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OBJETIVOS

:
Investigar la presencia de glúcidos lípidos y proteínas en una sustancia problema Sugerir de que se trata

MATERIALES:
Tubos de ensayo Mechero Cucharitas Cuenta gotas Baso de Bohemia

SUSTANCIAS:
NaOH HCl CuSO4 HNO3 (acido nítrico) Reactivo de Millón Fehling C Fehling T Reactivo Barfoed Reactivo Seliwanoff Reactivo Lugol

TABLA DE RESULTADOS
REACCIÓN Biuret Xantoproteica Millón Lugol Fehling Barfoed Barfoed Hidrolizado Seliwanoff Seliwanoff Hidrolizado Disán RESULT ADO POSITIVO POSITIVO POSITIVO NEGATIV O POSITIVO NEGATIV O POSITIVO NEGATIV O POSITIVO NEGATIV O

Agregar 2 gotas de Lugol.Barfoed: Colocar 2mL de solución problema en un tubo de ensayo. Agregar 3 ml del reactivo de Seliwanoff.Hidrólisis y Seliwanoff Colocar en un tubo de ensayo 2ml la solución problema.Xantoproteica: Colocar 1mL de solución problema en un tubo de ensayo. Observar. Caliente y observe. 4. Colocar la solución problema hidrolizada en otro tubo de ensayo. Observar 10. hasta asegurarse de haber obtenido un medio ácido. Observe 3. Calentar. Observar . 8.Biuret: Colocar 1mL de solución problema en un tubo de ensayo. Agregar 3 ml del reactivo de Seliwanoff. 5. Agregar unas gotas de ácido clorhídrico. Agréguele 1 o 2 gotas de reactivo Millón. Colocar la solución problema hidrolizada en otro tubo de ensayo. la solución debe mantenerse color azul para que el reactivo esté preparado de manera correcta. Una vez preparado el reactivo. Agregar 3 ml del reactivo de Barfoed. Agite y agregue 1 o 2 gotas de CuSO 4 (ac). repetir la preparación de Fehling.Hidrólisis y Barfoed Colocar en un tubo de ensayo la solución problema.TÉCNICA: 1. Caliente y agregue NaOH (ac). Luego de unos minutos. Observar.Disán Colocar una pequeña cantidad de soluto sobre papel filtro. Observar. 6. Calentar. Observar 9.Seliwanoff: Colocar 2mL de solución problema en un tubo de ensayo. Observe 2. De no ser así. Agregar 3 ml del reactivo de Barfoed. 7.Lugol: Colocar 2mL de solución problema en un tubo de ensayo. Agregue 20 gotas de NaOH (ac). Agregar unas gotas de ácido clorhídrico. Agregar 4 gotas sobre el soluto con cuentagotas limpio. Calentar.Fehling: Preparación del reactivo de Fehling: En un tubo de ensayo agregar 3 ml de solución de Fehling C y 3 ml de solución de Fehling T y calentar. Observar. Agréguele 2 o 3 gotas de HNO3 (ac). agregar Colocar 1mL de solución problema. hasta asegurarse de haber obtenido un medio ácido.Millón: Colocar 1mL de solución problema en un tubo de ensayo. Calentar.

El reactivo de Biuret contiene Cu2SO4 en solución acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). hidrógeno. Gran parte de las proteínas intracelulares son enzimas. La ribononucleasa. Son compuestos a base de carbono. Todas las enzimas.NH) unidos directamente o a través de un solo átomo de carbono o nitrógeno. Las moléculas de proteína están formadas por componentes más simples llamados aminoácidos. Esta reacción está dada por aquellas sustancias cuyas moléculas contienen dos grupos carbamino (-CO. La reacción se basa en la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos. Se han ideado métodos de análisis para reconocer la disposición exacta de aminoácidos en una molécula proteínica. unidos por enlaces peptídicos y aunque presentan propiedades fisicoquímicas y biológicas características éstas son reflejo de las de los aminoácidos que las constituyen. Reacciones de coloración Las proteínas están formadas por aminoácidos. algunas hormonas y muchos componentes estructurales importantes de la célula son proteínas. Fundamento teórico del reactivo de Biuret: El nombre de la reacción procede del compuesto coloreado formado por la condensación de dos moléculas de urea con eliminación de amoníaco. Reacción . su estructura es extremadamente compleja. secretada por el páncreas. Esta última reacción provoca un cambio de coloración: violeta púrpura o violeta rosado. Debe señalarse que el color depende de la naturaleza de las proteínas.MARCO TEÓRICO: Proteína proviene de la palabra griega proteios. nitrógeno y generalmente azufre y fósforo. Puesto que cada proteína puede tener cientos de aminoácidos combinados en ciertas proporciones y orden es posible una variedad prácticamente infinita de moléculas de proteína. oxígeno. sustancias que regulan la rapidez con que se han de tener numerosas reacciones celulares. La insulina. El elemento característico es el nitrógeno. hormona secretada por el páncreas y utilizada en el tratamiento de la diabetes. que significa lo primero. fue la primera enzima de la cuál se conoció el orden exacto de aminoácidos. fue la primera proteína cuya estructura se conoció. Muchas de las reacciones coloridas que se utilizan para el análisis de las proteínas en realidad se deben a la presencia de un aminoácido específico . Las moléculas de proteína son muy grandes y contienen miles de átomos.

Esta reacción se debe la presencia de un grupo fenilo en la molécula proteica. No puede realizarse esa reacción para identificar albúmina en orina. está dada solo por aquellas sustancias cuyas moléculas contienen dos grupos carbamino (-CO. Para esta prueba se produce la nitración del anillo bencénico presente en los aminoácidos obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo. triptófano). . fenilalanina.NH) unidos directamente o a través de un solo átomo de carbono o nitrógeno Fundamento teórico de la reacción Xantoproteica: Esta prueba caracteriza a los aminoácidos aromáticos (tirosina. Esta reacción no es una reacción característica de todas las proteínas . La positividad se reconoce por la aparición de un color amarillo o verde debido a la formación de nitrocompuestos. por el color anaranjado de la reacción final. Las proteínas que tienen en su composición estos aminoácidos también darán la reacción. que se vuelven anaranjado en medio fuertemente alcalino (formación de ácido picrámico o trinitrofenol). Los complejos de la molécula proteica que son de importancia en esta reacción son la tirosina y el triptófano. la reacción será negativa cuando la hidrólisis sea completa. La fenilalanina no reacciona en las condiciones que se realiza en el laboratorio.Esta reacción nos sirve para diferenciar las proteínas y péptidos de los aminoácidos y su utilidad principal es la de seguir el proceso de hidrólisis proteica.

el fenol y el timol producen resultados positivos en esta reacción.Esta reacción no es una reacción característica de todas las proteínas que es debida a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos bencénicos. . especialmente en presencia de tirosina. Fundamento teórico de la reacción de Millón: La reacción del Millón se debe a la presencia del grupo hidroxifenilo en la molécula proteica. De estos compuestos. de manera que sólo las proteínas que tienen este aminoácido ofrecen resultados positivos. Esto se considera así siempre y cuando la dieta de los mamíferos contenga un aporte adecuado de fenilalanina. cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado. Por tanto el aminoácido fenilalanina sí que es esencial. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali vira a un color anaranjado oscuro. Se clasifica como un aminoácido no esencial en los mamíferos ya que su síntesis se produce a partir de la hidroxilación de otro aminoácido: la fenilalanina. Cualquier compuesto fenólico que no esté sustituido en la posición 3. sólo la tirosina está presente en las proteínas. La tirosina es uno de los 20 aminoácidos que forman las proteínas.5 como la tirosina.

S. Debe tomarse en cuenta que en el caso de que la solución a examinar sea muy alcalina. pero las peptonas dan solamente una solución de color rojo. aunque solamente lo son algunos monosacáridos y disacáridos. Su fórmula general suele ser (CH 2O)n. aunque su composición y propiedades no corresponde en absoluto con esta definición. La prueba no es satisfactoria para soluciones que contienen sales inorgánicas en gran cantidad. debe ser previamente neutralizada.En esta prueba los compuestos mercúricos en medio fuertemente ácido (ácido nítrico del reactivo) se condensan con el grupo fenólico formando un compuesto de color rojo ladrillo o rojizo. proteínas como la ovoalbúmina producen un precipitado blanco que progresivamente por acción del calor se torna rojo. H. Los glúcidos están formados por unas pequeñas moléculas. Además. La unión de dos monosacáridos . donde oxígeno e hidrógeno se encuentran en la misma proporción que en el agua. GLUCIDOS Los glúcidos están constituidos por C. El nombre de glúcido deriva de la palabra "glucosa" que proviene del vocablo griego “glykys” que significa dulce. razón por la cual este reactivo no se usa para medir albúmina en orina. ya que el álcali precipitaría al ion mercurio en forma de óxidos amarillos. los monosacáridos. o P). y O (a veces tienen N. de ahí su nombre clásico de hidratos de carbono. ya que el mercurio del reactivo del Millón es precipitado y se vuelve negativo. El monosacárido más conocido es la glucosa (C 6H12O6).

3. se forma un polisacárido. Un aspecto .Sal de Seignette (Tartrato mixto de Potasio y Sodio). Fehling T: Tartrato doble de sodio y potasio Bitartrato cuprato II: Es un Ion complejo. El ensayo con el licor de Fehling se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de un aldehído. Se guardan separadas hasta el momento de su uso para evitar la precipitación del hidróxido de cobre (II). así como para detectar derivados de esta tales como la sacarosa o la fructosa. solución de hidróxido de sodio al 40%. hasta 1. la unión de tres. a un trisacárido. Si se une una gran cantidad de monosacáridos.000 ml. 35 g. Fundamento teórico del reactivo de fehling: El reactivo de Fehling. que forma un precipitado de color rojo. hasta 1.000 ml. El fehling da positivo cuando aparece un precipitado anaranjado. es una disolución descubierta por el químico alemán Hermann von Fehling y que se utiliza como reactivo para la determinación de azúcares reductores. agua destilada. etc. agua. Este reactivo es necesario que esté en medio básico para poder obtener el resultado positivo. también conocido como Licor de Fehling.da lugar a un disacárido. El licor de Fehling consiste en dos soluciones acuosas: Fehling C: Solución acuosa de sulfato cúprico: . Éste se oxida a ácido y reduce la sal de cobre (II) en medio alcalino a óxido de cobre (I). Sirve para demostrar la presencia de glucosa. 150 g. .Sulfato de cobre cristalizado.

Fundamento teórico de hidrólisis: La hidrólisis de un enlace glucosídico se lleva a cabo mediante la disociación de una molécula de agua del medio. Rompiendo los enlaces glucosídicos. Si un azúcar reduce el licor de Fehling a óxido de cobre (I) rojo. el OH se une al carbono libre del otro residuo de azúcar. se dice que es un azúcar reductor. Se basa en la reducción de cobre (II) (En forma de acetato) a cobre (I) (En forma de óxido).importante de esta reacción es que la forma aldehído puede detectarse fácilmente aunque exista en muy pequeña cantidad. Fundamento teórico de Barfoed: Es un ensayo químico utilizado para detectar monosacáridos. El hidrógeno del agua se une al oxigeno del extremo de una de las moléculas de azúcar. el cual . El resultado de esta reacción. es la liberación de un monosacárido y el resto de la molécula que puede ser un monosacárido si se trataba de un disacárido o bien del polisacárido restante si se trataba de un polisacárido más complejo.

conteniendo de tres a seis átomos de carbono. pueden interferir en la prueba MONOSACARIDOS Los monosacáridos o azúcares simples o carboxilos son los glúcidos más sencillos. mientras que si el enlace O-glicosídico es dicarbónílico el disacárido resultante será no reductor (sacarosa. Los disacáridos también pueden reaccionar. entre ellas el cloruro de sodio. DISACARIDOS Los disacáridos son un tipo de glúcidos formados por la condensación (unión) de dos azúcares monosacáridos iguales o distintos mediante un enlace O-glucosídico (con pérdida de una molécula de agua)pues se establece en forma de éter siendo un átomo de oxigeno el que une cada pareja de monosacáridos. Se nombran haciendo referencia al número de carbonos (3-7). mono o dicarbonílico.lizan rompimiento ). Si el carbono carbonílico está en cualquier otra posición. si el enlace O-glucosídico es monocarbonílico el disacárido resultante será reductor (maltosa. Los disacáridos más comunes son: Sacarosa: formada por la unión de una glucosa y una fructosa. RCOH + 2Cu +2+ 2H2O → RCOOH + Cu 2o↓+ 4H+ El grupo aldehído del monosacárido que se encuentra en forma de hemiacetal se oxida a su ácido carboxílico correspondiente. celobiosa. que además puede ser α o β en función del -OH hemiacetal o hemicetal. es decir. Lactosa: formada por la unión de una glucosa y una galactosa. que no se hidrolizan (hidro agua. Muchas sustancias. Su fórmula empírica es (CH2O)n donde n ≥ 3.forma un precipitado color rojo ladrillo. se trata de una cetona (-CO-) y el monosacárido recibe el nombre de cetosa. es decir. Es el azúcar de la leche. No tiene poder reductor. terminado en el sufijo -osa. A la sacarosa se le llama también azúcar común. que no se descomponen para dar otros compuestos. Tiene poder reductor. pero en forma más lenta. El carácter reductor se da en un disacárido si uno de los monosacáridos que lo forman tiene su carbono anomérico (o carbonílico) libre.). . Si este grupo carbonilo está en el extremo de la cadena se trata de un grupo aldehído (-CHO) y el monosacárido recibe el nombre de aldosa. si este carbono no forma parte del enlace O-glucosídico. El átomo de carbono restante tiene unido un grupo carbonilo (C=O). Dicho de otra forma. La cadena carbonada de los monosacáridos no está ramificada y todos los átomos de carbono menos uno contienen un grupo alcohol (-OH). etc. trehalosa).

. Este fenómeno es desencadenado porque las cetosas se deshidratan a mayor velocidad que las aldosas. El enlace covalente entre dos monosacáridos provoca la eliminación de un átomo de hidrógeno de uno de los monosacáridos y de un grupo hidroxilo del otro monosacárido. Los carbonos se numeran desde el grupo aldehído (el más oxidado de la molécula) hacia abajo. La detección de aldosas en el laboratorio puede realizarse mediante el test de Seliwanoff. Fundamento teórico del reactivo de Lugol: . mientras que el grupo carbonilo de las cetosas lo tienen en el medio. de forma que en conjunto podemos decir que se elimina una molécula de agua (H 2O) que se libera al medio de reacción. un resultado negativo indicará la presencia de aldosas en la muestra. Las aldosas difieren de las cetosas en que tienen un grupo carbonilo al final de la cadena carbonosa. Este se condensa con los frufurales derivados de cetosas originando un color rojo intenso. La representación lineal. Fundamento teórico del reactivo de Seliwanoff: Es una reacción para diferenciar cetosas de aldosas. donde el grupo aldehído forma un enlace hemiacetal con un grupo hidroxilo. con la consecuente eliminación de una molécula de agua. no es propia de las aldosas disueltas en agua u otro solvente.La fórmula empírica de los disacáridos es C 12H22O11. ya que éstas se encuentran en su mayor parte (cerca del 99%). sin embargo. Las aldosas isomerizan a cetosas en la transformación de Lobry-de Bruyn-van Ekenstein. Su fórmula química general es CnH2nOn (n>=3). que si bien es para detectar cetosas. generalmente el quinto o el sexto. es decir. Cetosas: Una cetosa es un monosacárido con un grupo cetona por molécula. Aldosas: Una aldosa es un monosacárido (un glúcido simple) cuya molécula contiene un grupo aldehído. Las cetosas pueden isomerizar en aldosas cuando el grupo carbonilo se encuentra al final de la molécula. un carbonilo en el extremo de la misma. Este tipo de moléculas se denominan azúcares reducidos. y es el único que no tiene actividad óptica. el gliceraldehído es la más simple de todas las aldosas. en su forma cíclica. la dihidroxiacetona es la más simple de todas las cetosas. Está basada en la formación de frurfural o en un derivado de éste y su posterior condensación con el resorcinol. Con tres átomos de carbono. Con solo 3 átomos de carbono. Con el fin de determinar si un compuesto pertenece al grupo de las cetosas o de las aldosas se suele llevar a cabo una reacción química de Seliwanoff.

una verdadera reacción química. cientos o miles de ellas. con aminoácidos aromáticos. La coloración producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la molécula de almidón. de treinta mil a cuatrocientos mil millones.NH) unidos directamente o a través de un solo átomo de carbono o nitrógeno. es decir proteínas. Dentro de los homopolisacaridos estudiaremos al almidón. Pueden estar constituidos por un solo tipo de osas. apareciendo la coloración azul violeta. contiene una mezcla de yodo (I2) y ioduro (I-). Son polimeros naturales que puede considerarse como derivados de aldosas y cetosas por una reacción de polimerización por condensación. fenilalanina. unidas por enlaces glicosidicos que se pueden romper por hidrólisis en forma semejante a la tratada para los oligosaidos. esta reacción detecta aquellas sustancias cuyas moléculas contienen dos grupos carbamino (-CO. Por lo tanto esta solución posee proteínas. . heteropolisacaridos. Están constituidos por muchas unidades de osas por molécula. sino que se forma un compuesto de inclusión que modifica las propiedades físicas de esta molécula. Por lo tanto esta solución posee proteínas.El reactivo de Lugol. Este método se usa para identificar polisacáridos. Xantoproteica dio positivo. denominándose homopolisacaridos o por varios tipos. esta reacción detecta aminoácidos aromáticos (tirosina. DISCUCIÓN DE RESULTADOS: Biuret dio positivo. triptófano). El almidón en contacto con unas gotas de Reactivo de Lugol (disolución de yodo y yoduro potásico) toma un color azul-violeta característico. No es por tanto. Polisacáridos: Son glúcidos de alta masa molecular.

los cuales reducen a Barfoed. que al ser hidrolizados. Por lo tanto esta solución posee grupo hidroxifenilo es decir tirosina. por lo tanto se confirma que posee disacáridos reductores. por lo que los disacáridos de la solución poseen cetosas. se podría afirmar que la sustancia problema puede contener leche en polvo. poseen aminoácidos aromáticos. esta reacción permite diferenciar entre monosacáridos y disacáridos reductores. Fehling dio positivo. Hidrólisis y Seliwanoff dio positivo. por lo que hay que hidrolizar. O cualquier producto que pueda contener leche en polvo descremada. Se realiza la hidrólisis para poder obtener los monosacáridos reductores. y también posee glúcidos de la leche. se obtienen sus monosacáridos componentes. Pero al dar negativo a la prueba de disán se trataría de leche en polvo descremada. Por lo tanto esta solución solo posee disacáridos reductores. porque como se pudo observar en Barfoed. . Hidrólisis y Barfoed dio positivo. Barfoed dio negativo. la solución posee disacáridos. Lugol dio negativo. dando positivo ante la presencia de cetosas. Por lo tanto esta solución posee azucares reductores. CONCLUCIONES: La solución problema esta compuesta tanto por proteínas como glúcidos. Esta reacción dio negativa. los cuales están compuesto por aldosas y cetosas. Dados los resultados obtenidos. específicamente tirosina. podemos afirmar que no contiene lípidos. En cuanto a sus glúcidos podemos afirmar que esta compuesto por disacáridos reductores. esta reacción permite diferenciar aldosas de cetosas. ya que da resultado positivo solamente en monosacáridos reductores. esta reacción detecta polisacáridos. Por lo tanto al no disolverse en disán. Las proteínas. nos permite determinar si hay presencia de lípidos. Disán dio negativo. Por lo tanto esta solución no posee polisacáridos.Millón dio positivo. particularmente almidón. esta reacción detecta azucares reductores pudiendo ser estos monosacáridos como disacáridos. dados los aminoácidos encontrados de proteínas típicas de la leche. pudiendo ser estos la caseína y la lactosa. Seliwanoff dio negativo. esta reacción detecta grupo hidroxifenilo. como por ejemplo helado en polvo Light. no siendo el caso de lípidos.