ASOCIACIN UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA SEMESTRE 2013

I I CICLO

GUIA DE PRCTICA DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

ASOCIACIN UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA CURSO DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR PRACTICA N1

EL MTODO CIENTIFICO

I. OBJETIVOS: Dar a conocer los lineamientos bsicos del mtodo cientfico y su aplicacin Adiestrar al estudiante en el uso del mtodo cientfico para usarlos en el campo de la medicina.

II. MATERIALES: Lecturas seleccionadas a partir de artculos cientficos

III PROCEDIMIENTO. Hacer una descripcin de las diferentes etapas que comprende en mtodo cientfico en base al artculo seleccionado , los alumnos por grupo revisarn y analizaran el mencionado artculo en base a lo siguiente: - Observacin - Reconocimiento del problema planteado - Formulacin de la hiptesis - Formulacin de objetivos y mtodos - Prueba de hiptesis mediante la experimentacin - Anlisis de resultados y conclusiones.

IV.RESULTADO - Describir mediante un informe la importancia del artculo evaluado y el correcto uso del mtodo cientfico.

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LABORATORIO: INSTRUMENTAL Y SEGURIDAD

III. OBJETIVOS: Dar a conocer los lineamientos bsicos de organizacin, instrumental y seguridad en el laboratorio sea de anlisis clnico o de investigacin. IV. MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO: Tubos de ensayo Placas de Petri Pipetas Bagetas Matraces(Erlenmeyer, Fiolas) Probetas Beaker (vasos de precipitacin) Pipetas (graduadas y volumtricas Mecheros de Bunsen y de alcohol Asas de Kolle Balanza analtica Estufa o incubadora Hornos Autoclave Espectrofotmetros o colormetros PH metros

V. PROCEDIMIENTO: 1. ORGANIZACIN: Generalmente los laboratorios funcionan de acuerdo a las actividades que ha de realizar se debe considerar reas, estructura y diseo interior, considerando lo siguiente: Mesas de trabajo y repisa sobre la mesa Mesa para instrumentales (balanza, microscopio, pH metro, etc.) Armarios para reactivos y material de vidrio Extractor de gases. 2. SECCIONES: Cada laboratorio puede presentar una o varias secciones dependiendo de la naturaleza de la actividad. En forma general el laboratorio debe contar reas fsicas o secciones: Toma de muestra Separacin y clasificacin de muestras Lavado y esterilizacin Almacn Sala de trabajo 3. CUIDADO DE LOS MATERIALES Y EQUIPOS:

3.1. Cuidado del material de vidrio: Todo material de vidrio debe estar ubicado en una zona especfica y codificados. El material a guardar debe estar completamente limpio, para lo cual debe ser sometido a un riguroso lavado, dependiendo del caso se usar mezcla sulfocrmica o agua regia debiendo ser sometidos posteriormente a numerosos enjuagues con agua corriente y finalmente con agua destilada o bidestilada, y otros podrn ser autoclavados. Los materiales sern sometidos a temperaturas de 37- 45 C para el secado respectivo. 3.2. Cuidado de equipos: Todo equipo o instrumental debe estar ubicado en una zona de poco transito, alta iluminacin y en una mesa slida. Para el manejo de los mismos se debe tener conocimiento de la manipulacin debindose contar con el manual respectivo. Antes de comenzar a operar un equipo verificar el voltaje, resistencia y amperaje del equipo. Terminado el trabajo el instrumental debe quedar limpio y apagado. Anotar en el cuaderno de control la fecha, hora de inicio y trmino de uso del equipo. 4. SEGURIDAD: La seguridad en el laboratorio es de alta responsabilidad. Cualquier actividad en un laboratorio tiene riesgos potenciales. Las reglas generales son: 1. El laboratorio NO es un lugar para correr, empujar y bromear. 2. Aprende donde esta y como se usa el equipo de seguridad. 3. Lee todas las instrucciones para la actividad ANTES de empezar a trabajar. Pon atencin a las notas que indican PRECAUCION. 4. Cualquier accidente, informar inmediatamente al responsable del laboratorio. 5. No comer ni beber en el laboratorio. No probar ninguna sustancia que se use en el laboratorio. Lavarse las manos antes y despus de cualquier actividad. 6. Llevar a cabo solamente aquellas actividades que se nos asigna. Nunca trabajes solo en el laboratorio 7. Mantener el rea de trabajo limpia: sin libros, ni papeles, ni equipo alguno innecesario. 8. Asegurarse de apagar las salida de gas, mecheros, hornillas y de cerrar todas las llaves de agua al

terminar la clase. 9. Sigue las instrucciones del profesor acerca de la forma adecuada de limpiar y recoger los materiales. 10. Usar MANDIL para cubrir la ropa cuando se esta trabajando en el laboratorio. 11. Al calentar materiales, inclinar el tubo de ensayo en direccin fuera de uno y de los dems. 5. SMBOLOS DE SEGURIDAD:

VI. CUESTIONARIO: Qu es la centrfuga y el pH metro y cules son sus usos en un laboratorio? Cul es la clasificacin de las seales de seguridad El vidrio es un material de amplio uso en el laboratorio que propiedades debe tener este material?

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PRACTICA N 3

RECONOCIMIENTO EN MATERIAL BIOLGICO DE LOS CARBOHIDRATOS

I.

OBJETIVO Reconocer las unidades monomricas y macromoleculares como componentes fundamentales de todos los seres vivos.

II.

MATERIALES POR MESA

Solucin de Glucosa al 1% (Monosacrido) Solucin de fructuosa al 1%(Monosacrido) Solucin de Sacarosa al 1% (Disacrido) Solucin de Maltosa al 1% (Disacrido) Solucin de Almidn al 1% (Polisacrido) Solucin de Lugol cido sulfrico concentrado Reactivo de Molish Reactivo de Benedict Tubos de 13x100 Tubos de 16x150 Pipeta de vidrio de 5 ml. graduada Bombilla de jebe para pipeta Pinzas de madera Mecheros, trpode, rejilla de asbesto

III. PROCEDIMIENTO

3.1. Determinacin General de Glcidos: Los Glcidos o Hidratos de carbono por accin deshidratante del cido sulfrico originan compuestos derivados del furfural, los que en presencia del alfa-naftol presente en el Reactivo de Molish, formarn un compuesto coloreado.

Preparacin: 1. 2. 3. 4. Colocar 1 ml. De cada solucin del glcido al 1% (Glucosa, Fructuosa, Sacarosa y Almidn) en un tubo de 13x100 y roturarlo. Adicionar a cada tubo con glcido una (1) gota del Reactivo de Molish. Agregar lentamente por la pared del tubo sin agitar 1 ml. de cido sulfrico concentrado. Observar si hay cambio de color.

3.2. Determinacin de Azcares Reductores: Un Azcar reductor al ser sometido a la accin del calor en el medio alcalino del Reactivo de Benedict, sufre fenmenos de enolizacin y se fragmenta formando cuerpo fuertemente reductores para el cobre del Reactivo de Benedict que se transforma en Ion cuproso (Cu+) el que reaccionar con los iones OH- del medio para formar Oxido cuproso (Cu2O) que es de color rojo ladrillo.

Preparacin: 1. 2. 3. 4. Colocar 2 ml. de cada solucin de glcido al 1% (Glucosa, Fructuosa, Sacarosa, Maltosa y Almidn) en un tubo de 16x150 mm y roturarlo. Adicionar 1 ml. de Reactivo de Benedict a cada tubo. Someter los tubos a ebullicin en agua hirviendo con ayuda de una pinza por cinco (5) minutos. Observar la formacin de color (rojo ladrillo si es positivo)

3.3. Determinacin de Almidn: El yodo del Lugol es absorbido por el almidn y forma con l compuestos complejos de color azul negruzco (yoduro de almidn).

Preparacin: 1. 2. 3. Colocar 2 ml. de solucin de Almidn al 1% en un tubo de 16x150 mm. Adicionar 3 gotas de Lugol y agitar. Observar la formacin de color (azul negro si es positivo)

IV. PROTOCOLO

A.

Determinacin de Glcidos.

B.Determinacin de azcares reductores. C.Determinacin de Almidn.

V. CUESTIONARIO

1. Cules son los fundamentos de las reacciones indicadas en la parte procedimental. 2. Diferencias entre azcares reductores y no reductores 3.Establezca diferencias biolgicas y qumicas entre maltosa y almidn 4.Que es la lactosa y que problema digestivo podra generar.

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RECONOCIMIENTO EN MATERIAL BIOLOGICO DE LIPIDOS , PROTEINAS y ADN

I. OBJETIVO Reconocer que compuestos orgnicos como los lpidos y protenas son constituyentes importantes en todos los seres vivos.

II. MATERIALES POR MESA Aceite comestible Albmina al 1% Clara de huevo Alcohol Cloroformo ter etlico Sudam III Hidrxido de sodio al 40% Sulfato de cobre al 1% cido ntrico concentrado Tubos de 16 x 150 mm. Pipetas graduadas de 5 ml.

III.

PROCEDIMIENTO

DETERMINACION DE LIPIDOS

A. Solubilidad de los Lpidos Los lpidos son insolubles en agua y solubles en solventes orgnicos como el ter y cloroformo. Preparacin: 1. 2. Colocar 2 ml. de Aceite en cada tubo y agitar Agregar: En el tubo N 1: 2 ml de agua destilada En el tubo N 2: 2 ml. de Alcohol En el tubo N 3: 2 ml. de cloroformo En el tubo N 4: 2 ml. de ter etlico 3. Observar, en cada tubo si hay solubilidad o no. 4. La solubilidad del aceite es positiva en el alcohol, cloroformo y ter etlico. B. Solubilidad del Sudam III El Sudam III es un compuesto coloreado que es mas soluble en los lpidos que en el alcohol, al solubilizarse en los lpidos produce una coloracin rosada.

Preparacin: 1. 2. 3. 4. Colocar 1 ml. de aceite comestible en un tubo de 16x150 mm. Adicionar 1 ml. de Sudam III Observar la coloracin producida. La formacin de una coloracin rosada indica que la prueba es positiva.

DETERMINACION DE PROTEINAS

A.

REACCION DE BIURET Los compuestos que contienen dos o ms enlaces peptdicos forman un complejo con las sales de cobre en un medio fuertemente alcalino, dando un color prpura o violeta. Preparacin: 1. 2. 3. 4. 5. Colocar 2 ml. de la solucin de Albmina al 1% o solucin Clara de huevo al 10% en un tubo de 16x150 mm. Agregar 2 ml. de la solucin de Hidrxido de sodio al 40% y mezclar. Aadir 2 gotas de Sulfato de cobre al 1%. Incubar a 25 C por 30 minutos. Observar la coloracin producida.

Resultado La formacin de una coloracin violeta o prpura indica que la prueba es positiva. B. REACCIN XANTOPROTECA Las protenas que presentan aminocidos con anillos bencnicos, cuando se someten a la accin del cido ntrico, dan derivados nitrogenados que se colorean de amarillo. Preparacin: 1. 2. 3. 4. Colocar 2 ml. de la solucin de Albmina al 1% o Clara de huevo al 10% en un tubo de 16x150 Adicionar 2 ml. de cido ntrico concentrado. Observar la formacin de un precipitado blanco y hervir por 3 minutos. Observar la coloracin producida.

Resultado La formacin de una coloracin amarillo - claro evidencia la presencia de protenas.

EXTRACCIN DE ADN

Siguiendo las indicaciones de su profesor proceda a extraer el ADN bajo la forma de fibras.
IV. CUESTIONARIO: ADN 1. 2. 3. 4. Por qu los lpidos no se disuelven en el agua pero si en solventes orgnicos Como se clasifican las protenas Cul es la composicin bsica de ADN Qu es la obesidad y la proteinuria

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MICROSCOPIA: ESTUDIO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO

I.

OBJETIVO 1. Conocer e identificar correctamente las partes pticas y mecnicas del microscopio compuesto. 2. Familiarizar al alumno con el uso correcto, cuidado y conservacin del microscopio.

II.

MATERIALES

4 Microscopios 4 Lminas portaobjetos 4 Laminillas cubreobjetos Lminas coloreadas Suero fisiolgico Pipeta Pasteur 1 Plumn indeleble Papel lente Tela de felpa(25 cms) Fibra de pelo y lana

III. PARTES DEL MICROSCOPIO Reconocer cada una de las siguientes partes del microscopio:

PARTE MECANICA Tubo portalentes y cremallera Tornillos macro y micromtrico Revolver Platina Condensador Brazo y Pie Charnela

PARTE OPTICA Ocular Objetivos

Espejo Lentes de condensador Diafragma

IV. SISTEMAS QUE COMPRENDE EL MICROSCOPIO 1. 2. 3. 4. Sistema de soporte: comprende el brazo, el pie, el tubo ocular, el revolver y la platina. Sistema de Iluminacin: comprende el foco, condensador y diafragma. Sistema de Ajuste: comprende el macromtrico, micromtrico y cremallera Sistema de Aumento: comprende el ocular generalmente de 10 x , 15 x y los objetivos de 5x, 10, 40, y 100x.

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V. PROTOCOLO DE LAS OBSERVACIONES REALIZADAS

OBJETIVO

AUMENTO

MUESTRA N 1

MUESTRA N 2

MUESTRA N 3

MUESTRA N 4

VI. 1. 2. 3. 4.

CUESTIONARIO Definir que es una imagen real y que una imagen virtual Que es el poder de resolucin y a qu se denomina ndice de Refraccin Que importancia tienen los microscopios electrnico y de fuerza atmica en la medicina. Realice un esquema del microscopio compuesto y seale sus partes.

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OBSERVACIONES CELULARES: PROCARIOTES (BACTERIAS) Y EUCARIOTES (HONGOS Y PARASITOS).

I.

OBJETIVO

Conocer diversos organismos microbianos denominados Bacterias, Protozoarios, hongos y parsitos que estn formados por una sola o varias clulas y que habitan diversos medios naturales. Visualizar ciertas caractersticas estructurales en ellas.

MATERIALES POR MESA Laminas con muestras preparadas de bacterias, hongos y parsitos Palitos mondadientes Solucin fisiolgica al 0.85% Solucin Mercuro cromo Solucin de Violeta de genciana Alcohol yodado Lamina portaobjetos Lamina cubreobjeto Aceite de inmersin Depsito para eliminar lminas y laminillas.

PROCEDIMIENTO Colocar una gota de solucin fisiolgica sobre una lmina. Con el mondadientes obtener una muestra de sarro dental y esparcir en espiral en la gota de solucin fisiolgica. Secar a temperatura ambiente y una vez seco cubrir con colorante Mercuro de cromo por 5 minutos. Enjuagar y aplicar 12

inmediatamente el colorante Violeta de genciana. Dejar por 3 minutos, lavar con agua de cao. Secar la muestra preparada por accin del calor o al medio ambiente. Las lminas con muestras preparadas de bacterias y la del sarro dental observar con lente de 100X y aceite de inmersin. Las lminas de hongos y parsitos observar con objetivos secos de 20 y 40 aumentos.

PROTOCOLO

Aumento Muestra con Sarro dental (coloreada con la coloracin de Vag) Lamina con muestra bacteriana (coloracin Gram y/o Ziehl Neesel Lamina con muestra Fungal (Hongo) Lamina con muestra de parsitos 4 X

10 X

40 X

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100 X

ASPERGILLUS (HONGO)

PENICILLUM (HONGO )

CUESTIONARIO

1. 2. 3. 4.

Que son organismos Procariotes y Eucariotes. Que formas bacterianas conoce, explique.. Cuales son las dos formas tpicas de los hongos Enumere enfermedades producidas en el hombre por bacterias y hongos

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PRACTICA N 7

OBSERVACION DE MEMBRANA Y PARED CELULAR: CELULA ANIMAL Y VEGETAL

I.

OBJETIVO Poder diferenciar al microscopio las caractersticas que presentan la membrana celular de la clula animal y la pared celular de la clula vegetal.

II. MATERIALES POR MESA Muestra de clula epitelial de la mucosa bucal Muestra de catfila de cebolla (Allium cepa) Microscopios Lminas portaobjetos Laminillas cubreobjetos Bistur Pinza de punta recta Mechero de alcohol Colorante Azul de metileno Colorante Lugol Alcohol yodado Solucin fisiolgica Papel secante Papel lente

III. PROCEDIMIENTO A) OBSERVACION DE CELULA ANIMAL (RASPADO DE MUCOSA BUCAL) 1. Colocar una gota de solucin fisiolgica sobre la lmina portaobjetos. 2. Con una lmina limpia hacer un raspado de la mucosa bucal. 3. Colocar la muestra obtenida sobre la gota de solucin fisiolgica. 4. Aplicar una gota del colorante azul de metileno sobre la muestra. 5. Cubrir la preparacin con una laminilla cubreobjeto. 6. Observar con objetivo de 10X y 40X aumentos.

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1- Membrana plasmtica, 3- Retculo endoplsmico rugoso, 5- Nucleolo, 7- Citosol (=hialoplasma), 9- Retculo endoplsmico liso,

2- Mitocondria, 4- Ribosomas, 6- Cromatina, 8- Diplosoma (=centriolos), 10- Aparato de Golgi

B) OBSERVACION DE CELULA VEGETAL (CATAFILA DE CEBOLLA) 1. Con ayuda de la pinza separe una de las catfila de la cebolla y extindalo sobre la lmina portaobjeto. 2. Con el bistur corte cuadritos de medio centmetro de catfila. 3. Coloque un cuadrito de la catfila sobre una lmina portaobjeto y agregar una gota de Lugol. 4. Cubrir la preparacin con una laminilla cubreobjeto. 5. Observar con objetivos de 10x y 40x

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C) OBSERVACION DE UNA CELULA FUNGICA 1. 2. En una lmina preparada observar un cultivo de hongo coloreada con Azul de Lactofenol. Observar con objetivos de menor y mayor aumento.

IV. PROTOCOLO "A" : Observacin de clula animal

AUMENTO

RASPADO DE LA MUCOSA BUCAL Con Suero Fisiolgico con Azul de Metileno

PROTOCOLO "B": Observacin de clula vegetal. CATAFILA DE CEBOLLA AUMENTO con Suero fisiolgico con Lugol

PROTOCOLO C: Observacin de una clula fngica.

AUMENTO CELULA FUNGICA (HONGO)

COLORACIN AZUL DE LACTOFENOL

10 X

40 X

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V. CUESTIONARIO 1.Qu caractersticas presenta la membrana celular de la mucosa epitelial y la pared celular de la clulas vegetales. 2.Cual es la importancia de los colorantes en las pruebas biolgicas 3.Que tipo decolorante es el azul de metileno y cual es su estructura. 4.Que es el lugol y que importancia tiene en la preparacin de laminas.

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ASOCIACIN UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA CURSO DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR PRACTICA N 8 FENOMENOS FISICOS DE LA CELULA: DIFUSION, OSMOSIS OBJETIVO Observar los fenmenos de difusin y smosis y su importancia para la clula. II. MATERIALES Lminas portaobjeto Laminillas cubreobjetos Tubos de prueba Lancetas hematolgicas Solucin de NaCl al 0.4% Solucin de NaCl al 0.9% Solucin de NaCl al 2.0% Agua destilada Alcohol corriente Algodn estril Pipetas de 1 ml. Varillas de vidrio macizo Gradillas Microscopios III. PROCEDIMIENTO A) Experimento con eritrocitos (clula animal): 1. En los tubos de prueba perfectamente numerados, colocar: En el 1er. tubo: 2 ml. de Sol. NaCl al 0.4 % En el 2do. tubo: 2 ml. de Sol. NaCl al 0.9 % En el 3er. tubo: 2 ml. de Sol. NaCl al 2.0 % 2. Desinfectar el dedo cordial (tercero) con algodn humedecido en alcohol 3. Realizar una puncin con ayuda de la lanceta descartable, en el dedo 4. Dejar caer 3 gotas de sangre en cada uno de los tubos 5. Agitar los tubos y dejar en reposo durante 2 minutos 6. Con la varilla de vidrio colocar sobre el portaobjeto una gota de la muestra de los tubos 7. Colocar el cubreobjeto y observar: Las lminas preparadas al microscopio, y El aspecto de los tubos hasta los 15 minutos. 19

B) Experimento con catfila de cebolla (clula vegetales: 1. En tubos de prueba perfectamente numerados, repetir el punto nmero 1 2. Agregar a cada tubo trocitos de vegetal 3. Dejar en reposo dos minutos, luego retirar la catafila para colocarla en una lmina y cubrirla con una laminilla. 4. Observar al microscopio IV. RESULTADO:
MUESTRA 1 Sol.NaCl0.4% + sangre MEDIO FENOMENO

Sol.NaCl 0.9 % + sangre

Isotnica

Sol. NaCl 2 % + sangre

Hipertnica

Sol,NaCl 0.4 + vegetal

Hipotnica

Sol.NaCl 0.9 + vegetal

Isotnica

Sol.NaCl 2 + vegetal

Hipertnica

VI. CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. Qu es difusin y cuantas clases existen Defina que es: Osmosis, Dilisis, Turgencia y Plasmlisis. Diferencia entre hemlisis y plasmolisis Que es crenacin , explique.

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ORGANISMOS MOVILES: PSEUDOPODOS, CILIOS Y FLAGELOS .

I. OBJETIVOS 1. 2. 3. Verificar y comprender el movimiento de la clula de vida libre. Observar y comprobar la existencia de estructuras para el movimiento celular. Llegar a diferenciar las diferentes estructuras que intervienen en el movimiento celular, hacer una comparacin entre ellas.

II. MATERIALES A. MATERIAL DE LABORATORIO Microscopios Placas Petri Lminas portaobjetos Laminillas cubreobjetos Gotero o Pipeta de 1 ml. Colorantes: -Lugol al 4% -Verde de metilo

B. MATERIAL BIOLOGICO Cultivo de Protozoarios.

III. PROCEDIMIENTO Cultivo de Protozoarios: En un frasco mediano de boca ancha, con agua estancada, preparar: arroz, zanahoria, lechuga picada y levadura Mantener abierto al aire libre durante 6 das, en un lugar donde no haya luz directa.

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IV.

OBSERVACION A) Movimiento ameboideo por seudpodos: Amoeba proteus (Clase Sarcodina) 1. 2. 3. Sobre una lmina portaobjetos, con un gotero coloque una gota del cultivo de protozoarios que contenga Amoeba, cubrirlo luego con una laminilla cubreobjetos. Aadir despus de haber observado una gota de Verde de metilo o Lugol. Dibujar las observaciones realizadas a 10x, 20x y 40x.

B) Movimiento flagelar por flagelos: Euglena viridis (Clase Mastigophora) 1. 2. 3. Sobre una lmina portaobjetos, colocar una gota de cultivo que contenga Euglena y cubrir con una laminilla cubreobjetos. Aadir despus de haber observado una gota de verde de metilo o Lugol. Dibujar las observaciones realizadas.

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C). Movimiento ciliar por cilios: Paramecium caudatum (Clase Ciliophora) 1. 2. 3. Sobre una lmina portaobjetos, colocar una gota de cultivo que contenga Paramecium, y cubrirlo con una laminilla cubreobjeto. Aadir despus de haber observado la muestra anterior, una gota de verde de metilo o Lugol. Dibujar las observaciones realizadas.

V.

PROTOCOLO: REALIZAR ESQUEMAS DE LO OBSERVADO

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AUMENTO

Amoeba proteus (Sarcodina)

Euglena viridis (Mastigophora)

Paramecium caudatum (Ciliophora)

10 X

20 X

40 X

VI. 1. 2. 3. 4.

CUESTIONARIO A que atribuye la gran movilidad de los Protozoarios. Explique las diferencias entre los diferentes tipos de movimientos: por seudpodos, flagelos, cilios. Que es el Sndrome de Kartagener y su importancia mdica. Explique tres enfermedades producidos por protozoarios, flagelados y no flagelados.

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ESTUDIO DE ORGANELOS CELULARES: MITOCONDRIAS, CLOROPLASTOS Y PLASTIDOS.

I.

OBJETIVO: Mediante el empleo de la tcnica de coloracin vital se observarn las mitocondrias presentes slo en el citoplasma de las clulas Eucariotas, que vienen a constituir las centrales de energa porque producen y almacenan energa bajo la forma de ATP. Con el uso de suero fisiolgico observar plastidos en las clulas vegetales eucariticas, los que contienen pigmentos y pueden sintetizar y acumular diversas sustancias, como los Leucoplastos que son plastidos incoloros, los Amiloplastos que acumulan almidn, los Proteinoplastos que acumulan protenas, los Elaioplastos que acumulan grasas y aceites esenciales. Los Cromoplastos son plastidos coloreados como el Caroteno que presenta un pigmento de color naranja, el Licopeno de color rojo, la Xantofila de color amarillo y los Cloroplastos que presentan un pigmento de color verde y cuya funcin principal es realizar la fotosntesis.

II.

MATERIALES POR MESA: Muestra de: Clulas de epitelio bucal Hoja de Elodea (Cloroplastos) Aj amarillo (Xantofila) Zanahoria (caroteno) Papa (Amiloplastos) Betarraga (Antocianina) Harina de arroz (Leucoplastos o Amiloplastos) Microscopios Hoja de afeitar Pinzas en punta Laminas portaobjeto Laminillas cubreobjeto Solucin Verde Janus 1/10,000 Frascos con Lugol Frasco con Suero Fisiolgico Goteros con chupn de jebe

III.

PROCEDIMIENTO:

A) OBSERVACION DE MITOCONDRIA EN EPITELIO BUCAL: 1. Con una lmina limpia y mediante un raspado suave obtener una muestra de la mucosa bucal, 2. Realizar un frotis extendiendo la muestra sobre otra lmina, 3. Dejar secar la lmina con la muestra al medio ambiente, 4. Cubrir la muestra con Verde Janus durante 5 minutos, 5. Eliminar el exceso de colorante y dejar secar al medio ambiente, 6. Observar al microscopio con objetivos de 10x y 40x.

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B) OBSERVACION DE PLASTIDOS EN VEGETALES: CLOROPLASTOS: Se localizan en las hojas debajo de la epidermis superior. 1. 2. 3. Seleccionar una hoja joven de Elodea, colocarla sobre una gota de agua en una lamina portaobjeto. Cubrir la muestra con una laminilla. Observar al microscopio con objetivo de menor y mayor aumento. CROMOPLASTOS: Son organelas coloreados y presentan formas variadas (redondas, elpticas, o aciculares). 1. 2. 3. 4. Realizar cortes finos de zanahoria, aj amarillo, betarraga sobre una lmina portaobjetos Colocar una gota de agua sobre el corte. Cubrir con una laminilla. Observar al microscopio con objetivos de menor y mayor aumento. AMILOPLASTO: Son organelas que contienen almidn como sustancia de reserva. 1. 2. 3. 4. Sobre una lmina portaobjetos colocar una gota de Lugol. Agregar una pequea porcin de harina de maz y/o trozo delgado de papa . Cubrir con una laminilla. Observar al microscopio con objetivo de menor y mayor aumento.

IV.

PROTOCOLO:

MUESTRAS

OBSERVACIN DE MITOCONDRIA,

CLOROPLASTOS Y TIPO PLASTIDIO DE

PLASTIDIOS 20 X EPITELIO BUCAL HOJA DE ELODEA AJI AMARILLO ZANAHORIA BETARRAGA PAPA HARINA DE ARROZ V. CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. 26 Cul es la importancia de las mitocondrias. Que transformaciones se llevan a cabo en las mitocondrias. Porque las mitocondrias fijan el verde de Janus. Que funcin cumplen los plastidios en las clulas. 40 X

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PRACTICA N 11 ACCION ENZIMATICA

I. OBJETIVO: Conocer el mecanismo de accin de las enzimas durante una reaccin qumica Conocer como acta un catalizador II. MATERIALES: Gradilla Mortero con piln Tubos de prueba de 16 x150 Agua oxigenada Dixido de Manganeso

Papa rayada Hgado de pollo Palito de Ignicin Fsforos Placas Petri

III. FUNDAMENTACION: Las Enzimas tienen como funcin acelerar la velocidad de una reaccin qumica. El mecanismo de accin se realiza de la siguiente manera: Unin de un Sustrato a la Enzima para formar un Complejo Enzima- Sustrato y desdoblamiento del complejo formado para liberar los Productos. E+S E-SE+P IV. PROCEDIMIENTO: 1) Numerar los tubos del 1 al 3 2) Colocar en cada tubo 2 ml. de Perxido de hidrgeno (Agua oxigenada) 3) Agregar al: Tubo 1: cucharita de Papa Tubo 2: cucharita de Hgado de pollo Tubo 3: 2 g. Dixido de Manganeso 4) Colocar a cada tubo el palito de Ignicin encendido en la boca del tubo 5) Si el palito de Ignicin aumenta la intensidad del fuego, la reaccin es positiva. V. RESULTADOS: MnO2 + 2 H2O2 ------ 2 H2O + O2 + MnO2 Catalasa + 2 H2O2 ------ 2 H2O + O2 + Catalasa VI. PROTOCOLO Anotar los resultados observados VII. CUESTIONARIO: 1) 2) 3) 4) Defina que es un catalizador De que manera se clasifican las enzimas Que se entiende por sitio activo. Que tipo de enzima es la catalasa, y cual es su importancia en el metabolismo

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PRACTICA N 12

CICLO CELULAR: MITOSIS

I.

OBJETIVO: Se estudiar la mitosis y el ciclo de divisin celular en las clulas meristemticas de la raz de Allium cepa (cebolla). En este sistema la poblacin celular esta en equilibrio dinmico y los cromosomas son relativamente grandes, con un nmero diploide ( 2n =16 ).

II.

MATERIALES: Bulbos de cebolla Placas Petri Estiletes y pinzas Papel de Filtro Portaobjetos Cubreobjetos Aceite de inmersin Mechero de Alcohol Orcena actica- clorhdrica Aceite de inmersin Papel lente Microscopios

III. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.

PROCEDIMIENTO: Cultivar los bulbos de cebolla en vasos pequeos conteniendo agua corriente, la que deber cambiarse cada 24 horas, mantener los bulbos en oscuridad a 25C y sometidos a aireacin constante. Despus de 48 a 72 horas, arrancar con ayuda de una pinza 2 a 3 races del bulbo, cortar 2 cm. de la parte apical y colocarla sobre una placa Petri que contenga Orcena. Calentar la placa en la llama de un mechero de alcohol hasta aproximadamente 60C y se observe la emisin de vapores blancos, evitar la ebullicin del colorante. Dejar enfriar y repetir esta operacin cuatro veces. Enfriar y dejar reposar durante 15 minutos. Colocar la raicilla en la lmina portaobjeto, cortar 2 mm de la punta, aadir una agota de Orcena fra, cubrir la preparacin con laminilla. Con la punta de un lpiz golpear suavemente la preparacin describiendo crculos concntricos para permitir la extensin del tejido meristemtico. Eliminar el exceso de colorante usando una tira de papel filtro. Observar la preparacin a mayor aumento y lente de inmersin.

IV.

PROTOCOLO:

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Esquematizar las diferentes fases que se observan: Interfase: Los cromosomas no se observan al microscopio debido a que son demasiados delgados y no puede absorber suficiente colorante para ser visible. Profase: Fase en la cual los cromosomas se observan con sus dos cromtidas. Metafase: Se observa el huso acromtico, los cromosomas estn mas condensados y cortos. Anafase: Los cromosomas se dirigen a los polos Telofase: Los cromosomas estn en los polos, empieza la formacin de la membrana nuclear

V. 1. 2. 3. 4.

CUESTIONARIO: Que es mitosis. Que hay de comn entre mitosis y meiosis. Que es Indice mittico e ndice interfsico Defina cariocinesis y citocinesis

REALIZAR ESQUEMAS:

FASE DE LA MITOSIS

ESQUEMAS

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PRACTICA N 13

OBSERVACION DE ELEMENTOS FORMES DE LA SANGRE

I.

OBJETIVOS Determinar la presencia de elementos figurados presentes en una muestra de sangre perifrica humana, mediante el uso de una coloracin diferencial. Observar la presencia de ncleos en su interior.

II.

MATERIALES Microscopios Colorante Wright o Giemsa Alcohol yodado Agua destilada Lminas portaobjetos limpias y desengrasadas Lancetas hematolgicas Algodn estril Varillas de coloracin

III. PROCEDIMIENTO A. Obtencin de sangre capilar 1. 2. 3. B. Desinfectar el dedo anular con alcohol yodado y algodn y con una lanceta estril punzar el dedo y dejar caer una gota de sangre sobre un extremo de la lmina portaobjetos. Con ayuda de otra lmina portaobjeto formar un ngulo de 45 y realizar un frotis, tratando de esparcir homogneamente la gota de sangre sobre la superficie de la lmina. Dejar secar la preparacin y proceder luego a la coloracin con Wright o Giemsa.

Coloracin 1. Cubrir el frotis con colorante Wright o Leishman por 1 minuto. 2.Sin eliminar el colorante agregar agua destilada y dejar actuar por 10 minutos. 3.Eliminar luego el colorante y lavar suavemente con agua de cao. 4.Dejar secar la lmina coloreada. 5.Una vez que la lmina coloreada a secado, observar al microscopio con el objetivo de 100 X y aceite de inmersin.

IV. PROTOCOLO (Esquematice los siguientes elementos que abajo se indican y que sern observados con ayuda del microscopio).

1.

LEUCOCITOS GRANULARES:

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a)

Neutrfilos segmentados: presenta un ncleo con varios lbulos (2-5) unidas por bandas de cromatinas.

b) Neutrfilos en banda o abastonado: presenta un ncleo no dividido en forma de S o en cayado O. c) Eosinfilos: redondos, voluminosos, con granulaciones acidfilas de color anaranjado, ncleo con dos lbulos. d) Basfilos: son escasos de 0-1, presenta un ncleo difcil de observar, pues se halla cubierto por una granulacin de color violeta o morado oscuro .

2.

LEUCOCITOS AGRANULARES: a) Linfocitos: De forma redonda o irregular, su ncleo es morado, voluminoso y ocupa la mayor parte de la clula, el citoplasma es azul y sin granulaciones. Su nmero aumenta con las infecciones.

b) Monocitos: De forma redonda u ovalada, ncleo variable generalmente en forma de rin, citoplasma sin grnulos. Presenta una gran actividad fagocitaria.

3.

PLAQUETAS: Las ms pequeas de las clulas de la sangre, de forma redonda y no contienen hemoglobina. Son esenciales en la coagulacin de la sangre.

4.

HEMATIES O ERITROCITOS: De forma generalmente redonda, sin ncleo, de color rosa intenso, contiene hemoglobina. La protena que se encarga del transporte de oxgeno y anhdrido carbnico.

Neutrofilos

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Eosinfilos

Basfilo

Monocitos

Linfocitos V. CUESTIONARIO 1. Cul es la diferencia entre plasma y suero. 2. Escriba cules son los valores leucocitarios en el adulto sano. 3. Diga cul son las funciones de los diferentes leucocitos. 4. Que es la anemia, y cual es su origen

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ASOCIACIN UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA CURSO DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

PRACTICA N 14 GRUPO SANGUINEO Y FACTOR Rh

I.

OBJETIVO: Al finalizar la prctica el alumno debe saber qu es el grupo sanguneo, sus aplicaciones en el campo de la medicina y el grupo sanguneo al que pertenece.

II.

GENERALIDADES: El serlogo Karl Landsteiner, en 1900-1901 fue el primero en demostrar la existencia de grupos sanguneos y en 1938 el Comit de Higiene de la Liga de la ONU, el Congreso de Microbiologa de 1930 en Londres y la Internacional de Transfusin Sangunea de Pars, se adopt definitivamente la clasificacin de los grupos sanguneos humanos heredables, designados como A, B, AB, O.

GRUPOS SANGUINEOS RESULTANTES

GRUPO SANGUINEO

ANTIGENO EN GLOBULOS ROJOS (AGLUTINOGENOS) A

ANTICUERPOS EN PLASMA O SUERO SANGUINEO (AGLUTININAS) Anti-B

Anti-A

AB

AB

Ninguno (Receptor universal) Anti-A + Anti-B (Dador universal)

Ninguno

III.

MATERIAL Y METODOS: Lminas portaobjetos Lancetas hematolgicas Sueros Anti-A, Anti-B, Anti-D o Rh. Algodn Alcohol yodado RECONOCIMIENTO DE GRUPOS SANGUINEOS: La tcnica de reconocimiento de grupos sanguneos se basa en la aglutinacin o no de los hemates cuando se mezclan con la aglutinina Anti-A o Anti-B.

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PROCEDIMIENTO : 1. Limpie con algodn embebido en alcohol la yema del dedo anular. 2.Realizar la puncin utilizando una lanceta hematologa estril. 3.Coloque dos gotas de sangre por separado sobre la lmina portaobjetos, de la persona a la cual se va a realizar la prueba y en otra lmina otra gota de sangre. 4.Agregar a cada gota de sangre una gota de suero Anti-A y Anti-B y Anti-D o Anti-Rh por separado. 5.Observar la reaccin e identificar a que grupo pertenece y que factor Eh, si es positivo o negativo

METODO DE RECONOCIMIENTO PRACTICO :

GRUPO A Anti-A Anti-B Anti-A Anti-B

GRUPO B

GRUPO AB GRUPO O

Rh: Anti D o Rh (+)

Anti- D o Rh (-)

IV: CUESTIONARIO : 1. 2. 3. 4. A quienes se les llama receptores y donadores universales, por qu? Explique la Eritroblastosis fetal. En que se basa el reconocimiento de los grupos sanguneos? Explique como se puede hacer el descarte de paternidad

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