PRACTICA Nº 6.

PERMEABILIDAD DE MEMBRANA Y ACTIVIDAD ENZIMATICA INTRODUCCION MEMBRANA CELULAR Toda célula posee un sistema complejo de membranas cuya función es el intercambio de materiales, entre la célula y el medio acuoso externo o fluido extracelular y entre los organelos y la célula, sirve como medio de compartición entre el interior celular y sus metabolitos. Las membranas celulares son selectivamente permeables. Algunos solutos cruzan la membrana libremente, algunos cruzan con asistencia y otros no pueden cruzar. Unas pocas sustancias lipofílicas se mueven libremente a través de la membrana celular por difusión pasiva. La mayoría de pequeñas moléculas u iones, requieren la asistencia de acarreadores proteícos específicos, para transportarlos a través de la membrana. Las moléculas grandes no cruzan intactas las membranas celulares, excepto en casos especiales. La difusión es el movimiento neto de sustancia de un área de alta concentración a una de baja concentración. Dado que las moléculas de cualquier sustancia se encuentran en movimiento cuando su temperatura está por encima de cero absoluto (0 grados Kelvin o -273 grados C), existe una disponibilidad de energía para que las mismas se muevan desde un estado de potencial alto a uno de potencial bajo. La mayoría de las moléculas se mueven desde una concentración alta a una baja, es decir el movimiento neto es desde altas concentraciones a bajas concentraciones. Eventualmente, si no se agrega energía al sistema las moléculas llegan a un estado de equilibrio en el cual se encuentran distribuidas homogéneamente en el sistema.

Factores que aumentan la fluidez de las membranas: - Ácidos grasos insaturados - Baja concentración de colesterol - Altas temperaturas - Colas hidrocarbonadas cortas (dificultan el empaquetamiento)

con la pérdida consiguiente de muchas funciones vitales de la membrana. por ejemplo. Por otra parte. el proceso se lleva a cabo con alta utilización de temperatura y calor. pero en este GERMAN MENDEZ DOCENTE UNIVERSIDAD ANTONIO NARIÑO 2 . Estos fenómenos son de gran importancia biológica. por lo tanto. Explique por qué las heladas afectan los cultivos. el movimiento de las colas hidrocarbonadas. ENZIMAS En las reacciones químicas ordinarias se requieren o producen cantidades altas de energía. Mayor temperatura del medio Efecto de la temperatura sobre la fluidez: El ascenso de la temperatura aumenta la energía cinética entre las moléculas y. organismos que habitan ambientes extremos poseen composiciones fosfolipídicas muy particulares en sus membranas. a veces con la participación de catalizadores de carácter inorgánico que faciliten la reacción. porque mediante ellos se logra en parte llevar a cabo procesos de trasporte e intercambio de sustancias. los que viven a temperaturas inferiores a los 0ºC tienen membranas muy ricas en lípidos poliinsaturados. la membrana puede llegar a “cristalizarse”. asegurando así una fluidez más o menos constante durante todo el año.  Menor temperatura del medio    Factores que favorecen la fluidez Alto de grado de insaturación y menor longitud de las colas hidrocarbonadas. Los organismos que habitan regiones donde hay grandes amplitudes térmicas estacionales varían la composición de los fosfolípidosde en sus membranas en forma periódica.GUIA DE LABORATORIO DE BIOLOGÍA – FACULTAD DE CIENCIAS Factores que favorecen la viscosidad Alto grado de saturación y mayor longitud de las colas hidrocarbonadas. una disminución de la temperatura vuelve más rígida a la membrana y a “empaquetar” las colas hidrofóbicas de los fosfolípidos e impedir sus movimientos. Esto lleva a una disminución de las interacciones atractivas entre las mismas y a un aumento de los movimientos de rotación y de difusión lateral. Si la temperatura desciende significativamente. Por el contrario. Dentro de las células se llevan a cabo reacciones similares.

*rollo de papel absorbente. Es posible extraer algunas enzimas de tejidos vivos con métodos sencillos. *lápiz de cera. capsulas de porcelana. centrifuga con sus respectivos tubos. Realice varios lavados. Adicione agua (según criterio del docente) a volúmenes iguales en cada vaso. y sobre la tabla para picar cortela en bloques de aproximadamente 1cc y lávelos todos al tiempo con agua de grifo para remover el pigmento de las células dañadas en el corte. gasa. *tabla de cocina para picar.5% y 1%. mortero. *cuchillo de cocina. Las enzimas se caracterizan por ejercer su acción sobre sustratos específicos. Extraer enzimas de vegetales y estudiar algunos factores que afectan la actividad enzimática. placa térmica. lo cual implica un cambio en su estructura. permitiendo así una máxima utilización energética. fuera de los cuales pierde su capacidad de acción y en este caso se dice que la enzima esta desnaturalizada. hasta que deje de salir el pigmento.GUIA DE LABORATORIO DE BIOLOGÍA – FACULTAD DE CIENCIAS caso la producción de temperatura y energía se realiza en forma controlada por gran variedad de entidades químicas que actúan cada una en diferentes pasos o reacciones intermedias. solución de almidón al 0. MATERIALES Y REACTIVOS (*deben ser traídos por el estudiante) *Raíz de remolacha. dentro de un rango de temperatura y pH característicos . termómetro. sin presionar. como es el caso del grupo de enzimas hidrosolubles extraídos de semillas. tubos de ensayo. vasos de precitados de 400 cc. Ante todo debe pelar la remolacha. para proveer la energía en forma de moléculas más sencillas como las hexosas (ejemplo glucosa) utilizada para actividades metabólicas. PROCEDIMIENTO PERMEABILIDAD DE LA MEMBRANA CELULAR. agua destilada. mecheros Bunsen. lugol. pinzas para tubo. Distribuya los bloques de remolacha en dos porciones equitativas y deposite cada una en un vaso de precipitados de 400cc. *semillas germinadas de cebada. Tales substancias reciben el nombre de enzimas (catalizadores bioquímicas) y son de naturaleza proteica. Caliente luego uno de los vasos de precipitados. las cuales durante el proceso de germinación desdoblan polisacáridos como los almidones. OBJETIVOS   Estudiar el efecto de la temperatura sobre el transporte a través de la membrana celular. controlando la temperatura del agua GERMAN MENDEZ DOCENTE UNIVERSIDAD ANTONIO NARIÑO 3 .

CUESTIONARIO 1. Utilice un tubo de ensayo (tubo madre) para recoger todo el sobrenadante (parte liquida) producto de la centrifugación 6. 3.. compare dichos resultados con otros grupos de estudiantes (0. 3. Explique el efecto de cambio de temperatura sobre las enzimas.Explique cuáles son los principales factores que afectan a la actividad enzimática.. evite que haya burbujeo inmediato) y déjelo enfriar. 7. color. 5. Realice el mismo montaje pero sin someterlo a calentamiento con el otro vaso.5% o 1% de solución de almidón. apariencia y otras características que usted pueda identificar. 4. después de dicho tiempo destape el frasco con el fin de que las semillas se aireen. analice los resultados y resuma los datos en una tabla. Explique dichos resultados.¿Cómo se define la velocidad de un proceso enzimático? ¿Qué efecto tiene sobre ella la cantidad de sustrato presente en el medio de reacción? GERMAN MENDEZ DOCENTE UNIVERSIDAD ANTONIO NARIÑO 4 . cúbrala con 5 ml de agua destilada (o según criterio del docente) y macere hasta obtener un extracto lechoso. según el caso). Observe las diferencias. hágalo en un frasco hermetico en un lapso de tiempo no mayor a 2 horas. 2. una o dos gotas de lugol. Registre los cambios observados en cada vaso en cuanto a textura. el docente realizara dicha distribucion). sabor. A continuación a cada tubo (A y B) agregue medio mililitro de solución de almidón al 0. lleve la cebada germinada a un mortero (aproximadamente un puñado). ENZIMAS 1. Filtre a través de un pedazo de gasa y colecte el liquido filtrado en un tubo de ensayo y proceda a centrifugarlo (2500rpm aproximadamente durante 5 minutos).GUIA DE LABORATORIO DE BIOLOGÍA – FACULTAD DE CIENCIAS con un termómetro (no mayor a 80 °C).5% o al 1% (unos grupos de trabajo usarán una concentración y otros grupos la otra concentración. este le servirá de control.Diferencie entre cofactor y coenzima. Posteriormente tome dos tubos de ensayo marcados uno como A y otro como B. 8. Caliente el tubo B en el mechero por un lapso de 5 minutos hasta ligera ebullición (tenga cuidado de calentar el tubo por las paredes cercanas al extracto y no desde el fondo. los resultados de coloración. Tome 150 gramos de cebada entera (4 o 5 puñados). Para transportar la cebada germinada. Deje en reposo durante 10 minutos y transcurrido este tiempo coloque 3-4 gotas de la mezcla de cada tubo (A y B) en dos porcelanas o vidrios de reloj y adicione a cada uno. 2. Ya en el laboratorio. olor.. a cada uno agregue dos mililitros de sobrenadante producto de la centrifugación (contiene diastasa y otras enzimas). colóquela a germinar en cámara húmeda por 36 horas (la germinación debe llevarse a cabo en un recipiente NO hermético (plato hondo) con agua que cubra las semillas y tapado con un plástico oscuro durante 36 horas a temperatura ambiente).

Life in the laboratory. 1979. Ediciones Madrid. & CANTARINO. D. Fondo Educativo Interamericano S.. H. N.. JAMES. ¿es lo mismo el centro activo que el centro alostérico? 7..org/joomla/index.Qué diferencias hay entre inhibición competitiva y no competitiva.htm BIBLIOGRAFÍA HUMPHRY. 10. 1969. México.GUIA DE LABORATORIO DE BIOLOGÍA – FACULTAD DE CIENCIAS 4.ehu. Ediciones Omega. Brace & World. 1974. Hercourt.¿Dónde actúan las enzimas alostéricas? 5. T.A. Springer – Verlag. DYKE. F. Biología 4a edición. Heidelberg.Cite tres propiedades por las que podamos considerar a las enzimas como catalizadores. A laboratory manual..com/ani%203/introduccionalmetabolismoact. O.es/biomoleculas/enzimas/mt/mt6. 9. 1982. Introducción a la fisiología vegetal. G.php?option=com_content&view=article&id= 1141:preguntas-resueltas-los-enzimas&catid=146:2o-bachillerato&Itemid=125 MAS PREGUNTAS SOBRE ENZIMAS http://www. 1967.Explique qué es un catalizador y por qué es necesaria su existencia para que las células desarrollen su actividad. Curso de prácticas de biología general.H.. 8. MOORE..iesdionisioaguado. GERMAN MENDEZ DOCENTE UNIVERSIDAD ANTONIO NARIÑO 5 .genomasur.Cuáles son los principales tipos de coenzimas.W. M. Blume. H. SALOM.W. Research experiences in plant Phisiology. Van & WILLIS.. J. 6.Y. D.htm http://www. 11.Defina centro activo y complejo enzima-sustrato. Barcelona KIMBALL.¿Qué características poseen las enzimas alostéricas? RESOLUCION AL CUESTIONARIO http://www.En las enzimas alostéricas..

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