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CUANTIFICACIN DE AZCARES REDUCTORES MEDIANTE MTODO DEL DNS Y DE BIOMASA POR PESO SECO Prctica de Laboratorio #4 Objetivos Logrados

1. Se realizo un reconocimiento general de las caractersticas, capacidades y utilidades de algunos equipos usados comnmente en el laboratorio, adems una breve introduccin al adecuado empleo de estos con el fin de obtener el mayor beneficio y aprovechamiento que estos ofrezcan. 2. La apropiacin de los mtodos espectrofotomtricos y de sus principios basados en la propiedad de absorcin de radiacin electromagntica de las molculas, adems del reconocimiento de su importancia en diferentes procesos tanto para microorganismos como para macromolculas en los cuales se necesita una cuantificacin de la cantidad de materia que se posee. 3. Se obtuvo un aprendizaje de gran valor en cuanto a la implementacin de dos mtodos de cuantificacin, los cuales permiten llegar a una relacin importante en funcin de la concentracin de un soluto por medio de la cual se puedan conocer posteriormente concentraciones desconocidas. Resultados Mtodo del Acido Dinitro Saliclico A continuacin se presentan en la Tabla los datos obtenidos en la primera parte de esta prctica, y las curvas de calibracin obtenidas para cada prueba con su respectivo ajuste. |Concentracin [g/L] |Absorbancia Prueba 1 |Absorbancia Prueba 2 | |0,25 |0,171 |0,149 | |0,5 |0,445 |0,462 | |0,75 |0,76 |0,776 | |1 |1,079 |1,116 |

[pic] [pic] Para esta primera parte del procedimiento vale la pena destacar que los datos obtenidos experimentalmente tienen una aproximacin muy cercana a la linealidad cumpliendo la ley de Beer con lo cual no queda duda de la eficacia en el empleo del reactivo DNS con el objetivo de obtener un espectro visible, la relacin obtenida por medio del ajuste de datos nos permite construir un modelo de ajuste a travs del cual podramos conocer la concentracin de una sustancias entre este rango de datos por medio de su absorbancia. Para este procedimiento se realizaron dos pruebas de cada una de las soluciones lo que permiti la realizacin de dos cuervas de calibracin, con lo cual se tena ms certeza en el resultado, en este caso efectivamente los porcentajes de diferencia entre ambas curvas fueron muy pequeos tanto en pendientes como en acercamientos a la idealidad (R2), agregando veracidad al procedimiento. Mtodo del Peso Seco

Para la segunda parte de la practica en la cual se intereso en obtener la masa de una cantidad de sustancia problema y junto con esta obtener concentraciones, para luego sacar de estas y de las diferentes lecturas entregadas por el espectrofotmetro la curva de Concentracin vs Absorbancia para la biomasa que se presenta en la grafica. |Concentracin [g/L] |Absorbancia para Biomasa | |1,25 |1,282 | |1,19 |1,117 | |0,6 |0,863 | |0,13 |0,362 |

[pic] Las soluciones llevadas al espectrofotmetro a 540nm presentaron unas medidas de absorbancia, que fueron correspondiendo a un patrn de proporcionalidad directa con respecto a las concentraciones calculadas por el peso de la biomasa seca en el papel, a partir de estos dos valores se pudo aproximar una funcin similar a una recta con pendiente positiva. El valor obtenido de R cuadrado cercano a 1 permite afirmar que el modelo es til para hallar concentraciones de este tipo de soluciones, aunque no asegura un valor exacto de esta.

Preguntas

1. Azcar Reductor Es un azcar que en su constitucin tiene un grupo carbonilo o aldehdo que se comporta como un agente reductor, a travs del cual pude reaccionar con otras molculas, reactividad que depende en si mismo de la disponibilidad de su grupo carbonilo. Tambin se considera que un azcar es reductor cuando puede oxidarse, por ejemplo, al hacer reaccionar glucosa con Br2/H2O, reactivo de Fehling o reactivo de Tollens, se transforma el aldehdo en cido carboxlico. En esta reaccin la glucosa se oxida (acta como reductor) y reduce al reactivo aadido. La glucosa se considera el azcar reductor ms abundante en el organismo, por lo cual su contenido en la sangre es vigilado cuidadosamente y sometido a regulacin por el mismo cuerpo. [pic] 2. Fundamentacin del Mtodo del DNS (Acido Dinitro saliclico). La reaccin consiste en agregar un acido como el dinitrisalicilico a un azcar que presenta propiedades reductoras como la glucosa, el azcar se oxida y el acido se reducir cambiando su color de amarillo a rojo. De este modo conociendo la cantidad de acido se podr conocer la cantidad del azcar presente en la solucin. Esta determinacin se realiza con la ayuda de un espectrofotmetro.

3. Fundamentacin del Mtodo de Miller Consiste en aplicar DNS a un azcar reductor en presencia de varios compuestos. Sal de Rochelle que evita la reaccin del DNS con el oxigeno disuelto, Fenol para incrementar la cantidad de color producido, Bisulfito de sodio para estabilizar el color en presencia de fenol e Hidrxido de sodio que se requiere para la accin reductora del azcar sobre el DNS. Conclusiones

Una de las cosas que permiti reconocer esta practica fue el hecho de como los principios de la espectrofotometra tiene una importante aplicacin en el trabajo con microorganismo y macromolculas, puesto que claramente se pudo observar que la absorbancia tiene una relacin directamente proporcional con la concentracin en la medida en que esta aumenta o disminuye segn sea la cantidad de soluto en la solucin. Lo anterior es de gran importancia pues esta relacin entre absorbancia y concentracin nos permite por ejemplo hacer un seguimiento y tener control sobre concentraciones de cierta especie durante un proceso.

El mtodo del DNS es una fuerte herramienta a la hora de evaluar la concentracin de un producto obtenido en un proceso biolgico en el cual las cantidades de concentracin de nuestro inters no presenten ningn contraste de tipo visible con respecto a la solucin y por lo tanto no podamos obtener valores de absorbancia directamente, siendo necesario medir la absorbancia de manera indirecta ayudados por los mecanismos de derivatizacin, a travs de los cuales una solucin reacciona formando un compuesto que da cuenta de la cantidad de su inicial.

A la hora de referirnos sobre la conveniencia de los mtodos espectrofotomtricos nos encontramos con una gran exactitud y eficiencia puesto que si lo comparamos con mtodos como la titulacin, al momento de calcular la concentracin de una solucin problema, los mtodo espectrofotomtricos presentan mejores resultados que las titulaciones ya que no se usa ningn tipo de agente qumico que interacte con la solucin, adems se pude realizar en una menor cantidad de tiempo y utilizando cantidades muy pequeas.

Al analizar los datos obtenidos en los dos mtodos empleados vemos como el valor para R2 es muy cercano a 1 al realizar el ajuste de los datos experimentales, lo anterior sugiere una alta confiabilidad al calcular valor de concentracin para estas soluciones, en el modelo matemtico sobre el que se fundamentan estos mtodos.

Otro texto de la consulta


1. Investigue ms acerca del mtodo de DNS y describe el fundamento del mtodo. El mtodo DNS (tcnica de miller) es una tcnica colorimtrica que emplea cido 3,5 dinitrosaliclico para la hidrlisis de polisacridos presentes en una muestra. Determina las absorbancias por medio de un espectrofotmetro a 540nm. Esta tcnica sirve para cuantificar los azucares reductores producidos durante una fermentacin o para cuantificar los productos de una reaccin enzimtica. La curva de calibracin es la representacin grfica en un eje de coordenadas, de la Absorbancia (eje de ordenadas: Y) frente a la Concentracin (eje de abscisas: X). Se ensayan varias soluciones de concentracin conocida y se determinan sus absorbancias, construyndose la curva de calibrado, que es una recta. La concentracin de una solucin problema (desconocida), se averigua por interpolacin de la Abs de la solucin en la curva de calibracin, o a travs de la ecuacin de la recta (y = mx +b) donde: Absorbancia (y) = constante (m) x concentracin + absorbancia del blanco. Fundamento. El DNS reacciona nicamente con los azcares reductores. La sacarosa es un disacrido no reductor, pero tras su hidrlisis en medio cido se liberan glucosa y fructosa que s son reductores y reaccionan con el DNS generando un producto coloreado. La intensidad del color, que se puede medir por mtodos espectrofotomtricos es proporcional a la concentracin de sacarosa. 2. Mencione otros mtodos de determinacin de carbohidratos. Fehling, Benedict, Somogy, Lane-Enyon, Hagerdorn-Hensen, etc., pero todos ellos se basan en el mismo principio: Todos los azcares con un grupo aldehdo libre o un grupo cetnico se clasifican como azcares reductores y se transforman fcilmente en enedioles (reductonas) al calentarlos en soluciones alcalinas; dichos enedioles son altamente reactivos y se oxidan fcilmente en presencia de oxgeno u otros agentes oxidantes, por lo tanto, los azcares en solucin alcalina rpidamente reducen iones oxidantes como Ag+, Hg+, Cu2+ y Fe(CN)63- y los azcares se oxidan formando mezclas complejas de cidos. Esta accin reductora es la que se utiliza tanto en las determinaciones cualitativas como cuantitativas. 3. Mencione algunas aplicaciones y ventajas del mtodo DNS. Esta tcnica es aplicable a todos los procedimientos de sistemas de cultivos de medios lquidos y slidos cuya molcula de sustrato sean azcares reductores como glucosa, xilosa, entre otros Ventajas

Simple, la coloracin final desarrollada es estable durante 24 hrs, sensible y adaptable durante la manipulacin de un gran nmero de muestras a la vez. Es til en la determinacin de azcares reductores en solucin. 4. Qu son los azcares reductores? Es un azcar que tiene un grupo aldehdo, cetona, hemicetal, o hemiacetal, pudiendo reducir a una agente oxidante (Ag+ o Br2). Debido a que la reaccin slo se produce con azucares que pueden revertir a la forma de cadena abierta, todos los monosacridos son azcares reductores. 5. Mencione 5 ejemplos de azcares reductores D-Glucosa L-Fucosa D-Fructuosa D-Manosa D-Xilosa