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PREGUNTAS DE BIOLOGA MOLECULAR 2013

Prof. Alejandra Sandoval A. Graciela Berrios P 1. En relacin a las normas de orden y bioseguridad, cuales considera usted son las necesarias en un laboratorio de Biologa Molecular? 2. En lo prctico, Cules son las principales caractersticas que distinguen la extraccin de ADN y al ARN? 3. Cmo fue destruida la pared celular de las hojas de D. antarctica? 4. Cmo fue destruida la pared celular de las bacterias en la extraccin del ADN plasmidial? 5. Qu funcin tienen las sales en una extraccin de ADN, por ejemplo el acetato de potasio (KAc)? 6. Cul es la funcin del dodecilsulfato sdico (SDS) en la extraccin de ADN plasmidial? 7. Qu finalidad tiene la neutralizacin en el mtodo de lisis alcalina? 8. Por qu la alcalinizacin en presencia de SDS afecta menos a los plsmidos que al ADN cromosmico? 9. Qu finalidad tiene el paso de incubacin con ribonucleasa A (RNAsa) en la purificacin de ADN plasmdico? 10. Por qu se irradian los geles con luz UV? 11. Qu caracterstica o factor est determinando el movimiento de molculas en la electroforesis?

12. En una electroforesis, Cmo distingue entre ADN genmico y ARN total (planta)? Dibuje si es necesario. 13. Cmo puede distinguir la presencia de ARN mensajero en la muestra de ARN total? 14. Indique la funcin de los siguientes reactivos en la extraccin de cidos nucleicos, recuerda el procedimiento especifico en el cual fueron utilizados?, comente: a) Etanol 75% b) Alcohol isopropanol c) Etanol Absoluto d) Cloroformo e) Agua con Dietilpirocarbonato f) Guanidino Tiocianato en solucin g) Formamida desionizada h) Formaldehido i) Nitrgeno Liquido j) ADESI k) Glicerol/azul de bromofenol l) GelRed m) Buffer TAE1x n) Buffer MOPS1X o) Agarosa p) Glucosa q) EDTA r) NaOH s) Acido actico glacial t) Fenol : cloroformo

15. Respecto de los reactivos anteriores: A qu temperatura se deben almacenar; Cul es su nivel de peligrosidad; Qu consideraciones debe tener antes de usarlos (cada uno)? 16. A qu temperatura se deben almacenar el ADN y el ARN? Por qu? 17. Cules son las diferencias entre un gel natural y un gel denaturante? 18. Cmo se visualizan en un gel las molculas de ADN plasmidial y ADN genmico? 19. Qu tipo de gel utilizara para visualizar cidos nucleicos? 20. Las muestras de ADN y ARN, requieren el mismo procedimiento para su anlisis? 21. Qu tipo de estudios puede realizar con molculas de ADN? 22. Qu tipo de estudios puede realizar con molculas de ARN? 23. Calcule la concentracin en ng/ul de las siguientes muestras de ADN y ARN total: Muestra ADN ADN ADN ARN ARN ARN ABS 260 nm 0.008 0.870 0.009 0.678 0.065 0.006 260/280 1.09 1.79 1.85 2.00 1.84 0.99 260/230 1.69 1.99 2.09 2.20 1.96 1.59

Respecto del grado de pureza de cada muestra, que puede usted concluir?

24. Identifique y comente cada figura:

a. Carriles 1, 2 y 3 1 2 3

b. Flecha A y B
A

c. Carriles 1 y 6 1 2 3 4 5 6

d. Carriles 1 y 2; Flecha

e. Carriles 1 y 4; Flecha 1 2 3 4

f.

Comente los siguientes resultados indicando que contiene cada gel y calidad de la extraccin.