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SUBSECRETARA DE EDUCACIN MEDIA SUPERIOR DIRECCIN GENERAL DE EDUCACIN TECNOLGICA INDUSTRIA COORDINACIN DE ENLACE OPERATIVO EN EL ESTADO DE TABASCO CENTRO

DE BACHILLERATO TECNOLGICO Industrial y de servicios No. 32

CUADERNO DE PRCTICAS
ASIGNATURA
VALORACION INTEGRAL CLINICA

Q.F.B. MARA ESTHER SNCHEZ SERRA.

Villahermosa, Tabasco Febrero 2013

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INDICE
Introduccin ....................................................................................................3 Objetivo General .............................................................................................3 Practica 1: Biometra Hemtica ......................................................................4 Practica 2: Citologa En Moco Fecal .................................................................. Practica 3: Citologa De Moco Nasal .................................................................. Practica 4: Citologa En Orina ........................................................................... Practica 5: Coprolgico ..................................................................................... Practica 6: Coprocultivo .................................................................................... Practica 7: Anticuerpos Parasitarios .................................................................. Practica 8: Reacciones Febriles ......................................................................... Practica 9: Urocultivo ........................................................................................ Practica 10: Determinacin De Gonadotropina Corinica Humana.................... Practica 11: Esperma ........................................................................................ Practica 12: Prueba Post-Coito ..........................................................................

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I.

INTRODUCCIN

El presente cuadernillo de trabajo pretende que el estudiante reafirme sus conocimientos y domine la metodologa de las prcticas

parasitolgicas, hematolgicas y endocrinolgicas.

II.

OBJETIVO GENERAL

Aplicar las tcnicas de laboratorio para reafirmar los conocimientos tericos.

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1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA Prctica No. 1 Titulo de la Prctica: BIOMETRA HEMATICA Fecha de realizacin:

Ubicacin: Unidad: I Temas: 1

CITOLOGA

Observar los elementos formes de la sangre

2.- INTRODUCCIN La Biometra Hemtica tambin denominada Hemograma, es uno de los estudios de rutina de mayor importancia, ya que la informacin que de aqu se deriva nos proporciona una idea muy confiable del estado general de la salud del paciente, consta de 2 bloques: Formula Roja: Determina los parmetros relacionados con el eritrocito. Formula Blanca: Determina los parmetros relacionados con los leucocitos.

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3.-MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes) CANTIDAD 1 5 2 1 1 1 2 1 1 1 1 DESCRIPCIN Jeringa de 5 ml. Tubos de ensaye de 13X100 Portaobjetos Pipeta de Thoma para cuenta de glbulos rojos Pipeta de Thoma para cuenta de glbulos blancos Boquilla Tubos capilares Mechero Pipeta de 5 ml. Gradilla Gasa

4.-EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 1 1 1 DESCRIPCIN Microscopio Microcentrfuga Espectrofotmetro Escala para leer microhematcrito

5.- MATERIAL BIOLGICO CANTIDAD DESCRIPCIN

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5 ML.

Sangre con anticoagulante.

6.- REACTIVOS: CANTIDAD 20 ml 0.2 ml 5 ml 5 ml DESCRIPCION Solucin de Drabkin Anticoagulante (sol. EDTA) Colorante de Wright Solucin de Hayem Lquido de Turck Aceite de inmersin

7.-RECOLECCION DE LA MUESTRA Extraer sangre venosa recolectada en tubo con anticoagulante

8.-DESCRIPCIN DE LA PRCTICA Formula Roja: La determinacin de la frmula roja se compone de los siguientes parmetros:

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A.- Hematocrito (Ht): Es el porcentaje de la sangre que est compuesta por eritrocitos. 1.- Mezcla en forma homognea y en forma lenta la sangre, para evitar hemlisis. 2.- Llena un tubo capilar con la sangre hasta las tres cuartas partes del mismo. 3.- Con ayuda del mechero sella el tubo en el extremo que se encuentra libre de sangre. 4.- Centrfuga el capilar sellado en la microcentrfuga durante 5 minutos. 5.- Lee el microhematcrito en una placa de escala de valores. B.- Hemoglobina (Hb): Determina la cantidad de esta protena expresada en g./dl. 1.- Coloca en un tubo de ensaye 5 ml. De reactivo de Drabkin. 2.- Con una pipeta de Sal mide 0.02 mm de sangre y adiciona sta al tubo que contiene el reactivo de Drabkin. 3.- Dejar en reposo durante 10 minutos. 4.- Leer en % de transmitancia a 540 nanmetros de longitud de onda. 5.- Calibra el aparato a 100% de transmitancia utilizando el blanco de reactivo. 6.- Lee la muestra problema. 7.- Convierte la transmitancia en gramos sobre 100 ml de acuerdo a la grafica.

C.- Recuento eritroctico (Eri): Es la cantidad total de eritrocitos circulantes por microlitro de sangre. 1.- Aspira sangre hasta la marca 0.5 en la pipeta de toma para glbulos rojos. 2.- Continua aspirando con el lquido de Hayem hasta la marca de 101. 3.- Agitar vigorosamente.

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4.- Elimina las tres primeras gotas de la dilucin que se encuentra en la pipeta 5.- Llena la cmara de Neubauer 6.- Dejar reposar durante 1 minuto. 7.- Lleva la cmara cuenta glbulos al microscopio, cuenta las clulas en objetivo de 10x. 8.- Realiza los clculos correspondientes

D.- ndices eritrocticos: Determinados mediante clculos matemticos. 1. Volumen Globular Medio (VGM): (Ht. x 10 / Eri), Es el tamao eritroctico expresado en femtolitros y se comporta de la siguiente forma: 2. Hemoglobina Globular Media (HGM): (Hb. x 10 / Eri.), Se refiere a la cantidad de hemoglobina depositada en el eritrocitos expresada en picogramos. 3. Concentracin de Hemoglobina Globular Media (CHGM) : (Hb x 100 / Ht) Es la cantidad de hemoglobina que est relacionada directamente con el eritrocito. Es el ndice ms preciso, ya que no requiere del conteo total de eritrocitos circulantes. E.- Morfologa eritroctica: Determinada en el frotis sanguneo Observar en el frotis sanguneo: Rouleaux Anisocitosis Esferocitos Policromasia Hipocromia Poiquilocitosis Leptocitos Estomatocitos Clulas en diana: Cuerpos de Howell-Jolly Cuerpos de Heinz Eritrocitos nucleados (Rubrocitos y Metarrubrocitos) Formula blanca A.- Recuento de leucocitos. 1.- Llenar la pipeta de glbulos blancos hasta la marca de 0.05, limpia el extremo de la pipeta con una gasa. 2.- Con el liquido de Turck termina de llenar la pipeta hasta la marca de 11 .

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3.- Mezcla durante un minuto. 4.- Desecha las 3 primeras gotas y carga la cmara de Neubauer. 5.- Deja reposar 1 minuto despus de haber llenado la cmara. 6.- Coloca la cara en el microscopio y lee con el objetivo de 10x . 7.- Cuenta los leucocitos en los cuadros grandes de los extremos de la cuadricula de la cmara de Neubauer. 8.- Realiza los clculos correspondientes. B.- Recuento diferencial. Realiza un frotis de la siguiente manera: 1.- Mezcla la sangre del tubo 2.- Coloca una gota en un extremo del porta objetos. 3.- Con ayuda del extremo de otro porta objeto distribuye de manera uniforme 4.- Deja secar el frotis. 5.- Tie con colorante de Wright. 6.- Deja secar 7.- Observa al microscopio con el objetivo de inmersin. 9.-CALCULOS: Clculos para eritrocitos: Cuenta los eritrocitos en los 5 cuadros pequeos (80 cuadritos pequeos) asignados para su conteo de la cmara cuanta glbulos (Ver Anexo 1 y 2 ) N x 200 x 10 x 400 = N x 10,000 80 Donde: N: nmero de eritrocitos contados. 200: titulo de dilucin 10: correccin de profundidad de la cmara para llevar a 1 mm 3 400: total de cuadritos de la cmara. 80: total de cuadritos contados. Por lo tanto la cantidad de glbulos rojos ledos en los 5 cuadros y adicionada de 4 ceros da la cifra correspondiente al total de eritrocitos en 1 mm 3 de sangre. Clculos para ndices eritrocitarios: Volumen corpuscular medio:

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Hematcrito x 10 V.C.M = Millones de glbulos rojos Expresado en 3 (micras cbicas) Hemoglobina corpuscular media: Hemoglobina en gramos /100ml X 100 H. C.M = Dos primeras cifras de los eritrocitos Expresado en micromicrogramos. Clculos para leucocitos: Cuenta los leucocitos en los 4 cuadros asignados para su conteo de la cmara cuanta glbulos ( Ver Anexo 1 y 2 ) N x 20 x 10 = N x 50 4 Donde: N: nmero de leucocitos contados en los 4 cuadros. 20: titulo de dilucin 10: correccin de profundidad de la cmara para llevar a 1 mm 3 4: total de cuadros.

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10.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS 1. Volumen Globular Medio (VGM): (Ht. x 10 / Eri), Es el tamao eritroctico expresado en femtolitros y se comporta de la siguiente forma: Valor aumentado: Se presenta en anemia. Valor disminuido: Se presenta en casos de deficiencia de hierro 2. Hemoglobina Globular Media (HGM): (Hb. x 10 / Eri.), Se refiere a la cantidad de hemoglobina depositada en el eritrocitos expresada en picogramos. Valor aumentado: En los casos de hemlisis tanto in vivo como in Vitro; la hemoglobina extracelular tambin est implcita, aunque el ndice asume que toda la hemoglobina es intracelular por lo que se debe interpretar con reservas. Durante la reticulocitosis permanece normal o ligeramente elevado. Valor disminuido: En los casos de deficiencia de hierro. 3. Concentracin de Hemoglobina Globular Media (CHGM) : (Hb x 100 / Ht) Es la cantidad de hemoglobina que est relacionada directamente con el eritrocito. Es el ndice ms preciso, ya que no requiere del conteo total de eritrocitos circulantes. Valor aumentado: En los casos de hemlisis tanto in vivo como in Vitro, as mismo puede incrementarse en los casos de esferocitosis marcada. Valor disminuido: En los casos de reticulocitosis y deficiencias de hierro. 11.-NOTAS IMPORTANTES Algunos factores que afectan hematocrito, hemoglobina y conteo eritroctico son: 1. Cambios que inciden directamente en la circulacin de eritrocitos: Valor disminuido: Se denomina anemia . Los tres parmetros disminuyen aunque este decremento puede ser desproporcionado cuando existen cambios en el tamao eritroctico y/o la cantidad de hemoglobina contenida en ellos, por lo que el clculo e interpretacin de los ndices de la formula roja son de ayuda en estos casos. Valor aumentado: Denominado policitemia . Aumento del nmero de eritrocitos circulantes. 2. Cambios en el volumen plasmtico: Valor aumentado: Se presenta en estados de deshidratacin Valor disminuido: Se presentan en sobrehidratacin con fluidos administrados parenteralmente dando una lectura que simula anemia

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12.-VALORES DE REFERENCIA Parmetros Hematcrito Hemoglobina Recuento de eritrocitos ndices eritrocitarios: VGM HGM CHGM Recuento de leucocitos Recuento diferencial: Neutrfilos: En banda: Segmentados: Metamielocitos: Eosinfilos: Basfilos: Monocitos: Linfocitos:

Valores de Referencia H 40- 52 % M 37-47% H 13.2 g M 12-16 g H 4.2-5.9 millones/micras cbicas M 4.2-5.4 89 a 95 micras cbicas 27 a 33 micromicrogramos 32 a 34% 4,500 10,000 mm3 40 a 85 % 0 a 11 % 40 a 46% 0a2% 0a7% 0a3% 1 a 13 % 12 a 46%

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13.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Reporta los resultados en la hoja de reporte Comenta conclusiones con tus compaeros. Responde el siguiente cuestionario: 1.- Cmo se prepara el diluyente para glbulos rojos?

2.- Cmo se prepara el diluyente para glbulos blancos?

3.- Cul es funcin de la hemoglobina?

4.- De qu color se tien los Eosinfilos y por qu?

5.- De qu color se tien los Basfilos y por qu?

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14. GLOSARIO DE TERMINOS 1. Rouleaux: Es el agrupamiento de eritrocitos a manera de monedas amontonadas, es debido a una tendencia de sedimentacin en forma paralela, trastorno que se relaciona con el incremento en la concentracin de fibringeno y/o el cambio en las concentraciones de globulinas.. 2. Anisocitosis: Es la variacin en el tamao de los eritrocitos donde aparecen macrocitos y/o microcitos a lado de clulas de tamao normales, se presenta como respuesta en anemias de tipo regenerativo. Macrocitos: Son eritrocitos de gran tamao que provocan incremento en el VGM, (reticulocitos) aparecen generalmente en anemias regenerativas. Microcitos: Son pequeos eritrocitos con un VGM disminuido que son observados en casos de anemias dadas por deficiencia de hierro. 3. Esferocitos: Son considerados microcitos que cuentan con una membrana celular reducida, lo que incrementa la permeabilidad hacia el sodio, se presentan generalmente en anemias de tipo autoinmune y en anemias hemolticas isoinmunes as como despus de una transfusin. 4. Policromasia: Es una variacin en la afinidad eritroctica hacia el colorante, donde existe un tono azuloso en las clulas que contienen residuos de ARN, eritrocitos que generalmente son grandes y se consideran reticulocitos. La presencia de policromasia est asociada con el incremento de la actividad eritropoyetica como respuesta a una anemia catalogada como regenerativa cuando esta presente. 5. Hipocromia: Se refiere a la presencia de palidez marcada en la regin central del eritrocito dado por la disminucin en la concentracin de hemoglobina dentro de la clula, la causa ms comn en la que se presenta es la deficiencia de hierro. 6. Poiquilocitosis: Son clulas anormales en su forma comnmente encontradas en anemias debidas a la prdida crnica de sangre o a enfermedades caracterizadas por fragmentacin eritroctica, clulas que son retiradas prematuramente de la circulacin agudizando el estado anmico. Los acantocitos, son un tipo de poiquilocitosis. 7. Leptocitos: Son clulas delgadas que cuentan con una membrana celular grande observadas en enfermedades crnicas debilitantes que producen anemia. 8. Estomatocitos: Son eritrocitos con una forma oval hacia el centro que se observa en enfermedades hepticas. 9. Clulas en diana: Son clulas con forma de tiro al blanco que se presentan en anemias de tipo regenerativo junto con policromasia, aunque cuando se

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presentan y no existe policromasia se pueden relacionar con enfermedad renal, heptica o esplnica. 10. Cuerpos de Howell-Jolly: Son remanentes nucleares observados frecuentemente como consecuencia de un estado anmico en procesos regenerativos, no obstante si son numerosos pueden indicar hipoesplenismo. 11. Cuerpos de Heinz: Son estructuras localizadas en la membrana eritroctica producto de la desnaturalizacin de la hemoglobina causada por la accin oxidante de ciertas drogas o qumicos, estos cuerpos desorganizan la membrana eritroctica y se asocian con hemlisis intravascular. 12. Eritrocitos nucleados (Rubrocitos y Metarrubrocitos): Se deben a la liberacin de clulas eritroides inmaduras hacia la circulacin sangunea en los casos de anemia aunque pueden ser observadas en casos de enfermedad de la mdula sea donde existe dao en el parnquima que afecta la barrera capilar, as como en casos de leucemia. 5.-BIBLIOGRAFA ESPECFICA. AUTOR Lynch, Raphael, Mellor, Spare, Inwood. Todo-Sanford

1 mm EDITORIAL Interamericana Salvat. 1 mm El Manual Moderno. Interamericana. Salvat la Panamericana Salvat de C. E. C. S. A

TTULO Mtodos de Laboratorio Diagnostico y Tratamiento

Clnico por el Laboratorio. Marcus A. Krupp, Norman Diagnostico clnico Integral J.Sweet Klusek Hamilton. Browen Rose Faust, Ernest, Carroll Mc Faddin F. Jean 1 mm Rapaport S.J Cowan T. Steels Manual de Diagnostico Clnico Parasitologa Clnica Pruebas bioqumicas

para

identificacin de bacterias. Introduccin a la Hematologa Manual para identificacin bacterias de importancia mdica

Cmara de Neubauer (cmara cuenta glbulos.)

1 mm

1 mm

1 mm

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Cmara de Neubauer

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Cuadros azules: Destinados al recuento de Leucocitos y Espermatozoides Cuadros rojos: Para el recuento de Eritrocitos y Plaquetas

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Prctica No. 2

TITULO DE LA PRCTICA
CITOLOGA EN MOCO FECAL

Fecha de realizacin:

Ubicacin: Unidad: I Temas: I.2

CITOLOGA

1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA


Observar Citologa en Moco Fecal.

2.- INTRODUCCIN La observacin microscpica del moco fecal en fresco con azul de metileno tiene utilidad para evaluar la celularidad de la muestra y la posible presencia de parsitos. Aunque la positividad de la citologa de moco fecal es relativamente baja en la mayora de las diarreas agudas que son de etiologa viral, al igual que el bajo porcentaje del aislamiento en coprocultivos.

3.-MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

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CANTIDAD 6 Portaobjetos 6 Cubreobjetos Aplicadores 12 Gasas 4.-EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 Microscopio 5.- MATERIAL BIOLGICO CANTIDAD

DESCRIPCIN

DESCRIPCIN

DESCRIPCIN
Muestra de Heces recin emitidas

6.- REACTIVOS: CANTIDAD DESCRIPCION Colorante de Wright Sol. Salina.

7.-RECOLECCION DE LA MUESTRA

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Por lo menos 48 horas antes del examen el paciente no debe ingerir grasas en exceso o legumbres de hojas. Las grasas interfieren en la preparacin hmeda para la observacin al microscopio, y las legumbres pueden tener parsitos de vida libre, que al ser liberados en el intestino y eliminados con las heces pueden ser considerados como parsitos del paciente. La muestra de heces no debe mezclarse con la orina al momento de recogerla para el examen, y no es adecuada para un examen si el paciente esta tomando medicinas que dejan residuos (bismuto, bario), o laxantes basados en aceite. Si es necesario el uso de laxantes para facilitar la deposicin use laxantes salinos, no use laxantes aceitosos, ni a base de leche de magnesia. Recoja la muestra en un envase plstico, rgido, descartable y tapa rosca. Pasos para la recoleccin: 1. Realizar la deposicin en un recipiente limpio y seco. 2. Destape el envase, y deje la tapa boca arriba para que no se contamine 3. Recoger con abatelengua (o similar) una cantidad representativa de la muestra, preferible de varios lugares sobre todo de aquellos que tienen aspecto raro. 4. Tape el envase, y rotlelo, con su nombre completo y de ser posible la hora de recoleccin. 5. Lleve la muestra al laboratorio lo ms pronto posible para permitir la observacin de formas vivas.

8.-DESCRIPCIN DE LA PRCTICA

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Microscopia y Tincin de Wright 1. Se toma una pequea porcin de moco presente en la muestra o materia fecal, se realiza un extendido en un portaobjetos limpio y desengrasado. 2. Se deja secar, a continuacin se tie con la tincin de wrigth : cubrir el frotis con colorante de wright durante 8 minutos, sin volcar agregar una cantidad igual del amortiguador de wright soplando ligeramente para mezclar ambos lquidos, dejar actuar de 6 a 10 minutos, se formara una superficie de brillo metlico. Volcar y lavar con agua corriente y dejar secar. 3. Se observa al microscopio en objetivo de 100 X y se realiza un recuento de 100 clulas mononucleares y polimorfonucleares 9.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS En condiciones normales, las heces no suelen contener clulas epiteliales, ni leucocitos, ni eritrocitos. Es fcil apreciar la presencia de leucocitos. En la deposicin mucosa de los que sufren alergia intestinal se observa un exceso de eosinfilos. La presencia de clulas epiteliales es un indicador de irritacin gastrointestinal. La presencia de clulas epiteliales, eritrocitos y bacterias se reporta en cruces de la siguiente manera: ABUNDANTES (+++) MODERADAS (++) ESCASAS (+)

La presencia de leucocitos se encuentra asociada con moco y se observa en diferentes enfermedades intestinales. Se observa un predominio de PMN en amibiasis aguda, shigelosis, colitis, tambin se observan macrfagos y MN con gran predominio en fiebre tifoidea. Los PMN y MN se reportan contando en total 100 clulas.

11.-NOTAS IMPORTANTES

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Prueba de utilidad en la Investigacin de enterocolitis infecciosa Ms de 10 leucocitos por campo en moco fecal orienta a una patologa infecciosa. Si el predominio es de mononucleares, es ms probable que la etiologa sea viral. En cambio, si el predominio es de polimorfonucleares, se puede pensar en patologa bacteriana. Cuando aparecen eosinfilos, entonces podemos pensar en infestacin vrmica (gusanos). Si encontramos eritrocitos, habr que pensar en complementar datos para sndrome disentrico, pues con ello cambia radicalmente el abordaje teraputico.

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12.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Reporta los resultados en la hoja de reporte Comenta conclusiones con tus compaeros. Responde el siguiente cuestionario: 1.- Si se encuentra en un frotis ms de 10 leucocitos por campo en moco fecal a qu nos orienta?

2.- Al predominio de mononucleares, qu etiologa nos sugiere?.

3.- Al predominio de polimorfonucleares, en que tipo de patologa se puede pensar?.

4.- Cuando aparecen eosinfilos, entonces qu etiologa nos sugiere?.

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14. GLOSARIO DE TERMINOS Enterocolitis infecciosa: Esta afeccin se refiere a un grupo de enfermedades de origen microbiano caracterizados principalmente por diarrea clinicamente significativa y algunas veces por cambios ulceroinflamatorios en el intsetino delgado y el colon, o algunas veces ambos. Existen varios mecanismos mediante los cuales los diversos patgenos intestinales causan enfermedad, principalmente diarrea. Eosinoflia: es la presencia de una cantidad anormalmente alta de eosinfilos en la sangre. Mononucleares: es una clula sangunea caracterizada por poseer un nico ncleo redondo, como los linfocitos o los monocitos. Estas clulas sanguneas son un componente crtico en el sistema inmune, concretamente para combatir las infecciones. Polimorfonucleares: Son clulas pertenecientes a la serie blanca pertenecientes al sistema inmune y que se encarga de proteger nuestro cuerpo de las infecciones bacterianas fundamentalmente. 15.-BIBLIOGRAFA ESPECFICA.
AUTOR Lynch, Raphael, Mellor, Spare, Inwood. Todo-Sanford Marcus A. Krupp, Norman J.Sweet Klusek Hamilton. Browen Rose Faust, Ernest, Carroll Mc Faddin F. Jean Rapaport S.J Cowan T. Steels TTULO Mtodos de Laboratorio Diagnostico y Tratamiento Clnico por el Laboratorio. Diagnostico clnico Integral Manual de Diagnostico Clnico Parasitologa Clnica Pruebas bioqumicas EDITORIAL Interamericana Salvat. El Manual Moderno. Interamericana. Salvat la Panamericana

para

identificacin de bacterias. Introduccin a la Hematologa Salvat Manual para identificacin de bacterias C. E. C. S. A de importancia mdica

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Prctica No. 3

TITULO DE LA PRCTICA
CITOLOGA EN MOCO NASAL

Fecha de realizacin:

Ubicacin: Unidad: I Temas: I.2

CITOLOGA

1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA


Observar Citologa en Moco Nasal.

2.- INTRODUCCIN El moco constituye una barrera permeable entre la mucosa y el aire inspirado y es el centro de todos sus intercambios metablicos. Es importantsimo en la fisiologa nasal por sus propiedades fsico-qumicas y biolgica. La mucosa o membrana mucosa es un tipo de tejido que reviste la cavidad nasal. Las membranas mucosas son generalmente tejidos hmedos, baados por secreciones, tal como ocurre en la nariz. COMPONENTES DEL MOCO NASAL El 95% es agua, 3% elementos orgnicos y 2% minerales. Contiene tambin numerosos aminocidos siendo su tasa entre 04 y 13 micromoles/ml. Se han encontrado unos 15: lisina, histidina, arginina, cido asprtico, treonina, serina, cido glutmico, prolina, glicina, alanina, valina, isoleucina, leucina, tirosina y fenilalanina. El moco nasal es ms rico que el plasma en cido asprtico y cido glutmino, y menos rico en alanina y valina. Contiene una cantidad de prolina ms elevada que otros tipos de moco. SIGNIFICADO CLINICO DEL ANALISIS DE CITOLOGIA NASAL Se utiliza en la bsqueda del tipo y agrupacin de las bacterias presentes en el moco nasal, as como para descartar o afirmar la presencia de alergias (rinitis) con la presencia de eosinofilos por medio de la tincin de Wright y en el caso de la tincin de gram, la presencia de bacterias, as como su agrupaci n. 3.-MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes) CANTIDAD 6 Porta objetos DESCRIPCIN

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6 12

Cubreobjetos Aplicadores Gasas

4.-EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 Microscopio 5.- MATERIAL BIOLGICO CANTIDAD DESCRIPCIN Moco Nasal. 6.- REACTIVOS: CANTIDAD DESCRIPCION alcohol etlico de 96%, Colorante de Hematoxilina-Eosina, 7.-RECOLECCION DE LA MUESTRA 1. OBTENCIN DE LA MUESTRA La muestra se puede obtener por dos medios: 1.1. EXFOLIACIN FORZADA ESPONTNEA Consiste en que el paciente se "suene" la nariz de manera enrgica en un pauelo de plstico. En l se pueden observar directamente las caractersticas macroscpicas del material, tanto su color como su densidad (acuoso, rojizo, etc.). 1.2. EXFOLIACIN FORZADA POR CEPILLADO Consiste en raspar la porcin media o posterior de los cornetes inferiores utilizando diversos instrumentos (cepillos, hisopos, etc.), siendo este mtodo de rentabilidad menor por la desecacin celular inmediata que se establece. El primer mtodo permite una mayor conservacin del material ya que, si se retrasan las realizaciones de las extensiones, la muestra puede permanecer en el interior del pauelo y guardado en el frigorfico durante, al menos, algunas horas. DESCRIPCIN

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8.-DESCRIPCIN DE LA PRCTICA Posteriormente, en el laboratorio de citologa, se realizarn las extensiones sobre un portaobjetos previamente identificado. Despus, se sumergen las extensiones en un bao de alcohol etlico de 96%, como mnimo durante 30 minutos, que servir como medio fijador celular. A continuacin, se tien los portaobjetos con los colorantes de Hematoxilina-Eosina, muy tiles para desenmascarar los leucocitos polimorfonucleares eosinfilos que, al poseer grnulos citoplasmsticos, se marcan de forma llamativa con la eosina. 9.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS Citologa: para ver que tipo de celularidad est presente v nos orientar si el problema es de tipo infeccioso o alrgico o su combinacin. Se realiza mediante un frotis de la mucosa del cornete inferior, empleando un hisopo adaptado de (rinoprobe). Obtenida la realiza muestra se colorea y se realiza el conteo celular diferencial. Los resultados sern: 1. Eosinfilos en el moco nasal por encima de 20 por campo corroboran la alergia en la etiologa. 2. Neutrfilos elevados relacionado con la presencia de infecciones bacterianas agudas. 3. Linfocitos: sugiere procesos infecciosos de tipo crnico.

10.-NOTAS IMPORTANTES La citologa exfoliativa, en general, tiene por objeto identificar las clulas del organismo que se desprenden de los epitelios que revisten cavidades orgnicas abiertas al exterior. El estudio citolgico de las secreciones nasales es una prueba bsica rpida, sencilla y de bajo coste, que servir como ayuda complementaria diagnstica al alerglogo en el estudio del origen de las rinitis. 11.-VALORES DE REFERENCIA Parmetros No hay leucocitos eosinfilos

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12.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Reporta los resultados en la hoja de reporte Comenta conclusiones con tus compaeros. Responde el siguiente cuestionario:

13. GLOSARIO DE TERMINOS Moco: secrecin viscosa de las membranas mucosas, en especial la que fluye por la nariz Exfoliacion: puede referirse al tratamiento cosmtico que se lleva a cabo para quitar las clulas muertas de la piel o a la prdida de la epidermis en forma de escamas. Eosinofilo: es un leucocito de tipo granulocito pequeo derivado de la mdula sea Neutrofilos: tambin denominados polimorfonucleares (pmn), son glbulos blancos de tipo granulocito. Linfocitos: son un tipo de leucocito (glbulo blanco) comprendidos dentro de los agranulocitos.

14.-BIBLIOGRAFA ESPECFICA. AUTOR Lynch, Raphael, Mellor, Spare, Inwood. Todo-Sanford TTULO Mtodos de Laboratorio Diagnostico y Tratamiento EDITORIAL Interamericana Salvat.

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Clnico por el Laboratorio. Marcus A. Krupp, Norman Diagnostico clnico Integral J.Sweet Klusek Hamilton. Browen Rose Faust, Ernest, Carroll Mc Faddin F. Jean Rapaport S.J Cowan T. Steels Manual de Diagnostico

El Manual Moderno. Interamericana.

Clnico Parasitologa Clnica Salvat Pruebas bioqumicas para la Panamericana identificacin de bacterias. Introduccin a la Hematologa Salvat Manual para identificacin de C. E. C. S. A bacterias mdica de importancia

Prctica No. 4

TITULO DE LA PRCTICA
CITOLOGA EN LQUIDO CEFALORRAQUDEO

Fecha de realizacin:

Ubicacin: Unidad: I Temas: I.3

CITOLOGA

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1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA Observar la citologa del lquido cefalorraqudeo. 2.- INTRODUCCIN El lquido cefalorraqudeo obtenido mediante puncin lumbar se examina en busca de clulas anormales y aumento o disminucin de la poblacin celular normal. Por lo general se observan leucocitos y se incluye una cuenta leucoicitaria. Asimismo, se realizan estudios qumicos y microbiolgicos. En los ltimos aos, los estudios celulares del LCR se utilizan para identificar clulas neoplsicas. Estos estudios han sido especialmente tiles en el diagnstico y tratamiento de las distintas fases de leucemia. Debido a al naturaleza de la neoplasia para que se exfolien las clulas del tumor deben invadir al circulacin del LCR y penetrar reas tales como las paredes ventriculares y en el plexo coroideo o el espacio subaracnoideo.

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3.-MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes) CANTIDAD Portaobjetos Jeringas Tubos de ensaye 4.-EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 Microscopio 1 Centrifuga 5.- MATERIAL BIOLGICO CANTIDAD DESCRIPCIN Liquido cefalorraquideo 6.- REACTIVOS: CANTIDAD DESCRIPCION
La albmina bovina al 22%

DESCRIPCIN

DESCRIPCIN

7.-RECOLECCION DE LA MUESTRA
Lquido extrado por puncin lumbar en condiciones totalmente aspticas, en tubo seco, estril, tapa rosca.

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8.-DESCRIPCIN DE LA PRCTICA Conteo manual de clulas. Estudio diferencial preparando extendidos manuales o mtodos de citocentrifugacin. La albmina bovina al 22% mezclada con el LCR ayuda a controlar la integridad en la morfologa de las clulas en los extendidos.

9.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS 1. Cuenta celular total Adultos: 0-10 / mm3 (mononucleares) Lactantes: 0-20 / mm3 2. Negativo para neoplasia 3. Se observa una gran variedad de clulas normales. Las ms frecuentes son linfocitos grandes. Tambin suele haber linfocitos pequeos, as como elevamientos de los monocitos y macrfagos. 4. El LCR del individuo sano no contiene microorganismos patgenos. 10.-NOTAS IMPORTANTES Los posibles signos de infeccin menngea en neonatos incluyen un conteo de leucocitos mayor de 30 cel/mm3 con ms del 60% de PMN, protenas > de 100mg/dl, glucosa < del 40% de los niveles en sangre. Un conteo de leucocitos mayor de 10 cel/mm3 en nios pequeos y de 5 cel/mm3 en nios mayores con ms de 1 PMN/mm3 es anormal. 11.-INVESTIGAR VALORES DE REFERENCIA

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15.-BIBLIOGRAFA ESPECFICA. AUTOR Lynch, Raphael, Mellor, Spare, Inwood. Todo-Sanford TTULO Mtodos de Laboratorio Diagnostico y Tratamiento EDITORIAL Interamericana Salvat. El Manual Moderno. Interamericana.

Clnico por el Laboratorio. Marcus A. Krupp, Norman Diagnostico clnico Integral J.Sweet KlusINek Hamilton. Browen Rose Faust, Ernest, Carroll Mc Faddin F. Jean Rapaport S.J Cowan T. Steels Manual de Diagnostico

Clnico Parasitologa Clnica Salvat Pruebas bioqumicas para la Panamericana identificacin de bacterias. Introduccin a la Hematologa Salvat Manual para identificacin de C. E. C. S. A bacterias mdica de importancia

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Prctica No. 5

TITULO DE LA PRCTICA
CITOLOGA EN ORINA

Fecha de realizacin:

Ubicacin: Unidad: I Temas: I.3

CITOLOG

1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA

Observar e identificar todos los tipos de clulas que se presentan en la orina. 2.- INTRODUCCIN Es un examen de laboratorio que se utiliza para detectar cncer y enfermedades inflamatorias de las vas urinarias.

3.-MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes) CANTIDAD Solucin salina Tubo de ensaye Porta objetos Cubre objetos Pipetas micromtricas DESCRIPCIN

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4.-EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 Microscopio 5.- MATERIAL BIOLGICO CANTIDAD DESCRIPCIN Muestra de orina 6.- REACTIVOS: CANTIDAD DESCRIPCION DESCRIPCIN

7.-RECOLECCION DE LA MUESTRA Para obtener la muestra de orina limpia, los hombres y los nios deben tener limpia la cabeza del pene y las mujeres deben lavar el rea que hay entre los labios con agua y jabn y enjuagar muy bien. Algunas veces, se suministra un equipo para tomar la muestra limpia, el cual trae una solucin de limpieza y pauelos estriles. Despus de orinar una pequea cantidad dentro de la taza del bao para limpiar la uretra de sustancias contaminantes, se recoge una muestra de orina en un recipiente limpio o estril. Se necesitan aproximadamente de una a dos onzas de orina para el examen. Se retira luego el recipiente del chorro de orina sin dejar de orinar y se termina con el proceso de miccin. Luego, se lleva la muestra al laboratorio. 8.-DESCRIPCIN DE LA PRCTICA 1.- se centrifuga la muestra a 3500 rpm durante 5 min. 2.- se elimina el sobrenadante 3.- se re-suspende el sedimento agitando suavemente la muestra 4.-se coloca una gota de la mezcla en el portaobjetos, se tapa con un cubre objetos y se examina primero con un lente de 10x y despus con una de 40x.

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9.-VALORES DE REFERENCIA Valores normales La orina muestra clulas normales y est relativamente libre de residuos. Nota: los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes laboratorios. Hable con el mdico acerca del significado de los resultados especficos de su examen. Significado de los resultados anormales Las clulas anormales en la orina pueden ser un signo de inflamacin de las vas urinarias o cncer de rin, urteres, vejiga o uretra. 10.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Reporta los resultados en la hoja de reporte Comenta conclusiones con tus compaeros. Responde el siguiente cuestionario: 1.- Por qu es de gran importancia este estudio? R= Para poder detectar algn cncer e infeccin en las vas orinaras. 2.- Cundo se observan eritrocitos en la muestra que nos indica? R= est en presencia de hematuria. 14. GLOSARIO DE TERMINOS Citologa: estudia las clulas en lo que concierne a su estructura, sus funciones y su importancia en la complejidad de los seres vivos. Orina: es un lquido acuoso transparente y amarillento, de olor caracterstico, secretado por los riones y eliminado al exterior por el aparato urinario.

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Miccin: es un proceso por el que la vejiga urinaria se vaca de orina cuando est llena. Re-suspender: Dispersin de partculas de nuevo en agua, como cuando la accin de una ola o el dragado revuelven los sedimentos que han cado fuera de la suspensin y se han depositado.

15.-BIBLIOGRAFA ESPECFICA. AUTOR Lynch, Raphael, Mellor, Spare, Inwood. Todo-Sanford TTULO Mtodos de Laboratorio Diagnostico y Tratamiento EDITORIAL Interamericana Salvat. El Manual Moderno. Interamericana.

Clnico por el Laboratorio. Marcus A. Krupp, Norman Diagnostico clnico Integral J.Sweet Klusek Hamilton. Browen Rose Faust, Ernest, Carroll Mc Faddin F. Jean Rapaport S.J Cowan T. Steels Manual de Diagnostico

Clnico Parasitologa Clnica Salvat Pruebas bioqumicas para la Panamericana identificacin de bacterias. Introduccin a la Hematologa Salvat Manual para identificacin de C. E. C. S. A bacterias mdica de importancia

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Prctica No. 6

Titulo de la Prctica: COPROLOGICO

Fecha de realizacin:

Ubicacin: Unidad: II Temas: II.1

INFECCIONES BACTERIANAS Y PARASITARIAS

1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA: ESTUDIO DE HECES. SANGRE OCULTA Y CUERPOS REDUCTORES 2.- INTRODUCCIN
Las materias fecales estn constituidas en unas tres cuartas partes por agua. Las sustancias slidas del cuarto restante comprenden: 30% de bacterias muertas. 10 - 20% de grasa. 2 - 3% de protenas. 10 - 20% de sustancias inorgnicas. 30% de restos no digeribles, componentes slidos del jugo digestivo como pigmentos biliares y detritus celulares. El estudio de laboratorio de muestras fecales de origen humano, permite obtener datos que nos sirve para determinar: 1.- La situacin del funcionalismo digestivo. 2.- Infecciones intestinales causadas por virus, bacterias y hongos. 3.- Infecciones causadas por parsitos intestinales. Este estudio tiene su mxima indicacin en las diarreas crnicas, y comprende la observacin macroscpica y microscpica de las heces, as como su anlisis qumico, bacteriolgico y parasitolgico.

3.- FUNDAMENTO Con este estudio procuramos conocer la digestin de los principios inmediatos. La

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digestin es el conjunto de fenmenos mecnicos y bioqumicos que transforman los constituyentes orgnicos ms o menos complejos de los alimentos en sustancias simples directamente asimilables. Los alimentos son triturados en la boca sufriendo una divisin fsica. Luego comienza una disgregacin qumica mediante fermentos digestivos y elementos bacterianos, siendo absorbidas las sustancias transformadas por la mucosa intestinal y por ltimo los residuos no aprovechables de la digestin son expulsados fuera del organismo. 4.- MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes) CANTIDAD 2 2 2 Abatelenguas Portaobjetos Cubreobjetos DESCRIPCIN

5.-EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 Microscopio 6.- MATERIAL BIOLGICO DESCRIPCIN Materia fecal. 7.- REACTIVOS: CANTIDAD DESCRIPCION 100ml Solucin salina 8.-RECOLECCION DE LA MUESTRA ALIMENTACIN PREVIA AL ANLISIS Se debe seguir con el rgimen habitual de comidas, pero hay que aadir aquellos elementos que nos pueden suministrar una base para el diagnstico, como son: Carne: Se investiga el tejido conjuntivo y fibras musculares. Debe DESCRIPCIN

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comerse lo ms cruda posible. Patatas: Se investiga la digestin de almidn. Grasa: Se tomar en forma de leche, mantequilla o carne. Este plan se sigue durante 3 das y luego se recoge la muestra de heces.
La materia fecal (aproximadamente el tamao de una nuez) se recoge en un recipiente limpio, procurando no contaminarla con orina del paciente.

9.- DESCRIPCIN DE LA PRCTICA El examen macroscpico de la materia fecal es de rutina parsitos y comprende los siguientes procedimientos: para la investigacin de

Observar la consistencia del espcimen, las heces blandas o lquidas indican la posible presencia de trofozotos o de protozoarios intestinales. Buscar parsitos en la superficie de la muestra (por ejemplo, progltidos de cestodos ) Desmenuzar la muestra con el abatelenguas en busca de helmintos adultos Examinar la muestra en busca de sangre y moco. CARACTERES ORGANOLPTICOS A) OLOR: Segn la ingesta: o Inodoro: Meconio. o Aumentado: Comidas ricas en carne y pescado. o Dbil: Dieta vegetariana y lctea. o Ligeramente agrio: Nios de pecho. Fecaloide normal. Ptrido (olor a amoniaco) Debido a la flora proteoltica aumentada. Provoca diarreas de putrefaccin (heces alcalinas y gases). Agrio penetrante o rancio Debido a la flora sacaroltica aumentada. Provoca diarreas de fermentacin (heces cidas y gases). Nauseabundo Debido a la descomposicin de tejidos, ocasionada por carcinoma, lceras... B) COLOR: Marrn: Es el color habitual. Verde:

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Puede ser debido a la ingesta (verduras, medicamentos...) o a la presencia de biliverdina (rapidez del trnsito intestinal, diarreas infantiles). Rojo: Debido a la ingesta (remolacha) o a la existencia de hemorragias prximas al ano. Negro: Debido a la ingesta (sangre, morcilla, espinacas), a los medicamentos (carbn, hierro, bismuto) o a hemorragias internas (heces pastosas, melenas). Blanco: Debido a la ingesta (leche, bario, caoln...) o a la ausencia de bilis fundamentalmente. Amarillo: Debido a la ingesta (rgimen lcteo) o a diarreas de fermentacin hidrocarbonada. C) CONSISTENCIA: Puede ser: dura, normal, pastosa, lquida. D) FORMA: Vara con la consistencia Cilndrica: Es la normal. Laminada o en cinta: Debido a papilomas. Bolitas secas y duras: Estreimiento. Bolitas en masas: Se presenta en la Salmonelosis. Bola maleable del tamao de un puo: Se presenta en la atona del recto (personas ancianas). E) VISCOSIDAD: Se determina tocando las diferentes partes de las heces con un agitador de vidrio. Viscosas (pastosas): Se adhieren al agitador. Poco viscosas: No se adhieren al agitador. Grasas: Tienen gran maleabilidad moldendose en ellas el agitador, como tierra amasada.

Examen Macrscopico:

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Para este examen se tritura ligeramente en un mortero con agua una cantidad de heces del tamao de una nuez. Luego se pasa a una placa de Petri y colocamos esta sobre una cartulina blanca y negra. Los fragmentos de carne aparecen de color gris o marrn. El tejido conectivo tiene forma de membranas o paquetes filamentosos. Se puede confundir con moco. Para diferenciarlo se aadir cido actico al 30% y si desaparece es tejido conectivo. El moco se puede presentar de varias formas: amorfo, transparente, opaco (con restos celulares) y membranoso (en forma de paquetes o moldes de la mucosa). La presencia de moco es importante, salvo en los recin nacidos, y siempre deber resaltarse en el informe. Examen Microscpico: Con ayuda de un abatelenguas colocar en un frasco una porcin de materia fecal del tamao de una nuez. Agregar solucin salina hasta cubrir la muestra, mezclar con el abatelenguas. Colocar una gota de la suspensin en un portaobjetos y cubrir con un cubreobjetos. Leer en el microscopio con objetivo de 10X100 y despus con 40X100. Anlisis Microscpico: Nos aporta datos ms fidedignos acerca de los trastornos de la digestin. Para ello habr que instaurar la alimentacin explicada anteriormente, si no se hace as la significacin del estudio es muy limitada. Para este estudio se hace una suspensin de heces en suero fisiolgico. 1. Se coge una cantidad de heces del tamao de una nuez y se coloca en un mortero, copa, vaso de precipitado o tubo de ensayo. 2. Se aade suero fisiolgico. 3. Mezclar con una varilla hasta formar una papilla homognea y fina, ni muy fluida ni muy espesa. 4. Se coloca una gota de esta suspensin en un portaobjetos 5. Colocar un cubreobjetos encima, cuidando que se extienda formando una capa delgada, homognea, sin burbujas de aire. No se debe aplastar el cubre. 6. Observar con el objetivo de x10 aumentos, obteniendo una visin de conjunto, y luego se enfoca con el de x40 aumentos. Cuando se trata de heces lquidas, se debe hacer una mezcla homognea y se coloca una gota directamente al portaobjeto. Podremos observar:

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A) CLULAS: Normalmente epiteliales de las ltimas porciones del intestino. No son patolgicas. B) LEUCOCITOS: Se observarn deformados. Si se encuentran en poca cantidad no es patolgico. Se observan mejor mezclando la gota de la suspensin fecal con otra de azul de metileno de Loefler. C) HEMATES: Es muy raro observarlos ya que se digieren. Si aparecen ser a causa de evacuacin muy rpida o hemorragias en tramos intestinales bajos. D) CRISTALES: Presentan el mismo aspecto que en el sedimento urinario. Hay unos, caractersticos del parasitismo intestinal, llamados cristales de Charcot-Leyden, presentando una forma tpica de agujas de brjula. E) FIBRAS MUSCULARES: Se pueden observar de diferentes formas dependiendo del grado de digestin: Mal digeridas: Fragmentos rectangulares estriados, dbilmente amarillos. Las estras son transversales y longitudinales. Los bordes del rectngulo son rectos. Parcialmente digeridas: Trozos ms pequeos con los bordes redondeados y las estras longitudinales. Bien digeridas: Trozos muy pequeos con los bordes redondeados y sin estras. La presencia de fibras musculares mal digeridas se llama CREATORREA, se puede deber a una insuficiencia gstrica o pancretica. F) TEJIDO CONJUNTIVO. Se observa como fibras o filamentos que se renen en fascculos y se entremezclan entre si. Son incoloros y no poseen estriacin. Se podra confundir con el moco, pero se distinguen porque se transparentan al aadirle cido actico al 30 %. G) ALMIDN. Para su investigacin se aade a la gota de emulsin fecal una gota de lugol. Los grnulos de almidn tomarn un u otro dependiendo del grado de digestin. Tambin podrn estar dentro de clulas o aislados: No digeridos: Azul oscuro, casi negro. Parcialmente digeridos: Rojo o rosa. Digeridos: Amarillos o color arenilla. El tejido muscular, al aadir almidn a la preparacin toma un color rojo-caoba. La presencia de almidn no digerido en las heces se llama AMILORREA.

H) LPIDOS.

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Para observar mejor usaremos el reactivo Sudam III. Una gota de este colorante se mezclar con una gota de la suspensin fecal. Los lpidos o grasas se encuentran en las heces en forma de: cidos grasos: Tienen aspecto cristalino, en forma de escamas o agujas finas rectas o curvadas. Difcilmente se tien. Grasa neutra: Se observan como gotitas de color rojo o naranja Si la temperatura es fra (< 20 C) las gotas se transforman en masas o placas algo amarillentas o rojas. Jabones: Difciles de reconocer al microscopio. No se tien. Se presentan como masas amorfas o cristales en forma de agujas cortas. En la observacin lo mas importante son las grasa neutras. Se informa positivamente a partir de 15-20 gotas/campo (objetivo x40). El aumento patolgico de grasas en heces se llama ESTEATORREA. Si en el microscopio se observa ms de 60 gotas /campo se considera esteatorrea . Algunas veces, para observar las grasas se calienta el portaobjetos suavemente a la llama. De esta forma todas las grasas (cidos grasos, neutros y jabones) se transforman en gotitas de color rojo-anaranjado (con Sudam III). En el estudio de las grasas en heces puede inducirnos a error, los supositorios, los enemas oleosos, as como los portaobjetos y cubreobjetos mal desengrasados. 10.- OBSERVACIONES Debido a que los trofozotos no sobreviven durante periodos largos y su movilidad es de importancia diagnstica las muestras no deben examinarse ms de una hora despus de haberse evacuado. 11.- NOTAS IMPORTANTES Es importante no contaminar la muestra con orina. 12.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Reporta los resultados en la hoja de reporte Comenta conclusiones con tus compaeros. Completa el glosario de terminos

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14. GLOSARIO DE TERMINOS Trofozoto: Flora proteoltica: Flora sacaroltica: Esteatorrea: Amilorrea: Progltidos

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SANGRE OCULTA EN HECES. 1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA

Observar la presencia de sangre en heces 2.- INTRODUCCIN La sangre en heces es de suma importancia diagnostica puede ser el nico signo de padecimientos ulcerativos neoplsicos o inflamatorio del sistema digestivo 3.- FUNDAMENTO La hemoglobina y sus derivados porfirnicos que contienen hierro canalizan la oxidacin de la bencidina a un compuesto de color azul por liberacin del oxigeno del agua oxigenada.

4.- MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes) CANTIDAD DESCRIPCIN 3 Portaobjetos Aplicadores desechables 5.-EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 Microscopio 6.- MATERIAL BIOLGICO DESCRIPCIN

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DESCRIPCIN Materia fecal. 7.- REACTIVOS: CANTIDAD 5 ml 5 ml 5 ml DESCRIPCION cido actico Agua oxigenada Bencidina

8. RECOLECCION DE LA MUESTRA En un frasco de vidrio limpio de boca ancha recoger una muestra de materia fecal del tamao de una nuez. 9.- DESCRIPCIN DE LA PRCTICA 1. En un porta objeto coloca con el aplicador una porcin de la muestra de heces. 2. Agrega una gota de bencidina y mezcla 3. Adiciona una gota de cido actico, mezcla. 4. Agrega una gota de agua oxigenada y mezcla.

10.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS La reaccin se considera : Positiva ( + ) si aparece en un minuto un color azul o azul verdoso. Negativa ( - ) si no hay cambio de color.

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La positividad del estudio indica hemorragia de vas gastrointestinales, que puede ser el resultado de muchos padecimientos como varices, lcera pptica, carcinoma, colitis ulcerosa, disentera o enfermedad hemorrgica.

11.- OBSERVACIONES

En caso de grandes hemorragias duodenales o colnicas, la sangre colorea las heces de rojo, pero por lo general y debido a la accin de diversos elementos intestinales pierde su color original y entonces las materias fecales aparecen con un color oscuro. La investigacin de sangre en las heces adquiere valor cuando se encuentra en pequeas cantidades y si se trata de descartar la posibilidad de que el cambio de coloracin se deba a diversos alimentos o medicamentos. 12.- NOTAS IMPORTANTES

Se le prohbe al paciente la ingestin de carne y verduras, as como tambin la limpieza de los dientes sobre todo en pacientes con encas fcilmente sangrantes. Este rgimen se instituir por un lapso no menor de 3 das y la recoleccin de las muestras se har por deposicin espontnea evitando el uso de purgante cuidando que las heces no se contaminen con la orina y que sean envasadas en recipientes limpios. El estudio adquiere particular importancia en el diagnostico oportuno de cncer colorectal, porque el 50% de las personas con esta neoplasia muestran resultados positivos. 13.- ACTIVIDADES

Anota tus resultados. Reporta los resultados del estudio. Comenta conclusiones con tus compaeros.

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Completa el glosario de trminos. Responde el siguiente cuestionario: 1.- En qu enfermedad adquiere particular importancia este estudio? 2.- Cul es la finalidad de sta prueba? 3.- Menciona que factores pueden interferir en los resultados de este estudio.

14. GLOSARIO DE TERMINOS Carcinoma: Disentera: Neoplasia:

AZUCARES REDUCTORES EN HECES 1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA

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Observar la presencia de azucares reductores en materia fecal. 2.- FUNDAMENTO La oxidacin de los azucares presentes en materia fecal se determina por la oxidacin de la glucosa en presencia de los iones .

3. MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes) CANTIDAD 1 1 2 1 DESCRIPCIN Pipeta de 5 ml Tubo de ensaye Aplicadores de madera Mechero

4.- MATERIAL BIOLGICO Materia Fecal. 5.- REACTIVOS: CANTIDAD 10 ml Reactivo de bencidina

6.- RECOLECCION DE LA MUESTRA En un frasco de vidrio de boca ancha, recolectar una muestra de materia fecal

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del tamao de una nuez.

7.- DESCRIPCIN DE LA PRCTICA 1. 2. 3. 4. 5. Pipetear 1 ml. de reactivo en un tubo de ensaye. Con el aplicador agregar una pequea cantidad de la muestra Mezclar hasta homogenizar. Sujetar el tubo con una pinza Calentar en el mechero hasta ebullicin.

8.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS Si se observa cambio de color en el reactivo de color azul, azul verdoso hasta color naranja se considera Positiva (+). Si no hay cambio de color la prueba es Negativa (-). En condiciones normales la prueba debe ser negativa. 9.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Reporta los resultados del estudio Comenta conclusiones con tus compaeros. Responde las siguientes preguntas: 1.- Cul es la importancia de sta prueba? 2.- Qu son los azcares reductores?

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DETERMINACIN DEL pH EN HECES. 1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA

Apreciacin de la reaccin de las heces en papel tornasol

2.- FUNDAMENTO La presencia aumentada de los azucares presentes en las muestras de heces

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permiten que cambien su pH de ligeramente alcalino al cido.

3.-MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes) CANTIDAD 2 2 Porta objetos Aplicadores de madera. DESCRIPCIN

4.- MATERIAL BIOLGICO DESCRIPCIN Materia fecal

5.- REACTIVOS: CANTIDAD 1 DESCRIPCION Tiras reactivas para el pH

6.- RECOLECCION DE LA MUESTRA En frasco limpio de boca ancha recolectar una pequea muestra ( del tamao de una nuez) de materia fecal. 7.- DESCRIPCIN DE LA PRCTICA

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1.- Colocar sobre un porta objetos una tira de papel indicador de pH. 2.- Con el aplicador agregar una pequea cantidad de la muestra procurando impregnar la zona de reaccin . 3.- Comparar con la gama de colores que acompaan a las tiras reactivas y determinar su pH.

8.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS

La reaccin de pH es neutra por lo general pero a veces ligeramente cida o alcalina el pH varia de 6.9 a 7.2 .

9.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Reporta los resultados del estudio Comenta conclusiones con tus compaeros. Responde lo siguiente :

Por qu es importante este estudio?

10.-BIBLIOGRAFA ESPECFICA. AUTOR Lynch, Raphael, Mellor, TTULO Mtodos de Laboratorio EDITORIAL Interamericana

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Spare, Inwood.

Prctica No. 7 Ubicacin: Unidad: II

TITULO DE LA PRCTICA
COPROCULTIVO

Fecha de realizacin:

INFECCIONES BACTERIANAS Y PARASITARIAS Temas: II.1

1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA

Investigar la presencia de bacterias patgenas en materia fecal.

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2.- INTRODUCCIN En cuadros diarreicos es necesario identificar el agente causal y tratarlo con el antibitico adecuado, en caso de que corresponda hacerlo. El estudio de las bacterias responsables de cuadros clnicos gastrointestinales se realiza fundamentalmente mediante el cultivo de la materia (coprocultivo)

3.- FUNDAMENTO La tcnica de coprocultivo que aqu se describe es un mtodo de rutina para el aislamiento de Salmonella, Shigella, Escherichia coli y Vibrio cholerae. 4. MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes) CANTIDAD 5 1 18 2 1 1 2 DESCRIPCIN Cajas de Petri Asas de platino Tubos de ensaye 13 x100 Tubos 16 x 150 Mechero Gradilla Aplicadores estriles

5. EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 Autoclave 1 Estufa bacteriolgica 6.- MATERIAL BIOLGICO CANTIDAD Materia Fecal DESCRIPCIN DESCRIPCIN

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7.- REACTIVOS: CANTIDAD 1 10 ml 1 caja 1 caja 1 caja 1 caja 3 tubos 3 tubos 3 tubos 3 tubos 3 tubos DESCRIPCIN Tubo de Cary-Blair Agua peptonada alcalina Medio de Mc Conkey Medio de Salmonella Shigella Medio Sulfito de Bismuto Medio de TCBS (agar tiosulfato, citrato, bilis , sacarosa ) Medio MIO Medio LIA (agar de hierro y lisina ) Medio TSI (agar de hierro y triple azcar ) Medio Citrato de Simmons Caldo de malonato

8.-PREPARACIN DE REACTIVOS Deben prepararse de acuerdo con las instrucciones escritas en el frasco del producto que se expende comercialmente.

9.- RECOLECCIN DE LA MUESTRA: Recoleccin en el estadio primario de la enfermedad (salmonella y shigella se encuentran en nmero apreciable en las heces en el perodo agudo, por lo que la muestra debe obtenerse en los tres primeros das), lo mismo que para tratar de aislar E. Coli enteroinvasiva y/o E. Coli toxignica. No debe iniciarse tratamiento antibitico antes de tomar las muestras para coprocultivo. Muestras de heces recin emitidas, en recipientes estriles de tamao adecuado.

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10.- ESQUEMA DE LA PRCTICA Muestra en Cary-Blair MEDIOS PARA ENRIQUECIMIENTO Directo

Caldo de Selenito Caldo tetrationato

Agua peptonada alcalina

Incubar de 8 a 12 horas a 37C MEDIOS PARA AISLAMIENTO


Agar SS Agar SB Agar TCBS

Agar Mc Conkey

Incubar de 18 a 24 horas a 36C MEDIOS PARA IDENTIFICACIN

Agar TSI Medio MIO Agar Citrato Agar Urea Caldo Malonato Agar LIA

Agar TSI Medio MIO Agar Citrato Agar Urea Caldo Malonato Agar LIA

Agar TSI Medio MIO Agar Citrato Agar Urea Caldo Malonato Agar LIA

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Incubar de 18 a 24 horas a 36C 11.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS: Medio SS Salmonellas, Shigellas dan colonias incoloras o blancas con presencia o no de centro negro o parduzco. Salmonella colonias negras con o sin brillo metlico. Shigella colonias incoloras. Vibrio Cholerae colonias amarillas. Comparar los resultados con la tabla de reacciones bioqumicas.

Medio SB Medio Mc Conkey Medio TCBS Bioqumicas

12.- NOTAS IMPORTANTES

Si es posible, examinar varias muestras sucesivas de materia fecal para mayores posibilidades de aislamiento. Los coprocultivos se piden en toda diarrea desinteriforme, mxime si cursa con respuesta inflamatoria sistmica, o si hay pus o sangre en las heces.

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Estadsticamente los ndices de positividad de estos coprocultivos puede llegar hasta el 75%. Si hay sospecha de shiquellosis, un escobilleo rectal puede servir, ya que este microorganismo se encuentra en la parte final del intestino. Si la lleva antes de dos horas al laboratorio puede permanecer a temperatura ambiente en el medio de transporte. Si la demora es ms de dos horas, mantenga la muestra en el medio de transporte a 4C. Informar si est tomando antibiticos. El aislamiento de Yersinia enterocolitica requiere medios selectivos (medio CIN) y/o enriquecimiento en fro. Para el aislamiento de Campylobacter es necesario utilizar medio Campy-BAP e incubarlo en microaerofilia a 42C. Para aislar Staphylococcus aureus es recomendable aadir una placa de Chapman-manitol, y para detectar Candida albicans otra de agar Sabouraud. Estos microorganismos se aslan e identifican en otras prcticas, por lo que no se utilizarn aqu esos medios. Si adems se solicita coprocultivo para Yersinia enterocoltica, pedir medio de transporte especial (Buffer). Sin medio de transporte: Receptculo estril (frasco de boca ancha) Introduzca el hisopo con deposicin directamente en el frasco de boca ancha, ms o menos 1 a 2 grs. de la muestra. La muestra debe enviarla al Laboratorio antes de una hora de su obtencin a temperatura ambiente. 13.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Reporta los resultados del cultivo. Comenta conclusiones con tus compaeros. Responde el siguiente cuestionario: Completa el glosario de trminos.

CUESTIONARIO

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1.- Por qu se usan los medios de enriquecimiento? 2.-Medio de enriquecimiento para el aislamiento de Salmonella spp. a partir de materia fecal. 3.-Medio de enriquecimiento para el aislamiento de Salmonella typhi 4.-Medio de enriquecimiento para Vibrio cholerae 5.-Menciona el principio activo del caldo de tetrationato y caldo de selenito respectivamente. 6.-Menciona la bacterias patgenas de importancia clnica en un coprocultivo 7.- Cuantos tipos de medios se usan para realizar un coprocultivo? 8.- Cul es el objetivo de las pruebas bioqumicas? 14. GLOSARIO DE TRMINOS Enteroinvasivas Microaerofilia

15.-BIBLIOGRAFA ESPECFICA. AUTOR


Lynch, Raphael, Mellor, Spare, Inwood. Todo-Sanford

TTULO
Mtodos de Laboratorio Diagnostico y Tratamiento

EDITORIAL
Interamericana Salvat.

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Marcus A. Krupp, Norman J.Sweet Klusek Hamilton. Browen Rose Cowan T. Steels

Clnico por el Laboratorio. Diagnostico clnico Integral Manual de Diagnostico Clnico Manual para identificacin

El Manual Moderno. Interamericana. de C.E.C.S.A Salvat. El Manual Moderno. Interamericana. Salvat la Panamericana Salvat de C.E.C.S.A

bacterias de importancia mdica Diagnostico y Tratamiento Todo-Sanford Marcus A. Krupp, Norman J.Sweet Klusek Hamilton. Browen Rose Faust, Ernest, Carroll Mc Faddin F. Jean Rapaport S.J Cowan T. Steels Clnico por el Laboratorio. Diagnostico clnico Integral Manual de Diagnostico Clnico Parasitologa Clnica Pruebas bioqumicas

para

identificacin de bacterias. Introduccin a la Hematologia Manual para identificacin bacterias de importancia mdica

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Prctica No. 8

Titulo de la Prctica: ANTICUERPOS ANTIPARASITARIOS

Fecha de realizacin:

Ubicacin: Unidad: II Temas: II.2

INFECCIONES BACTERIANAS Y PARASITARIAS

1.-OBJETIVO DE LA PRCTICA Conocer las principales tcnicas serolgicas utilizadas en el diagnstico de enfermedades parasitarias y desarrollar una de las tcnicas Serolgicas investigadas por el alumno. 2.- INTRODUCCIN En los vertebrados reside la capacidad de los sistemas inmunitarios para distinguir entre clulas o sustancias de su propio organismo y las que tienen otro origen. Entre los cuerpos extraos se incluyen clulas de otros organismos, parsitos, virus, bacterias, toxinas, toxoides, vacunas, etc., cuando estos materiales penetran en el organismo son reconocidos como sustancias extraas. La Inmunologa estudia principalmente el desarrollo de la resistencia del hospedador frente a enfermedades causadas por microorganismos, es decir, la inmunidad adquirida especfica. Las clulas germinales de la mdula sea que participan en las respuestas inmunitarias, se diferencian en una de dos posibles poblaciones de linfocitos. 3.- FUNDAMENTO 1.- Linfocitos B, o Clulas B. reciben ese nombre, porque las clulas precursoras maduran en un pequeo rgano linfoide llamado Bolsa de Fabricio en las aves, en los mamferos hay tejidos linfoides equivalentes, como las placas de Peyer del tracto digestivo y se transforman en linfocitos B. Slo el 20 % de los linfocitos circulantes

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son Clulas B; el resto de las clulas estn en el tejido linfoide. Viven das o semanas. Las Clulas B son las responsables de la respuesta inmunitaria humoral, ya que al entrar en contacto con el antgeno, originan clulas plasmticas productoras de anticuerpos. Tambin pueden originar clulas con memoria, linfocitos de larga supervivencia que estn en reposo despus de haber sido estimulados por un antgeno; cuando se renueva el contacto con un antgeno igual, producen la llamada "respuesta secundaria" que es ms rpida y vigorosa que la "respuesta primaria", porque hay una mayor y ms rpida produccin de anticuerpos. El resultado es que el individuo responda con mayor prontitud e intensidad a una segunda exposicin al antgeno. 2.- Linfocitos T, o Clulas T, que tambin se originan a partir de precursores producidos en mdula sea por las clulas germinales. Se desarrollan en el Timo, de donde toman su nombre. Abandonan el timo y se concentran en bazo, ganglios linfticos y tambin van a la sangre. Viven durante varios meses. Como consecuencia de la activacin antignica, los Linfocitos T dan lugar a las clulas Efectoras responsables de la respuesta inmunitaria celular. Los linfocitos T participan en la muerte o eliminacin de materiales extraos y microorganismos invasores, e incluso clulas cancerosas. Son las principales responsables del rechazo de trasplantes y de reacciones alrgicas cutneas. Se encargan de movilizar a los macrfagos en la destruccin de patgenos y de estimular a las clulas B para intensificar la produccin de anticuerpos (hay una "cooperacin celular"). Aunque ms difcil de medir, la inmunidad celular tambin est reforzada por una segunda exposicin a un antgeno, lo que es representado por una nueva y mayor poblacin de clulas T con memoria, capaces de responder a la segunda aparicin del antgeno. En el laboratorio clnico, la Serologa permite el estudio de las reacciones antgenoanticuerpo que se encuentran en el suero sanguneo. Las reacciones serolgicas son especficas entre un antgeno y un anticuerpo y pueden ser usadas para el trabajo de diagnstico. Cuando uno de los componentes es conocido, el desconocido puede ser detectado con un alto grado de sensibilidad y exactitud. Las pruebas serolgicas de reaccin antgeno-anticuerpo, amplan la capacidad diagnstica del clnico y orientan la teraputica. Hay muchas tcnicas disponibles. 4.- ACTIVIDADES

Investiga las pruebas inmunolgicas ms comunes usadas en parasitologa. Describe cada uno de los siguientes puntos, mencionados a continuacin, de la prctica que vayas a realizar.

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1.-OBJETIVO DE LA PRCTICA 2.- INTRODUCCIN 3.- FUNDAMENTO 4.-MATERIALES A UTILIZAR Prctica No. Titulo de la Prctica: Fecha de 5.-EQUIPO A UTILIZAR REACCIONES FEBRILES realizacin: 6.-MATERIAL BIOLGICO 9 7.-REACTIVOS 8.-PREPARACIN DE REACTIVOS 9.- RECOLECCION DE LA MUESTRA 10.ESQUEMA DE LA PRCTICA Ubicacin: INFECCIONES BACTERIANAS Y 11.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS PARASITARIAS Unidad: II 12.- OBSERVACIONES Temas: II.3 13.- ACTIVIDADES 14.-BIBLIOGRAFA ESPECFICA. Anota tus resultados. Reporta los resultados Comenta conclusiones con tus compaeros.

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1.-OBJETIVO DE LA PRCTICA El alumno realizar en el laboratorio las reacciones, con el fn de identificar la presencia de anticuerpos y dar el diagnstico serolgico de algunas enfermedades bacterianas. 2.- INTRODUCCIN Los antgenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella, Brucella y Rickettisia (reaccin cruzada con Proteus OX-19. Salmonella. La reaccin de Widal en un mtodo serolgico usado comnmente en el diagnstico de las fiebres tifoideas, entrica y ondulante, la reaccin mide el ttulo del suero contra una suspensin de microorganismo conocidos. La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos. Hay tres especies clnicamente importantes de Salmonella: enteritidis, choleraeauis y thyphi. Tres sndromes principales, resultan de la infeccin por salmonella. 1. Gastroenteritis (la forma ms comn). 2. Fiebre tifoidea. 3. Septicemia. Brucella. En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella, casi todas las infecciones humanas por Brucella, se deben a B abortus, B suis o B melitensis. La brucelosis es una enfermedad aguda o crnica que se manifiesta principalmente por escalofros, fiebre y debilidad, ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de fiebre ondulante de la enfermedad. Rickettsias. Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antgenos idiotpicos con Proteus ( OX-19, OX-2 OX-K), esta relacin se us en el diagnstico de tifo. Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequeos plemrfos que funcionan como parsitos intracelulares. La inmunidad por lo general es de larga duracin, con algunas excepciones. El tifus endmico puede causar recadas 10 o 20 aos despus de la aparente recuperacin (enfermedad de Grill Zinseer). La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recadas. 3.- FUNDAMENTO Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es

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invadido por agentes infecciosos, responde produciendo anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especfico. El ttulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad. Para que los resultados tengan un valor diagnstico el ttulo de ellos debe aumentar.

4.-MATERIALES A UTILIZAR CANTIDAD 1 1 2 1 1 3 1 1 4 DESCRIPCION Placas de vidrio con divisiones Gradilla. Tubo sin anticoagulante Pipeta pasteur con bulbo. Pipeta serolgica de 0.1ml Aplicadores de madera Fuente luminosa Jeringa desechable Torundas con alcohol.

5.-EQUIPO A UTILIZAR CANTIDAD 1 Agitador. 1 Centrfuga elctrica. 1 Bao mara. 6.-MATERIAL BIOLGICO CANTIDAD DESCRIPCION DESCRIPCION

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1 ml Suero 7.-REACTIVOS CANTIDAD 1 ml 1 ml Antgeno Paratyphi A 1 ml Antgeno H Salmonella typhi 1 ml Antgeno Paratyphi B 1 ml Antgeno Brucella aborturs 1 ml Antgeno Proteus OX-19 1 ml Antgeno O Salmonella typhi 8.- RECOLECCION DE LA MUESTRA 1. Elija un brazos del paciente para localizar una vena adecuada. 2. En el brazo elegido se coloca una ligadura de hule ltex, aproximadamente a 6 Cm por encima de la vena. 3. Se limpia toda la zona con una torunda impregnada con alcohol. Deje secar antes de sangrar, para evitar posibles reacciones alrgicas y que no arda. 4. Introduzca la aguja del vacutainer la muestra sangunea: 5. Se revisan ambos paralelamente a la vena para no perforarla, cuidando que el en el bisel de la aguja, el orificio quede hacia arriba. 6. Se introduce el tubo para recoleccin de muestra, en el soporte del vacutainer y automticamente se obtendrn 3 ml. 7. Saque la aguja de la vena y presione con la torunda hasta que no salga ms sangre del paciente. 8. Deje coagular la sangre y centrifugue. 9. Separe el suero con una pipeta pasteur y depostelo en un tubo limpio, para las pruebas serolgicas. 9.- PROCEDIMIENTO DESCRIPCION Antgeno O Salmonella typhi

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Puede efectuarse por medio de dos maneras. Mtodo de aglutinacin rpida en placa. 1. Anotar el antgeno correspondiente en la placa de vidrio. 2. Depositar en cada cuadro 0.04ml de suero del paciente para cada uno de los antgenos que se vayan a utiliza. 3. A cada gota de suero aadir una gota de cada antgeno. 4. Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antgeno. 5. Agitar suavemente la placa por rotacin (120 r.p.m) durante 2 3 minutos. 6. Observar la aglutinacin con ayuda de una lmpara. Cuando hay reaccin positiva se repite la tcnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma.

Mililitros de suero 0.08 0.04 0.02 0.01 0.005 INTERPRETACIN.

Dilucin 1:20 1:40 1:80 1:160 1:329

El informe del resultado de la prueba se hace tomando en consideracin la dilucin ms alta que se observe en la reaccin positiva. En tifoideas los anticuerpos llegan a tener ttulos diagnsticos hasta los 8 das despus de la fiebre. Mtodo de aglutinacin en tubo. 1. Numerar siete tubos ( 13x75mm) del uno al seis y un testigo (T) para cada antgeno.

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2. Adicionar 0.9 ml de solucin salina al primero y 0.5 ml a los restantates. 3. Agregar 0.1ml del suero problema al tubo uno. Mezclar y pasar 0.5ml al tubo dos y as sucesivamente hasta el seis eliminando 0.5ml de esta ltima dilucin. Obtenindose diluciones 1/10, 1/20, 1/40, 1/80, 1/160 y 1/320. 4. Adicionar 0.3ml de antgeno diluido previamente 1:20 con solucin salina en cada uno de los tubos. 5. Agitar enrgicamente e incubar en bao mara en las siguientes condiciones. Antgeno/tiempo Salmonella B 18 a 24hrs. Salmonella H 2hrs. Paratificos A y B 2hor. Brucella 48 hrs. Proteux 0X-19 18hrs. Temperatura. 48 a 50C 37C 48 a 50C 37C 37C

6. Tomar dos o tres tubos a la vez, agitarlos ligeramente frente una fuente de luz que ilumine las partculas claramente.

10.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS

Reportar el resultado, empleando la recproca de la dilucin ms alta que presenta aglutinacin. Grado de aglutinacin: 100% ++++ Sedimentacin de los grumos y el sobrenadante claro. 75% +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante claro. 50% ++ sedimentacin marcada y sobrenadante ligeramente claro. Negativo. Ninguna evidencia de aglutinacin, sobrenadante idntico al control.

11.- RECOMENDACIONES 1. No congelar ninguno de los reactivos.

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2. Evitar utilizar los reactivos frios. 3. La presencia de ttulos bajos puede ser debido a vacunaciones o infecciones pasadas o subclnicas. 4. Es conveniente estudiar varias muestras de sangre del enfermo con diferencia de cinco a siete das en los casos dudosos. 5. Es recomendable el uso de controles tanto positivos como negativos para asegurar la validez de los resultados. 12.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Reporta los resultados del estudio Comenta conclusiones con tus compaeros. Responde lo siguiente :

1. Menciones algunas caractersticas del gnero Salmonella. 2. Dnde se localiza en antgeno O? 3. Dnde se localiza el antgeno H? 4. Menciona otros mtodos de laboratorio para el diagnstico de salmonelosis. 5. Menciona algunas propiedades generales del gnero Brucella. 6. Por qu es importante este estudio?

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13.-BIBLIOGRAFA. AUTOR Lynch, Raphael, Mellor, Spare, Inwood. Todo-Sanford TTULO Mtodos de Laboratorio Diagnostico y Tratamiento EDITORIAL Interamericana Salvat. El Manual Moderno. Interamericana.

Clnico por el Laboratorio. Marcus A. Krupp, Norman Diagnostico clnico Integral J.Sweet Klusek Hamilton. Browen Rose Faust, Ernest, Carroll Mc Faddin F. Jean Rapaport S.J Cowan T. Steels Manual de Diagnostico

Clnico Parasitologa Clnica Salvat Pruebas bioqumicas para la Panamericana identificacin de bacterias. Introduccin a la Hematologia Salvat Manual para identificacin de C.E.C.S.A bacterias mdica de importancia

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1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA Prctica No.la presencia de Titulo de la Prctica:en vas urinarias. Fecha de Observar bacterias patgenas UROCULTIVO realizacin: 10

Ubicacin: Unidad: II Temas: II.4

INFECCIONES BACTERIANAS Y PARASITARIAS

2.- INTRODUCCIN El urocultivo es un estudio de laboratorio necesario para la evaluacin del enfermo en busca bacterias patgenas que producen infecciones de vas urinarias con mayor frecuencia de la vejiga.

3.- FUNDAMENTO La orina de vejiga y riones suele ser estril, pero en la uretra suelen existir nmeros pequeos de bacterias, en consecuencia la orina puede contener diversos microorganismos. La bacteriuria es el resultado de la prevalencia de un tipo particular de bacterias. 4.- MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes) CANTIDAD 1 4 1 1 12 DESCRIPCIN Asa calibrada Cajas de Petri Mechero Frasco estril de boca ancha Tubos de 13x 100

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4. EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 Estufa bacteriolgica. 6.- MATERIAL BIOLGICO CANTIDAD Muestra de orina problema 7.- MEDIOS DE CULTIVO CANTIDAD 1 caja 1 caja 1 caja 1 caja 2 DESCRIPCION Agar gelosa sangre Agar EMB Agar Sal de Manitol Agar Muller Hilton Juegos de bioqumicas DESCRIPCIN DESCRIPCIN

8.-RECOLECCION DE LA MUESTRA Tcnica de chorro medio: Se recomienda la primera orina de la maana. Debe realizarse la limpieza adecuada de las zonas cercanas a la uretra, a fin de que se elimine la mayor parte de los microorganismos que conforman la flora normal, se deber emplear agua jabonosa, esponja y agua estriles enjuagando suficiente para que no queden trozos de jabn. Se descarga en el inodoro la primer parte de la miccin y sin que est se suspenda, se recogen de 20 a 30 ml en un frasco de vidrio de boca ancha limpio y estril, la ltima parte de la miccin se desecha.

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9.-DESCRIPCIN DE LA PRCTICA METODO DEL ASA CALIBRADA 1.- Frente al mechero encendido, destapa el frasco que contiene la muestra. 2.- Con un asa calibrada toma la muestra de orina y siembra en las cajas con medios de cultivo : Gelosa sangre, EMB, Sal de manitol, respectivamente. 3.- Cruzando en medio y estriando toda la superficie.(Mtodo de Kass) 4.- Incuba a 37C en la estufa bacteriolgica durante 24 horas. 5.- Transcurridas las 24 horas examina las cajas de cultivo. 6.- Si no se observa desarrollo bacteriano en las 24 horas de incubacin volver a incubar 24 horas ms y si no se observa desarrollo bacteriano se informa negativo. 7.- Si se observa desarrollo de bacterias cuenta el nmero de UFC y se multiplica por el factor de dilucin del asa calibrada para obtener el nmero de bacterias por mililitro de orina. 8.- Inocular la bacteria sospechosa en pruebas bioqumicas para su identificacin. 9.- Incubar las pruebas bioqumicas en la estufa bacteriolgica durante 24 horas a 37C. 10.- Leer las pruebas bioqumicas con la ayuda de una tabla de bioqumicas. 11.- Hacer Antibiograma si se requiere.

Mtodo de Kass Inocular en el medio depositando la cantidad de muestra tomada con el asa calibrada en el centro del agar y a partir de ah se traza una lnea recta de extremo a extremo de la caja. Con la misma asa, y sin tomar ms muestra ni esterilizarla, se estra en zig-zag de manera que intercepte la lnea central de lado a lado, como indica el esquema siguiente:

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10.- ESTIMACIN CUANTITATIVA DE LAS UFC:

Cuando se cuentan menos 10,000 UFC/ml de orina nos indica contaminacin. Si el nmero de bacterias oscila entre 10,000 y 100,000 UFC/ml de orina, se sospecha de infeccin. Cuando el nmero es mayor de 100,000 UFC/ml se confirma la infeccin.

11.-INTERPRETACIN DE RESULTADOS:

Leer bioqumicas e identificar patgenos. 12.- OBSERVACIONES La infeccin es prcticamente segura si se repiten en dos cultivos consecutivos las cifras por encima de 100,000 UFC/ml. 13.- NOTAS IMPORTANTES El hallazgo de ms de dos especies bacterianas es sospechoso de contaminacin artificial. 14.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Reporta los resultados del Urocultivo. Comenta conclusiones con tus compaeros. Responde el siguiente cuestionario: 1.- Cuando se considera la bacteriuria significativa de infeccin. 2.- Menciona los mtodos por los cuales puede obtenerse la muestra para un urocultivo.

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3.- Cul es la medida de un asa calibrada? 4.- Menciona los principales agentes etiolgicos que pueden encontrarse en un urocultivo.

15.- GLOSARIO DE TERMINOS Antibiograma: Mtodo para determinar la sensibilidad de un germen frente a diversos antibiticos. Estriar: Formar estras en un medio de cultivo. Miccin: accin de orinar

16.- BIBLIOGRAFA ESPECFICA. AUTOR Lynch, Raphael, Mellor, Spare, Inwood. Todo-Sanford TTULO Mtodos de Laboratorio Diagnostico y Tratamiento EDITORIAL Interamericana Salvat. El Manual Moderno. Interamericana.

Clnico por el Laboratorio. Marcus A. Krupp, Norman Diagnostico clnico Integral J.Sweet Klusek Hamilton. Manual de Diagnostico

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Browen Rose Faust, Ernest, Carroll Mc Faddin F. Jean Rapaport S.J Cowan T. Steels

Clnico Parasitologa Clnica Salvat Pruebas bioqumicas para la Panamericana identificacin de bacterias. Introduccin a la Hematologia Salvat Manual para identificacin de C.E.C.S.A bacterias mdica de importancia

Prctica No. 11

Titulo de la Prctica: Determinacin De Gonadotropina Corinica Humana (GCH)

Fecha de realizacin:

Ubicacin: Unidad: III Temas: III.1

REPRODUCCIN Y FERTILIDAD

1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA: Confirmar la presencia de la Hormona Gonadotropina Corinica Humana ( HCG )

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excretada en la orina de mujeres embarazadas .

2.- INTRODUCCIN: La gonadotropina corinica humana (hCG) es una hormona glucoprotenica sintetizada por las clulas trofoblsticas de la placenta. En caso haber concepcin, el mtodo especfico para medir hCG, llamado comnmente medicin de subunidad beta, puede detectar dicha hormona en la sangre nueve das despus de la ovulacin. El intervalo anterior coincide con la implantacin del huevo fecundado, en la pared del miometrio. La produccin de hCG aumenta en forma constante durante el primer trimestre y alcanza su punto mximo por la dcima semana de gestacin. Despus, los niveles disminuyen a menos del 10% de las cantidades mximas del primer trimestre, en el resto del embarazo. Puede hacerse diagnstico de presuncin de embarazo tomando en consideracin la persistencia de la elevacin trmica durante la fase lutenica, hallazgo que se puede obtener de una grfica elaborada por la paciente. La excrecin de cantidades desproporcionadamente altas de gonadotropina se presenta en los casos de mola hidatidiforme y de carioepitelioma en la mujer, y en el carcinoma embrionario testicular del hombre. 3.- FUNDAMENTO La hormona Gonadotropina Corinica Humana (HCG) excretada en la orina de las mujeres embarazadas se determina cualitativamente por medio de una reaccin altamente sensible de inhibicin de la aglutinacin, en presencia de antisuero antiHCG. La ausencia de HCG en la orina de mujeres no embarazadas produce una AGLUTINACIN heterognea de partculas de ltex sensibilizado con HCG (PRUEBA NEGATIVA). L a presencia de HCG en la orina de mujeres embarazadas INHIBE LA AGLUTINACIN, de las partculas de ltex (PRUEBA POSITIVA). El uso de antisuero especifico garantiza la alta especificidad de la prueba. 4.- MATERIALES A UTILIZAR:

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CANTIDAD 1 1 3 1

DESCRIPCIN Placa de reaccin con 3 divisiones. Tubo de ensaye 13x100 Popote agitador de plstico desechable. Gradilla.

5.- EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 Centrfuga. 6.- MATERIAL BIOLGICO CANTIDAD 5 ml. De Orina. 7.- REACTIVOS: CANTIDAD DESCRIPCIN Equipo de reactivos para determinaciones, en placa, beta especficas de la hormona Gonadotropina Corinica Humana (HCG) en orina. Contenido: R-1 R-2 R-3 R-4 Reactivo de Ltex. Antisuero anti-HCG. Control Positivo. Control Negativo. DESCRIPCIN DESCRIPCIN

RECOLECCIN DE LA MUESTRA: Explicar a la paciente que no necesita restringir alimentos o lquidos y que se requiere recolectar una muestra de orina, la cual podr recolectar en el momento de la prueba.

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9.- DESCRIPCIN DE LA PRCTICA Mtodo Inmunolgico Indirecto 1.- Se recomienda centrifugar la orina si se observa turbia. 2.- Homogeniza perfecta y suavemente la suspensin de ltex-sensibilizado R-1 a temperatura ambiente (entre +15C y + 25 C), antes de usarse. 3.- Coloca en las divisiones de la placa, utilizando un popote agitador para cada muestra:

1 gota de R-2 + 1 gota de

1 gota de R-2 +

1 gota de R-2 +

1 gota de R-3

1gota de R-4

orina 4.- Mezcla bien con el extremo del popote agitador, empleando un popote diferente para cada divisin. 5.- Agrega a cada divisin 1 gota de R-1 6.- Mezcla bien y distribuye la muestra sobre cada divisin de la placa. 7.- Rota suavemente, con movimiento circular durante 2 minutos. 8.- Interpreta los resultados inmediatamente.

10.- INTERPRETACIN DE RESULTADOS

PRUEBA POSITIVA (+)

PRUEBA NEGATIVA (-)

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PRESENCIA DE EMBARAZO
A los 2 min. NO SE OBSERVA AGLUTINACIN. La suspensin debe ser comparable a la del control positivo R-3

AUSENCIA DE EMBARAZO
A los 2 min. SE OBSERVA AGLUTINACIN. La suspensin debe ser comparable a la del control negativo R-4

11.- OBSERVACIONES

Cuando el resultado no pueda ser interpretado claramente como positivo o como negativo, esto es, si es DUDOSO, podra deberse a que la concentracin de HCG est por debajo de la sensibilidad de la prueba . En este caso se recomienda repetir la prueba 5 das ms tarde, utilizando una muestra reciente de orina.

12.- NOTAS IMPORTANTES

Factores que intervienen en los resultados:


1.- Despus de ser usado cada reactivo deber taparse inmediatamente con su tapn-gotero correspondiente, cuidando de no intercambiarlos. 2.- Cualquier resto de detergente en la vidriera o en la placa con separaciones puede falsear los resultados (falso positivo). Se recomienda utilizar un detergente neutro, por ejemplo: EXTRAN NEUTRO y recipientes desechables para colectar la orina. 3.- Los reactivos y las muestras deben estar a la temperatura ambiente entre +15C y + 25 C , en el momento de realizar la prueba. 4.- No deber utilizarse el mismo popote o agitador para las diferentes muestras o controles. 5.- Para pipetear volmenes correctos y evitar contaminaciones cruzadas durante el pipeteo, debe evitarse tocar con las puntas de los goteros la superficie de la placa con divisiones. 6.- Las lecturas debern hacerse a los 2 minutos despus de haber mezclado los reactivos y las muestras. 7.- Los reactivos debern mantenerse en refrigeracin (entre +2C y + 8 C ) SIN CONGELAR mientras no se utilicen y bien cerrados para evitar cualquier evaporacin.

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8.- En casos de epitelioma corinico y la mola hidatdica, pueden detectarse niveles importantes de HCG en orina, an en ausencia de embarazo. 9.- En el embarazo extrauterino, la toxemia, muerte fetal o amenaza de aborto puede estar disminuida la excrecin de HCG. 10.- La proteinuria manifiesta, puede producir resultados falsamente positivos. 11.- La hematuria puede producir resultados falsamente positivos. 12.- Algunos frmacos como las fenotiacinas dan resultados falsamente positivos o negativos.

13.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Informa tus resultados Comenta conclusiones con tus compaeros. Contesta el siguiente cuestionario. Completa el glosario de trminos.

14.- CUESTIONARIO 1.- Cmo se llama la glndula de secrecin interna que se diferencia de todo el sistema endocrino, por ser un rgano temporario en la cual se elabora la HCG? 2.- Menciona las unidades por la cual est formada la HCG. 3.- Cul de las unidades de la HCG es especifica de la placenta? 4.- Cmo se encuentran los niveles de HCG despus del parto? 5.- En condiciones normales es posible detectar presencia de HCG en hombres? Explica por qu. 6.- Menciona en que condiciones es posible detectar la presencia de aumentada. 7.- Menciona en que condiciones es posible detectar la presencia de disminuida. HCG HCG

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14- GLOSARIO DE TERMINOS Trofoblasto Fase lutenica Mola hidatidiforme Carioepitelioma Carcinoma embrionario testicular Aglutinacin Antisuero Ltex sensibilizado Sensibilidad de la prueba. Hematuria

15.- BIBLIOGRAFA ESPECFICA AUTOR Lynch, Raphael, Mellor, Spare, Inwood. Todo-Sanford TTULO Mtodos de Laboratorio Diagnostico y Tratamiento EDITORIAL Interamericana Salvat. El Manual

Clnico por el Laboratorio. Marcus A. Krupp, Norman Diagnostico clnico Integral J.Sweet Klusek Hamilton. Browen Rose Rapaport S.J Manual de Diagnostico Clnico Introduccin a la Hematologia

Moderno. Interamericana. Salvat

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Prctica No. 12

Titulo de la Prctica:
Espermograma

Fecha de realizacin: Feb-07

Ubicacin: Unidad: III Temas: III.2

REPRODUCCIN Y FERTILIDAD

1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA: Analizar en el laboratorio una muestra de lquido seminal. Aprender la diferenciacin de formas normales y anormales de los espermatozoides en el microscopio. Realizar la clasificacin de los espermatozoides de acuerdo con su movilidad (mvil, torpe e inmvil).

2.- INTRODUCCIN: El estudio de semen forma parte de la investigacin completa de la infertilidad que comprenda a los dos cnyuges de un matrimonio estril. El semen es una solucin compuesta formada por los testculos, as como por los rganos reproductores masculinos accesorios. Consta bsicamente de espermatozoos suspendidos en el plasma seminal. Su funcin consiste en proporcionar un medio nutritivo de osmolaridad y volumen adecuados para vehicular los espermatozoos hacia el mocoendocervical donde termina su contribucin al proceso de fertilizacin. Aproximadamente el 60% del volumen de semen se deriva de las vesculas seminales. La prstata contribuye en aproximadamente el 20% del volumen total de semen. Los epiddimos, conductos referentes glndulas vulvoretrales y glndulas uretrales contribuyen en 10 al 15% de volumen.

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3.- FUNDAMENTO

Un anlisis seminal completo nos informa sobre las propiedades del semen en su conjunto, tanto de la produccin de espermatozoides como de la funcin de las glndulas sexuales accesorias, aspectos que analizaremos en est prctica. Los parmetros utilizados para evaluar la calidad del semen en el espermograma "clsico, estndar o tradicional" son fundamentalmente los siguientes: conteo total de espermatozoides, movilidad, y morfologa normal de los espermatozoides; tambin deben evaluarse otras caractersticas fsicas del semen como su apariencia, volumen de semen eyaculado, viscosidad o consistencia y pH del semen, as como conteo de clulas, en especial leucocitos.

4.-MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes) CANTIDAD 1 1 1 1 1 1 1 1 DESCRIPCIN Tiras de papel de PH Cmara de Neubauer Pipeta para glbulos blancos Cubreobjetos Portaobjetos Pipeta de 5 ml. Frasco de boca ancha Pipeta Pasteur

5.-EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD DESCRIPCIN

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Microscopio

6.- MATERIAL BIOLGICO: DESCRIPCIN Lquido Seminal. 7.-REACTIVOS: CANTIDAD 5ml DESCRIPCION Lquido diluyente de Macomber y Saunders Preparacin:5.0 gr de NaHC03 + 1.0 ml de Formalina + 100 ml de H20 8.-RECOLECCION DE LA MUESTRA: Se recomienda que se recolecte la muestra despus de un perodo de abstinencia de tres das, la muestra ms satisfactoria es la que se recoge en el laboratorio mediante masturbacin, esto permite un examen completo del semen. Particularmente del proceso de su coagulacin y licuefaccin y tambin elimina la posibilidad de un "golpe de fro".Las muestras que se obtienen en la casa del paciente mediante un coito interrumpido o masturbacin y que se envan rpidamente al laboratorio son aceptables, pero algo menos satisfactorias. Para cualquiera de estos mtodos, la muestra puede recogerse en un frasco de vidrio de boca ancha, limpio proporcionado por el laboratorio para evitar posibles restos de detergentes o de otros contaminantes nocivos, o en unos recipientes adecuados de plstico o de polietileno. 9.-DESCRIPCIN DE LA PRCTICA: Para llevar a cabo este estudio se divide en:

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A) Examen Macroscpico en el cul se observarn sus Caractersticas Fsicas B) Examen Microscpico.


A) EXAMEN MACROSCPICO 1.- Observa a simple vista en la muestra lo siguiente: COLOR: El semen normal recin eyaculado tiene una apariencia homognea y gris-opalescente a la inspeccin simple, el color puede variar del blanco amarillento al blanco grisceo. En ocasiones, el semen puede aparecer menos opaco si la concentracin de espermatozoides es muy baja; cuando hay hemospermia o hematospermia podemos observar un color rojizo pardusco; un color amarillento neto puede implicar una piospermia ste color tambin puede observarse en caso de abstinencia sexual prolongada. ASPECTO: El aspecto heterogneo del semen recin eyaculado se modifica luego de la licuacin y se hace homogneo. Su opalescencia resulta proporcional a la concentracin de espermatozoides. La turbiedad se encuentra aumentada en las en procesos inflamatorios en cualquier parte del aparato reproductor presentndose piospermia. Tambin se encuentra turbiedad aumentada en las hemospermias.

VISCOSIDAD: Sumerge una varilla de vidrio en la muestra, levntala y mide la longitud del filamento que se forma. Es normal una filancia de 5 a 10 milmetros. A sido discutida la importancia de ste parmetro, pero se ha admitido que el aumento de la misma imposibilita la correcta motilidad de los espermatozoides. En las prostatitis crnicas y en las vesiculitis seminales se observan viscosidades aumentadas LICUEFACCIN: Despus de 5 a10 minutos, el cogulo se licuar espontneamente para formar un lquido translcido, turbio y viscoso. COAGULACIN: La coagulacin tiene importancia diagnstica, porque el semen de los varones con una ausencia congnita bilateral de los conductos deferentes y de las vesculas seminales no se coagula por ausencia de sustrato de aglutinacin. pH:

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Coloca con una pipeta Pasteur, una pequea muestra en el papel indicador de Ph. Debe ser ligeramente alcalino con Ph de alrededor de 7.7 VOLUMEN: Con una pipeta mide el volumen. El volumen normal de semen es de un promedio de 3.5 ml oscilando entre 1.5 y 5 ml. Cuando el volumen resulta inferior a 1.5 milmetros se habla de hipospermia.

B) EXAMEN MICROSCPICO 1.- Con la ayuda de una pipeta Pasteur deposita en un portaobjetos, una gota de la muestra inmediatamente despus de realizar el estudio fsico. 2.- Coloca encima de la gota un cubreobjetos. 3.- Observar al microscopio con objetivos secos, lo siguiente: Morfologa: Observa los espermatozoides morfolgicamente normales y anormales. Se deben estudiar con el objetivo de inmersin por lo menos 200 espermatozoides y determinar el porcentaje de formas anormales. El semen normal contiene menos del 30% de formas anormales, adems de la morfologa del espermatozoide, se deber apreciar la presencia de leucocitos y clulas epiteliales.

Motilidad:
Los movimientos de los espermatozoides pueden ser rpidos, lentos o de balanceo. Cuenta 100 espermatozoides y se reportan porcentajes de rpidos, lentos o de balanceo. Recuento de espermatozoides: 1. Con la pipeta para glbulos blancos absorber hasta la marca de 0.5 la muestra.

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2. 3. 4. 5.

Diluye hasta la marca 11 con el lquido diluyente (Solucin de Macomber y Saunders) Mezclar agitando vigorosamente. Carga la cmara del hermacitmetro: dejando caer las dos primeras gotas en una gasa y se deja caer la tercera gota, colocando la punta de la pipeta entre la cmara (porcin cuadriculada) y el cubre hemocitmetro. Deja sedimentar durante 2 minutos. Cuenta los espermatozoides en las cuadrculas grandes. Repetir todo el procedimiento por lo menos una vez y sacar el promedio de los resultados.

Reportar la presencia de clulas ajenas al semen como bacterias, leucocitos, eritrocitos y levaduras.

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11.- REPORTE DE RESULTADOS:

CARACTERES ORGALPTICOS:
Aspecto

RESULTADOS

VALORES DE REFERENCIA
Viscoso translcido. 3.5 ml. (1.5 ml 5.0 ml)

Volumen Color Viscosidad Entre 10 y 30 minutos Licuefaccin 7.2 - 7.7 pH EXAMEN MICROSCOPICO: Cuenta de espermatozoides Motilidad % Acinticos: % Lentos y torpes: % Moderados: % Rpidos: % de normales: % de anormales: Tipo de anormales: 60 150 millones por ml. Espermatozoides mviles entre 70 y 80% dentro de las primeras 3 horas de recolectada la muestra posteriormente irn disminuyendo un 5% las formas mviles por hora. Menos del 30% son formas anormales De blanco amarillento al blanco grisceo. De 5 a 10 milmetros

Morfologa

Observaciones:

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Nmero de espermatozoides en 2 cuadrantes x 100,000 = Nmero de espermatozoides /ml. El nmero total de espermatozoides presentes en la muestra se obtiene multiplicando el nmero de espermatozoides / ml X el valor total del semen. Recuento inferiores de 20 millones /ml es claramente anormal.

12.- OBSERVACIONES Normalmente no deben existir en el lquido seminal: leucocitos, eritrocitos, bacterias ni levaduras. 13.- NOTAS IMPORTANTES El NaHC03 ayuda a fluidificar el moco y la Formalina inmoviliza los espermatozoides para facilitar la observacin. Para observar la morfologa apyate de un cuadro comparativo. 14.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Reporta los resultados del espermograma, como el cuadro de reporte de resultados. Comenta conclusiones con tus compaeros. Responde el siguiente cuestionario. Completa el glosario de trminos. Investiga y anexa el cuadro comparativo de las formas anormales de los espermatozoides.

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CUESTIONARIO 1.- Qu es el semen y qu objeto tiene su estudio?

2.- De qu rganos se derivan los componentes del semen y que porcentaje del mismo aporta cada uno de ellos?

3.- Cules son los tres estados del proceso de licuefaccin y coagulacin del semen?

4.- Mencionar el procedimiento completo de recuento de espermatozoides en la cmara de recuento de un hemocitmetro.

5.- Cul es la funcin de la motilidad activa del espermatozoide y cul es el procedimiento para valorar esta motilidad?

6.- Anote las caractersticas fsicas normales del lquido seminal.

7.- Describe y dibuja las formas anormales de los espermatozoides.

8.- Cmo se llama el diluyente para el recuento de espermatozoides?

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9.- Cmo se prepara el diluyente para el recuento de espermatozoides?

10.- Cmo se carga la pipeta de Thoma para el recuento de espermatozoides?

11.- Cul es la funcin del semen?

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15.- GLOSARIO DE TERMINOS Piospermia Hemospermia. Vesculas seminales. Prstata Epiddimos Conductos referentes Glndulas vulvoretrales Glndulas uretrales Azooespermia Hemocitmetro Oligozoospermia

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16.- BIBLIOGRAFA ESPECFICA. AUTOR Lynch, Raphael, Mellor, Spare, Inwood. Todo-Sanford TTULO Mtodos de Laboratorio Diagnostico y Tratamiento EDITORIAL Interamericana Salvat. El Manual Moderno. Interamericana.

Clnico por el Laboratorio. Marcus A. Krupp, Norman Diagnostico clnico Integral J.Sweet Klusek Hamilton. Browen Rose Manual de Diagnostico Clnico

Prctica No. 13

Titulo de la Prctica: Prueba Post-coito (PCT).


(de Sims-Huhner)

Fecha de realizacin: Feb-07

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Ubicacin: Unidad: III Temas: III.3

REPRODUCCIN Y FERTILIDAD

1.- OBJETIVO DE LA PRCTICA:


Asegurarse de que la relacin sexual que tiene lugar sea completa. Determinar si la infertilidad es debida a una incapacidad del espermatozoide de avanzar a lo largo del cuello. Demostrar una adecuada estimulacin estrognica y una buena preparacin del tracto genital femenino con mucus.

2.- INTRODUCCIN:

Prueba Post-Coito (PCT). [despus del coito] (PCT) examina la habilidad de la esperma de introducirse y moverse dentro de la sustancia mucosa de la crvix justo antes del momento de la ovulacin. La pareja tiene coito cerca del momento de ovulacin y se examina la sustancia mucosa de la crvix unas pocas horas ms tarde. Una PCT tambin puede indicar si hay una reaccin entre la esperma y la sustancia mucosa de la crvix que podra estar causando infertilidad.

El examen post-coito (PCT) evala no solamente el moco del cuello uterino sino tambin la interaccin de la esperma y el moco. Si es programado apropiadamente (segn lo indicado por el profesional), el examen revela mucho sobre la suficiencia de la produccin del moco del cuello uterino de una mujer, la capacidad del espermatozoide de sobrevivir en el moco del cuello uterino, y cmo la esperma y el moco del cuello uterino interactan. Idealmente, los espermatozoides no tienen problemas para moverse a travs del

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moco del cuello uterino.

La infertilidad se define como la incapacidad de una pareja para concebir tras un ao de relaciones regulares no protegidas. La infertilidad se considera primaria cuando ocurre en una mujer que nunca ha estado embarazada y secundaria cuando esto ocurre en una mujer con historia previa de uno o ms embarazos. Dentro de la infertilidad debemos diferenciar entre subfertilidad y esterilidad. La subfertilidad se aplica a aquellos casos en que la concepcin no se descarta, aunque conseguirla se presente como algo complicado. Ejemplos de subfertilidad serian la endometriosis y la oligozoospermia. La esterilidad la definimos como la imposibilidad absoluta para concebir. Ejemplos serian la azoospermia o la obstruccin tubrica bilateral. La fecundabilidad sera la probabilidad de conseguir un embarazo dentro de un ciclo menstrual. La fecundidad se define como la probabilidad de conseguir un recin nacido dentro de un ciclo menstrual. La fecundidad se refiere al rango completo desde la concepcin hasta el nacimiento, mientras que la fecundabilidad se refiere solo a la concepcin.

3.- FUNDAMENTO

El moco del cuello uterino habitualmente es espeso y se encuentra presente para alejar las infecciones del tero. Cerca del momento de ovulacin, el moco del cuello uterino se hace delgado y acuoso para ayudar a la esperma a desplazarse travs del tero de modo que pueda llegar hasta las trompas de Falopio y fertilizar al vulo. Este examen especial puede proporcionar conocimiento acerca del porqu no est teniendo lugar una fertilizacin exitosa. Este examen es a veces denominado prueba de Sims-Huhner, por el nombre de los mdicos que lo inventaron 4.-MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes) CANTIDAD 1 Jeringa de Luer DESCRIPCIN

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1 1 1 1 1 1

Cnula de vidrio Tubo de goma Caja de Petri Pinzas Porta-objetos Cubre objetos

5.-EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 Microscopio 6.- MATERIAL BIOLGICO: CANTIDAD Moco cervical 7.-REACTIVOS: CANTIDAD No se requiere DESCRIPCIN DESCRIPCIN DESCRIPCIN

8.-RECOLECCION DE LA MUESTRA: Se instruir a la mujer para que visite a su mdico dentro de las primeras horas despus del coito durante la fase ovulatoria que se determina por un registro de la temperatura corporal. La muestra del moco endocervical se obtiene mediante la aspiracin por una cnula de vidrio acoplada a una jeringa de Luer mediante un tubo de goma. Se aconseja a la pareja que tenga relaciones uno o dos das antes de la fecha en
que se espera que ocurra la ovulacin, habitualmente durante los das 11 a 13 del ciclo, y que acuda al laboratorio al da siguiente. La mayora de los centros prefieren realizar este examen entre 6 y 12 horas

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despus del coito. En la clnica, se extrae una pequea cantidad de mucus del canal cervical mediante un espculo vaginal sin producir dolor.

9.-DESCRIPCIN DE LA PRCTICA: 1.- Obtenida la muestra, se mide el Volumen de moco. 2.- Se vierte en una caja de Petri, y observar lo siguiente:

Color.- En la mitad del ciclo el moco deber ser claro y acuoso. Grado de viscosidad.- Se mide la capacidad de extensin del moco. Esta se determina cogiendo una porcin del moco con unas pinzas y se mide la distancia a que puede estirarse antes de que se rompa. En la mitad del ciclo la financia es ptima, es decir de unos 10 cm por lo menos. Nmero de espermozoides.- Se coloca una gota de moco en un portaobjetos, se tapa con un cubre objetos, observar a gran aumento el nmero estimado de espermios por campo, con el porcentaje de de formas mviles. Se deben encontrar al menos 10 espermatozoides mviles por campo, en las 6 u 8 horas siguientes al coito. Tambin observar la presencia de leucocitos, eritrocitos, y trichomonas.

10.- CALCULOS: No se requieren 11.- REPORTE DE RESULTADOS:


Paciente: Fecha: Da del ciclo : Das de abstinencia : Tiempo postcoito : Medicacin previa : Caractersticas de la prueba Aspecto macroscpico de la secrecin cervical Color:

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Aspecto del contenido vaginal Grado de viscosidad: Examen microscpico del contenido cervical: -Leucocitos. -Grmenes. -Nmero de Espermatozoides por campo : Inmviles. Con movimiento lento y difcil Con movimiento moderado o vivo.

1. Negativo (Ausencia de espermatozoides en el moco cervical) 2. Favorable ( 5 ms espermatozoides por campo).


Por lo menos 5 espermatozoides en cada campo de microscopio y nadando activamente en lnea recta atravesando el mucus. Un buen test postcoito significa que se estn produciendo suficientes espermatozoides, que estn siendo depositados en la vagina y que son capaces de penetrar el mucus cervical.

2. Deficiente (Espermatozoides en nmero pero sin calidad cintica) se ven menos de 5 espermatozoides en cada campo y/o en el que la motilidad es mala y no lineal. Si bien un mal resultado puede indicar un problema en los espermatozoides o en el mucus, la razn ms comn es que no son correctos los tiempos en que se hace la prueba. Si la prueba es realizada demasiado precozmente o tardamente en el ciclo, el resultado va a ser anormal porque en esos momentos el mucus cervical es espeso y relativamente hostil para los espermatozoides. Slo en las proximidades de la ovulacin el mucus cervical favorece el transporte de los espermatozoides. 12.-OBSERVACIONES

Sin contar la indispensable historia clnica detallada y el examen fsico, la base de una evaluacin de la infertilidad se asienta sobre seis pilares

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bsicos: (1) anlisis seminal (2) interaccin moco cervical-espermatozoides (3) Ovulacin (4) permeabilidad tubrica (5) anormalidades uterinas (6) peritoneales. Antes de someter a ninguna pareja a exploraciones o a procedimientos diagnsticos agresivos hay que recordar, que normalmente las parejas en edad reproductiva con relaciones sexuales regulares sin contracepcin tienen aproximadamente entre un 25 a 30% de posibilidades de concebir en un ciclo y sobre un 85% de posibilidades en un ao. No olvidar que muchos problemas se resuelven con informacin y " educacin " antes que con cualquier otra medida ms "teraputica". Sin embargo en pacientes en los que se sospecha de infertilidad por azoospermia, obstruccin tubrica o amenorrea prolongada la evaluacin no debe ser pospuesta. Tampoco debemos posponer estudios en parejas infrtiles con edad avanzada (>35 aos).

13.- NOTAS IMPORTANTES

Ciertos eventos deben tener lugar para que ocurra la concepcin: Ovulacin la liberacin de un vulo de uno de los ovarios de la mujer. Fertilizacin la unin del vulo de la mujer y la esperma del hombre. Implantacin la conexin del vulo fertilizado a la pared del tero La concepcin puede ocurrir si se tiene relaciones sexuales durante o cerca del momento de la ovulacin. La ovulacin ocurre aproximadamente 14 das antes del

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comienzo del prximo perodo menstrual. Una vez que se libera un vulo, permanece apto para ser fertilizado durante 12 24 horas. Cuando el hombre eyacula durante el sexo, su esperma se libera dentro de la vagina. La esperma puede vivir en el tracto reproductivo de la mujer durante 2 3 das o ms. Viajan hacia arriba a travs la crvix o la abertura del tero y salen al interior de la trompa. Si la esperma y el vulo se unen, puede ocurrir la fertilizacin. El vulo fertilizado se mueve entonces por la trompa al interior del tero y se implantar para crecer y desarrollarse formando un feto. Si hay un problema en algn punto de la cadena de eventos, puede resultar la infertilidad.

14.- ACTIVIDADES Anota tus resultados. Reporta los resultados, como el cuadro de reporte de resultados. Comenta conclusiones con tus compaeros. Responde el siguiente cuestionario. Completa el glosario de trminos.

CUESTIONARIO 1.- En la fase ovulatoria en la mitad del ciclo que factores permiten la mxima penetrabilidad de moco por parte de los espermatozoides? 2.- Cual es el propsito de la prueba postcoito? 3.- Que hormona liberada en la fase secretora aumenta la viscosidad del moco

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cervical? 4.- Cundo ocurre la ovulacin? 5.- Cuanto tiempo pude vivir el espermatozoide en el tracto reproductivo de la mujer? 6.- Para que un resultado se considere favorable, en la prueba postcoito, cuantos espermatozoides se deben observar por campo? 7.- Cuales son los tres parmetros a estudiar en la prueba postcoito? 8.- Este examen es a veces denominado prueba de Sims-Huhner, por qu? 9.- Que revela la prueba de Sims-Huhner? 10.- En que condiciones debe presentarse una paciente para realizarse la prueba postcoito? 11.- La prueba postcoito forma parte de una serie de estudios para la investigacin de infertilidad, menciona los otros cinco estudios.

16.- GLOSARIO DE TERMINOS Ovulacin Fertilizacin Implantacin

Obstruccin tubrica

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Amenorrea Endometriosis Oligozoospermia Esterilidad


Fecundabilidad Infertilidad Fertilidad

17.- BIBLIOGRAFA ESPECFICA. AUTOR Lynch, Raphael, Mellor, Spare, Inwood. Todo-Sanford TTULO Mtodos de Laboratorio Diagnostico y Tratamiento Clnico por el Laboratorio. EDITORIAL Interamericana Salvat.

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Marcus A. Krupp, Norman Diagnostico clnico Integral J.Sweet Klusek Hamilton. Browen Rose Manual de Diagnostico Clnico

El Manual Moderno. Interamericana.

EVALUACION
REGISTRO DE

No Caractersticas del producto a evaluar SI


LISTA DE COTEJO (4 puntos)

CUMPLIMIENTO

OBSERVACIONES

NO

NA

1 2

Cuestionario contestado al 100% Glosario contestado al 100%

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3 4 1 2 3 4 5 6 7 8

El manual presenta el resultados de la prctica Presenta en tiempo y forma sus reportes de laboratorio GUIA DE OBSERVACION (6 puntos 0.75 c/u) Asistencia y puntualidad en el laboratorio Presento el material solicitado Porta la bata debidamente

Lee y comprende la metodologa de la prctica de laboratorio Presenta el manual de laboratorio Trabaja respetando las normas de laboratorio Usa debidamente el equipo de laboratorio Limpia su area de trabajo antes y despus de realizar la practica TOTAL :

IV.

CREDITOS DE ELABORACIN

Este cuaderno de trabajo fue elaborado por la academia de Laboratorio Clnico del CBTis 32. INTEGRANTES Q.F.B. Mara Esther Snchez Serra Q.F.B. Xchitl del Carmen Ros Ochoa Q.F.B. Miguel ngel Quijano Couoh Q.F.B. Pedro Joaqun Perales Sabido Q.B.P. Edgardo Salvador Acevedo Casarrubias Q.F.B. Andrs Barrientos Acosta Q.F.B. Esly Hernndez Torres Q.F.B. Alejandra Guadalupe Garca Pantoja M.C.D. Mario Alberto Lpez Jess

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M.V.Z. Ramn Pichardo Hernndez V. VALIDACIN DEL CUADERNO DE PRCTICAS PERODO ESCOLAR: Feb

PLANTEL: C.B.T.i.s. No. 32 2013 - Jul 2013

ACADEMIA LOCAL DE: Laboratorista Clnico Q.F.B. MIGUEL A. QUIJANO COUOH PRESIDENTE DE LA ACADEMIA
(Nombre y firma)

ACADEMIA ESTATAL DE: Laboratorista Clnico Q.F.B. MARIA ESTHER SNCHEZ SERRA PRESIDENTE DE LA ACADEMIA
(nombre y firma)