando a seis matraces de aforo de 10 mL la solución patrón (0, 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5 mL a cada matraz, el primero se considera como blanco). A continuación, 2 mL del reactivo Liberman-Burchard fueron añadidos a cada matraz y se aforaron con cloroformo a un volumen final de 10 mL. Los matraces fueron cubiertos por papel aluminio y mantenidos en la oscuridad durante 15 min. Luego se estableció el cero de la absorbancia del blanco a 640 nm y se midió la absorbancia de las demás soluciones, obteniéndose de esta forma el gráfico de la curva patrón. En el Anexo D, Figura D-2 se observa la curva de calibración de los esteroles totales.

Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). 18

Capítulo 3. Materiales y Métodos

Para el análisis de aceites se pesaron 100 mg de éste utilizando cloroformo como solvente. Se tomaron 3 mL de la solución diluida y se determinó su absorbancia luego de añadir el reactivo Liberman-Burchard mas cloroformo. La Ecuación (3.3) se utilizó para determinar el contenido de esteroles totales presentes en el aceite.

C
Donde:

(mA) FD V g

1000

(3.3)

C: concentración de esteroles totales (mg esterol/kg de aceite) m: pendiente de la curva patrón estigmasterol A: absorbancia del aceite analizado en longitud 640 nm FD: factor de dilución V: volumen del solvente utilizado en la preparación de aceite (mL) g: masa de aceite analizado (g)

3.3.3 Contenido de tocoferoles La concentración de tocoferoles totales se determinó a través de espectrofotometría UV-VIS, usando el método colorimétrico Emmerie-Engel informado por Wong et al. (1988). Para este análisis fue necesario preparar los siguientes reactivos:    Reactivo α- tocoferol: disolver 0,0150 g de α- tocoferol en 30 mL de tolueno y agitar. Solución 2,2’-bipiridina: disolver 0,0700g de 2,2’-bipiridina en 100 mL de etanolagua (95%). Solución FeCl3x 6H2O: disolver 0,0400 g de FeCl3*6H2O en 20 mL de etanol-agua (95%).

En primer lugar se preparó una curva de calibración. A continuación, 3,5 mL de 2,2 fueron añadidos a cada matraz más 0,5 mL la solución de Fe y se aforó con tolueno a volumen final de
Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). 19

Capítulo 3. Materiales y Métodos

10 mL. Se estableció el cero de la absorbancia del blanco a 520 nm y luego se procedió a medir la absorbancia de las siguientes soluciones, para obtener de esta forma el gráfico de la curva patrón observado en el Anexo D, Figura D-3. Para el análisis de las muestras se disolvieron 0,2 g de aceite en 5 mL tolueno y se adicionaron 3,5 mL de 2,2’-bipiridina y 0,5 mL de Fe. La solución se aforó con tolueno a 10 mL y luego se leyó a una absorbancia de 520 nm. La Ecuación (3.4) se utilizó para determinar la concentración de trolox equivalente presente en la muestra extraída.

C
Donde:

(mA) V FD 1000 g

(3.4)

C: concentración de Tocoferoles totales (mg tocoferoles/kg de aceite) m: pendiente de la curva de patrón de α-tocoferol A: absorbancia de la muestra analizada en longitud 520 nm V: volumen del solvente utilizado en la preparación de aceite (mL) g: masa de aceite analizado (g)

3.4 Diseño de experimentos 3.4.1 Análisis estadístico Se utilizó la metodología Superficie de Respuesta (MSR) que permitió evaluar el efecto de las variables independientes temperatura codificada (X1) y densidad de CO2 codificada (X2) (Ecuación 3.5 y 3.6 respectivamente) sobre las variables dependientes; rendimiento de extracción de aceite (Y1), concentración de carotenoides (Y2), concentración de esteroles (Y3), concentración de tocoferoles (Y4), rendimiento de extracción de carotenoides (Y5), rendimiento de extracción de esteroles (Y6) y rendimiento de extracción de tocoferoles (Y7).

Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). 20

Capítulo 3. Materiales y Métodos

X1 

T  55 10

(3.5)

Donde: T: temperatura ° C
X2  D  900 40

(3.6)

Donde: D: densidad (kg/m3)

Se utilizó un polinomio de segundo orden para expresar la variables respuestas como una función de las variables independientes como sigue:

2 Y  A0  A1 X 1  A2 X 2  A12 X 1 X 2  A11 X 12  A22 X 2

(3.7)

Donde: A0: es una constante A1 y A2: coeficientes lineales A12: coeficiente de interacción A11 y A22: los coeficientes cuadráticos.

El diseño experimetal (Tabla 3.1) está basado en un diseño central compuesto rotatorio; el cual consiste de un diseño factorial de 2 factores independientes con niveles de trabajo (-1,+1). El diseño tiene 4 (2n) puntos experimentales y 4 (2n) puntos axiales con una distancia axial de 1,41 ( = 2n/4), y 4 replicas en el punto central (total 12 puntos de diseño). El ajuste del modelo fue evaluado por el coeficiente de determinación R2 y mediante un análisis de varianza (ANOVA), para estimar el efecto y significancia de las variables independientes (temperatura y densidad de CO2) sobre las variables respuestas; rendimiento de extracción de aceite, concentración de carotenoides, concentración de esteroles, concentración de tocoferoles, rendimiento de extracción de carotenoides, rendimiento de extracción de esteroles y rendimiento de extracción de
Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). 21

Capítulo 3. Materiales y Métodos

tocoferoles en el aceite. Los coeficientes de la ecuación de segundo orden fueron estimados usando el programa Design-Expert Versión 6.0.1 (Stat-Easy, Inc. Minneapolis, MN). La significación estadística se basó en los criterios de error total con un nivel de confianza del 95%.

Tabla 3.1. Diseño experimental Central Compuesto Rotatorio. Puntos de diseño 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Temperatura (T) °C 45 65 45 65 41 69 55 55 55 55 55 55 Densidad (D) kg CO2/m3 860 860 940 940 900 900 843 957 900 900 900 900 X1 (-) -1 1 -1 1 -1,41 1,41 0 0 0 0 0 0 X2 (-) -1 -1 1 1 0 0 -1,41 1,41 0 0 0 0

Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). 22

CAPÍTULO 4 RESULTADOS Y DISCUSION .

además.0 (g est/kg aceite). donde Y1 presenta valores de rendimiento que varían entre 60.8 (mg car/ kg SS).21% (b. 1990) (Anexo A.7) que describe la respuesta Y en función de las variables independientes temperatura y densidad. mientras que el rendimiento de carotenoides (Y5) presenta valores comprendidos entre 497. concentración de tocoferoles (Y4).9. la concentración de tocoferoles (Y4) se encuentra entre 16 y 17.41 ± 0.1 se puede observar los valores de las respuestas antes citadas. observar cuales son las mejores condiciones de extracción en los rangos establecidos en el diseño estadístico utilizando el programa Design Expert. En la Tabla 4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 4.9 (mg est/kg SS) y finalmente. en cuanto a la concentración de esteroles (Y3) presenta concentraciones comprendidas entre 15. El efecto de las variables se evaluará a continuación mediante la metodología de superficie de respuesta usando la ecuación cuadrática (Ecuación 3.2 Efecto de las variables independientes temperatura y densidad del CO 2 sobre el comportamiento de las respuestas. rendimiento de carotenoides (Y5).h) obtenido según el método gravimétrico (AOAC.5 a 1386.9 y 84.22. la respuesta Y2 presenta una concentración de carotenoides que varía en un rango de 8. en la respuesta Y6 se observan rendimientos entre 972.4 y 1676. se estudió el efecto de éstas sobre las respuestas: rendimiento de extracción de aceite (Y1). inhibiendo el contacto entre el SC-CO2 y el sustrato. de actuar como anti-solvente y reducir la solubilidad de carotenoides (Sun y Temelli. Tabla A-1).1 a 16. 22 . concentración de esteroles (Y3). Utilizando un diseño central compuesto rotatorio con dos variables independientes: temperatura (X1) y densidad de CO2 (X2).1 Contenido de humedad de la muestra inicial El contenido de humedad de la muestra inicial de microalga (Botryococcus braunii) fue 3. rendimiento de esteroles (Y6) y rendimiento de tocoferoles (Y7) para.6 (g toc/kg aceite). Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). (2010).4 y 1276. Resultados y discusión CAPÍTULO 4. el rendimiento de tocoferoles (Y7) presenta valores que varían desde 974. Según Li et al.Capítulo 4. 2006) En este ensayo la humedad inicial del sustrato es baja y favorable para la extracción de aceite como de carotenoides con SC-CO2. concentración de carotenoides (Y2).1 (g car/kg aceite). de esta forma.8 (mg toc/kg SS). el agua interfiere en la eficiencia de la extracción.2 (g aceite/kg SS). 4.

7 828.5 17. kg / m3) X1 () X2 ( ) Y1 (g aceite/ kg SS) Y2 (g car/ kg aceite) Y3 (g est/ kg aceite) Y4 (g toc/ kg aceite) Y5 (mg car/ kg SS) Y6 (mg est/ kg SS) Y7 (mg toc/ kg SS) 45 65 45 65 41 69 55 55 55 55 55 55 860 860 940 940 900 900 843 957 900 900 900 900 -1 1 -1 1 -1.5 62.8 16.Resultados y discusión .1 84.7 17.41 0 0 0 0 61.5 828.2 890.1 Rendimiento de extracción y concentración de carotenoides.6 1160.4 72.1 1270.8 1009.4 1676.0 1250.2 533.4 1282.0 896.41 1.5 18.6 8.5 993.0 9.8 1340.4 1228.7 923.9 1386.5 21.4 769. Y3: concentración de esteroles.1 12.8 73. esteroles y tocoferoles con SC-CO2.2 12.9 1353.2 977.3 6 60.0 22. Y6: rendimiento de extracción de esteroles.1 73. Y7: rendimiento de extracción de tocoferoles.0 Y1: rendimiento de extracción de aceite.41 1.4 13.9 8.2 12.3 1087. 1276.8 18.5 16.5 1331.8 589.Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).2 16.7 1330.9 76.7 497.3 1216.6 14.7 1207.1 972.1 1228.6 16. °C) Densidad (D.8 974.5 16.0 17. Y5: rendimiento de extracción de carotenoides.41 0 0 0 0 0 0 -1 -1 1 1 0 0 -1.6 15.6 16.1 12.0 1481.2 60. Capítulo 3.2 1193. Y4: concentración tocoferoles.9 60 80. 23 Tabla 4.6 1070.0 16.0 17.0 61.9 16.2 67.2 17.2 12.6 1044.3 19.6 16.1 17.1 18. Temperatura (T.4 1337.5 19.1 825.0 16.0 18.5 16.5 1421. Y2: concentración de carotenoides.

2E5 Residuo 25982.62 37.13 4.5E+5 2900.Capítulo 4.72 < 0. versión 6.97 9.0001 2.12 0.53E+5 12156. Tabla de análisis de varianza para el modelo cuadrático Modelo Y1 Regresión Residuo Total Y2 Regresión Residuo Total Y3 Regresión Residuo Total Y4 Regresión Residuo Total Y5 Regresión Residuo Total Y6 Regresión Residuo Total Y7 Regresión 2.24 5 6 11 0. Y4: concentración de tocoferoles.37 10.36 < 0.4E+5 5 6 11 44650.0066 3.2 se presentan los resultados del análisis de varianza entregado por el programa Design Expert.14 51. Y7: rendimiento de extracción de tocoferoles. En la Tabla 4.86 12.0.7 13.3 Análisis estadístico La evaluación estadística del modelo se efectuó mediante el análisis de varianza (ANOVA) el cual permite determinar de forma analítica el comportamiento de los datos obtenidos a partir de los ensayos de extracción.42 0. Y6: rendimiento de extracción de esteroles.0044 7.70 4330.05 < 0.31 < 0.30 < 0.2E+5 5 6 11 77253. Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).29 5 6 11 132.85 0.23 6409.0051 72.7E+5 5 6 11 1.60 3. Mediante este análisis se podrá evaluar la significación y la adecuación del modelo cuadrático propuesto (Ecuación 3.0330 34.53 0.86E+5 38459. Y5: rendimiento de extracción de carotenoides. Resultados y discusión 4.24 3.51 72.0081 Suma de cuadrados gl Cuadrado medio F Valor p Y1: rendimiento de extracción de aceite.94 7. Y3: concentración de esteroles.64 0.5 < 0. Tabla 4.7).62 5 6 11 14.10 5.2.97 < 0.81 747.48 83. Y2: concentración de carotenoides. 24 .85 5 6 11 6.6 11.1.21 Total 2.084 170.0001 663.

coeficiente de variación.3 es la falta de ajuste. para Y1 es de 0.Capítulo 4.2 se puede observar los valores F para cada modelo de regresión. es decir.01. le confiere validez al modelo obtenido. Esta situación se repite para las respuestas Y2. esto debido a que no existen grandes diferencias entre el valor experimental y el valor predicho como se puede observar en el Anexo E. rechazar una hipótesis nula cuando es cierta. Para la respuesta Y1 el valor de F es 9. el 11% restante es la contribución del error a la respuesta.05) para ninguna de las respuestas. lo cual indica que el modelo es significativo para predecir el comportamiento de estas respuestas en función de las variables no codificadas temperatura de extracción y densidad de CO2. Y5. indica la contribución de todos los componentes de la ecuación a la respuesta. Y7. el indicador R2 se encuentra alrededor de 0. Para la respuesta Y1 existe menos del 1 % de cometer un error tipo I.89. siendo consistentes en el tiempo sin importar las fuentes de ruido que pueden comprometer su calidad. Este valor. Para las demás respuestas.5 lo que indica que el modelo utilizado es significativo ya que presenta un valor p≤0.05 que el modelo pueda fallar debido a perturbaciones experimentales. no se observa una alta dispersión de los datos. Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). 25 . coeficiente de determinación (R2) y falta de ajuste. Y6. (Figura E-1 a E-7). al ser alto. en este caso H0 indica que el modelo utilizado no es apropiado para predecir el comportamiento de la respuesta en función de las variables en estudio.033 lo que indica que existe una probabilidad menor 0. La respuesta Y4 (concentración de tocoferoles). por lo tanto. y se establece que el modelo es adecuado. En cuanto a la razón señal/ruido estas presentan un valor mayor a 4 lo que indica que las respuestas obtenidas tienen robustez y son de calidad. cuanto más pequeño sea su valor mayor será la evidencia para rechazar la hipótesis nula (H0).3 se observan los indicadores estadísticos para cada una de las respuestas. lo que quiere decir que el 89% del rendimiento de extracción de aceite está explicado por el modelo representado en la ecuación. Resultados y discusión En la Tabla 4. presenta un valor p<0. Y3.90 lo cual señala que el comportamiento de éstas está explicado adecuadamente por las variables independientes involucradas en la ecuación cuadrática. razón señal/ruido. se rechaza H0. en esta ocasión es improbable. En la Tabla 4. donde se encuentran los valores del modelo (F). El valor p es el nivel de significancia observado en el modelo. la cual no resultó significativa (p≥0. El coeficiente de determinación R2. Otro de los indicadores estadísticos que pueden observarse en la Tabla 4.

9%.1.82 0.4 9.3. respectivamente.50* 0.35 4.89 61.05).2 9.83 ( ) -0.36* 0.Capítulo 4. Y3: concentración de esteroles. se puede observar que el rendimiento de extracción de aceite fue afectado significativamente (p≤0.19 1.30* 0.8% y 11.05* Significante (p≤0.76 ( D-900 40 ) + *4. Y4: concentración de tocoferoles.6 10. 1 T-55 D-900 T-55 2 71.5 22. 24. Tabla E-1). 4.0ns 10.68 Y1: rendimiento de extracción de aceite. Esto se observa en la Figura 4.78ns 5.16 6.05* 0.91 21821. Y2: concentración de carotenoides.56 ( ) + *4.35ns 51.1) A partir de la Ecuación 4.31* 0.1 y el análisis de varianza para la contribución de cada término presente en la ecuación polinómica (Anexo E.3. braunii (Y1).9ns 12.38 2.1 que indica la relación causa/efecto que existe con las variables independientes (temperatura de extracción y densidad de CO2) donde los coeficientes significativos (p≤0.82+ *6. Análisis del rendimiento de extracción de aceite Para la respuesta rendimiento de extracción de aceite de microalga B.91 26980.99 0.97 12156.97* 0.93ns Y2 (g car / kg aceite) 170.01). se obtuvo la Ecuación 4. En base a los resultados estadísticos obtenidos. Y7: rendimiento de extracción de tocoferoles.89 6.21 5. CV: coeficiente de variación.34ns 9.05). donde el efecto positivo de la temperatura se ve a alta densidad y el efecto positivo de la densidad se observa a Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).1. el modelo cuadrático resulta adecuado y permite utilizar las superficies de respuesta para analizar el efecto de las variables independientes temperatura de extracción y densidad del CO2 sobre cada una de las respuestas en estudio.72* 0.* significativo p≤0.57 ( 2 T-55 10 ) ( D-900 40 ) (4. Y5: rendimiento de extracción de carotenoides.8 5. ** Significante (p≤0.2% de contribución en la respuesta. Resultados y discusión Tabla 4.71 ( ) 10 40 10 -2. 26 .90 2. Y6: rendimiento de extracción de esteroles. y ns No-significante (p≥0.4 40.6ns Y1 (g / kg SS) 9.05) se indican con (*).05) por los componentes lineales de temperatura y densidad y la interacción de ambos componentes con un 45. Indicadores estadísticos para el modelo de superficie de respuesta Indicadores estadísticos F R2 Falta de ajuste Señal/ruido CV Variable respuesta Y3(g est / Y4 (g toc/ Y5(mg car/ Y6 (mg est/ Y7 (mg toc/ kg aceite) kg aceite) kg SS) kg SS) kg SS) 11.6 7.

0 kg aceite/kg SS. En la Figura 4. 90 81 72 63 53 957 69 929 62 900 55 872 843 41 48 Densidad (kg CO2/m3) Temperatura (°C) Figura 4. de acuerdo al modelo cuadrático el valor fue 53. Además. representando gráficamente el mayor % de contribución a la respuesta.1 se observa que el mayor rendimiento de extracción se encuentra en la zona de alta temperatura de extracción y alta densidad de CO2.1. obtenido a 69 °C y 957 kg CO2/m3. Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). Finalmente. la Figura 4. el mejor rendimiento de extracción de aceite fue 90.Capítulo 4. de acuerdo al modelo cuadrático. Resultados y discusión alta temperatura. ya que.0 g aceite/kg SS. Los coeficientes de las variables lineales y la interacción de éstas fueron significativos y positivos existiendo una relación directamente proporcional a condiciones de densidad y temperatura sobre el punto central (900 kg CO2/m3 y 55 °C) aproximadamente. se observa una mayor pendiente para la variable temperatura. 27 .1 Superficie de respuesta del rendimiento de extracción de aceite (Y1) como función de la temperatura (ºC) y densidad (kg CO2/m3). muestra que el menor rendimiento de extracción se encuentra a temperaturas entre 41 y 48°C en el rango de densidades de 843 a 872 kg CO2/m3.

2) Del análisis de varianza (Anexo E. Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). 28 . también influyó significativamente (p≤0.036 ( ) 10 40 10 +0.9% de contribución en la respuesta. que estos tres componentes explican en un 99. se produce un aumento en la concentración de carotenoides (Y2).05) se indican con (*). Resultados y discusión 4. a su vez la menor concentración de carotenoides presenta un valor de 6.45 ( ) -0. donde se ve un comportamiento lineal de la respuesta. Se puede decir entonces. lo que gráficamente representa la contribución que realiza esta variable a la respuesta. la superficie sigue esta tendencia presentando una mayor concentración en condiciones sobre el punto central (55°C y 900 kg CO2/m3).2). Tabla E-2) se establece que la concentración de carotenoides (Y2) fue afectada principalmente por el componente lineal densidad de CO2 con un 65.0 g car/kg aceite encontrada a una temperatura de 69 °C y una densidad de 957 kg CO2/m3.2 se observa que el signo de los coeficientes de ambas variables es positivo. como se observa en la Figura 4.0.0 g car/kg aceite a una temperatura de 42 °C y densidad de 843 kg CO2/m3.47 ( 2 T-55 10 )( D-900 40 ) (4. A partir de la Ecuación 4.13 ( D-900 40 ) .2. lo que indica una relación directamente proporcional de la temperatura de extracción y densidad de CO 2 sobre la concentración de carotenoides (Y2). De acuerdo a los valores entregados por el modelo cuadrático la mayor concentración de carotenoides es 17.2% la respuesta Y2.0% y finalmente la interacción de los componentes temperatura y densidad de CO2 influyó un 1.7 ( ) + 2.2% en la concentración de carotenoides en el aceite extraído.05) el componente lineal temperatura con un 32. 2 T-55 D-900 T-55 2 12.2 Análisis de concentración de carotenoides Para la respuesta concentración de carotenoides (Y2) se obtuvo la ecuación polinómica (4. es decir.2 se obtuvo la superficie de respuesta observada en la Figura 4. a medida que aumenta la densidad a temperatura constante.2. En la Ecuación 4.3. presentando una mayor pendiente la variable densidad de CO2.30+ 1. la cual indica la relación causa/efecto que existe entre la respuesta y las variables independientes temperatura de extracción y densidad de CO2 donde los coeficientes significativos (p≤0.Capítulo 4.

90 ( T-55 D-900 T-55 2 ) + 1. presentando un coeficiente de signo positivo lo que indica una relación directamente proporcional a la respuesta (Y3) a bajas temperaturas. Otro de los factores que influyó significativamente en la respuesta (Y3) es la Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).05) se indican con (*).3) A partir del análisis de varianza para la concentración de esteroles en el aceite (Anexo E.48 ( ) 10 40 10 D-900 40 +0.Capítulo 4.6%.3 que indica la relación causa/efecto que existe con las variables independientes (temperatura y densidad de CO2) donde los coeficientes significativos (p≤0. 4. se observa que la variable lineal densidad de CO2 influye significativamente (p≤0.3.0.0.16 ( ) .2 Superficie de respuesta de la concentración de carotenoides (Y2) como función de la temperatura (°C) y densidad (kg CO2/m3).3.76 ( 2 T-55 10 )( D-900 40 ) (4.3 Análisis de concentración de esteroles Los valores experimentales de la concentración de esteroles se ajustaron a un modelo cuadrático con la finalidad de generar la Ecuación 4.76 .05) en la respuesta contribuyendo un 62. 3 18. 29 . Resultados y discusión 17 14 12 9 6 957 69 929 62 900 55 872 843 41 48 3 Densidad (kg CO2/m ) Temperatura (°C) Figura 4.71 ( ) . Tabla E-3) y al analizar la Ecuación 4.0.

3 donde.0 g esteroles/ kg aceite.3 Superficie de respuesta de la concentración de esteroles (Y3) como función de la temperatura (°C) y densidad (kg CO2/m3). este comportamiento se observa en la Figura 4.4% a la respuesta. 30 . a su vez la menor concentración de esteroles presenta un valor de 15.Capítulo 4.3 se observa una mayor concentración de esteroles a temperaturas entre 41 a 48 °C y densidad de CO2 entre 929 y 957 kg CO2/m3 y de acuerdo al valor entregado por el modelo cuadrático la mayor concentración es 23. la concentración de esteroles disminuye. a medida que aumenta la temperatura a densidad de CO2 constante. Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). su coeficiente es negativo lo que indica una relación indirecta entre temperatura y concentración de esteroles. En la Figura 4. 23 21 19 17 15 957 69 929 62 900 55 872 843 41 48 Densidad (kg CO2/m3) Temperatura (°C) Figura 4.0 g esteroles /kg aceite a una temperatura de 69 °C y densidad de 860 kg CO2/m3. Resultados y discusión variable lineal temperatura aportando un 17.

mientras que a valores altos de densidad de CO2. a su vez la menor concentración de tocoferoles presenta un valor de 15. presentando una contribución de 60.4 donde a valores de temperatura bajo el punto central (55 °C) se observa un comportamiento directamente proporcional a la respuesta (Y4).05) por la variable lineal densidad de CO2 y la variable cuadrática temperatura de extracción.4 indican que la respuesta fue afectada significativamente (p≤0.05). Mientras que el signo negativo que acompaña el coeficiente de la variable cuadrática temperatura indica que dentro de un rango de trabajo.05) se indican con (*).0 g tocoferoles/ kg aceite a una temperatura de 41 °C y densidad de 843 kg CO2/m3 Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).25 ( 2 T-55 10 )( D-900 40 ) (4. presentándose un máximo en la respuesta lo que se observa en la Figura 4. Este comportamiento explica porque el componente cuadrático de la variable temperatura es negativo y significativo (p≤0.4) El análisis de varianza para la concentración de tocoferoles (Anexo E.3. Resultados y discusión 4.0 g tocoferoles/ kg aceite observada a condiciones de 41 °C y 957 kg CO2/m3. la mayor concentración de tocoferoles es 18. desde una determinada temperatura la concentración de tocoferoles disminuye al aumentar esta variable.83-0. la concentración de tocoferoles disminuye con el aumento de la temperatura.49 ( ) .25 ( ) 10 40 10 D-900 40 -3. 31 . De acuerdo al valor entregado por el modelo cuadrático. Al observar los signos que acompañan los coeficientes. En la Figura 4. la cual indica la relación causa/efecto que existe entre la respuesta y las variables independientes temperatura de extracción y densidad de CO2 donde los coeficientes significativos (p≤0.03 ( T-55 D-900 T-55 2 ) + 0.Capítulo 4.4.7% respectivamente.4% y 12. 4 16. Tabla E-4) y la Ecuación 4.4 Análisis de concentración de tocoferoles Para la respuesta concentración de tocoferoles (Y4) se obtuvo la ecuación polinómica (4.4).*0.4 se observa que a valores bajos de densidad de CO2 la concentración de tocoferoles aumenta a medida que aumenta la temperatura. en el caso de la variable lineal densidad es positivo y su comportamiento se puede observar en la Figura 4.12 10-3 ( ) -0.

4 Superficie de respuesta de la concentración de tocoferoles (Y4) como función de la temperatura (°C) y densidad (kg CO2/m3).99 ( 2 T-55 10 )( D-900 40 ) (4.99 ( ) + *227.Capítulo 4.5 indica la relación causa/efecto que existe entre la respuesta rendimiento de extracción de carotenoides (Y5) y las variables independientes temperatura y densidad de CO2. La Ecuación 4.05) se indican con (*).85+ *202.40 ( ) 10 40 10 -14. 32 .71 ( ) -0.53 ( D-900 40 ) +43.3.5 Análisis de rendimiento de extracción de carotenoides Del análisis estadístico se obtuvieron las variables significativas para el rendimiento de extracción de carotenoides en el aceite. 4. 5 T-55 D-900 T-55 2 883.5) Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). donde los coeficientes significativos (p≤0. Resultados y discusión 18 17 16 16 15 957 69 929 62 900 872 48 843 41 55 Densidad (kg CO2/m3) Temperatura (°C) Figura 4.

el menor rendimiento de extracción de carotenoides es 333.5. Tabla E-5) y la ecuación polinómica (4.05) por los componentes lineales densidad de CO2 y temperatura de extracción presentando una contribución a la respuesta de 53.0 mg car/kg SS obtenido a 69 °C y 957 kg CO2/m3. Resultados y discusión El análisis de varianza realizado para el rendimiento de extracción de carotenoides en el aceite (Anexo E. a su vez.5 se observa un comportamiento lineal de la superficie de respuesta y según los valores entregados por el modelo cuadrático el mejor rendimiento es 1550. En la Ecuación 4. Superficie de respuesta del rendimiento de extracción de carotenoides (Y5) como función de la temperatura (°C) y densidad (kg CO2/m3) Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). 1550 1246 941 637 333 957 69 929 62 900 55 872 843 41 48 Densidad (kg CO2/m3) Temperatura (°C) Figura 4. es decir. como se observa en la Figura 4. lo que indica una relación directamente proporcional de la temperatura de extracción y densidad de CO 2 sobre el rendimiento de extracción de carotenoides (Y5).Capítulo 4.5.5) indican que la respuesta (Y5) fue afectada significativamente (p≤0.8% y 42.5 se observa que el signo de los coeficientes de ambas variables es positivo. se produce un aumento en el rendimiento de extracción de carotenoides (Y5).0 mg car/kg SS. encontrado a 41 °C y 843 kg CO2/m3. la superficie sigue esta tendencia presentando un mayor rendimiento en condiciones sobre el punto central (55 °C y 900 kg CO2/m3). 33 .8% respectivamente. En la Figura 4. a medida que aumenta la densidad a temperatura constante.

22+55. Los coeficientes significativos (p≤0.6. En la Figura 4. Tabla E-6) y al observar la Ecuación 4.3.0 mg est/ kg SS. 34 .6 se observa que el mayor rendimiento de extracción se encuentra en condiciones sobre el punto central (55 °C y 900 kg CO2/m3) presentando un valor de 1631.03 ( 2 T-55 10 )( D-900 40 ) (4.68 ( ) + 203.Capítulo 4. ecuación polinómica que indica la relación causa/efecto que existe entre la respuesta rendimiento de extracción de esteroles (Y6) y las variables independientes temperatura y densidad de CO2.6) Del análisis de varianza (Anexo E. Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).6 se establece que el rendimiento de extracción de esteroles (Y6) fue afectado mayoritariamente por el componente lineal densidad de CO2 con un 77.09 ( D-900 40 ) +39.6 tanto a bajas como a altas temperaturas de extracción. presentando un coeficiente positivo el cual indica un comportamiento directamente proporcional a la respuesta.81 ( ) 10 40 10 -29. el modelo cuadrático señala que el menor rendimiento de esteroles es 883. lo que quiere decir que a medida que la densidad de CO2 aumenta a temperatura constante el rendimiento de extracción de esteroles aumenta.6 Rendimiento de extracción de esteroles Del análisis estadístico se obtuvieron las variables significativas para el rendimiento de extracción de esteroles en el aceite. esta situación se puede observar en la Figura 4. 6 T-55 D-900 T-55 2 1347.48 ( ) -58. Resultados y discusión 4.0 mg est/ kg SS observado a 41°C y 843 kg CO2/m3.05) indicados con (*) se observan en la Ecuación 4. además.4% de contribución.

6.4% respectivamente.83 ( ) -29. 4. T-55 D-900 T-55 2 1208.47+ *106.74 ( ) 10 40 10 7 -44.7) Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).94 ( 2 T-55 10 )( D-900 40 ) (4.7 que indica la relación causa/efecto que existe con las variables independientes (temperatura de extracción y densidad de CO2).34 ( D-900 40 ) +60.Capítulo 4. Superficie de respuesta de la rendimiento de extracción esteroles (Y6) como función de la temperatura (°C) y densidad (kg CO2/m3).05) en la respuesta Y7 aportando un 36.70 ( ) + *112.2% y un 40. 35 . Los valores experimentales del rendimiento de extracción de tocoferoles. Tabla E-7) se observa que las variables de los componentes lineales temperatura de extracción y densidad de CO2 influyen significativamente (p<0.3. se ajustaron a un modelo cuadrático con la finalidad de generar la Ecuación 4.7 Rendimiento de extracción de tocoferoles A partir del análisis de varianza (ANOVA) desarrollado para el rendimiento de extracción de tocoferoles (Anexo E. Resultados y discusión 1631 1444 1257 1070 883 957 69 929 62 900 55 872 843 41 48 Densidad (kg CO2/m3) Temperatura (°C) Figura 4.

a partir de la Figura 4. En la Figura 4.7 se observa el signo positivo que acompaña los coeficientes lineales temperatura de extracción y densidad de CO2 lo que se ve en la Figura 4.7.7 se observa que el mayor rendimiento de extracción de tocoferoles se encuentra en la zona de alta temperatura de extracción y alta densidad de CO2.7.Capítulo 4. donde el efecto positivo de la temperatura se observa a alta densidad y el efecto positivo de la densidad se observa a alta temperatura existiendo una relación directamente proporcional que se observa solo a condiciones de densidad y temperatura sobre el punto central (900 kg CO2/m3 y 55 °C) aproximadamente. obtenido a 69 °C y 957 kg CO2/m3. también se puede ver que el menor rendimiento de extracción se encuentra a temperaturas de 41 a 48 °C en Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).7 Superficie de respuesta del rendimiento de extracción de tocoferoles (Y7) como función de la temperatura (°C) y densidad (kg CO2/m3).0 mg toc/kg SS. Resultados y discusión En la Ecuación 4. 36 . ya que. 1492 1337 1182 1027 872 957 69 929 62 900 55 872 843 41 48 Densidad (kgCO2/m3) Temperatura (°C) Figura 4. de acuerdo a los valores entregados por el modelo cuadrático el mejor rendimiento de extracción fue 1492. Finalmente.

rendimiento similar al obtenido en esta investigación. En cuanto al contenido de aceite de microalga Botryococcus braunii.1 kg CO2/m3 logrando un rendimiento de 86.Capítulo 4. Maróstica et al. extrajo aceite a partir de la microalga Nannochloropsis sp. Andrich et al. se estudia el efecto de la temperatura de extracción y densidad del CO2 sobre el rendimiento de extracción de aceite de la microalga (Botryococcus braunii). la cual aumenta por el incremento de la temperatura. tamaño de partícula.4 Discusión general Existen muchos factores que pueden influenciar el rendimiento de extracción supercrítica. indican que la solubilidad de los solutos está influenciada claramente por dos factores: la densidad del SC-CO2. estudios realizados por Chen y Walker (2012).. la solubilidad de los solutos cambiará de acuerdo al factor más predominante. y la presión de vapor de los solutos. obteniendo el mayor rendimiento (118. temperatura de extracción. 4.1 existe relación entre estas variables y cada una de las respuestas en estudio. condiciones de extracción dentro de nuestro rango de estudio. 37 .3 g aceite/ kg SS. lograron el mayor rendimiento de extracción de aceite de microalga Chlorella protothecoides a condiciones de 50 °C y 900 kg CO2/m3. es decir. Resultados y discusión un rango de densidades de 843 a 872 kg CO2/m3 y de acuerdo al modelo cuadrático fue 872. Antilaf (2011). observando un efecto significativo de la temperatura sobre el rendimiento de extracción encontrando el mayor a una temperatura de 69 °C y una densidad de 957 kg CO2/m3 lo cual concuerda con Maróstica et al. Como se puede observar la densidad es mayor a la utilizada en esta investigación y por ende el rendimiento de extracción también es mayor. Este hecho se debe a la alta presión del solvente lo que genera una menor distancia entre Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). densidad del CO2 entre otras. En este caso.04 g aceite/kg SS) a 55 ºC de temperatura y una densidad de 1000 kg CO2/m3.0 mg toc/kg SS. (2005). extrajo aceite a condiciones de 40 °C y 911. (2010). estos pueden ser: humedad del sustrato. (2010) que señalan que el aumento de la temperatura acelera la transferencia de masa. mientras que. de acuerdo a los resultados presentados en la Tabla 4. Por otro lado. donde. aumentando la presión de vapor de los compuestos extractables y mejorando el rendimiento de extracción. que aumenta con la presión trabajando a temperaturas constantes. presión de CO2.

(2004) determinó que un 55. braunii. se obtuvieron trabajando con las densidades de CO2 más altas (sobre 900 kg CO2/m3). Fang et al. 2001). Resultados y discusión las moléculas provocando un aumento en la solubilidad del aceite como también un incremento del poder solvente del SC-CO2 (Li et al.... 890 kg CO2/m3. 38 .4% del extracto corresponde a ácidos grasos como ácido oleico. Los carotenoides son pigmentos termolábiles y fotodegradables cuyas propiedades antioxidantes están ampliamente estudiadas y para los que la extracción con CO2 supercrítico ha sido ampliamente utilizada. (2005). Debido a la baja polaridad de estos compuestos y a la alta selectividad de este método se ha llegado a calificar la extracción con fluidos supercríticos como “el método más apropiado para la obtención de ácidos grasos. 1998). obteniendo los mejores rendimientos de carotenoides a condiciones de trabajo de 60 ºC. pigmentos.. en la microalga S. los resultados obtenidos por Macias-Sánchez et al. resultados similares a la investigación realizada por Macías-Sánchez et al. en el caso de B. densidades de 882 a 957 kg CO2/m3. Los mejores resultados. con valores superiores a 1500 mg car/ kgSS. (2010). Esto puede ser debido a que la extracción de carotenoides está favorecida por el empleo de elevadas densidades de CO2 cuando se trabaja en intervalos supercríticos (Ibañez et al. esto puede ser debido a que la extracción de carotenoides está favorecida por el empleo de elevadas densidades del CO2 cuando se trabaja en intervalos supercríticos (Favati et al. a partir de biomasa de microalgas” (Careri et al. linoleico entre otros. Por otro lado. logrando el mayor rendimiento por sobre los 55 ºC y densidades sobre los 900 kg CO2/m3.. Mendiola (2008) señala que a pesar de que en el rendimiento de extracción de carotenoides se debe tener en cuenta la presencia de otros compuestos en el extracto. palmítico. En el proceso de extracción de carotenoides tanto la densidad de SC-CO2 como la temperatura de extracción influyeron significativamente en el rendimiento de carotenoides. en términos de rendimiento de extracción de carotenoides. 1998). quienes utilizaron extracción con SCCO2. etc. en Nannoclhoropsis gaditana utilizando SC-CO2 indican que a temperaturas de 60 ºC y densidad de 890 kg CO2/m3 se obtiene el mayor rendimiento en la extracción de carotenoides. almeriensis trabajando a temperaturas entre 32 y 60 ºC. el rendimiento de Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).Capítulo 4. 2010). Cabe mencionar que el aceite obtenido de microalgas y de otros sustratos en general se extrae como mezcla de varias fracciones de lípidos.

Este comportamiento indica que el proceso sería controlado por la transferencia de masa (difusión del CO2 al interior de la matriz vegetal y difusión del CO2 mas el aceite desde el interior de las partículas hacia la superficie) (MacíasSánchez et al. Finalmente.Capítulo 4. (Figua C-1 a C-12) donde se ven claramente dos fases predominantes en las curvas del modelo de extracción. obteniendo el mayor rendimiento a condiciones máximas de temperatura (83 °C). En la primera fase se observa una velocidad de extracción rápida durante los primeros 10 minutos. . en este estudio el mayor rendimiento de extracción de tocoferoles se obtuvo a la máxima temperatura del rango de trabajo (69 °C). La velocidad de extracción de aceite de microalga Botryococcus braunii se puede observar en el Anexo C. ya que. 2009) Finalmente. una gran proporción del aceite ha sido extraído lo que gráficamente se representa por una asíntota.. es lógico pensar que el rendimiento estará favorecido a elevadas temperaturas. Efecto de la densidad y temperatura del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). Otro estudio realizado por Mendiola (2008) en extractos de Spirulina también concuerda con lo anteriormente descrito. 1996). dado que la temperatura afecta positivamente su extracción (King et al. luego se observa que la tasa de extracción va disminuyendo (fase de transición). durante esta fase. 39 . a condiciones de 69 °C y 900 kg CO2/m3 (finalizada la extracción) se obtuvo el mayor rendimiento. En cuanto al rendimiento de extracción de tocoferoles tanto la densidad de CO2 como la temperatura de extracción influyeron significativamente p≥ 0. esto ocurre debido a que en esta fase se encuentra todo el aceite disponible para la extracción. Esta relación se refleja en los resultados obtenidos en esta investigación. Resultados y discusión carotenoides tiene una relación directa con el total del aceite extraído.05 sobre el rendimiento. el mayor rendimiento de carotenoides y el mayor rendimiento de aceite se obtuvieron a las mismas condiciones (69 °C y 957 kg CO2/m3). Estos resultados coinciden con la aseveración de que los tocoferoles son compuestos fácilmente extraíbles.. por tanto.

CAPÍTULO 5 CONCLUSIONES .

0% por las variables en estudio.8%. un contenido de carotenoides de 12.4%.0% de influencia de temperatura. con una densidad de 957 kg CO2/m3. Efecto de la densidad y temperatura de CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). El mayor rendimiento de extracción de aceite se obtuvo a 69 °C.2 g car/kg aceite y un contenido de tocoferoles totales de 16.8 g toc/kg aceite.0 g car/kg aceite registrada a una temperatura de 69 °C y una densidad de 957 kg CO2/m3.05) por las 2 variables en estudio. braunii).8 g esterol/kg aceite. explicando su comportamiento en un 89.6% y un 60.0%.  La concentración de esteroles y tocoferoles en el extracto fueron afectadas significativamente (p≤0.05) el rendimiento de extracción de aceite de microalga (B. CONCLUSIONES  La temperatura y la densidad de CO2 afectaron significativamente (p≤0.4% respectivamente.9%. siendo la densidad de CO2 la variable que más afectó con un 53. La mayor concentración de carotenoides fue 17.  El aceite obtenido bajo condiciones seleccionadas (55 °C. 900 kg CO2/m3) presentó un contenido de esteroles totales de 18. siendo la temperatura de extracción la variable que más afectó con un 46. 41 . siendo la densidad del CO2 la variable que más contribuyó a la respuesta con un 62.Capítulo 5.  El comportamiento del rendimiento de extracción de carotenoides fue explicado en un 82.1% de contribución seguido por el 32.  La densidad del CO2 afectó significativamente (p≤0. Conclusiones CAPÍTULO 5. seguido por la temperatura con un 42.05) la concentración de carotenoides en el extracto con un 66.

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ANEXOS .

s) 3.8300 Peso muestra húmeda (g) 28.606±0.5029 27.7952 Promedio % humedad (b.7609 3. N° de réplica 1 2 Peso placa (g) 27.8315 Peso placa + Muestra seca (g) 28.3357 3.4508 3.5072 28. 51 .h) 3.6246 4.4737 28.205 % humedad (b. Determinación de la humedad del sustrato Tabla A-1: Determinación de la humedad inicial de la microalga (Botryococcus braunii).Anexos ANEXOS ANEXO A.480±0.220 Efecto de la densidad temperatura y del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).

Extracción de aceite de microalga B.Efecto de la densidad y temperatura sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii) 52 ANEXO B.1309 0.6312 Peso extracto (g) 0.4165 kg CO2 / kg SS 2.3459 0.8 4.6289 30.0437 Peso acumulado recuperado 0.5223 vial (g) Final 30.3473 30.0069 30.6 36.6 Peso Inicial 30.3299 0.4248 30.70 51.0 126.5 17.0856 0. braunii. Tabla B-1.566 Peso extracto (g) 0.6 Peso Inicial 30.6284 31.3 18.13 62.9 31. Determinación del rendimiento de extracción de aceite de microalga B.2771 0.5 CO2 g 18. Extracción de aceite de microalga B.7289 30.1927 0.5 CO2 g 18.0145 0. braunii a 45°C y 860kg CO2/m3 (Punto de diseño 1) Vial 1 2 3 4 5 Tiempo (min) 3 5 10 20 39 Consumo L NPT 10.1664 0.5 35 70 136.0 126.2595 0.1799 0.1068 0.226 0.25 1 2 3 4 5 Anexos .6728 30.49 Tabla B-2.3 g aceite / kg MP 24.5457 30.3 g aceite / kg MP 15.0819 0.0972 0.6 9.547 30.3 18.7 9.0355 0.70 61.2821 0.9924 30.0 245.4585 30.0603 Peso acumulado recuperado 0.59 41.5872 30.6 36.79 26.6369 30.45 38. braunii a 65°C y 860kg CO2/m3 (Punto de diseño 2).0 245.3828 30.5709 vial (g) Final 30. Vial Tiempo (min) 3 5 10 20 39 Consumo L NPT 10.5 35 70 136.3374 corregido 0.5 63.4212 kg CO2 / kg SS 2.5 17.2101 corregido 0.78 30.9 31.0337 0.0511 0.20 28.0827 0.1639 0.5 63.5784 30.1441 0.8 4.0827 0.0585 0.31 48.0856 0.

2651 0.2 140. Vial 1 2 3 4 5 Tiempo (min) 3 5 10 20 40 Consumo L NPT 11.96 Anexos Anexos .1 5.1766 0.0586 Peso acumulado recuperado 0.2 140.1 5.6366 33.2324 0.5 39 78 156 CO2 g 21.294 0.3 280.6186 33.4 20.643 34.7 19.5708 33.1 70.1451 0.3526 corregido 0.0169 vial (g) Final 33.20 49.5 g aceite / kg MP 32.2 10.3936 33.1065 0.4343 33.67 60.0558 0.0616 0.8 41.2226 0.0592 Peso extracto (g) 0.4119 kg CO2 / kg SS 3.8335 vial (g) Final 33.8921 Peso extracto (g) 0.5409 kg CO2 / kg SS 3.1914 0.2709 0.7939 33.2442 33.0423 Peso acumulado recuperado 0.0394 0.5 g aceite / kg MP 17.7 41. Extracción de aceite de microalga B. Extracción de aceite de microalga B.0658 0.1182 0. braunii a 45°C y 940kg CO2/m3 (Punto de diseño 3).7 Peso Inicial 33.70 66.91 40.3 280.30 39.6488 33.91 Tabla B-4. Vial 1 2 3 4 5 Tiempo (min) 3 5 10 20 40 Consumo L NPT 11.4 20.041 0.Efecto de la densidad y temperatura sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii) 53 Tabla B-3.0407 0.3359 0.3565 0.0315 0.1 70.2292 corregido 0.1 35.684 34.1451 0.0658 0.8819 34.49 28.7 19.5 39 78 156 CO2 g 21.05 52.4510 0.1 35.0229 34.1475 0.7 Peso Inicial 33.8261 34.1869 0. braunii a 65°C y 940kg CO2/m3 (Punto de diseño 4).1826 33.2 10.67 79.5871 33.0623 34.

12 61.3254 0.0332 0.0703 0.6 133.53 84.0 33.7 37.6 CO2 g 20.0481 0.4 g aceite / kg MP 11.6063 30.7255 30.5292 vial (g) Final 30.17 Anexos .0318 0.0 4.0353 0.3695 30.3 66. Vial 1 2 3 4 5 Tiempo (min) 3 5 10 20 38 Consumo L NPT 11.0703 0.6535 Peso extracto (g) 0.3322 0.9 9.5694 kg CO2 / kg SS 3.4501 0. braunii a 41°C y 900kg CO2/m3 (Punto de diseño 5).0776 0. Extracción de aceite de microalga B.2120 corregido 0.7 37.2 253.635 30.3527 corregido 0.0481 0.6121 vial (g) Final 30.41 39.48 25.1 18.56 48.2676 0.1 18.0772 0.0 4.7299 30.24 30.6616 30.0 Peso Inicial 30.5671 30.1056 0.Efecto de la densidad y temperatura sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii) 54 Tabla B-5.5 37 74 140.7652 30.1071 0.6031 Peso extracto (g) 0.0739 Peso acumulado recuperado 0.7845 30.0945 0.6739 30.3 66.2056 0.05 Tabla B-6.9 9.1369 0.56 49.2016 0.059 0.5 37 74 140.4128 kg CO2 / kg SS 3.0 Peso Inicial 30.7071 30.6 133.696 30. braunii a 69°C y 900kg CO2/m3 (punto de diseño 6) .1374 0.2 253.1706 0.6835 30.6032 30.0 33.11 66. Vial 1 2 3 4 5 Tiempo (min) 3 5 10 20 38 Consumo L NPT 11.8 19. Extracción de aceite de microalga B.6479 30.8 19.1729 0.6 CO2 g 20.0414 Peso acumulado recuperado 0.4 g aceite / kg MP 20.4398 30.2788 0.

2 g aceite / kg MP 18. braunii a 55°C y 843kg CO2/m3 (Punto de diseño 7). Extracción de aceite de microalga B.2 140.0595 vial (g) Final 34.0229 33.7292 30. Vial 1 2 3 4 5 Tiempo (min) 3 5 10 20 40 Consumo L NPT 11. Vial 1 2 3 4 5 Tiempo (min) 3 5 10 20 40 Consumo L NPT 10.91 Tabla B-8.2434 34.6719 34.5 g aceite / kg MP 34.2339 0.0995 Peso extracto (g) 0. braunii a 55°C y 957kg CO2/m3 (Punto de diseño 8).9 31.8 4.4 20.0437 Peso acumulado recuperado 0.5137 30.731 30.0624 0.1318 34.8 41.151 0.5 39 78 156 CO2 g 21.3363 corregido 0.0395 0.7081 30.17 42.Efecto de la densidad y temperatura sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii) 55 Tabla B-7.084 0.4535 0.151 0.0211 0.7162 Peso extracto (g) 0.1 5.2963 0.5 63.0 251.45 48.7 9.3 18.0392 0.5147 kg CO2 / kg SS 3.1689 34.0629 0.0371 0.04 Peso acumulado recuperado 0.1677 0.01 60.2879 0.2064 corregido 0. Extracción de aceite de microalga B.5532 30.2466 0.6095 34.3580 0.5791 30.1 70.1235 0.79 36.0924 34.5 35 70 140 CO2 g 18.5 17.7 19.10 Anexos .6183 30.1881 0.6725 vial (g) Final 30.1627 0.05 76.0458 0.1 35.4121 kg CO2 / kg SS 2.3249 0.93 67.57 52.6 37.0 126.6681 30.56 24.2311 0.3 280.2 10.9 Peso Inicial 30.7 Peso Inicial 34.1256 0.0629 0.0687 33.

4 g aceite / kg MP 25.6 133.7717 0.2 266.5 37 74 148 CO2 g 20.3052 0.8631 vial (g) Final 34.4 g aceite / kg MP 5.0365 0.051 Peso acumulado recuperado 0.4390 0.40 9.1085 33.8 19.1 18.34 45.0452 0.5 37 74 148 CO2 g 20.4949 kg CO2 / kg SS 3.78 Anexos .1007 0.6799 33.4585 kg CO2 / kg SS 3.8191 0.57 67.0474 0.6 133.13 56. Extracción de aceite de microalga B.0765 33.2678 corregido 0.1559 33.9 9.4122 34.2 266.1724 0.8 19.0426 0.3 66.7102 34.0642 0.1357 0.8792 33.16 Tabla B-10. braunii a 55°C y 900kg CO2/m3 (Punto de diseño 10).2235 0. Vial 1 2 3 4 5 Tiempo (min) 3 5 10 20 40 Consumo L NPT 11.8312 33.43 64.116 33.3068 33. Vial 1 2 3 4 5 Tiempo (min) 3 5 10 20 40 Consumo L NPT 11. Extracción de aceite de microalga B.1122 0.0443 Peso acumulado recuperado 0.7 39.6884 Peso extracto (g) 0.4659 0.035 0.89 68.8701 corregido 0.1007 0.0 4.7 39.0 33.0313 33.1783 0.6449 33.6374 vial (g) Final 33.2167 33.49 34.0 33.371 33.9074 Peso extracto (g) 0.3 66.048 0.2323 0.9 9.3 Peso Inicial 33.6595 0.0642 0.0507 34. braunii a 55°C y 900kg CO2/m3 (Punto de diseño 9).0638 0.0 4.Efecto de la densidad y temperatura sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii) 56 Tabla B-9.3826 0.3 Peso Inicial 34.87 73.3696 34.1 18.

05 31.1213 0.3 66.9 9.1 18.6 133.9 9.3 Peso Inicial 33. braunii a 55°C y 900kg CO2/m3 (Punto de diseño 12).18 0.19 73.0447 Peso acumulado recuperado 0.7 39.091 34.2291 0.1753 0. Vial 1 2 3 4 5 Tiempo (min) 3 5 10 20 40 Consumo L NPT 11.1543 0.8559 33.3 Peso Inicial 33.8495 33.1259 0. Extracción de aceite de microalga B.2318 33.2809 33.3244 0.4966 kg CO2 / kg SS 3.0489 Peso acumulado recuperado 0.0 33.10 72.0834 0.6 133.8759 33.0 33.0491 0.6447 33.82 47.2153 0.2684 corregido 0.2330 0.3195 0.2 266.8989 33.4139 0.4 g aceite / kg MP 22.0425 0.0484 0.7 39. Extracción de aceite de microalga B.4066 0.0323 34.0 4.81 34.6368 Peso extracto (g) 0.6931 33.41 Tabla B-12.2 266.95 61.9505 34.5 37 74 148 CO2 g 20. braunii a 55°C y 900kg CO2/m3 (Punto de diseño 11).9992 34.0 4.1 18.Efecto de la densidad y temperatura sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii) 57 Tabla B-11.0487 0.0494 0.22 60.0834 0.9157 Peso extracto (g) 0.6106 33.93 Anexos .8984 33.0726 0.9593 33.4 g aceite / kg MP 19.8 19.8 19.6832 33.5921 vial (g) Final 33. Vial 1 2 3 4 5 Tiempo (min) 3 5 10 20 40 Consumo L NPT 11.2780 corregido 0.5 37 74 148 CO2 g 20.0726 0.4934 kg CO2 / kg SS 3.44 47.1289 0.0587 0.2237 0.8668 vial (g) Final 33.3 66.

Efecto de la densidad temperatura y del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). 70 Rendimiento (g aceite/kg SS) 60 50 40 30 20 10 0 0 10 20 30 40 50 tiempo (min) Figura C-1. Curva cinética de extracción de aceite a 45°C y 860kg CO2/m3 (Punto de diseño 1). 58 . 70 Rendimiento (g aceite/kg SS) 60 50 40 30 20 10 0 0 10 20 30 40 50 tiempo (min) Figura C-2 Curva cinética de extracción de aceite a 65°C y 860kg CO2/m3 (Punto de diseño 2).Anexos ANEXO C. Determinación de la cinética de extracción de aceite de microalga (Botryococcus braunii).

90 Rendimiento (g aceite/kg SS 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 10 20 30 40 50 Tiempo (min) . 59 . Figura C-3. Curva cinética de extracción de aceite a 45°C y 940kg CO2/m3 (Punto de diseño 3). Efecto de la densidad temperatura y del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). Figura C-4 Curva cinética de extracción de aceite a 65°C y 940kg CO2/m3 (Punto de diseño 4).Anexos 70 Rendimiento (g aceite/kg SS 60 50 40 30 20 10 0 0 10 20 30 Tiempo (min) 40 50 .

Efecto de la densidad temperatura y del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). Curva cinética de extracción de aceite a 69°C y 900kg CO2/m3 (Punto de diseño 6). 60 . 90 Rendimiento (g aceite/kg SS 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 5 10 15 20 25 30 35 40 Tiempo (min) Figura C-6.Anexos 70 Rendimiento (g aceite/kg SS) 60 50 40 30 20 10 0 0 5 10 15 20 25 30 35 40 tiempo (min) Figura C-5 Curva cinética de extracción de aceite a 41°C y 900kg CO2/m3 (Punto de diseño 5).

Efecto de la densidad temperatura y del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).Curva cinética de extracción de aceite a 55°C y 843kg CO2/m3 (Punto de diseño 7). 80 Rendimiento (g aceite/kg SS 70 60 50 40 30 20 10 0 0 10 20 30 40 50 Tiempo (min) .Anexos 70 Rendimiento (g aceite/kg SS) 60 50 40 30 20 10 0 0 10 20 30 40 50 Tiempo (min) Figura C-7. 61 . Curva cinética de extracción de aceite a 55°C y 957kg CO2/m3 (Punto de diseño 8). Figura C-8.

Curva cinética de extracción de aceite a 55°C y 900kg CO2/m3 (Punto de diseño 10). 9 Curva cinética de extracción de aceite a 55°C y 900kg CO2/m3 (Punto de diseño 9).Anexos 80 Rendimiento (g aceite/kg SS 70 60 50 40 30 20 10 0 0 10 20 30 40 50 Tiempo (min) . 80 Rendimiento (g aceite/kg SS 70 60 50 40 30 20 10 0 0 10 20 30 40 50 Tiempo (min) . Efecto de la densidad temperatura y del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). 62 . Figura C. Figura C-10.

Anexos 80 Rendimiento (g aceite/kg SS 70 60 50 40 30 20 10 0 0 10 20 30 40 50 Tiempo (min) . Figura C-12. 63 . Figura C-11. Curva cinética de extracción de aceite a 55°C y 900kg CO2/m3 (Punto de diseño 12) Efecto de la densidad temperatura y del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii). Curva cinética de extracción de aceite a 55°C y 900kg CO2/m3 (Punto de diseño 11) 80 Rendimiento (g aceite/kg SS 70 60 50 40 30 20 10 0 0 10 20 30 40 50 Tiempo (min) .

02 0.03 0.4 0. D Análisis del extracto de aceite de microalga (Botryococcus braunii).545 0. Efecto de la densidad temperatura y del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).06 0.184 0.01 0 0 0.895 0.Anexos ANEXO.03 0.04 0.05 0.01 Absorbancia 0 0.716 0. Datos curva de calibración para la concentración de carotenoides en el aceite de microalga B.05 β-caroteno (mg/mL) 0.9998 Absorbancia Figura D-1. Tabla D-1. Curva calibración carotenoides totales.2 0.04 0. braunii Diluciones 1 2 3 4 5 6 β-caroteno (mg/mL) 0 0.02 0.366 0.0556x R² = 0.6 0. 64 .8 1 y = 0.

25 0.15 0. Efecto de la densidad temperatura y del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).400 0. braunii.951 0.234 0.000 mg estigmasterol/ml y = 0.678 0.000 Estigmasterol (mg /mL) 0.357 0.00 0.425x + 0. Datos curva de calibración para la concentración de esteroles en el aceite de microalga B.200 0.35 0.15 0.45 0.10 0.9979 absorbancia a 15mn Figura D-2.25 0.20 0.574 0.10 0.30 0.05 0.Curva de calibración esteroles totales.800 1. 65 .05 0.30 0.102 0.20 0.00 1 2 3 4 5 6 7 8 0.0039 R² = 0.442 0.600 0.40 0. Diluciones Absorbancia a 15mn 0.40 0.Anexos Tabla D-2.000 0.

813 0.01 0.Anexos Tabla D-3.04 0. 66 . Curva de calibración para tocoferoles totales.03 0.6 0.05 0.02 0.06 0. Diluciones 1 2 3 4 5 α-Tocoferol (mg/mL) Absorbancia 0.04 0.212 0.01 0 0 0.03 0.8 1 y = 0. Datos curva de calibración para la concentración de tocoferoles en aceite de microalga (Botryococcus braunii).05 0.9976 α-tocoferol (mg/mL) Absorbancia Figura D-3.0497x R² = 0.428 0.4 0. Efecto de la densidad temperatura y del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).02 0.979 0.2 0.616 0.

17 16 15 Y Predicho 14 13 12 11 10 9 8 8 10 12 14 16 18 Y Ac Experimental Figura E-2. Valores actuales y predichos para la respuesta concentración de carotenoides (Y2). 67 .Anexos ANEXO E Análisis Estadístico 90 85 Y Predicho 80 75 70 65 60 60 70 80 90 Yac Experimental Figura E-1 Valores actuales y predichos para la respuesta rendimiento de extracción de aceite (Y1). Efecto de la densidad temperatura y del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).

0 17. Efecto de la densidad temperatura y del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).5 16.5 Y Ac Experimental Figura E-4.5 17. Valores actuales y predichos para la respuesta concentración de tocoferoles (Y4).0 15.5 Y Predicho 17.Anexos 23 22 21 Y Predicho 20 19 18 17 16 15 15 16 17 18 19 20 21 22 23 Y Ac Experimental Figura E-3.0 16. 68 . 18.5 16.5 15. Valores actuales y predichos para la respuesta concentración de esteroles (Y3).5 18.

Valores actuales y predichos para la respuesta rendimiento de carotenoides (Y5). 1700 1600 1500 Y Predicho 1400 1300 1200 1100 1000 960 1060 1160 1260 1360 1460 1560 1660 1760 Y Ac Experimental Figura E-6. 69 .Anexos 1480 1380 1280 1180 Y Predicho 1080 980 880 780 680 580 480 490 690 890 1090 1290 1490 Y Ac Experimental Figura E-5. Valores actuales y predichos para la respuesta rendimiento de esteroles (Y6) Efecto de la densidad temperatura y del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).

Anexos 1470 1420 1370 1320 Y Predicho 1270 1220 1170 1120 1070 1020 970 990 1090 1190 1290 1390 1490 Y Ac Experimental Figura E-7.34 0. Análisis de varianza para el rendimiento de extracción de aceite.43 6.84 0.05).67 13.2 186. Tabla E-1.63 Gl 1 1 1 1 1 Varianza 344. Fuente X1 X2 X12 X22 X1X2 Suma de cuadrados 344. 70 . Valores actuales y predichos para la respuesta rendimiento de tocoferoles (Y7). Efecto de la densidad temperatura y del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).23 3.19 48.99 Probabilidad 0.93 24.62 186.15 X1: Temperatura [°C].71 83. GL: grados de libertad y *: Indica coeficiente significativo (p<0.71 83.0500* R2 % 45.36 3.49 5.0107* 0.1111 0.0025* 0.63 Valor F exp 24. X2: Densidad [kg CO2/m3].6495 0.49 11.19 48.36 3.

05).57 3.0081 0.52 1.3118 0.04 2.51 23.99 0.9 Valor F exp 274.8 39.0001* 0.05). 71 .69 0.5 0.78 Probabilidad 0.07 X22 X1X2 X1: Temperatura [°C].97 65. Tabla E-3.51 23.94 0.88 0. Fuente X1 X2 X12 X2 2 Suma de cuadrados 23.7 566. X2: Densidad [kg CO2/m3].21 47.28 Gl 1 1 1 1 1 Varianza 6.16 2.767 0.21 47.0008* 0. X2: Densidad [kg CO2/m ].Anexos Tabla E-2.43 6.5 0.9 Gl 1 1 1 1 1 Varianza 23.6288 0.0001* 0.14 1. GL: grados de libertad y *: Indica coeficiente significativo (p<0. Efecto de la densidad temperatura y del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).0997 R2 % 17. Fuente X1 X2 X1 2 Suma de cuadrados 6.52 1.1 0.16 2.32 62. GL: grados de libertad y *: Indica coeficiente significativo (p<0.0167* 0.28 3 Valor F exp 10.68 Probabilidad 0.22 10.0171* R2 % 31.0081 0.01 0.1 0. Análisis de varianza para la concentración de carotenoides en el aceite.166 0.49 0.26 3.88 -0. Análisis de varianza para la concentración de esteroles en el aceite.24 X1X2 X1: Temperatura [°C].096 1.

41 0.000062 0.05).76 53.26 3 Valor F exp 0.18 1.004* 0. 72 .61 4.71 7739.95 0.0071 1.03 0.70 0.797 0.12 0.6 Gl 1 1 1 1 1 Varianza 329600 414800 1.Anexos Tabla E-4.26 Gl 1 1 1 1 1 Varianza 0.089* 0.00 8.000062 0. X2: Densidad [kg CO2/m ]. Análisis de varianza para la concentración de tocoferoles en el aceite.6 3 Valor F exp 113.1535 R2 % 42.42 12. Análisis del rendimiento de carotenoides.05 1350.00062 2.0071 1.47 2.66 143.00 0.56 Probabilidad 0. X2: Densidad [kg CO2/m ].05 1350.22 60.161 R2 % 0. Efecto de la densidad temperatura y del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).41 0.67 Probabilidad 0.00036 0. Tabla E-5.06 X1: Temperatura [°C].05).5204 0. Fuente X1 X2 X12 X22 X1X2 Suma de cuadrados 0.95 0.0001* 0.9854 0.072 19.00 X1: Temperatura [°C]. Fuente X1 X2 X12 X22 X1X2 Suma de cuadrados 329600 414800 1. GL: grados de libertad y *: Indica coeficiente significativo (p<0.71 7739. GL: grados de libertad y *: Indica coeficiente significativo (p<0.81 0.981 0.0001* 0.

73 .63 6093.31 2.36 5.51 101800 5660.51 101800 5660. Análisis del rendimiento de tocoferoles Fuente X1 X2 X1 X2 2 2 Suma de cuadrados 91071.95 Probabilidad 0.84 0.03 23.12 12580.27 1.2965 0.91 3.5 14853.55 5415.79 77.45 0.55 5415.15 331200 22136.15 40.0037* 0.42 X1X2 X1: Temperatura [°C].36 Gl 1 1 1 1 1 Varianza 24800.99 5. X2: Densidad [kg CO2/m ]. Tabla E-7. Análisis del rendimiento de esteroles Fuente X1 X2 X1 X2 2 2 Suma de cuadrados 24800.Anexos Tabla E-6.68 3.25 4.1392 0.43 Probabilidad 0.3672 R2 % 5. Efecto de la densidad temperatura y del CO2 sobre la extracción supercrítica de aceite de microalga (Botryococcus braunii).12 12580.52 1.63 6093.52 Gl 1 1 1 1 1 Varianza 91071.87 51.36 3 Valor F exp 3.3935 0.90 X1X2 X1: Temperatura [°C].15 331200 22136.0968 0. X2: Densidad [kg CO2/m ]. GL: grados de libertad y *: Indica coeficiente significativo (p<0.05).0004* 0.05).17 1.1135 R2 % 36. GL: grados de libertad y *: Indica coeficiente significativo (p<0.5 14853.0029* 0.52 3 Valor F exp 21.1125 0.41 2.

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