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Microbiología

De:

Wagner Junior Delgado Arteaga
Docente:

DR. Dolores Vázquez
Curso:

3er nivel “A”

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Tinción de Gram 3 Colorantes que se utilizan en la Tinción de Gram 3 Técnica de la coloración Gram 4 Para qué sirven el método de Gram en la Tinción 6 Fundamentos de diferenciación de Gram positivo y Gram negativo 7 Ejemplo de las bacterias con la tinción de Gram 9 11 Glosario Bibliografía 12 2 .Índice Temas Pág.

. ayudando a arrastrar el colorante excedente que no haya fijado a las paredes celulares Safranina..actúa como un mordente.. y es usado en desinfectante de intensidad moderada externo. cachorros y gatos incluidos. Otros colorantes 3 . no debe ser usado para desinfección de la piel de estos animales. Yodo. es decir ayuda a la fijación del colorante previo que has aplicado Alcohol cetona. El violeta de genciana es muy venenoso para la mayoría de los animales. en histología y en citología. El violeta de genciana destruye células...es un colorante biológico. Colorantes que se utilizan en la Tinción de Gram Violeta de genciana.es el ingrediente activo en el colorante de Gram. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram.Tinción de Gram La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en Bacteriología para la visualización de bacterias.actúa en forma contraria. usado para clasificar bacterias. que desarrolló la técnica en 1884. considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella. de contraste que se utiliza en la Tinción de Gram para proporcionar un color violeta más intenso a las bacterias Gram+ y tiñe de rosa a las bacterias G. sobre todo en muestras clínicas. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana.

Acido pícrico Fucsina acida. proceder a realizar la extensión de la muestra en el portaobjetos mediante movimientos giratorios (dar vueltas con el asa) sobre la lámina.Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m. III. II. de tal forma que al terminar la extensión. IV. hacer que ésta tenga contacto con una lámina portaobjetos. Eosinato de azul de metileno. Eosina. Safranina 30 seg) Colorantes Básicos: I. la cual servirá para depositar la muestra contenida en el asa. Neutros: I. Sudan III Rojo escarlata Técnica de la coloración Gram Fijar un frotis Con la ayuda de un mechero. Con el asa (conteniendo la muestra) sobre la lámina portaobjetos. Colorantes Ácidos: I. VI. II. II. Una vez obtenida una pequeña cantidad de la muestra (con el asa). Indiferentes: I. Yodo 1m. Tionina cristal violeta violeta de genciana rojo neutro fucsina básica hematoxilina. Tomar el asa (previamente flameada) y con ésta tomar un poco de muestra. III. flamear un asa bacteriológica y esperar que enfríe un poco. lavado con alcohol. 4 . II. tengamos como producto una espiral en la parte media de la lámina. Eosinato de azur de metileno. V.

violeta de genciana. Se deja actuar al colorante por 1 minuto. El calor deseable es aquél en el que el portaobjetos sea apenas demasiado caliente para ser colocado sobre el dorso de la mano. El mordiente es cualquier sustancia que forma compuestos insolubles con colorantes y determina su fijación en las bacterias. Para esto se utiliza el gotero del frasco del decolorante. se aplica como mordiente yodo o lugol durante 1minuto más. El chorro debe ser un chorro delgado. puesto que el calor excesivo puede cambiar la morfología celular de las bacterias a observar. acetona o alcohol-acetona. hasta 5 . Esta tinción de 1 minuto está dada para trabajar a una temperatura ambiente de 25 °C. teniendo en cuenta que el calor no debe ser directo (sólo se pasa por la llama). Para realizar el lavado. hasta que ya no escurra más líquido azul. También el enjuague se debe realizar poniendo la lámina portaobjetos en posición inclinada hacia abajo.. etanol al 95 %. aproximadamente de medio a un milímetro de espesor. se recomienda sea al 1%. el frotis se decolora con etanol al 75 %.. como para lograr cubrirla por completo. ésta debe caer sobre la parte superior de la lámina que no contiene muestra. Enjuague Al transcurrir el minuto. se debe enjuagar la lámina conteniendo la muestra con agua corriente. Mordiente Una vez enjuagado el portaobjetos. Tinción Con violeta cristal.Esperar que seque al aire libre o ayudarse con la llama de un mechero para fijar la muestra. Se van añadiendo cantidades suficientes del decolorante. Decoloración (paso crítico) Pasado el minuto de haber actuado el mordiente. se debe tener en cuenta que el chorro de agua NO debe caer directamente sobre la muestra. La solución de cristal violeta. azul de metileno o en todo caso tinta china utilizando una cantidad suficiente de dicho colorante sobre la muestra.

En un primer momento las bacterias se tiñen con violeta de genciana (derivado metilado anilínico) y después se tratan con la solución de Gram (1 parte de yodo. por último se lavan con alcohol etílico. hasta que ya no escurra más líquido azul. se procede a enjuagar la lámina con agua. 2 partes de yoduro potásico y 300 partes de agua). dejar actuar durante 1 minuto. Nuevo enjuague Pasado el minuto correspondiente. Tinción de contraste Una vez que la lámina ya secó. es decir. procedemos a teñir nuevamente. se escurre el agua sobrante y se seca en la forma anteriormente descrita. ya tendremos listo el frotis para su respectiva observación microscópica. lo que tiene como consecuencia una menor fiabilidad y reproducibilidad. Lavado y secado Lavar con agua para quitar los residuos de decolorante y esperar que seque la lámina al aire libre o con la ayuda de la llama de un mechero de la forma anteriormente descrita. y unas bacterias 6 . El método tradicional de tinción Gram es un proceso largo y complejo que requiere de experiencia técnica y de numerosas etapas manuales. Para qué sirven el método de Tinción de Gram La tinción de Gram es una prueba esencial y obligatoria a realizar en el laboratorio de microbiología.lograr que éste salga totalmente transparente. pero esta vez se va a utilizar un colorante de contraste como por ejemplo la safranina. Es una etapa preliminar que se utiliza para diferenciar las bacterias Gram positivas de las Gram negativas. desarrollado por el médico danés Hans Christian Joachim Gram. es un procedimiento utilizado universalmente. Es el método de identificación de bacterias mediante una tinción específica. De esta manera.

Algunas bacterias presentan capacidad variable de tinción de Gram y se llaman Gram variables. la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada. La membrana exterior está hecha de proteína. Bacterias Gram positivas típicas son los estafilococos que producen forúnculos. ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana. y las Gram positivas lo poseen en mucha mayor proporción que las Gram negativas. además de dos clases de ácidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática.retienen el fuerte color azul de la violeta de genciana y otras se decoloran por completo. Se denominan bacterias Gram positivas a aquellas que retienen la tinción azul y bacterias Gram negativas a las que quedan decoloradas. 7 . se encuentra el ácido lipoteicoico. Gram variables son los bacilos de Koch de la tuberculosis. y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior (de composición distinta a la interna) por medio de lipoproteínas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoproteínas. ambos tipos de bacterias se tiñen diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su pared. Fundamentos de diferenciación de Gram positivo y Gram negativo Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglicano. y más en la superficie. el ácido teicoico que está anclado solamente en el peptidoglicano (también conocido como mureína) Por el contrario. Gram negativas representativas son la Escherichia coli de la flora intestinal o los bacilos de la tos ferina. A veces se añade una contratinción con fucsina o eosina para teñir las bacterias decoloradas de color rojo y hacerlas más visibles. fosfolípido y lipopolisacárido. Por lo tanto. La clave es el peptidoglicano.

no son susceptibles a la acción del solvente orgánico. lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo.La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración. sino que este actúa deshidratando los poros cerrándolos. como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. y por lo tanto este complejo se escapa. al poseer una pared celular más resistente y con mayor proporción de peptidoglicanos. perdiéndose la coloración azul-violácea. 8 . las Gram positivas. se debe a que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgánicos. La capa de peptidoglucano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se formó previamente. Pero por el contrario. Ejemplo de las bacterias con la tinción Bacterias Escherichia coli (Gram negativas) vistas al microscopio tras ser teñidas con la tinción de Gram. y manteniendo la coloración azulviolácea.

El resto son leucocitos atacando la infección. Si hubiera una especia de bacteria Gram negativa apareceria de color rosa.Bacterias Gram positivas de Bacillus anthracis (bacilos morados) que producen una enfermedad llamada Carbunco. encontrados en una muestra de líquido cerebroespinal. Una tinción Gram en la que observamos un mezclado de Staphylococcus aureus (Coco Gram positivo) y Escherichia coli (bacilo Gram negative) 9 .

para la desinfección de agua en emergencias y como un reactivo para la prueba del yodo en análisis médicos y de laboratorio. Hematoxilina.este producto se emplea frecuentemente como desinfectante y antiséptico.es un colorante ácido.. de uso ampliamente extendido en el ámbito industrial. conocida también con el nombre de palo de campeche. Como curiosidad. Fucsina.. * musculatura: anaranjado * cromatina rojo. Eosina.los fosfolípidos son un tipo de lípidos anfipáticos compuestos por una molécula de glicerol..es un compuesto que se obtiene de la planta leguminosa haematoxylum campechianum l. en forma de polvo rojo cristalino. a la que se unen dos ácidos grasos (1. en las tinciones de mallory. da estos resultados: * colágeno: azul oscuro. también se utiliza en la coloración de la gasolina Mordiente. por lo cual se denomina basófilo (ya que tiene afinidad por las sustancias alcalinas)..la fucsina ácida es un colorante magenta utilizado en histología. Este término es usado principalmente en la industria textil Fosfolípidos..el mordiente es una sustancia empleada en tintorería que sirve para fijar los colores en los productos textiles. 10 . desde la industria textil hasta el estudio biológico e histológico. van gieson y tricrómica de masson. Y dependiendo del tejido a teñir.Glosario: Lugol... amarillo opaco. Es un producto natural que al ser oxidado constituye una substancia de color morado oscuro denominada hemateína. La función del mordiente es favorecer la fijación del colorante en las fibras.2-diacilglicerol) y un grupo fosfato.

com/2011/10/como-realizar-una-tincion-degram.html 11 .answers.google.com/question/index?qid=20111014141321AAVOqN O http://www.yahoo.shtml http://books.com/question/index?qid=20060909112406 AAhjBR6 http://espanol.answers.http://es.Bibliografía.yahoo.yahoo.ec/books?id=Nxb3iETuwpIC&pg=PA69&lpg=PA 69&dq=tincion+de+gram+que+colorantes+emplea&source=bl&ots=z82quK 92qD&sig=S_q9mlom09dMN4KtQi9Z2WMes0&hl=es&sa=X&ei=EoWJUeinKIX50gG_woHAB g&ved=0CGAQ6AEwBQ#v=onepage&q=tincion%20de%20gram%20que% 20colorantes%20emplea&f=false http://mediens.com/question/index?qid=2008092606330 2AAzfQ7Z http://espanol.monografias.blogspot.wikipedia.yahoo.answers.com/trabajos15/tinciones/tinciones.com.answers.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram http://espanol.com/question/index?qid=20060909112406 AAhjBR6 http://espanol.