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OBTENCION DE ALBUMINA DE CLARA DE HUEVO (Alemany M, Font S. Prcticas de Bioqumica.1983. Pg 235.Primera edicin. Edit Alhambra, Espaa).

Se pesa la clara de huevo en un vaso de precipitado previamente tarado. Se aade a continuacin un volumen de tantos mililitros de solucin saturada de sulfato de amonio en agua (760 g/l) como gramos de clara se hayan pesado. Esta adicin debe realizarse con lentitud, casi gota a gota, agitando continuamente el conjunto. Las ovoglobulinas precipitan en la solucin con facilidad, pudiendo ser extradas por centrifugacin o filtrado (este precipitado redisuelto en agua sirve las reacciones de caracterizacin de las protenas, dando positiva la prueba de Molisch, que detecta la presencia de glcidos, debido a que contiene una proporcin importante de glucoprotenas. En esta prueba, a 1 ml de muestra, patrones al 1% y un blanco de agua se le aaden 5 gotas del reactivo de Molisch- -naftol al 1% en etanol y se agita hasta homogeneidad. A continuacin se deja reabalar por las paredes del tubo 1 ml de cido sulfrico concentrado, formandose de esta manera una fase cida en la zona inferior de la solucin que contiene la muestra y el naftol. La reaccin es positiva, indicando la presencia de glcidos solos o combinados, cuando aparece un anillo violeta en la interfase de los dos lquidos. Si se agita suavemente, se mezclan las dos fases y la coloracin violcea se hace ms intensa y uniforme). El sobrenadante se filtra a travs de algodn o lana de vidrio colocado en la parte estrecha de un embudo. A continuacin se aade mas solucin saturada de sulfato de amonio gota a gota hasta que el lquido quede completamente turbio, an cuando no se observe una clara precipitacin. En este punto, se aade cido actico al 25%, gota a gota y con agitacin, hasta que el pH sea prximo a 4.5. En este punto isoelctrico de la ovalbumina se produce la precipitacin de la protena. Antes de centrifugar la muestra, se puede tomas una gota con una pipeta Pasteur y observar los cristales al microscopio. El precipitado se separa por centrifugacin, desechndose el sobrenadante. Se redisuelve el precipitado en agua en unos 15 ml de agua destilada, agitando con una varilla, se filtra a travs de un tapn de algodn y se aade lentamente y con agitacin 18 ml de acetona pur. Este precipitado se lava de nuevo dos veces con 15 ml de acetona pura y finalmente con eter dietlico. Seque el polvo obtenido bajo una corriente de aire (o en la campana).

MATERIALES Sulfato de amonio slido 500 g Pipetas pasteur y chupn de goma Filtro Algodn cido actico glacial 100 ml pHmetro Microscopio Lminas de microscopio

Centrfuga y tubos de centrfuga Varilla de vidrio Acetona 100 ml Eter dietilico 200 ml Vaso de precipitado de 250 y 500 ml