OBJETIVO

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PRÁCTICADE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II ABSORCIÓN INTESTINAL Y UTILIZACIÓN DE RIBOFLAVINA desayuno, 3 con el almuerzo y 3 con la cena. El dia de la práctica, antes de desayunar descartará unos pocos mL de su orina (que serán contabilizados) y luego recogerá una muestra de aproximadamente unos 50 mL de su orina en frasco de vidrio ámbar (M1), la que será conservada en la nevera a 4ºC hasta su procesamiento en el laboratorio. Un segundo estudiante consumirá solamente yogurt sin sabor o color a frutas ad libitum (todo el que quiera) durante todo el día, y el día de la práctica antes de desayunar descartará unos pocos mL de su orina (que serán contabilizados) y luego recogerá una muestra de aproximadamente unos 50 mL de su orina en frasco de vidrio ámbar (M2), la que será conservada en la nevera a 4ºC hasta su procesamiento en el laboratorio. Un tercer estudiante consumirá solamente sales de rehidratación (sin sabor ni color) durante todo el día y el día de la práctica, antes de desayunar descartará unos pocos mL de su orina (que serán contabilizados) y luego recogerá una muestra de aproximadamente unos 50 mL de su orina en frasco de vidrio ámbar (M3), la que será conservada en la nevera a 4ºC hasta su procesamiento en el laboratorio. Una vez recogida la muestra de orina del día de la practica todos pueden retomar sus hábitos alimenticios normales y disponerse para la parte experimental del laboratorio con sus dos muestras de orina de 50 mL contenidas en frascos ámbar. NOTA. No deben traer la totalidad de la orina recogida el día anterior, solo el dato del volumen en mL) Si la muestra de orina presenta turbiedad, tome 10 ml de muestra y agréguele 0.5 g de carbón activado, agite y filtre antes de proceder con la determinación de riboflavina. Para esta determinación, disponga una serie de tubos de ensayo debidamente marcados como se ilustra en la siguiente tabla y agregue los componentes que en ella se indican M2 (mL) 5 5 M3 (mL) 5 5 BM1 (mL) 5 5 BM2 (mL) 5 5 BM3 (mL) 5 5

Determinar la tasa de absorción de riboflavina en individuos en diferentes estados fisiológicos. INTRODUCCIÓN. La riboflavina, una de las vitaminas del complejo B, es absorbida normalmente en la segunda porción del intestino delgado y utilizada según las necesidades del organismo, mientras el excedente es excretado por la orina gracias a su gran solubilidad. Esta vitamina normalmente presenta coloración amarilla, razón por la cual no requiere ser convertida químicamente para producir un pigmento coloreado que se pueda determinar colorimétricamente. PROCEDIMIENTO.
La presente práctica incluye 48 horas de preparación. Dos dias antes de la práctica todos los estudiantes consumirán comida en la que no se incluyan productos lácteos, huevos, snacks(mecatos), bebidas gaseosas, jugos envasados, frutas amarillas o verduras. Al día siguiente antes de consumir alimento cada estudiante descartará unos pocos mL de su orina y recolectará una muestra 50 mL de orina en un frasco de vidrio color ámbar y la conservará en la nevera a 4ºC hasta su uso en el laboratorio. Ésta será utilizada como blanco. El día anterior a la práctica, DESPUÉS DE haber recogido su muestra de orina de 50 mL, todos los estudiantes deberán recoger la totalidad de la orina producida en 24 horas y anotarán el volumen total obtenido. Uno de los estudiantes del grupo consumirá EXACTAMENTE la misma comida que haya tomado el dia anterior, y junto con ella tomará una tableta de complejo B (Gen Far®) por cada 12 Kg de peso si es mujer y una tableta por cada 10 kg de peso corporal si es varón, distribuidas en las tres comidas principales, es decir, si el cálculo da 8.6 tabletas, se redondea a 9 y se toma 3 con el T1 (mL)
Patrón de riboflavina*

T2 (mL)

T3 (mL)

T4 (mL)

T5 (mL)

BP (mL)

M1 (mL) 5 5

8 6 4 2 1 Acido acético 0.02 2 4 6 8 9 10 N Agitar los tubos para que el color se distribuya uniformemente * Anote la concentración del patrón utilizado. Finalmente lea la absorbancia de todos los tubos a una longitud de onda de 450 nm. A partir de la curva de calibración obtenida con los patrones se calculará la concentración de riboflavina en su orina y la tasa de depuración de riboflavina en su grupo.

B. Cuestionario (Responda a las preguntas con la debida sustentación científica) 1. Describa el fundamento del método espectrofotométrico utilizado para la determinación de riboflavina en la orina. 2. Se deben presentar diferencias en la absorción intestinal de riboflavina en los tres estados fisiológicos estudiados? Si es ese el caso sustente debidamente las razones. 3. Describa cual es el papel fisiológico de la riboflavina en el organismo humano 4. Qué factores afectan la absorción intestinal de riboflavina en humanos. 5. Explique cada una de las razones por las cuales en esta práctica se exigió una dieta preparatoria. 6. Para el desarrollo de esta práctica se podía haber administrado vitaminas del complejo B de forma inyectable, pero se prefirió su uso oral. Cuáles fueron las razones para preferir esta elección?

INFORME (para bitácora) Sustente debidamente las respuestas a los siguientes interrogantes A. Análisis de resultados. 1. Calcule la cantidad de riboflavina absorbida por kg de peso en promedio entre los integrantes de su grupo utilizando la curva de calibración preparada por ustedes en los tres estados fisiológicos estudiados 2. Calcule la tasa de depuración de riboflavina promedio en su grupo para los tres estados fisiológicos estudiados. (Consultar el concepto) 3. Analice los resultados con base en lo reportado en la literatura científica en los tres estados fisiológicos estudiados.