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Laboratorio N°5: Fotosíntesis

Para entender la forma en que un organismo se nutre debemos conocer la manera en que obtiene la materia, principalmente el carbono que necesita para formar moléculas orgánicas que componen su cuerpo y como obtiene la energía necesaria para su funcionamiento. Según la forma en que los organismos obtienen el carbono es posible distinguir dos tipos de seres vivos. Autótrofos: organismos capaces de fijar carbono inorgánico, usando como fuente dióxido de carbono del ambiente, Heterótrofos: organismo que no pueden fijar carbono, debiendo usar como fuente moléculas orgánicas preformadas, producidas por otros organismos. La energía que los seres vivos requieren para realizar estos procesos puede ser obtenida a partir de dos fuentes: mediante la energía solar y la contenida en los compuestos químicos. Es de esta forma que los organismos que usan la luz son conocidos como fotosintéticos. La fotosíntesis es el proceso que permite a los vegetales obtener la materia y la energía que necesitan para desarrollar sus funciones vitales, este proceso se lleva a cabo gracias a la presencia en las hojas y en los tallos jóvenes, de pigmentos capaces de captar la energía lumínica. Estas transforman en sus hojas las sales minerales y el agua por intervención del dióxido de carbono (CO2) en sustancias orgánicas sencillas que después pasan a formar la glucosa y finalmente el almidón, paralelamente desprendiendo oxigeno (O2) al ambiente. El aporte de energía en los tejidos vivos procede de la conversión de glucosa en dióxido de carbono y agua para formar ATP. Para realizar la fotosíntesis las plantas poseen pigmentos capaces de captar la energía, entre estos podemos mencionar: Clorofila: Se encuentra en los cloroplastos de cada célula. Este pigmento es indispensable para que se lleve a cabo la fotosíntesis. Carotenos: Es un pigmento amarillo anaranjado que se encuentra en ciertas células vegetales, como por ejemplo en la zanahoria. Xantofilas: Son unas sustancias cristalinas de color amarillo oscuro, que se encuentra conjuntamente con la clorofila de los cloroplastos. En la fotosíntesis se reconocen dos fases sucesivas: una dependiente de la luz (fase luminosa) y otra que no depende de ella (fase oscura). En la fase luminosa, la luz que incide (fotones) es absorbida por la clorofila de manera que esta libera un electrón. Simultáneamente los fotones provocan la ruptura de la molécula del agua (fotolisis) en dos subproductos: oxigeno, que se libera al medio y los protones (H+). Los electrones liberados por la clorofila activada son captados por los protones por medio de transportadores, de manera que se forma el hidrogeno molecular (H2) que se utiliza para que la molécula de NADP (Nicotidamina adenina dinucleotido) se reduzca a NADP2. Los protones que se acumulen en el estroma pueden comportarse como “enzimas activas” catalizando la formación de moléculas de ATP a partir de ADP y P. En resumen: en la fase luminosa de la

fotosíntesis el impacto de los fotones de luz sobre la clorofila y la fotolisis del agua son el origen de un estado de desequilibrio molecular (fenómeno químico) que se reequilibra constantemente gracias al flujo de protones a través de la membrana de los tilacoides (fenómeno físico). La fase oscura es independiente de luz y sus reacciones tienen lugar en el estroma de los cloroplastos. En ella se utiliza la energía química almacenada en el ATP y el poder reductor del NADPH2, sintetizados en la fase luminosa, para la fijación del CO2 atmosférico. Este es incorporado a una molécula de 5 átomos de carbono: la ribulosa 1-5 difosfato que abunda en el estroma. El resultado, tras una molécula inestable de 6 átomos de carbono, es el acido 3-fosfoglicerico. Las reacciones oscuras forman un proceso llamado ciclo de Calvin. Por cada ciclo completo se produce una molécula de fosfogliceraldehido que es precursora de la glucosa y otros compuestos orgánicos. Durante este ciclo ocurre la fijación del CO2 gracias a la energía proporcionada por al ATP y NADPH2 formados en la fase clara. La mayoría de las plantas fijan el CO2 formando inmediatamente fosfoglicerato, molécula que tiene tres carbonos por los que se le llama plantas C3. Existen otras que fijan el CO2 en moléculas de oxalacetato de cuatro carbonos y son las plantas C4. Existen también las plantas con el metabolismo del ácido crasulaceo, muy similar a las plantas C4, con la diferencia que almacenan CO2 durante la noche porque durante el día tienen sus estomas cerradas por vivir en ambientes áridos, donde es difícil conservar agua. Objetivo: Observar el fenómeno de fotosíntesis.

Actividad Nº 1: “Movimientos protoplasmáticos de Elodea canadencis”

Materiales:

-Microscopio -Hoja de Elodea -Portaobjeto -Cubre objeto

Procedimiento:

a) Mantener la hoja de Elodea en condiciones normales en cuanto a salinidad (la misma agua de acuario en que la trajo). b) Tome una hoja de Elodea y póngala en un portaobjeto. Agregue una gota de agua de acuario. Observe los cloroplastos y su movimiento. Si los cloroplastos no se mueven intensifique la luz de su microscopio y espere unos minutos. c) Coloca entre el cubreobjetos una hoja de Elodea con una gota de agua, selecciona una célula y cuenta el número de cloroplastos. Haz lo mismo en diez células y obtén el promedio. Observa su forma y localización.

Actividad N°2 Producción de oxigeno en Elodea Materiales 1 Frasco de vidrio 3 tubos de ensayo 3 lámparas y 3 ampolletas (20,40 y 60 watts) Elodea Agua 3 gradillas Lápiz marcador para tubo

Procedimiento a. rotular los tubos de ensayo (1,2 y 3) b. Coloca una ramita de Elodea en interior de cada tubo con el ápice hacia la base del tubo, y llénalos con agua, posteriormente ubícalos en cada gradilla c. Ilumina con una lámpara los tubos, utilizando una ampolleta de diferente potencia para cada tubo. d. Observa durante 5 minutos, anote la cantidad de burbujas que se desprenden cada 10 minutos Diseña una tabla de datos y realice un grafico.

Actividad N°3 Captación de Co2 en Elodea. MATERIAL: 1 bombilla. 3 tubos con tapa MATERIAL BIOLOGICO: Elodea (Elodea canadensis; planta acuática). REACTIVOS: Agua mineral de cualquier marca. Azul de bromotimol. TÉCNICA: A. Colocar una gota de azul de bromotimol en dos tubos. B. En el primer tubo, diluir con agua corriente y el segundo tubo diluir con agua carbonatada el azul de bromotimol y observar la coloración. (Nota: Tapar el tubo herméticamente evitar fugas de dióxido de carbono). C. Colocar en otro tubo (tubo 3), una gota de azul de bromotimol y diluir con agua corriente (Nota: el pH del agua con que se trabaja debe tomarse en cuenta ya que modificará los resultados, en este caso debe ser neutra o ligeramente alcalina). D. Soplar con un bombilla dentro del agua hasta cambio de coloración. Tapar el tubo. Anotar observaciones. E. Colocar dentro del tubo 3 una ramita de Elodea, taparlo nuevamente y esperar de 30 a 60 minutos.

Actividad N°4 PRESENCIA DE GLUCOSA EN LAS HOJAS DE LAS PLANTAS VERDES MATERIAL: Mortero. Baño maría Pinzas para tubo de ensayo. Mechero Tubos de ensayo de 15 x 125 mm. Embudo mediano. Vaso de precipitado de 500 ml. Vaso de precipitado de 250 ml. Agitador de vidrio. Gasa. Pipeta de 5 ml. MATERIAL BIOLÓGICO: 6 ó 7 hojas verdes de espinacas. REACTIVOS: Solución de Fehling A Solución de Fehling B.

TÉCNICA: a. Triturar perfectamente las hojas de espinacas en el mortero, posteriormente del triturado, colocarlas en un vaso de precipitado de 500 ml. b. Agregar agua corriente suficiente para cubrir el triturado y agitar hasta que obtengas una mezcla uniforme, cuidando que la mezcla no te quede muy diluida, deberá quedar semilíquida. c. Filtrar la mezcla en el segundo vaso de precipitado, esta filtración la deberás de hacer con la gasa para que sea un poco más rápido y no tenga restos de las hojas que trituraste d. Listo ya el filtrado, toma de 3 a 4 ml, del mismo agregándolo al tubo de ensayo que deberás tener listo. A este filtrado le deberás agregar 2 ml de solución de Fehling (1 ml de solución de Fehling A y 1ml de solución de Fehling B). Agitar vigorosamente durante aproximadamente un minuto. Esto es con el fin de mezclar perfectamente tu muestra. e. Proceder a calentar el tubo hasta ebullición, cuidando de que no te vaya a saltar la muestra, y sufras algún tipo de quemadura. Mantén la muestra durante algunos minutos hasta que observes que el cambio de color se estabiliza. f. Observa qué coloración toma tu muestra y con la tabla de comparación, establece si hay presencia de glucosa (porcentaje) a partir de las hojas que trituraste. g. Realiza dibujos de lo que observo.

TABLA PARA LA IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS (GLUCOSA) EN LAS HOJAS DE LAS PLANTAS VERDES SEGÚN BIURET, BENEDICT Y FEHLING. % DE GLUCOSA 20 POSITIVIDAD + INTENSIDAD DE COLOR Color verde, precipitado verde o amarillo. Color amarillo a verde, precipitado amarillo. Color amarillo anaranjado, precipitado amarillo a naranja.

50

++

75

+++

Negativa: Color azul claro (Puede formarse un precipitado amarillo). Trazas: Color verde azulado.

CUESTIONARIO: 1) ¿Qué relación tiene el CO2 con los cambios de color en la solución de azul de bromotimol, en el proceso de fotosíntesis observado en la actividad N°3? 2) Realice un mapa conceptual sobre el proceso de fotosíntesis. (max 1 hoja)