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UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente- ECAPMA Programa: Ingeniería

Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombre y Apellido: María de los Ángeles Oñate Código: 26871741; Fecha: 04-05-2013

BIOQUIMICA METABOLICA PREINFORMES

MARIA DE LOS ANGELES OÑATE LÓPEZ CÓDIGO 26871741 GRUPO: 352001_66

Tutora NIDIA CARREÑO

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA - UNAD ESCUELA DE CIENCIAS AGRARIAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE. PROGRAMA DE INGENIERIA AGROFORESTAL CEAD VALLEDUPAR 2013

orina. harina y forraje ). Es importante realizar análisis del potencial bufferante de muestras d origen biológico. Pecuarias y del Medio Ambiente.1 Materiales y Equipos requeridos Materiales Vidriería Equipos Balanza analítica Beaker de 250mL Pipetas graduadas de 10mL Soporte universal Potenciómetro Muestras biológicas (concentrado.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas. Practica de laboratorio: capacidad amortiguadora y potencial amortiguador de muestras biológicas. Fecha: 04-05-2013 TÍTULO DE LA PRÁCTICA CAPACIDAD AMORTIGUADORA BIOLÓGICAS. Y POTENCIAL AMORTIGUADOR DE MUESTRAS Mentefacto conceptual Se usa la técnica potenciométrica que consiste en cuantificar la concentración de una sustancia en disolución. .ECAPMA Programa: Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombre y Apellido: María de los Ángeles Oñate Código: 26871741. sangre. MATERIALES Y MÉTODOS 1. Haciendo uso de la titulación volumétrica logramos conocer que tan ácida o básica es una solución o su concentración. Se busca cuantificar la capacidad amortiguadora de muestras biológicas Harina Orina Concentrado Forraje Sangre 1. relacionando su actividad iónica con la fuerza electromotriz existente en la célula electroquímica con la que entra en contacto.

El procedimiento llevado a cabo para llevar a cabo el procedimiento de determinación de la capacidad y potencial amortiguador se utilizaron muestras de origen biológico (orina. sangre.3. concentrado. forraje. la orina la aporto uno de los compañeros de curso.3 Procedimiento 1.) y reactivos químicos (buffer fosfato. harina. El primero en la muestra biológica estéril y el segundo al adicionarle HCl.3.1 Toma de muestra (cuando se requiere) Las muestra de sangre fue obtenida de un deposito de sangre en un expendio de carne. Espátula metálica Agitador de vidrio Probeta graduada de 100mL Bureta de 25mL Equipo de titulación 1.1N 0.1N 2 gotas 20ml 1ml /ml de H2O 1.2 EN LABORATORIO (Con base en lo descrito en las guías. NaOH. y algunos equipos que nos ayudaron en dicho experimento. Fecha: 04-05-2013 Erlenmeyer de 125Ml.ECAPMA Programa: Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombre y Apellido: María de los Ángeles Oñate Código: 26871741. Los datos obtenidos se registraron en tablas y de acuerdo a estos se hicieron los cálculos necesarios los cuales determinaron la capacidad y potencial amortiguador de la muestra biológica 1. Con el fin de determinar la variación de acidez (según escala pH) y la capacidad amortiguadora de dicha solución buffer. En este espacio. tomando 2 registros. elaborar un diagrama de flujo ó mapa conceptual del procedimiento que se va a desarrollar en laboratorio. Pecuarias y del Medio Ambiente.2 Reactivos a utilizar Reactivo Hidróxido de sodio Acido clorhídrico Fenolftaleína Agua destilada Solución buffer fosfato Fórmula NaOH HCl C20H14O4 H2O KH2PO4 Concentración 0. Con el uso de la bureta se realizo la titulación con NaOH.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas. puede incluir dibujos) . HCl). se realizaron procesos de medición con el phmetro.

agitamos por un minuto y volver a observar el pH final (pH2). se adicionan 5 gramos de concentrado pulverizado y 100 mL de agua destilada. 20mL de agua destilada.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas. 4. se agitó con la varilla de vidrio por 5min. luego. 3. se agitó con la varilla de vidrio por 5min. al tercero. 20 mL de leche.1N. Se registraron datos en la tabla. filtramos y se midió el pH de este filtrado. 2. se adicionaron 5mL de NaOH 0. 3. respectivamente 5. agitamos nuevamente por 1min y evaluamos el pH final (pH2). Posteriormente. agitar de nuevo por un minuto y volvimos a medir el pH2. 2.1N. En el quinto frasco. agregamos 5 mL de HCl 0. al dos. Datos volumétricos para capacidad amortiguadora de muestras biológicas . luego. En el cuarto vaso. se coloco 2 gotas de fenolftaleína y agitamos por 10 segundos. Pecuarias y del Medio Ambiente. se colocamos 20mL de orina junto con 20mL de agua destilada.1N. a. se procedió a llenar la bureta con solución de NaOH 0. agitamos por 30 segundos y registramos el pH1.ECAPMA Programa: Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombre y Apellido: María de los Ángeles Oñate Código: 26871741. a. se alistaron 5 beakers ó erlenmeyers y se rotularon del 1 al 5 2. repetimos el procedimiento con las muestras de harina y forraje picado. se agitó por 30 segundos y medimos pH1. Adicionamos al beaker uno. PRUEBAS PARA LA TÉCNICA POTENCIOMÉTRICA Se lleva a cabo el sig proceso 1. Alistamos 3 beaker ó erlenmeyer pequeños y rotular así: 1. se registró como pH1. filtramos y se midió el pH de este filtrado. adicionamos 5mL de NaOH 0. Al primer frasco. TABLA DE DATOS (Ver guías de laboratorio) Tabla 1.1N para hacer la titulación. Fecha: 04-05-2013 Parte I: Pruebas para el Método de titulación volumétrica PRUEBAS PARA EL MÉTODO DE TITULACIÓN VOLUMETRICA Se lleva a cabo el proceso 1. a. 3. los 6. se registró como pH1. a. 2. En el segundo y tercer beakers. se registraron los datos en la tabla. 20mL de solución buffer. se agregó 1mL de sangre y 19 mL de agua destilada.

62 6.370 4.8 0. Valores de capacidad y potencial amortiguador para las muestras analizadas muestras β (mEq HCl β (mEqNaOH /ΔpH) /ΔpH) Concentrado Harina Forraje Sangre Orina 21.77 5.800 16. RESULTADOS ESPERADOS (según lo planteado en las guías de laboratorio) Se espera que los datos de pH varíen de acuerdo al tipo de muestras biológicas. Las soluciones reguladoras o “buffer” son capaces de mantener la acidez o basicidad de un sistema dentro de un intervalo reducido de pH. Tienen la propiedad de mantener estable el pH de una disolución frente a la adición de cantidades relativamente pequeñas de ácidos o bases fuertes.20 4. . orina.33 4. Realizar un análisis comparativo del potencial bufferante de muestras de origen biológico.23 5. concentrado y forrajes 4. del mismo modo la capacidad y el potencial amortiguador de cada una de las variantes.59 3.87 Tabla 3. Fecha: 04-05-2013 Muestras Agua destilada Buffer fosfato Leche Vm (ml) 20 20 20 VNaOH 0.60 9.17 3. analizaremos la pr4eparación del tampón acetato (ácido acético. GLOSARIO Buffer: Un tampón. Este hecho es de vital importancia.7 0.08 6.200 39. Esta capacidad depende de la cantidad de ácido y de sal que componen la solución amortiguadora. Capacidad amortiguadora: es la cantidad de ácido (H+) o de base (OH-) que una solución tampón puede neutralizar antes de que el pH del medio ambiente que está siendo regulado cambie apreciablemente. sangre. sales hidrolíticamente activas.1N (ml) Tabla 2.3 12. ya que solamente un leve cambio en la concentración de hidrogeniones en la célula puede producir un paro en la actividad de las enzimas.16 7.30 6.60 pH2 5. A modo de ejemplo.100 9. como: leche. Pecuarias y del Medio Ambiente. relacionando su actividad iónica con la fuerza electromotriz existente en la célula electroquímica con la que entra en contacto. es decir.96 7. buffer.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas.700 15. Datos potenciométricos para capacidad amortiguadora de muestras biológicas Muestras concentrado Harina Forraje Sangre Orina Wm (g) 5g 5g 5g 1 ml 20 ml Vm (ml) 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml pH1 6.acetato de sodio) de pH = 5 PH: El pH (potencial de hidrógeno) es una medida de acidez o alcalinidad de una disolución.ECAPMA Programa: Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombre y Apellido: María de los Ángeles Oñate Código: 26871741. Técnica potenciometrica: Se trata de una técnica analítica que permite cuantificar la concentración de una sustancia en disolución.99 4. solución amortiguadora o solución reguladora es la mezcla en concentraciones relativamente elevadas de un ácido débil y su base conjugada.

extractos líquidos. entre otros. esto se logra gracias a las reacciones llevadas en laboratorio . Pecuarias y del Medio Ambiente.1 Materiales y Equipos requeridos Materiales Vidriería Filtrado para carbohidratos no estructurales Equipos Tubos de ensayo Gradilla pinzas para bureta erlenmeyer de 125mL pipetas de 5 y 10mL matraz aforado de 100mL baño termostatado beaker de 400mL bureta de 25mL soporte universal . Se hace una mezcla de reactivos para lectura espectrofotométrica 1. oligosacáridos. POR EL MÉTODO DE FENOL-ÁCIDO SULFÚRICO: INTRODUCCIÓN El proceso de determinación de carbohidratos no estructurales (CNE). por el método de fenol-ácido sulfúrico es un procedimiento que nos ayuda a conocer dichas proporcionas en alimentos líquidos. ya que los azucares simples. MATERIALES Y MÉTODOS 1. materiales de celulosa. polisacáridos. DETERMINACIÓN DE CARBOHIDRATOS NO ESTRUCTURALES (CNE). y sus derivados dan una coloración al entrar en contacto con fenol acido sulfúrico. Mentefacto conceptual Por el método de fenol-ácido sulfúrico Mediante la técnica en laboratorio se evidencia un color amarillo-naranja muy estable cuando reacciona con fenol acido sulfúrico.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas. basándose en su contenido de almidones hidrolizables y azúcares solubles. Este método determina la cantidad de carbohidratos totales No estructurales. Fecha: 04-05-2013 TÍTULO DE LA PRÁCTICA: DETERMINACIÓN DE CARBOHIDRATOS NO ESTRUCTURALES (CNE).ECAPMA Programa: Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombre y Apellido: María de los Ángeles Oñate Código: 26871741.

6N 20 mL 1. Medir el volumen del filtrado (Vf) y pasar 5mL a un tubo de ensayo.2 Reactivos a utilizar Reactivo Fenol Acido sulfúrico Hidróxido de sodio Agua destilada Fórmula C6H5OH H2SO4 NaOH H2O Concentración 5% 1N O.0g de muestra de forraje.023. mediante la ecuación : A =2.1.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas. tapar y rotular así: FCNE: Filtrado para carbohidratos no estructurales. convertir estos valores a Absorbancia (A). adicionar a éste 5mL de NaOH 0. 1. agitar por 15 segundos.6N. durante 10 min. Dejar enfriar por 5 min y filtrar sobre papel filtro.2 EN LABORATORIO DETERMINACIÓN DE CARBOHIDRATOS NO ESTRUCTURALES (CNE).0g de muestra en balanza analítica y registrar 1 2 3 Agregar 50 mL de solución de HCl 0. POR EL MÉTODO DE FENOL-ÁCIDO SULFÚRICO: Depositarla luego en un vaso de precipitado Pesar +/.000 de Absorbancia (A) Leer el % de Transmitancia (T).1 Extracción: Pesar +/. ajustando a 100% de Transmitancia (%T) y 0.y registrar Llevar el beaker con la solución al baño termostatado y calentar a 90°C.ECAPMA Programa: Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombre y Apellido: María de los Ángeles Oñate Código: 26871741.6N.1.3.6N. adicionar a éste 5mL de NaOH 0. 8 . Agitar constantemente con la varilla de vidrio durante 3 minutos.de los tubos st y m. agitar por 15 segundos. pasar 5mL a un tubo de ensayo.Log%T .3 Procedimiento 1. en balanza analítica y registrar como: (Wm) depositarla luego en un vaso de precipitado y agregar 50 mL de solución de HCl 0. trabajar con 3 cifras decimales. Pecuarias y del Medio Ambiente. tapar y rotular así: FCNE 5 7 Durante 20 min y Medir el volumen del filtrado(Vf) 6 7 Alistar el espectrofotómetro y calibrar el aparato con el tubo blanco .ejemplo:0.6N.durante 20 min 4 Dejar enfriar por 5 min y filtrar. Fecha: 04-05-2013 1. Llevar el breaker con la solución al baño termostatado y calentar a 90°C.

si se continúa el calentamiento y la catálisis ácida se producen varios derivados del furano que condensan consigo mismos y con otros subproductos para producir compuestos coloridos producto de la condensación de compuestos fenólicos y con heterociclos con el nitrógeno como heteroátomo. Con este laboratorio se lograra mostrar definiciones de algunos conceptos. Su versión más simple consiste en una lámina bimetálica como la que utilizan los equipos de aire acondicionado para apagar o encender el compresor. Bajo estas condiciones una serie de reacciones complejas toman lugar empezando con una deshidratación simple. Pecuarias y del Medio Ambiente. por eso se utiliza como uno de los tantos medidores de la capacidad industrial de los países. Lectura espectrofotométrica: es un método de análisis que hace uso de la interacción entre la materia y la energía radiante la cual se refiere a como la ondas electromagnéticas se propagan y trasportan sin trasferencia de materia. Termostato: Es el componente de un sistema de control simple que abre o cierra un circuito eléctrico en función de la temperatura. GLOSARIO Método de fenol-sulfúrico: Este método propuesto por Dubois en 1956 se fundamenta en que los carbohidratos son particularmente sensible a ácidos fuertes y altas temperaturas.ECAPMA Programa: Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombre y Apellido: María de los Ángeles Oñate Código: 26871741. Es el compuesto químico que más se produce en el mundo. . TABLA DE DATOS (Ver guías de laboratorio) 3. Se espera que los resultados obtenidos sean similares a los encontrados en la literatura. RESULTADOS ESPERADOS (según lo planteado en las guías de laboratorio) Con en el proceso llevado a cabo en el laboratorio se busca la determinación y composición de las muestras en cuanto a su contenido de carbohidratos. procedimientos. datos y soluciones que debemos tener y manejar como la base fundamental del conocimiento de la bioquímica metabólica. 4. Se busca corroborar si los carbohidratos son particularmente sensibles a ácidos fuertes y altas temperaturas. Acido sulfúrico: Es un compuesto químico extremadamente corrosivo cuya fórmula es H2SO4.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas. Fecha: 04-05-2013 2.

CUANTIFICACIÓN DE NITRÓGENO NO PROTEICO (NNP) (Fracción A de Van Soest. Fecha: 04-05-2013 TÍTULO DE LA PRÁCTICA CUANTIFICACIÓN DE NITRÓGENO NO PROTEICO (NNP) (Fracción A de Van Soest ) Mentefacto conceptual Se utiliza el ácido Tricloroacético (ATA) también denominado fracción A de Van Soest . Fórmula CI3. 1.COOH) H2O Concentración 10 %. 20 mL .UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas. El nitrógeno no proteico (NNP) en el rumen de algunos animales se transforma en amoniaco.4 Reactivos a utilizar Reactivo Ácido tricloroacetico (ATA) Agua destilada 1. Con el uso de técnicas instrumentales analíticas de Kjeldhal y espectrofotométricas se determina el contenido de NNP y Proteína verdadera (PV) en forrajes y concentrados.1. La mayoría de los microorganismos ruminales pueden sintetizar proteína a partir de amoniaco proveniente de fuentes no proteicas tales como la urea El proceso de reciclaje es más eficiente cuando la dieta tiene niveles bajos de proteína. Puede eliminarse a través de la orina.3 Materiales y Equipos requeridos Materiales Vidriería Filtrado para carbohidratos no estructurales Equipos Tubos de ensayo gradilla pinzas para bureta Erlenmeyer de 125mL pipetas de 5 y 10mL matraz aforado de 100mL baño termostatado beaker de 400mL bureta de 25mL soporte universal 1.C. Pecuarias y del Medio Ambiente. MATERIALES Y MÉTODOS 1.ECAPMA Programa: Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombre y Apellido: María de los Ángeles Oñate Código: 26871741.0 g de muestra (forraje) y colocar en vaso de precipitado.3 Procedimiento Pesar +/.

colocarlos en un tubo de ensayo y rotularlo: FNNP.filtrado para nitrógeno no proteico. Pecuarias y del Medio Ambiente.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas.2 EN LABORATORIO . Recolectar 5 Ml del filtrado. Reposar a temperatura ambiente 15 minutos. agitar por un minuto.ECAPMA Programa: Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombre y Apellido: María de los Ángeles Oñate Código: 26871741.3. Adicionar 20 mL de solución de ATA. Filtrar con papel filtro sobre probeta. agitar por un minuto. Dejar reposar la mescla por un minuto. Medir el volumen de filtrado (VF). Tuvo con la muestra de forraje y Proceso de filtrado nitrógeno no proteico (NNP) 1. Fecha: 04-05-2013 Adicionar 30 mL de agua destilada.

4 Reposar a temperatura ambiente 15 minutos. 5 7 Medir el volumen de filtrado (VF). Pecuarias y del Medio Ambiente. Filtrar con papel filtro sobre probeta y medir el volumen de filtrado (VF). Fecha: 04-05-2013 CUANTIFICACIÓN DE NITRÓGENO NO PROTEICO (NNP) (Fracción A de Van Soest ) 2 Adicionar 30 mL de agua destilada. Adicionar 20 mL de solución de ATA. 6 Recolectar 5 Ml del filtrado. agitar por un minuto.1. agitar por un minuto. Pesar +/. colocarlos en un tubo de ensayo y rotularlo: FNNPfiltrado para nitrógeno no proteico.0 g de muestra (forraje) y colocar en vaso de precipitado 1 3 Dejar reposar la mescla por un minuto.ECAPMA Programa: Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombre y Apellido: María de los Ángeles Oñate Código: 26871741.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas. Tuvo con la muestra de forraje y Proceso de filtrado nitrógeno no proteico (NNP) 8 2. TABLA DE DATOS (Ver guías de laboratorio) .

destilación y valoración. . bacterias y organismos que viven en simbiosis con ellos. RESULTADOS ESPERADOS (según lo planteado en las guías de laboratorio) Con este laboratorio se lograra mostrar definiciones de algunos conceptos. más que absorbiéndolos de la dieta. la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentración o reacciones químicas que se miden en una muestra. en función de la longitud de onda.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas. Los organismos que puede utilizar el NNP son los hongos. Espectrofotométricas: Un espectrofotómetro es un instrumento usado en el análisis químico que sirve para medir. El forraje es cualquier hierba seca que sirva de alimento a los animales. nitritos y nitratos y otros como la urea. Los compuestos que forman el NNP son los que contienen amoníaco. Debido a que cerca del 90 % del nitrógeno total (NT) se encuentra en forma insoluble con el desarrollo del laboratorio se busca conocer el contenido de este en una muestra de forraje y concentrados. GLOSARIO Nitrógeno no proteico: Se denomina Nitrógeno no proteico a los compuestos de nitrógeno que pueden ser convertidos en proteínas por algunos organismos vivos. 4. Se espera que los resultados obtenidos sean similares a los encontrados en la literatura. Pecuarias y del Medio Ambiente. datos y soluciones que debemos tener y manejar como la base fundamental del conocimiento de la bioquímica metabólica. las plantas y algas. procedimientos. el biuret o el ácido úrico. por método espectrofotométrico de Biuret-Lowry. El método Kjeldahl se puede desglosar en tres pasos principales: digestión. Se busca comprender la manera en la que en nitrógeno a través de muchos procesos internos del animal se convierte en amoniaco o gas carbónico.ECAPMA Programa: Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombre y Apellido: María de los Ángeles Oñate Código: 26871741. Los cuales pueden ser convertir algunos aminoácidos en otros diferentes. Cuantificar el Nitrógeno en el filtrado. También es utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y microorganismos. Fecha: 04-05-2013 3. Análisis Kjeldahl: Las determinaciones de nitrógeno de Kjeldahl se realizan sobre una variedad de sustancias alimentarias. Forraje: Pasto puede ser el verde plantado o el seco. Se busca desarrollar los cálculos siguiendo las formulas propuestas en la guía de laboratorio. Muchos organismos superiores no pueden obtener aminoácidos de otras formas.

yahoo.pdf http://es.scribd.slideshare.a14.answers.mx/media/users/10/523320/files/51871/ManualBioqu_mica_II.wikipedia.net/ekathy80/mentefacto-conceptual .ECAPMA Programa: Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombre y Apellido: María de los Ángeles Oñate Código: 26871741.elergonomista. UNAD http://www. Fecha: 04-05-2013 BIBLIOGRAFÍA http://quimicosfarmacobiologos.bligoo.com.com/doc/20270275/Informe-N%C2%BA1-laboratorio-de-bioquimica-II http://www.gva.html http://es.com/question/index?qid=20101014210010AADGjg6 http://www. Pecuarias y del Medio Ambiente.htm http://espanol.san.org/wiki/Hidr%C3%B3lisis MODULO BIOQUIMICA METABOLICA.com/quimica/q9.es/laboratorio/web/potenciometricas.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas.