You are on page 1of 14

BASES FISIOLOGICAS PARA EL MANEJO DE LA FBN EN ESPECIES FORRAJERAS: ALFALFA Ing. Agr. Roberto W. Racca e Ing. Agr.

Norma Gonzlez ( IFFIVE- INTA Crdoba e INTA BALCARCE, respectivamente ) Una caracterstica destacada de la alfalfa es el alto contenido de N total que, casi exclusivamente en forma de protenas y aminas, se ubica principalmente en las hojas. Comparado con otras especies, el forraje de alfalfa tiene un mayor contenido de protenas y por consiguiente, altos requerimientos nitrogenados (2, 11). En condiciones de regado, Ball y Teneyck (1) y Roth et al. (17) determinaron que para producir 21.3 y 47.5 tn de materia seca (MS) ha-1 ao-1, la alfalfa extrae entre 784 y 1120 kg de N ha-1, respectivamente. En condiciones de secano, Romero et al. (15) establecieron que una produccin de alfalfa de 15 tn MS ha-1 ao-1 utiliza 450 kg de N ha-1. Dentro de los ciclos biogeoqumicos de los minerales, el del N es posiblemente uno de los ms complejos, ya que el elemento se encuentra en condiciones naturales en diferentes estados de oxidacin, que van desde +5 a 3, formando compuestos estables. El N es imprescindible para el crecimiento vegetal. Sin embargo, a pesar de que la atmsfera contiene aproximadamente un 78% de N2, las plantas superiores no pueden utilizarlo directamente en su nutricin. Esto es as porque la triple ligadura que une los dos tomos del N2 es una de las ms fuertes que se conocen en la naturaleza. Solamente algunas bacterias, entre ellas las Rizobiaceas, poseen un complejo enzimtico denominado nitrogenasa, que les permite romper esas triples ligaduras a temperatura y presin ambientales normales, necesitando para ello de energa metablica (ATP), que debe ser provista por la planta hospedera con la que la bacteria debe asociarse para que el proceso natural de fijacin biolgica del nitrgeno (FBN) ocurra. El establecimiento de la simbiosis fijadora de nitrgeno es el resultado de una compleja serie de eventos coordinados de comunicacin, reconocimiento y diferenciacin entre la planta de alfalfa y su bacteria especfica. Cuando estos pasos se cumplen, la manifestacin de la simbiosis es la formacin de un nuevo rgano vegetal: el ndulo. Este ltimo est habitado por las bacterias simbiticas que, transformadas en bacteroides, son capaces de cumplir con el proceso de reduccin del N2 a NH3 (10). Normalmente, la alfalfa satisface gran parte de sus requerimientos nitrogenados por medio de la FBN, a travs de su relacin simbitica con la bacteria Sinorhizobium meliloti. Heichel et al. (8) estimaron que la alfalfa puede derivar de la FBN entre 43 y 64% de sus requerimientos totales de N. Se ha determinado que el cultivo puede fijar entre 50 y 740 kg de N2 ha-1 ao-1, con un promedio de aproximadamente 200 kg de N2 ha-1 ao-1 (20, 8, 9). Este amplio rango en las estimaciones de N2 fijado est condicionado por una serie de factores, entre los que se incluyen la cepa del rizobio y su interaccin con el genotipo de la planta, las condiciones ambientales (pH, contenido de P y K del suelo, disponibilidad de agua, radiacin, temperatura etc.) y las alternativas de manejo del cultivo (21). Existe una profusa informacin fisiolgica, bioqumica y genmica referente a la simbiosis entre Sinorhizobium meliloti y varias especies del gnero Medicago, entre

INTA IFFIVE (Crdoba) y

EEA Balcarce INTA.

ellas la alfalfa (7, 12, 5). Sin embargo, el estudio de la magnitud del proceso de FBN a campo y su relacin con los rendimientos no es tan frecuente, dada la complejidad de las interacciones que se establecen entre la planta, la bacteria y su ambiente. Valorar la importancia de la FBN en la alfalfa y los factores que la condicionan, es trascendente para la sustentabilidad de los sistemas de produccin que la incluyen. Si este cultivo no pudiera satisfacer la mayor parte de sus altos requerimientos de N a travs de la FBN, disminuira significativamente sus rendimientos y la fertilidad nitrogenada de los suelos en los que crece. Esto afectara la productividad de los cultivos agrcolas que le siguen en la rotacin y obligara al empleo de fertilizantes qumicos, con el consiguiente impacto econmico y ambiental. Entre 1993 y 1997 el INTA gener un Proyecto Nacional titulado Fijacin Biolgica del Nitrgeno en Alfalfa para el Desarrollo Sostenible de los Sistemas Agrcolo Ganaderos (PRONALFA). Su objetivo principal fue determinar la contribucin de la FBN a la nutricin nitrogenada de la alfalfa (% de N derivado de la atmsfera) y evaluar el impacto que sobre este proceso tienen los factores de clima y suelo. En el marco del mismo se implementaron ensayos en Rafaela (Santa Fe), Manfredi (Crdoba), Anguil (La Pampa), General Villegas (Buenos Aires) y Barrow (Buenos Aires), localidades ubicadas en las reas pampeanas tradicionalmente productoras de alfalfa, que representaban combinaciones particulares de condiciones edficas (rango textural de franco-arcilloso a franco-arenoso) e hdricas (precipitaciones anuales de 950 mm en la zona hmeda a 630 mm en la zona semirida). Todos los suelos presentaban valores de P que excedan los niveles crticos para alfalfa, excepto Barrow, cuyos valores fueron corregidos por fertilizacin. A continuacin, y sobre la base de la informacin generada por el PRONALFA (13), se analizarn diversos aspectos involucrados en la dinmica de la nutricin nitrogenada del cultivo de alfalfa en la Regin Pampeana bajo condiciones de secano.

Produccin de forraje y acumulacin de nitrgeno

La produccin promedio de forraje durante los cuatro aos en que se condujeron los ensayos del proyecto, fluctu entre 5.767 kg ha-1 ao-1 de MS en Barrow (con una limitacin severa de profundidad del suelo por presencia de una capa de tosca entre 40 y 60 cm y los valores ms bajos de temperatura y radiacin) y 16.582 kg ha-1 ao-1 de MS en Rafaela (sin limitantes edficas importantes y con los mximos valores de temperatura y radiacin de todos los sitios ensayados) (Figura 1). Estos valores estn comprendidos en el rango experimental de rendimiento de forraje citado por Rossanigo et al. (16) para cultivares bajo corte. En general, se observ que la variabilidad en la produccin de forraje a lo largo del proyecto fue ms importante entre localidades que entre campaas dentro de cada localidad. El promedio de acumulacin total de nitrgeno, considerando las cuatro campaas de evaluacin en cada localidad, vari entre 193 y 550 kg N ha-1 ao-1 para Barrow y Rafaela, respectivamente. En la Figura 2 se presentan los valores promedio para cada campaa en cada localidad.

FIGURA 1: Produccin de materia seca (MS) de alfalfa en secano durante cuatro campaas en cinco localidades de la Regin Pampeana. Los segmentos verticales representan el error estndar. Adaptado del Proyecto PRONALFA (13).

FIGURA 2: Acumulacin de nitrgeno en forraje de alfalfa producido en secano durante cuatro campaas en cinco localidades de la Regin Pampeana. Los segmentos verticales representan el error estndar. Adaptado del Proyecto PRONALFA (13).

Aporte de Nitrgeno por fijacin biolgica La cantidad de Nitrgeno aportada por la fijacin biolgica, estimada a travs de la tcnica del valor A con el uso de 15N propuesta por Rennie et al. (14), fluctu entre 28,7 y 79,4 % (Cuadro 1).

CUADRO 1. Porcentaje de Nitrgeno derivado de la fijacin biolgica respecto del contenido total de N en biomasa area de alfalfa en ensayos conducidos por cuatro temporadas en cinco localidades de la Regin Pampeana. Adaptado del Proyecto PRONALFA (13).

.
Localidad Anguil Barrow Manfredi Rafaela Villegas Promedio 93/94 60.2 70.1 58.8 64.8 79.4 66.6

Campaa 94/95 39.8 48.7 49.7 45.8 54.9 47.8 95/96 28.7 53.1 32.1 69.8 52.5 47.2 96/97 52.6 45.3 44.5 78.8 63.9 57.0 Promedio 42.00 54.06 43.44 65.80 60.64

53.18

Haciendo una evaluacin global por temporada, se aprecia que -en lneas generales- el porcentaje de N derivado de la FBN fue mximo en la primera, disminuy en la segunda y tercera y se increment nuevamente en la cuarta. Este comportamiento se vio influenciado principalmente por la disponibilidad de agua, tanto de las precipitaciones como del acceso a la napa fretica que se experiment en algunas localidades (Cuadro 2). En la Figura 3 se presenta la evolucin de la cantidad de nitrgeno fijado (kg N ha ) en cada localidad y para las cuatro temporadas en las que se condujeron los ensayos. Claramente se aprecia que los mayores valores de FBN correspondieron a Rafaela y General Villegas, en tanto que los menores valores se observaron en Barrow y Anguil. Es interesante resaltar que durante las dos primeras campaas, an con una produccin de forraje por debajo de otras localidades (Figura 1), General Villegas registr los mayores aportes de nitrgeno derivados de la FBN, como consecuencia de su mayor porcentaje de fijacin (Cuadro 1).
-1

Analizando los valores de FBN por localidad, pero considerando conjuntamente las cuatro temporadas, se observ que los valores promedio de fijacin oscilaron entre 102 y 349 kg N ha-1 ao-1 para las localidades de Barrow y Rafaela, respectivamente. El promedio general de FBN para el conjunto de temporadas y localidades alcanz los 217,2 kg N ha-1 ao-1 (13). Todos estos valores (rango y promedio general) son muy similares a los informados por Vance et. al. (21).

CUADRO 2: Evapotranspiracin potencial de cultivo o ETc (mm), consumo de agua (mm), aporte de la napa fretica (mm y %) y deficiencia de agua (mm) en ensayos de alfalfa conducidos por cuatro temporadas en cinco localidades de la Regin Pampeana. Adaptado del Proyecto PRONALFA (13).

Localidad Campaa

ETc (mm)

Deficiencia Deficiencia de agua con de agua sin Consumo de Aporte de la Aporte de la aporte de aporte de napa napa Agua napa napa (%) (mm) (mm) (mm) (mm)

Anguil

Barrow

Manfredi

Rafaela

Villegas

93/94 94/95 95/96 96/97 Media 93/94 94/95 95/96 96/97 Media 93/94 94/95 95/96 96/97 Media 93/94 94/95 95/96 96/97 Media 93/94 94/95 95/96 96/97 Media

1460 1602 1434 1464 1490 1275 1340 1389 1325 1332 1418 1476 1283 1527 1426 1428 1526 1510 1401 1466 1389 1369 1499 1483 1435

701 564 582 749 649 762 713 718 739 733 760 819 823 728 783 891 1034 922 738 896 863 933 946 634 844

0 0 0 0 =0 0 0 0 0 =0 0 339 320 98 =757 77 409 150 331 =967 192 118 280 0 =590

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 41.4 38.9 13.5 24.2 8.6 39.6 16.3 44.9 27.0 22.2 12.6 29.6 0 17.5

759 1038 852 808 841 513 627 671 586 599 658 657 460 799 643 537 492 588 663 570 526 436 553 849 591

759 1038 852 808 841 513 627 671 586 599 658 996 780 897 833 614 899 738 994 811 718 554 833 849 738

De acuerdo con Collino et al. (3), las condiciones de temperatura, radiacin y disponibilidad de agua (precipitacin mas aporte de napa ) podran explicar mayormente las variaciones en produccin de forraje y FBN entre localidades y entre temporadas dentro de cada localidad. La evapotranspiracin calculada (ETc) fue similar entre localidades, excepto en Barrow donde los menores valores de radiacin y temperatura determinan condiciones de menor demanda atmosfrica (Cuadros 2 y 3). El consumo de agua del cultivo fluctu entre 44% y 61% de la ETc en Anguil y Rafaela, respectivamente, indicando que en todas las localidades hubo importantes deficiencias de agua. Sin embargo, esas deficiencias no estuvieron directamente relacionadas con la precipitacin efectiva en Manfredi, Rafaela y General Villegas, porque en estas localidades hubo aporte de agua desde la napa fretica. Si bien este aporte fue variable, no slo entre estas localidades sino tambin entre campaas dentro de localidades, result de un efecto significativo para mitigar -al menos en parte- la eventual escasez de

humedad.. En este contexto, si no se hubieron producido los aportes de la napa, las deficiencias hdricas hubiesen sido similares en Anguil, Manfredi y Rafaela. La combinacin de aportes de agua por precipitaciones y napa fretica hizo que las menores deficiencias se registraran en Rafaela, General Villegas y Barrow, mientras que en Manfredi se presentaron valores intermedios y en Anguil se verificara la condicin hdrica ms desfavorable.

FIGURA 3 Cantidad de N (kg N ha-1 ) derivado de la fijacin biolgica en forraje de alfalfa producido en secano durante cuatro campaas en cinco localidades de la Regin Pampeana. Los segmentos verticales representan el error estndar. Adaptado del Proyecto PRONALFA (13).

CUADRO 3 Valores promedio para el perodo 1993/97, con sus correspondientes coeficientes de variacin (entre parntesis), de temperaturas mxima (T.mx.) y mnima (T.mn.), radiacin solar (Rad.), evapotranspiracin potencial de referencia (ETo), precipitaciones (Pp.) y deficiencia hdrica climtica (ETo-Pp.) para cinco localidades de la Regin Pampeana. Adaptado del Proyecto PRONALFA (13).

Localidad Anguil Barrow Manfredi Rafaela Villegas C.V.

T.mx.
C 23.0 (1,2) 20,6 (1,7) 24,0 (2,3) 24,8 (2,7) 22,7 (3,4) (6,7)

T.mn.
C 8.1 (7,5) 7,7 (6,1) 9,9 (3,3) 12,0 (2,1) 8,4 (6,8) (18,2)

Rad.
MJ m
-2

Eto
Mm 1625 (3,0) 1459 (2,5) 1562 (6,2) 1622 (7,7) 1571 (5,1) (6,1)

Pp.
mm 763 (33,8) 838 (13,1) 636 (13,2) 806 (21,8) 760 (17,9) (21,3)

ETo-Pp.
Mm 862 (42,4) 621 (17,9) 925 (20,2) 816 (41,6) 811 (31,3) (32,6)

15,3 (2,1) 15,3 (1,8) 15,8 (4,1) 16,7 (2,6) 15,7 (3,8) (4,1)

De todo lo anterior, se puede concluir que los alfalfares de la Regin Pampeana, como promedio general, derivan de la FBN el 53% del nitrgeno total que acumulan en su biomasa area, con un rango va del 79 al 29% y que depende de la interaccin plantaambiente. En ese contexto, la disponibilidad de agua constituye un factor de primer orden para la determinacin de la magnitud de la FBN.

Rizobios en el suelo y el sistema nodular La informacin provista por el Proyecto PRONALFA tambin ha permitido comprobar que habitualmente en los suelos alfalferos de la Regin Pampeana existen poblaciones nativas o naturalizadas de Sinorhizobium meliloti, capaces de nodular especies de los gneros Medicago, Melilotus y Trigonella. Estas poblaciones de rizobios se encuentran en nmero variable y a distintas profundidades. Con frecuencia, en los muestreos iniciales cercanos a la siembra, las tcnicas de deteccin habituales de estos microorganismos arrojan resultados negativos (13). Sin embargo, cuando los cultivos no inoculados comienzan a desarrollarse, aparecen ndulos espontneos, que son consecuencia de la estimulacin que ejercen las plantas de alfalfa sobre estas poblaciones de muy bajo nmero de individuos por gramo de suelo (4). Esto ha sido confirmado en nuevos ensayos conducidos en Balcarce y en Punta Espinillo (Uruguay), donde en suelos aparentemente libres de rizobios especficos para alfalfa en el momento de la siembra, se detect en la primavera siguiente que el 25% de los ndulos estaban ocupados por una cepa diferente de la inoculada (A. Grassano y A. Ronchi, UN La Pampa, comunicacin personal). En esas zonas, y principalmente en Uruguay, la carga inicial no detectable de S. meliloti en los suelos condiciona una implantacin muy dificultosa del cultivo (C. Labandera, R. O. Uruguay, comunicacin personal). Durante la conduccin de los ensayos del Proyecto PRONALFA, la observacin de los sistemas radicales de alfalfa a lo largo del perfil de suelo permiti la deteccin de ndulos en toda la raz, hasta profundidades superiores a 1 m. La distribucin de los ndulos en el perfil present usualmente gran variabilidad y no pareci estar ligada al tipo de suelo, excepto en Barrow donde la presencia de un horizonte petroclcico definido plantea serias limitaciones para el desarrollo de las plantas. En aquellos tratamientos del Proyecto PRONALFA en los que se sembr semilla de alfalfa inoculada, los rizobios que se incorporaron con el inoculante fueron capaces de formar ndulos en todas las temporadas, tanto en superficie como en profundidad, lo que indica que las cepas introducidas fueron capaces de persistir y competir eficientemente con las cepas naturalizadas. En respuesta a la inoculacin, e independientemente de la poblacin de Sinorhizobium meliloti que se halla naturalizada en el suelo, durante el ao de implantacin y en los primeros 30 cm de profundidad, aparecieron ndulos asociados a la raz principal o a races secundarias en desarrollo. Los ndulos de alfalfa, cuando son nuevos tienen forma unilobulada o alargada; a medida que se siguen desarrollando adquieren aspecto palmado, y finalmente -si logran persistir- forman ramilletes coraloides o racimos (Figuras 4 y 5).

FIGURA 4 Ndulos de alfalfa de forma alargada, detectados a profundidades cercanas a los 30 cm durante el ao de implantacin del cultivo. Adaptado de Proyecto PRONALFA (13).

FIGURA 5 Ramilletes coraloides de ndulos de alfalfa detectados durante el tercer ao de vida del cultivo. Adaptado de Proyecto PRONALFA (13).

Los ndulos de alfalfa son de tipo meristemtico y de crecimiento indeterminado. Estas caractersticas, frente a situaciones de estrs moderado (corte, defoliacin, sequa, etc.), hacen que aunque una parte o la totalidad del tejido funcional que participa en la FBN pueda morir, el meristema nodular persista y sea capaz de regenerar el crecimiento cuando la situacin de estrs se revierta (18). La nodulacin inicial, expresada como porcentaje de plantas noduladas, es usualmente ms abundante en aquellos suelos que presentan altos contenidos de Ca2+ y un pH prximo a la neutralidad, porque en ellos la poblacin rizobial naturalizada es tambin mayor. En una etapa temprana, si no existen limitaciones en el suministro de P, el agua disponible en la porcin del suelo explorado por las races es el factor que regula

directamente la magnitud de la nodulacin. A pesar de que se ha sealado que niveles medianamente altos de materia orgnica conllevan un alto potencial de mineralizacin y, por lo tanto, podran desalentar la nodulacin (6), sta no se vio comprometida en los ensayos del Proyecto PRONALFA (13). A medida que avanza el ciclo del cultivo y las races profundizan en el suelo, es frecuente la no deteccin de ndulos en los primeros 30 40 cm del perfil; ello no implica que la alfalfa los haya perdido, sino que stos se desarrollan a mayor profundidad. Como la emisin de races nuevas est gobernada por la disponibilidad de agua, cuando la humedad de los estratos superficiales del suelo se va agotando, el sistema radical de la alfalfa -si no encuentra mayores limitaciones- va profundizando y emitiendo raicillas capaces de aprovechar el contenido de agua subsuperficial. Estas raicillas son receptivas a las clulas de S meliloti y pueden formar nuevos ndulos en profundidad (Figura 6), que en algunos casos pueden superar el metro. La formacin de stas nuevas raicillas sera la clave para la dinmica de nodulacin en profundidad.

FIGURA 6 Ndulos de aspecto coraloide encontrados a una profundidad cercana a los 70 cm en races de alfalfa de 2 aos de edad. Adaptado de Proyecto PRONALFA (13).

La observacin de sistemas radicales sin disturbar, en suelos bajo una intensa sequa, muestra que los primeros 30-40 cm de raz principal son muy pobres en raicillas secundarias y prcticamente sin ndulos. Por el contrario, en una situacin sin limitaciones hdricas, se encuentra gran abundancia de nuevas raicillas cortas, unidas a la raz principal, que albergan ndulos nuevos. An bajo condiciones de sequa, se observa la existencia de ndulos persistentes en profundidad, en ramilletes coraloides o en racimos (19), que en ocasiones pueden llegar a dimetros superiores a 1 cm. Esto sugiere una estrategia de supervivencia diferente para este tipo de ndulos. La masa nodular profunda parece ser bastante independiente de las condiciones ambientales. Sus ndulos seran capaces de otorgar estabilidad al sistema de FBN, satisfaciendo en gran parte los requerimientos nutricionales nitrogenados del cultivo. Contrariamente, los ndulos de las capas superficiales del suelo, al ser ms dependientes de las condiciones edafoclimticas (humedad y temperatura), pueden inactivarse, morir, o volver a formarse en funcin del crecimiento de raicillas y de la humedad disponible.

En funcin de todo lo precedente, Racca et al. (13) sugirieron que el sistema nodular superficial actuara como compensador de los mayores requerimientos nitrogenados del cultivo cuando se dan condiciones ambientales favorables para su crecimiento, en tanto que el profundo seria el responsable de la supervivencia del cultivo. La poblacin saproftica de Sinorhizobium meliloti tiende a aumentar en el suelo a travs de los primeros aos de cultivo, para posteriormente estabilizarse en funcin de las condiciones locales de clima y suelo. Aunque la inoculacin puede contribuir a alcanzar este equilibrio, se estima como ms importante el papel que juega la estimulacin provocada por los exudados radicales de la alfalfa. Por otro lado, y a travs del estudio de la dinmica de la ocupacin nodular en el Proyecto PRONALFA (13), se ha comprobado el fenmeno de competencia, tanto en el estrato superficial como en profundidad del perfil. En general, las cepas naturalizadas dominaron los sistemas nodulares en todos los sitios experimentales; sin embargo, en algunas campaas y localidades las cepas introducidas fueron las que formaron el mayor porcentaje de ndulos (Figura 7). Respecto de las cepas naturalizadas, la competitividad de las cepas introducidas fue elevada y vari desde 30% (Manfredi) a 75% (General Villegas) de ocupacin nodular en el estrato 0-30 cm y de 14% (Anguil) a 53% (General Villegas) a profundidades mayores. A lo largo de los aos, y como promedio general, la proporcin de ndulos ocupados por las cepas introducidas disminuy en el estrato de 0-30 cm de 57% en la primera mitad del proyecto a 31% en la segunda, mientras que a mayores profundidades la disminucin fue de 42% a 23%, respectivamente. Este comportamiento podra indicar una mayor persistencia de los ndulos formados a partir de cepas naturalizadas, o bien una mayor disponibilidad y/o competitividad de stas ltimas a travs del tiempo. En consecuencia, los resultados de productividad y de acumulacin de nitrgeno, as como tambin la proporcin de ste que proviene de la fijacin biolgica, parecen ser la consecuencia de una combinacin de la actividad de las cepas naturalizadas y las introducidas. Los datos del Proyecto PRONALFA permiten inferir que tanto las cepas naturalizadas como las introducidas han sido funcionales y eficientes en todos los sitios experimentales y a lo largo de todos los aos de ensayo. La presencia de ndulos a profundidades superiores a 1 m sugiere que las bacterias han llegado hasta esta profundidad arrastradas posiblemente por el agua. Con la nica excepcin de Barrow, probablemente debido a su condicin de suelo poco desarrollado por la presencia de tosca subusperficial, los alfalfares de todos los otros sitios exhibieron ndulos funcionales -y en algunos casos abundantes- an a los cuatro aos de implantados los cultivos. De manera general, con el envejecimiento del cultivo comenzaron a hacerse evidentes problemas sanitarios en las races. stos parecieron ser mayores en los suelos que presentaban en profundidad una textura ms arcillosa que en aquellos de textura ms gruesa. Paralelamente, se advirti en los suelos una gran actividad biolgica, asociada con frecuencia a plagas y/o enfermedades de la alfalfa. A profundidades de 40 a 60 cm se observaron abundantes races muertas o en proceso de degradacin, con evidencias de ataque -eventualmente secundario- de hongos. Las plantas cuyas races fueron daadas por gorgojos o corchosis y no pudieron llegar a la napa, no presentaron ndulos grandes en la corona y, en general, carecieron de ndulos en todo el perfil. No obstante, tambin se hallaron algunas races totalmente enfermas de las cuales surgan una o pocas raicillas, usualmente muy finas, que portaban uno o pocos ndulos de buen tamao (Figura 8).

80

Ndulos formados con cepas Introducidas (%)

60

C1P C1O C2 C3 C4P C4O

0-30 cm

40

20

0 + 30 cm 80

60

40

20

Anguil Barrow Manfredi Rafaela Villegas

FIGURA 7- Porcentajes de ndulos formados con cepas introducidas (marcadas con resistencia a antibiticos) respecto del total de ndulos encontrados a profundidades de 0-30 cm (grfico superior) y >30 cm (grfico inferior) en la primavera de 1993 (C1P), en el otoo de 1994 (C1O), en la primavera de 1994 (C2), en la primavera de 1995 (C3), en la primavera de 1996 (C4P), y en el otoo de 1997 (C4O) en cinco localidades de la Regin Pampeana. Adaptado del Proyecto PRONALFA (13).

FIGURA 8 Raz de alfalfa de 3 aos de vida que, pese a sus evidentes signos de deterioro, presenta algunas raicillas con ndulos activos y de gran tamao.

Si bien lo descrito en el ltimo prrafo no es la situacin comn, y se acepta generalmente que las races enfermas generan menos ndulos que las sanas, las observaciones comentadas aportaran evidencias de que la duracin de la simbiosis no sera la causa primera -y probablemente ni siquiera una importante- del decaimiento de los alfalfares y que la nodulacin, como fenmeno biolgico, se da aisladamente an en plantas enfermas. Sin embargo, una raz en estado sanitario deteriorado conlleva globalmente a una menor masa nodular y, como contrapartida, una raz sana mantiene un sistema nodular activo y vigoroso hasta bien entrado el quinto ao de vida del cultivo.

CONSIDERACIONES FINALES Como resumen de todo lo observado en el Proyecto PRONALFA puede decirse que tanto los rizobios preexistentes en el suelo (naturalizados) como los aportados por la inoculacin, fueron capaces de formar ndulos funcionales y eficientes en todos los sitios experimentales y a lo largo del ciclo de cultivo. Se observ la presencia de ndulos activos en races creciendo hasta profundidades superiores a 1,10m. Las cepas aportadas por el inoculante formaron, en promedio, el 50% del total de los ndulos recolectados durante las dos primeras campaas y el 27% durante las dos ltimas. Dentro de un amplio rango de produccin anual de forraje, el promedio general de N derivado de la FBN represent el 53% del total de N utilizado por el cultivo. Cuando no

se presentan limitaciones ambientales (especialmente sequas) muy marcadas, por cada 1000 kg de MS de alfalfa se incorporan aproximadamente 20 kg de N provenientes de la atmsfera. En ese contexto, la cantidad promedio de N derivado de la FBN, medida en relacin a la biomasa area, fue de 235 kg de N ha-1 ao-1, con mximos de 426 y mnimos de 113 kg de N ha-1 ao-1. La cantidad promedio de N derivado de la FBN, calculada en funcin de la biomasa total, area y radical, fue de 350 kg N ha-1 ao-1, con mximos de 639 y mnimos de 169 kg de N ha-1 ao-1 (13). En lneas generales, se puede concluir que en la Regin Pampeana el sistema de FBN en alfalfa funciona adecuadamente, aportando un porcentaje muy significativo del total del N requerido por el cultivo a lo largo de todo su ciclo de vida y, por lo tanto, favoreciendo la sustentabilidad del sistema agropecuario.

BIBLIOGRAFIA 1- BALL, J. A. and G. TENEYCK.1980. Top management on irrigated alfalfa produces top yields. Better Crops Plant Food 64: 16-19. 2- BICKOFF, E. M., G. O. KOHLER and S. SMITH. 1972. Chemecial Composition of Herbage. In: C. H. Hanson (ed.) Alfalfa Science and Technology. Chapter 12. Agronomy Series N15, ASA. Madison, WI, USA, pp. 247-282. 3- COLLINO, D., J. DARDANELLI, L. DE LUCA, and R. W. RACCA. 2005. Temperature and water availability effects on radiation and water use efficiencies in alfalfa. Aust. J. Exp. Agric. 45 (4) (en prensa). 4- DA, H. N. and S. P. DENG. 2003. Survival and persistence of genetically modified Sinorhizobium meliloti in soil. Applied Soil Ecology 22: 1-14. 5- DEL PAPA, M. F., M. PISTORIO, L. BALAGU, C. WEGENER, A. PERTICARI, K. NIEHAUS and A. LAGARES. 2003. A microcosm study on the influence of pH and the host plant on the soil persistence of different alfalfa-nodulating rhizobia. Biology and Fertility of Soils 39: 112-116. 6- DUSHA, I. 2002. Nitrogen control of bacterial signal production in Rhizobium meliloti-alfalfa symbiosis. Indian J. Exp. Biol. 40(9): 981-8. 7- GALIBERT, F. T. M. FINAN, S. R. LONG, A. PHLER, P. ABOLA, F. AMPE, F. BARLOY-HUBLER, M. J. BARNETT, A. BECKER, and P. BOISTARD. 2001. The composite genome of the legume symbiont Sinorhizobium meliloti. Science 293: 668-672 8- HEICHEL, G. H., C. P. VANCE, and D. K. BARNES. 1983. Symbiotic nitrogen fixation of alfalfa , birdsfoot trefoil and red clover. In J. A. Smith and VW Hays (eds.) Proc. 14th Int. Grassl. Congr. Westview Press, Boulder, CO, USA, pp. 336-339. 9- HEICHEL, G. H., C. P. VANCE, D. K. BARNES and K. I. HENJUM. 1984. Dinitrogen fixation, and N and dry matter partitioning during a four year alfalfa stand. Crop. Sci. 25: 101-105. 10-HIRSCH, A. M., M. R. LUM, and J. A. DOWNIE. 2001. What Makes the RhizobiaLegume Symbiosis So Special?. Plant Physiol. 127: 1484-1492

11-HOWARTH, R. E. 1988. Antiquality Factors and NonnutritiveChemical Components. In: En AA Hanson, DK Barnes and RR Hill, Jr. (eds) Alfalfa and Alfalfa Improvement. Agronomy Series N 29, Cap.15. ASA-CSSA-SSSA, Madison, WI, USA, pp. 493-514. 12-PISTORIO, M., L. BALAGU, M. F. DEL PAPA, A. PICH OTERO, A. LODEIRO, D. HOZBOR and A. LAGARES. 2002. Construction of a Sinorhizobium meliloti strain carrying a stable and non transmissible chromosomal single copy of the green fluorescent protein GFP-P64L/S64T. FEMS Microbiol. Letters 214: 165-170. 13-RACCA, R. W., D. COLLINO, J. DARDANELLI, D. BASIGALUP, N. GONZLEZ, E. BRENZONI, N. HEIN y M. BALZARINI. 2001. Contribucin de la Fijacin Biolgica del Nitrgeno a la nutricin nitrogenada de la alfalfa en la Regin Pampeana. ISBN 987-521-045-5. Ediciones INTA. Buenos Aires, Argentina, 56 p. 14-RENNIE, R. J., E. A. RENNIE and M. FRIED. 1978. Concepts of 15N usage in dinitrogen fixation studies. In Isotopes in Biological Dinitrogen Fixation Conference. IAEA, Viena, Austria. 15-ROMERO, N. A., C. BARIGGI y G. SCHENKEL. 1977. Exploracin de deficiencias nutritivas para la alfalfa en suelos pampeanos mediante ensayos de campo. INTA Anguil. Proyecto FAO-INTA Argentina 75/006. Documento de Trabajo N 3, 76 p. 16-ROSSANIGO, R., M. C. SPADA y O. BRUNO. 1995. Evaluacin de cultivares de alfalfa y panorama varietal en la Argentina. In E. H. Hijano y A. Navarro (eds.) La alfalfa en la Argentina, Cap. 4. ISSN 0327-3377. INTA. Enc. Agro de Cuyo, Manual N 11. Editar, San Juan, Argentina, pp. 63-78. 17-ROTH, R. L., B. GARNER, G. TRITZ, and E. LAKATOS. 1983. Alfalfa response to water and nitrogen variables. 13th California Alfalfa Symposium. Cal. Coop. Ext. Serv., University of California-Davies, USA. 18-STOUGAARD, J. 2000. Regulators and Regulation of Legume Root Nodule Development. Plant Physiol. 124: 531-540. 19-TIMMERS, A. C., E. SOUPENE, M. C. AURIAC, F. de BILLY, J. VASSE, P. BOISTARD, and G. TRUCHET. 2000. Saprophytic intracellular rhizobia in alfalfa nodules. Mol. Plant Microbe Interact. 13(11): 1204-13. 20-VANCE, C. P. 1978. Nitrogen fixation in alfalfa: an overview. In Proc 8th Annu. Alfalfa Symp., pp 34-41. 21-VANCE, C. P., G. G. HEICHEL, and D. PHILLIPS. 1988. Nodulation and Symbiotic Dinitrogen Fixation. In AA Hanson, DK Barnes and RR Hill, Jr. (eds) Alfalfa and Alfalfa Improvement. Agronomy Series N 29, Cap. 7. ASA-CSSASSSA, Madison, WI, USA, pp. 229-257.