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Química Clínica

Manual de Prácticas de Laboratorio

Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez

PRACTINA NO________ DETERMINACION DE FOSFATASA ALCALINA (ALP) INTRODUCCION La fosfatasa alcalina es una enzima ampliamente distribuida en el organismo. Hidroliza los monoésteres del ácido ortofosfórico en medio alcalino. En el adulto proviene en parte del higado (termoestable) y en parte de hueso, sistema reticuloendotelial y vascular (termolabil) dando lugar a distintas izoenzimas. La actividad serica de ALP ósea, en condiciones normales alcanza su mayor actividad en los niños en edad de crecimiento, llegando a triplicar los niveles del adulto, debido a que esta izoenzima se localiza en los osteoblastos. También es fisiológico el aumento que se produce al final de primer trimestre de embarazo, a expensad de la izoenzima placentaria que en este periodo alcanza niveles máximos. Entre las patologías que afecta la actividad sérica de ALP se pueden citar: carcinomas metastáticos en higado y hueso, colestasis biliar, infarto al miocardio, pulmonar o renal. FUNDAMENTO La ALP hidroliza al p-nitrofenilfosfato, incoloro, produciendo fosftato y p-nitrofenil a pH de 9.8, la velocidad de aparicion del anion p-nitrofenolto a 405nm, es proporcional a la actividad enzimatica en la muestra. La dietanolamina regula en pH de reaccion y actua como aceptor del fosftato liberado por la fosfatasa. ALP + p-NFF  PO4 + p-Nitrofenol (pH 9.8) Esta prueba se realiza en el contexto de otras pruebas hepáticas (GOT, GPT, Bilirrubina, GGT) y se utiliza para evaluar problemas hepáticos. Suele asociarse en la elevación de GGT excepto en problemas óseos donde solo se eleva la ALP. REACTIVO Buffer DEA : dietanolamina Sustrato pNFF MUESTRA Suero MATERIAL • Espectrofotómetro y cubetas • Baño maria • Agua destilada • Pipetas • Estandar de calibración • Reactivos de ALP

Química Clínica

Manual de Prácticas de Laboratorio

Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez

PARAMETROS Longitud de onda Temperatura de reacción Tiempo Vol final de reacción

405nm 25, 30 o 37ºC 3 minutos 2.52mL

PROCEDIMIENTO Colocar en cubeta a temperatura de Reaccion: Sustrato reconstituido 2.5mL Preincubar unos minutos, después agregar Muestra 20uL • • Leer absorbancia inicial en espectro a 405nm, disparar cronómetro Registrar absorbancias después de 1,2 y 3 minutos después de la primera lectura. Determinar la diferencia promedio de Absorbancia / min (∆A/min), restando cada absorbancia y obteniendo el promedio.

CALCULOS ALP (U/I) = ∆A/min x 6812

RESULTADOS ALP= ______________ (U/I) VALORES DE REFERENCIA Adultos: Niños y adolescentes 25ºC = 40-190 U/I hasta 400 30ºC = 45-213 U/I hasta 450 37ºC = 65-300 U/I hasta 645 CONCLUSIONES

FUNDAMENTO La creatinina reacciona con el picrato alcalino. lo hacen durante los primeros 30 segundo de iniciada la reacción. según la reacción de Jaffé. MATERIAL REQUERIDO • Espectrofotómetro • Cubetas de lectura • Material volumétrico • Sistema de termostatizacion (20-30ºC) • Cronómetro PARAMETROS Longitud de onda Temperatura Ajuste a cero PROCEDIMIENTO Pipetear en cubetas Estandar Muestra espectrofotométricas: Reactivo de Trabajo 2. es directamente proporcional a la concentración de creatinina en la muestra y se mide fotométricamente a 490-510nm. La reacción de jaffé es una reacción no específica para creatinina. CALCULOS *SUERO Creatinina (mg/L) = (M2-M1) x f 500nm (490-510) 25ºC agua destilada f= 20mg/L S2-S1 *ORINA DE 24 HORAS Creatinina (g/24h) = (M2 – M1) x f f= 0. ____ DETERMINACION DE CREATININA DEPURACION DE CREATININA INTRODUCCION La determinación de niveles séricos de creatinina.4mL Mezclar inmediatamente y disparar el cronómetro A los 30 seg exactos de incubación registrar las lecturas de Abs de S1 y M1. para dar un cromógeno rojizo. A los 5 minutos exactos de incubacion registrar las lecturas de Abs de S2 y M2. La cantidad de cromógeno que se forma bajo condiciones controladas. dado que su eliminación se efectúa a través del riñón y casi exclusivamente por filtración.020g/L x 50 x V S2-S1 . producto de la degradación de la creatina.0mL 2.4mL Muestra 0. pero las otras sustancias que reaccionan con el picrato alcalino. se utiliza como índice de funcionalismo renal.0mL Equilibrar a temperatura de trabajo y pipetear Estandar 0.Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez PRACTICA NO.

Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez Donde 50 es el valor de dilución y V= vol de diuresis en litros en 24h.E. *DEPURACION DE CREATININA ENDOGENA D. ___________________ml/min VALORES DE REFERENCIA Suero 8-14mg/L Orina 8-23 mg/kg / 24h DCE 80-140 ml/min CONCLUSION creatinina en orina (g/24h) Creatinina en suero (mg/L) x 694 .C.E.C. ml/min = RESULTADOS Creatinina en Suero ___________________mg/L Creatinina en Orina ___________________g/24h D.

Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez PRACTINA NO___ CLORO FUNDAMENTO El cloro reacciona con el tiocianato de mercurio para formar un compuesto coloreado. REACTIVO Reactivo: formado por tiocianato de mercurio. CALCULO Muestra DO Estandar DO n= 100mEq/L 100mmol/L 335mg/dL RESULTADO Cloro = ___________mg/dL VALORES DE REFERENCIA Suero o plasma 98-107 mEq/L 98-107 mmol/L 348-380 mg/dL CONCLUSION x n Estandar 1mL 10uL 10uL Muestra 1mL 480nm 37ºC 1cm de paso de luz blanco de reactivo orina 110-250 mEq/24h 3900-8870 mg/24h . incubar 5 minutos Leer abosrbancias (densidad optica DO) Color final estable 1 hora. nitrato de hierro y ácido nitrico. Estandar: Cloro MUESTRA Suero Plasma heparinizado Orina PARAMETROS Longitud de onda Temperatura Cubeta Ajustar a cero PROCEDIMIENTO Blanco Reactivo 1mL Agua destilada 10Ul Estandar Muestra Mezclar.

hepatitis. liberan glicerol y ácidos grasos libres. el glicerol es fosforilado por glicerofosfato deshidrogenada y ATP en presencia de glicerol quinasa para producir glicerol 3 fosfato y ADP.Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez PRACTICA NO. el D3P es convertido en dihidroxifosfato y peróxido de Hidrógeno por GPO. Una dieta alta en grasa eleva los triglicéridos. 505nm Blanco Patron Muestra R ml 1mL 1mL 1mL Patrón uL 10uL Muestra uL 10uL Mezclar Incubar 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia del calirador._____ TRIGLICERIDOS PRINCIPIO DEL METODO Los triglicéridos son grasas que suministran energía a la célula. al igual el colesterol son transportados por LPL en la sangre. Al final el H2O2 reacciona con 4-AF y p-clorofeno por la enzima peroxidasa provocando coloración roja. Los triglicéridos son incubados con LPL. Color estable 30 min. MUESTRA Suero o plasma PROCEDIMIENTO Longitud de onda Temperatura 37ºC o 15 a 20 ºC Ajustar el cero con agua destilada. pueden estar relacionadas con esta enfermedad. obstrucción biliar. de la muestra frente a blanco. CALCULOS ABS muestra ABS Patron x 200 (conc) =__________mg / dL RESULTADO Triglicéridos = ____________mg/dL VALORES DE REFERENCIA Hombres 40 a 160 mg/dL Mujeres 35 a 165 mg /dL CONCLUSION . cirrosis.

_____ COLESTEROL Los esteres de colesterol se hidrolizan por la acción de la colesterol ester hidrolasa para liberar colesterol y ácidos grasos. leer la densidad óptica (DO) El color final se mantiene estable durante 1 hora. y tras una incubación de 5 min.6 g/L 3.71 mmol/L CONCLUSION .17mmol/DL RESULTADO CHOL= ___________mg/dL VALORES DE REFERENCIA 150-260 mg/dL 1. MUESTRAS Suero Plasma heparinizado PROCEDIMIENTO Longitud de onda Temperatura Cubeta Leer contra blanco de reactivo Reactivo Agua destilada Estandar Muestra Blanco 1mL 10uL 500nm (492-550) 37ºC 1cm de paso de luz Estandar 1ml 10uL Muestra 1mL 10uL Mezclar. Puede perjudicar la fertilidad. 200mg/dL 2g/L 5. CALCULOS Muestra DO *n = Estandar DO n= concentración de std. riesgo durante el embarazo de efectos adversos para el feto.87 – 6. El colesterol libre exisente junto con el producido por esta reacción se oxida por la acción de colesterol oxidasa en 4-colestenona y peróxido de hidrógeno. en presencia de peroxidasa. Inflamable. PRECAUCIONES ¡toxico! El estandar coniene 2-mettoxietanol. ingestión o contacto con la piel. Este ultimo. oxida el sistema cromógeno (4-aminoantipirina/fenol) en un compuesto de color rojo.5 – 2. nocivo por inhalación. evitese la exposición.Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez PRACTICA NO.

es necesario agregar benzoato de cafeína al medio de reacción.Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez PRACTINA NO______ BILIRRUBINA Significado Clínico La bilirrubina es un compuesto de degradación de la Hemoglobina. Estable 48 horas de 2 a 10ºC. que para que reaccione la Bilirrubina Total (directa e indirecta) de la muestra. De manera.5mL Desarrolador Reactivo Sulfanílico 200uL Diazorreactivo 530nm en espectrofotómetro Ambiente 5 min 200uL 2. La determinación de la bilirrubina sérica en niños recien nacidos es de gran importancia. pero la indirecta requiere de un desarrollador acuoso. patología provocada por incompatibilidad materno-fetal. ya que aumenta con un consecuente riesgo de difución al sistema nervioso. que se mide a 530nm.9mL Directa 200uL 2. Material • Espectrofotómetro • Pipetas y micropipetas • Reloj Condiciones de Reacción Longitud de Onda Temperatura de Reaccion Tiempo de Reacción Vol Muestra Vol final de Reaccion PROCEDIMIENTO Colocar en tubos separados Blanco Muestra 200Ul Agua destilada 2. es necesario proteger. Libre de hemolisis. la acción de la luz puede destruir en una hora el 50% de la bilirrubina. Alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar su aumento (hiperbilirrubinemia). se produce una destrucción excesiva de glóbulos rojos.5mL 200uL Total 200uL 2. captada por el hígado para su conjugación y excretada en la bilis. esto se debe a que en la eritroblastosis fetal o anemia hemolítica del recien nacido.13mol/L • Nitrito de Sodio • Reactivo Sulfanílico • Bilirrubina STD (no provista) • Agua destilada (no provista) Muestra • Suero o Plasma heparinizado. Fundamento del Método La bilirrubina reacciona con el ácido sulfanílico diazotado originando un producto color rojovioleta (azobilirrubina).5mL 200uL . Reactivos • Desarrollador solución acuosa de Benzoato de cafeina 0. La bilirrubina directa reacciona con el diazorreactivo .

Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez CALCULOS Bilirrubina Total (mg/L) = Bilirrubina Directa Bilirrubina Indirecta (libre) Factor RESLTADOS Bilirrubina Directa Bilirrubina Indirecta Bilirrubina Total (T – B) x f (D – B) x f BR Total – Br Directa Calclar con en el Estandar de bilirrubina ____________mg/L ____________mg/L ____________mg/L VALORES NORMALES Adultos Directa hasta 2mg/L Total hasta 10mg/L Recien Nacidos Sangre de cordon 24 horas 48 horas 3 a 5 dias CONCLUSION A termino 25mg/L 60mg/L 75mg/L 120mg/L prematuros 80mg/L 120mg/L 230mg/L .

Arsenazo tiene alta afinidad por los iones de calcio y no muestra interferencia por los otros cationes que se encuenran en suero. no solo es factor estructural de huesos y dientes sino que también se encuentra en la sangre y en la función neuromuscular. el incremento se debe al aumento de la reabsorción en los huesos causada por metastasis o factor humoral producido por celulas tumorales. plasma u orina.Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez PRACTICA NO. DECREMENTO Hipocalemia METODO Arsenazo III El Arsenazo III se combina con los iones del calcio a pH de 6. Reactivo El reactivo esta listo para su uso Muestra Suero. Muestra estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ºC y seis meses en congelación.75 y forma un cromoforo coloreado cuya absorbancia es directamente proporcional a la concentración de calcio en la muestra. INCREMENTOS Hipercalemia se puede desarrollar en pacientes con enfermedad de Pager de hueso e hiperparatiroidismo. plasma heparinizada u orina.______ ELECTROLITOS EN SUERO CALCIO El calcio tiene numerosas funciones dentro del cuerpo. PARAMETROS Longitud de Onda Volumen de la muestra Volumen de Reactivo Incubación Concentración STD Blanco 630nm 10/20 uL 500-1000uL 1 min a 37ºC 10mg/dL Reactivo STD 1000 20 20 MUESTRA 1000 PROCEDIMIENTO Pipetear dentro de BLANCO tubos marcados Reactivo 1000 Agua destilada 20 Estándar Muestra Mezclar y leer absorbancia a 630nm CALCULOS Calcio mg/dL = ABS M / ABS STD X (Concentración STD) = RESULTADO Calcio = _______________mg/dL .

Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez MAGNESIO El magnesio forma coloracion purpura al reaccionar con la calmadita en medio alcalino. Niveles altos de Mg se hallan en uremia.5 a 2. fallo renal o enfermedad de Addison. estable 7 dias a temperatura de 2 a 8ºC. REACTIVOS Reactivo 1 Reactivo 2 Magnesium cal amino metil propanol . RESULTADO Magnesio : _______________mg/dL Blanco 1 520 nm 371C o 15-20 con agua destilada Patron 1 10 Muestra 1 10 VALORES NORMALES Suero o plasma Orina 1.5 mg/ dL 24 a 244 mg /dL .EGTA Calmagita Patron de Mg MUESTRA Suero o plasma heparonizado libre de hemolisis. Es el segundo cation mas numeroso en el organismo. proporcional a la concentración de Mg en la muestra. PROCEDIMIENTO Longitud de onda Temperatura Ajustar Pipetear en cubeta Rt Ml Patron uL Muestra uL CALCULOS ABS M / ABS P X 2 (CONC PAT) = mg / dL de Mg. tambien puede utilizarse orina.

alcoholismo. Niveles altos se atribuyen a la dieta. desordenes renales. Niveles bajos se deben a hipervitaminosis D. REACTIVO R molibdico Phosphorus Cal MUESTRA Suero o plasma libre de hemolisis Orina PARAMETROS Longitud de onda Cubeta Temperatura Ajustar a cero 340nm 1cm 37-30-25ºC con agua destilada PROCEDIMIENTO Pipetear en una cubeta Blanco Patrón Reactivo 1Ml 1mL Patrón 10uL Muestra Mezclar e incubar 5 min Leer abs Patron y Muestra frente a Blanco de Reactivo.4-1. P) = mg/dL ABS P Orina 24h ABS M ABS P x 5 x Vol (dL) orina /24h = mg/24h Muestra 1mL 10uL RESULTADO Fósforo = _____________mg/dL VALORES NORMALES Suero o plasma Orina Niños 4-7mg/dL Adultos 2.5-5mg/dL 0. FUNDAMENTO Método para detección de fósforo inorgánico. diarreas.3g/24h . alteraciones de hígado. metástasis de huesos. Aprox. mala absorción. El Pi reacciona en medio ácido con molibdato amónico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo. El 85% se encuentra en hueso y dientes. CALCULOS Suero ABS M x 5 (conc. hipertiroidismo.Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez FOSFORO INTRODUCCION El fósforo es esencial para la formación de tejido oseo y en el metabolismo energético celular. de intensidad proporcional a la concentración de Pi presente en la Muestra.

La albúmina es una proteína plasmática importante producida por el hígado.____ ALBUMINA FUNDAMENTO La albúmina se une al azul de bromocresol a pH ligeramente ácido produciendo coloración amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentración de la albúmina en la muestra. sus niveles se alteran en enfermedades hepáticas.5 a 5 g/dL CONCLUSIONES . dermatitis. incubar 10 minutos a temperatura ambiente. CALCULOS ABS M X 5 (conc. PARAMETROS Longitud de onda Temperatura Cubeta Ajustar a cero PROCEDIMIENTO Blanco Patrón Muestra Reactivo 1mL 1mL 1mL Patron 5uL Muestra 5uL Mezclar.Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez PRACTICA NO. Patrón) = g/dL ABS P 630nm 15-25ºC 1cm agua destilada RESULTADO Albúmina = _______________g/dL VALORES NORMALES 3.2 Patrón primario acuoso de albúmina MUESTRA Suero o plasma libre de hemólisis Estable 1 mes a 2-8ºC. REACTIVO Verde bromocresol pH 4. Leer absorbancia de Patrón y Muestra contra blanco. color estable 1 hora. desnutrición.

3 g/dL Recien Nacidos : 5. color estable 30 min.2-9. incubar 5 min a 37ºC o 10 minutos a temperatura ambiente. REACTIVO Reactivo de Biuret T protein Cal MUESTRA Suero o plasma heparinizado.6-8.____ PROTEÍNAS TOTALES En medio alcalino las proteínas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre. Se dividen en dos fracciones: Albúmina y Globulina Se detección es util para detección de: Hiperproteinemia Hipoproteinemia. P) = g/dL Blanco 1ml Patrón 1mL 25uL Muestra 1mL 540nm 1cm 37ºC/15-25ºC con agua destilada RESULTADOS Proteinas Totales = ___________g/dL VALORES NORMALES Adultos : 6.1 g/dL CONCLUSIONES . Estable un mes en nevera a 2-8ºC PARAMETROS Longitud de onda Cubeta Temperatura Ajustar a cero PROCEDIMIENTO Reactivo Patron Muestra 25uL Mezclar. Las proteínas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte.Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez PRACTICA NO. CALCULOS Abs M Abs P x 7 (conc. Leer absorbancia de Patrón y Muestra contra blanco. la intensidad es proporcional a la concentración de la proteína total en la muestra.

y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutos Obtener Diferenta promedio de Densidad Optica. las células hepáticas.529 1. pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propósito.Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez PRACTICA NO__ AST ASPARTATO AMINOTRASMINASA INTRODUCCION La AST tiene una alta concentración en el músculo cardiaco. se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT.235 1. MUESTRA Suero sin hemolisis Plasma EDTA Reactivo 1 L.746 1. Procedimiento de dos reactivos Reactivo 1 1mL Muestra 100uL Mezclar y esperar 1 minuto Reactivo 2 100uL Mezclar. Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad hepática. medir cambio de densidad óptica durante 3 min. incubar 1 minuto. las células músculo esquelético y en menores grados en otros tejidos. ALP y bilirrubina) Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos.905 .942 3. CALCULOS 340nm : actividad U/L = cambio DO/ min x 334mn : actividad U/L = cambio DO/ min x 365mn : actividad U/L = cambio DO/ min x RESULTADO AST = _______________ U/L VALORES NORMALES 30°C hasta 30 U/L 37°C hasta 46 U/L CONCLUSION: Un reactivo 2 reactivos 1.aspartato LDH Acida sodica Reactivo 2 a-cetogluterato NADH azida sodica PARAMETROS • • • • 340 nm longitud de onda 30-37°C Cubeta de 1 cm paso de luz Blanco agua destilada PROCEDIMIENTO Procedimiento de un reactivo Reactivo de trabajo Muestra 1 ml 100 ul Mezclar uncubar un minuto.780 3.

Procedimiento de dos reactivos Reactivo 1 1ml Muestra 100uL Mezclar y esperar 1 minuto Reactivo 2 100uL Mezclar. MUESTRA Suero sin hemólisis Plasma EDTA PARAMETROS • 340nm longitud de onda • 30-37°C • Cubeta de 1 cm paso de luz • Blanco agua destilada PROCEDIMIENTO Procedimiento de un reactivo Reactivo de trabajo Muestra Reactivo 1 L-alanina LDH Azida sodica Reactivo 2 a-cetogluterato NADH azida sodica 1ml 100ul Mezclar. CALCULOS 340nm : actividad U/L = cambio DO/ min x 334nm : actividad U/L = cambio DO/ min x 365nm : actividad U/L = cambio DO/ min x RESULTADOS ALT = __________________UL VALORES NORMALES 30°C hasta 35 UL 37°C hasta 49 UL CONCLUSION un reactivo 1. incubar un minuto.942 3. La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminoácido alanita y se encuentra en varios tejidos.235 2 reactivos 1.Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez ALT ALANINA AMINO TRANSAMINASA INTRODUCCION Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesión hepática. incubar 1 minuto. medir cambio de densidad optica durante 3 min. Cualquier lesión en el hígado hace que se libere esta enzima a la sangre.746 1. pero presenta concentraciones mayores en el hígado.529 . y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutos Obtener Diferenta promedio de Densidad Optica.780 3.905 1.

según estudios bioquimicos. u tipo de lípidos presentes en la leche.Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez PRACTICA NO_____ LIPASA FUNDAMENTO La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber. reduce los triglicéridos. obtener incremento de absorbencia por minuto promedio (∆A/min) CALCULOS (∆A/min)MUESTRA (∆A/min)PATRON X Concentración del patron = U/L RESULTADOS Lipasa = _________________U/L VALORES NORMALES 7-59 U/L . a los 3-5 minutos añadir: Reactivo C 250uL Mezclar 4. Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37°C. a ácidos grasos y glicerol. producida por las glándulas gástricas. poner el cronometro en marcha. La lipasa gástrica. Pipetear a una cubeta Reactivo de trabajo Muestra/Patron 750 ul 15 ul 3. leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5. es idéntica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreática no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancreático y llega a las glándulas mamarias a través de la circulación sanguínea. REACTIVOS • • Reactivo de trabajo Patron de lipasa MUESTRA • Suero PROCEDIMIENTO 1. Precalentar reactivo de trabajo a 37°C durante unos minutos 2. La enzima se encuentra en la leche materna y. Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales.

MUESTRA • • • Suero Plasma heparinizado Orina diluida una parte en dos de agua PROCEDIMIENTO Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37° C Cubeta 1 cm Blanco Agua destilada REACTIVO MUESTRA 30°C 1mL 25uL 37°C 1mL 15uL Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (∆A/min) CALCULOS Actividad Cambio Densidad Optica / min X 2715 a 30°C Cambio Densidad Optica / min X 4640 a 37°C RESULTADOS Amilasa = _______________ U/L VALORES DE REFENCIA En suero: • <67 U/L a 30°C • <86 U/L a 37°C CONCLUSION . Cuando una de estas glándulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el análisis de la amilasa serica. se produce principalmente en las glándulas salivares ( glándulas partidas) y en el páncreas.Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez AMILASA INTRODUCCION La amilasa es una enzima que tiene la función de dirigir el glicógeno y el almidón para formar azucares simples.

se define el titulo como la dilución mayor que da resultado positivo. 2. 4. 3. Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente. y una gota de los controles positivo y negativo. proceder para cada dilución como la prueba cualitativa. Aglutinación positiva indica una concentración de PCR igual o mayor a 6mg/L En el semicuantitativo. Semicuantitativo. No hemolisadas ni lipémicas. Con palillos distintos. 5. El incremento se produce después de unas horas de desarrollarse inflamación alcanzando niveles de 300mg/L en 12-24h. La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos. 1. depositar 50uL de M. Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente.Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez PRACTICA NO. mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo. homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a cada una de las gotas anteriores. realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9g/L 2. CALCULOS La concentración de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula: 6xTitulo de PCR = mg/L VALORES DE REFERENCIA Hasta 6mg/L RESULTADO Aglutinación: __________________ CONCLUSION: . en un portaobjetos. PROCEDIMIENTO Cualitativo. Suero humano Suero animal Muestra: Suero fresco estable 7 dias a 2-8ºC o 3 meses a -20. situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin exceso. virales. PRUEBAS SEROLOGICAS PROTEINA C REACTIVA Es una tecnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano. LECTURA E INTERPRETACION Examinar microscópicamente presencia o ausencia de aglutinación inmediatamente al retirar el agitador. 1. Reactivos: Latex Control (rojo) Control (azul) Suspensión de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana. inflamación. y neoplasias malignas.

Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente. Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo. 4. En circulos distintos. Semicuantitativo. Con palillos distintos. En un portaobjetos. No hemolisadas ni lipémicas. LECTURA E INTERPRETACION Examinar microscópicamente presencia o ausencia de aglutinación inmediatamente al retirar el agitador. CALCULOS 8 X TITULO DE FR = UI/mL VALORES DE REFERENCIA Hasta 8 UI/ mL RESULTADO Aglutinación: _____________________ CONCLUSIÓN . 3. 2. realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9g/L 2. 1. Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas anteriores. proceder para cada dilución como la prueba cualitativa.Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez FACTORES REUMATOIDES PRINCIPIO DEL METODO FR Latex es una tecnica de aglutinación en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano. y una gota de los controles positivo y negativo. se define el titulo como la dilución mayor que da resultado positivo. aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen. Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin exceso. Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G. PROCEDIMIENTO Cualitativo. Aglutinación positiva indica una concentración de FR Latex igual o mayor a 8UI/mL En el semicuantitativo. Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra. Reactivos Latex Control Rojo Control Azul suspensión de latex cubierto con gammaglobulina humana Suero humano Suero animal Muestra: Suero fresco estable 7 dias a 2-8ºC o 3 meses a -20. Su interés clínico es el diagnóstico de la Artritis Reumatoides. 1. depositar 50uL de M. 5.

Anotar el antígeno correspondiente en la placa de vidrio. Puede efectuarse por medio de dos maneras. fiebre y debilidad.m) durante 2 ó 3 minutos. 1. El tifus endémico puede causar recaíadas 10 o 20 años después de la aparente recuperación (enfermedad de Grill Zinseer). 3. B suis o B melitensis. Cuando hay reacción positiva se repite la técnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma. Observar la aglutinación con ayuda de una lámpara. la reacción mide el título del suero contra una suspensión de microorganismo conocidos. La reacción de Widal en un método serológico usado comúnmente en el diagnóstico de las fiebres tifoideas. septicemia. ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de “fiebre ondulante” de la enfermedad. 4. resultan de la infección por salmonella. La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos. Depositar en cada cuadro 0. La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaídas. Agitar suavemente la placa por rotación (120 r. 3. gastroenteritis ( la forma más común ). esta relación se usó en el diagnóstico de tifo. A cada gota de suero añadir una gota de cada antígeno. OX-2 OX-K). La brucelosis es una enfermedad aguda o crónica que se manifiesta principalmente por escalofríos. Tres síndromes principales. 5. El título del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad. 2. Salmonella. Hay tres especies clínicamente importantes de Salmonella: enteritidis. Brucella. Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigénos idiotípicos con Proteus ( OX-19. La inmunidad por lo general es de larga duración. 2. responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo específico. Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos.Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez REACCIONES FEBRILES INTRODUCCION Los antígenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella. fiebre tifoidea.04ml de suero del paciente para cada uno de los antígenos que se vayan a utiliza. Para que los resultados tengan un valor diagnóstico el título de ellos debe aumentar MUESTRA Suero libre de hemolisis REACTIVOS Paratifico A Paratifico B Tifico O Tifico H Proteus OX Brucella PROCEDIMIENTO. se deben a B abortus. casi todas las infecciones humanas por Brucella. Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19. . con algunas excepciones. choleraeauis y thyphi. Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antígeno. 6. Método de aglutinación rápida en placa. FUNDAMENTO. Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequeños plemórfos que funcionan como parásitos intracelulares.p. entérica y ondulante. 1. En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella. Rickettsias.

005 Dilución 1:20 1:40 1:80 1:160 1:329 INTERPRETACION Reportar el resultado.Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez Mililitros de suero 0.08 0. Grado de aglutinación. Ninguna evidencia de aglutinación. • Negativo. • 100% ++++ Sedimentación de los grumos y el sobrenadante claro. sobrenadante idéntico al control.02 0. • 75% +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante claro. empleando la recíproca de la dilución más alta que presenta aglutinación.04 0. RESULTADO Paratifico A Paratifico B Tifico O Tifico H Proteus OX Brucilla __________________ __________________ __________________ __________________ __________________ __________________ CONCLUSION . • 50% ++ sedimentación marcada y sobrenadante ligeramente claro.01 0.

esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculación utilizando un microscopio de bajo aumento. Añadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circulo Observar el resultado.5. en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento).6 El VDRL es una técnica de floculación que utiliza el antígeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponémicos inespecíficos producidos por el individuo ante una infección sifilítica.Química Clínica Manual de Prácticas de Laboratorio Eduardo Otoniel Bermúdez Chávez VDRL INTRODUCCION La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una técnica serológica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnóstico de sífilis y analizar la respuesta al tratamiento específico. Se practica normalmente en lámina de cristal. RESULTADO VDRL ____________________ CONCLUSION .1-4 El Médico de la Familia es el máximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles. por tanto. PROCEDIMIENTO En un porta. con una suspensión fresca de antígeno de cardiolipina. Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisión sexual en grandes masas de población. sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente. depositar una gota (50uL) de suero del paciente. MUESTRA Suero o plasma libre de hemolisis. entre sus funciones básicas se encuentran la indicación y la interpretación a primera instancia de los resultados de ésta.