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UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS


ESCUELA INGENIERIA AGRICOLA MENCION AGROINDUSTRIAL ASIGNATURA: MICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS 2 TRABAJO AUTNOMO N 1 TEMA: DESCRIPCIN DE LOS MATERIALES DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS Y SUS FUNCIONES DOCENTE: DRA. TAMARA BORODULINA ESTUDIANTE: DIANA CAJAPE TUBAY CURSO: 2DO A FECHA: JUNIO 2013 CAMPUS GUAYAQUIL

MATERIALES DE LABORATORIO INTRODUCCION El laboratorio de Microbiologa es un lugar altamente habilitado donde se pueden examinar microorganismos. Este tipo debe ser llevado a cabo con una buena asptica y por tanto se requiere un laboratorio limpio y ordenado. Por ello trabajamos siempre en condiciones de esterilidad. En el laboratorio de microbiologa encontraremos condiciones de cmara de seguridad biolgica o bien en la llama del mechero de alcohol o de gas. Adems de un ambiente apto para el trabajo microbiolgico, el laboratorio de microbiologa requiere una

instrumentacin bsica para llevar a cabo estudios elementales. El laboratorio deber estar en diseado de manera que permitir fcilmente su limpieza, con poyatas impermeables y resistentes a cidos y disolventes orgnicos, como fregaderos y grifos. Estos podran ser los equipos y el material necesario: Materiales Matraces Pipetas Vaso precipitacin Cajas Petri Probetas Tubos de ensayo Embudos Soporte universal Mecheros Asas de siembra Microscopio Balanzas Esterilizador Bao de maria Ogye Leifson Oxoid Potato agar dextrosa Capsula Mortero de Probetas Equipos Autoclave Horno Pasteur Incubadoras Medios de cultivo Agar nutritivo Mac conkey agar Lauril sulfato caldo

Matraz de Erlenmeyer El matraz o frasco de Erlenmeyer es un frasco transparente de forma cnica con una abertura en el extremo angosto, generalmente prolongado con un cuello cilndrico, suele incluir algunas marcas. Por su forma es til para realizar mezclas por agitacin y para la evaporacin controlada de lquidos; adems, su abertura estrecha permite la utilizacin de tapones. El matraz de Erlenmeyer no se suele utilizar para la medicin de lquidos ya que sus medidas son imprecisas. Fue diseado en el ao 1861 por el qumico alemn Emil Erlenmeyer Probeta La probeta o cilindro graduable es un instrumento volumtrico, que permite medir volmenes superiores y ms rpidamente que las pipetas, aunque con menor precisin. Est formado por un tubo generalmente transparente de unos centmetros de dimetro, y tiene una graduacin (una serie de marcas grabadas) desde 0 ml (hasta el mximo de la probeta) indicando distintos volmenes. En la parte inferior est cerrado y posee una base que sirve de apoyo, mientras que la superior est abierta (permite introducir el lquido a medir) y suele tener un pico (permite verter el lquido medido). Generalmente miden volmenes de 25 50 ml, pero existen probetas de distintos tamaos; incluso algunas que pueden medir un volumen hasta de 2000 ml. Puede estar constituido de vidrio (lo ms comn) o de plstico. En este ltimo caso puede ser menos preciso; pero posee ciertas ventajas, por ejemplo, es ms difcil romperla, y no es atacada por el cido fluorhdrico.

Vaso de precipitados Un vaso de precipitados es un simple contenedor de lquidos, usado muy comnmente en el laboratorio. Son cilndricos con un fondo plano; se les encuentra de varias capacidades, desde 1 ml. hasta de varios litros. Normalmente son de vidrio (Pyrex en su mayora) o de plstico. Aqullos cuyo objetivo es contener cidos o qumicos corrosivos tienen componentes de tefln u otros materiales resistentes a la corrosin. Suelen estar

graduados, pero esta graduacin es inexacta por la misma naturaleza del artefacto; su forma regular facilita que pequeas variaciones en la temperatura o incluso en el vertido pasen desapercibidas en la graduacin. Es

recomendable no utilizarlo para medir volmenes de sustancias, ya que es un material que se somete a cambios bruscos de temperatura, lo que lo des calibra y en consecuencia nos entrega una medida errnea de la sustancia. Debido a que su graduacin es inexacta, es comnmente usado para transportar lquidos hacia otro recipiente como a una probeta o a un tubo de ensayo por un embudo. Son resistentes a los cambios bruscos de temperatura. Tiene mltiples usos en el laboratorio: calentar, disolver, etc. Pipeta La pipeta es un instrumento volumtrico de laboratorio que permite medir alcuotas de lquido con bastante precisin. Suelen ser de vidrio. Est formado por un tubo hueco transparente que termina en una de sus puntas de forma cnica, y tiene una graduacin (una serie de marcas grabadas) indicando distintos volmenes.

Metodologa de uso

Se introduce la pipeta (con la punta cnica para abajo) en el recipiente del cual se desea extraer un volumen determinado de muestra. Se disminuye leve y lentamente la presin ejercida por el dedo, hasta que el lquido comience a descender. Se vuelve a presionar cuando el menisco del lquido lleg a 0. Si el lquido descendi demasiado, se comienza nuevamente. Se traslada la pipeta al recipiente destino. Se disminuye nuevamente la presin del dedo hasta llegar a la cantidad de mililitros necesarios. Tubos de ensayo Consiste en un pequeo tubo de vidrio con una punta abierta (que puede poseer una tapa) y la otra cerrada y redondeada, que se utiliza en los laboratorios para contener pequeas muestras lquidas. Aunque pueden tener otras fases. Como realizar reacciones en pequea escala, etc. Metodologa de uso Para calentar durante intervalos cortos a llama directa puede sostenerse el tubo con la mano mediante su parte superior. Si se desea exponerlo ms intensamente al calor es necesaria la utilizacin de pinzas. En ambos casos debe tenerse la precaucin de no apuntar con la boca del tubo hacia alguna persona (para evitar proyecciones de la muestra). Los tubos de ensayo no han de llenarse ms all del primer tercio. GRADILLA Una gradilla es una herramienta utilizada para dar soporte a los tubos de ensayos o tubos de muestras.

Normalmente es utilizado para sostener y almacenar este material. Este se encuentra hecho de madera, plstico o metal Placas petri La placa de Petri es un recipiente redondo, de cristal o plstico, con una cubierta de la misma forma que la placa, pero algo ms grande de dimetro, para que se pueda colocar encima y cerrar el recipiente. Tcnicas de uso Se utiliza en los laboratorios principalmente para el cultivo de bacterias y otros microorganismos, solindose cubrir el fondo con distintos medios de cultivo (por ejemplo agar) segn el microorganismo que se quiera cultivar. Si se quieren observar colonias, durante el tiempo de incubacin del microorganismo sembrado en la placa esta se mantiene boca abajo, es decir, apoyada sobre la tapa. De este modo, el agar queda en la parte superior y al condensarse el vapor de agua que generan los microorganismos por su metabolismo, cae sobre la tapa, evitando que los microorganismos se diluyan, mantenindose fijos al sustrato y formando colonias. Gotero

Existen en el mercado diferentes modelos. Los de vidrio, tradicionalmente empleado son incoloros o mbar. De acuerdo con su capacidad, pueden contener entre 25 y 100 ml. Estos frascos poseen una tapa de vidrio esmerilado provista de una ranura perpendicular, que cuando se rota la tapa y se hace coincidir con la ranura en el cuello del frasco, el contenido gotear si se inclina el frasco adecuadamente.

Otros modelos consisten en frascos provistos de un gotero con tapn de caucho, similar a los empleados en los frascos de medicamentos, en tanto que otros estn diseados para que comiencen a gotear si el frasco es invertido. Embudos Los embudos presentan la porcin superior cnica y la posterior en forma de un tubo cilndrico y delgado cortado oblicuamente en su extremo terminal, pudiendo tener una longitud, menor, igual o mayor que la porcin cnica, cuya capacidad oscila entre 30 ml y 5 litros, teniendo las paredes internas, segn el modelo, estriadas o lisas. Se emplean para traspasar lquidos.

Trpode Se trata de un accesorio metlico, formado por tres varillas metlicas de igual longitud, separadas entre s a una misma distancia y soldadas por su extremo superior a un aro tambin de metal. Cuando el trpode es colocado sobre la mesa de trabajo, podemos percatarnos de que las patas no quedan en posicin

Capsula de porcelana Son pozuelos de borde esfrico, fondo redondeado y tamao variable, caracterizndose generalmente por ser de color blanco y tener las paredes delgadas lisas y muy pulidas, con un doblez en forma de labio por un punto de su borde para facilitar verter su contenido, sin que se produzca

derramamiento. Uso: Se utilizan regularmente como recipientes de disoluciones que van a ser sometidas a una medicin de pH o para colocar medios de cultivo que se pretenden pesar.

Mortero El Mortero tiene como finalidad machacar o triturar las sustancias slidas. El Mortero posee un instrumento pequeo creado del mismo material llamado "Mano o Piln" y es el encargado del triturado. Normalmente se encuentran hechos en Madera, Porcelana, Piedra y Mrmol. Si al machacar sustancias peligrosas o lquidos en conjunto con slidos, deber molerse o triturarse muy suavemente para evitar salpicaduras. ASAS DE SIEMBRA Material de laboratorio que se utiliza para el transporte de microorganismos de un medio a otro. Consta de un mango y de un filamento, el cual originalmente era de platino, pero ha sido sustituido por materiales ms baratos como puede ser el acero. Este filamento termina en forma de aro, mediante el cual se extrae la muestra de microorganismos necesaria para cualquier preparacin. Existen varios tipos de asa de siembra: de plstico, metlica. Balanza digital Las balanzas digitales son instrumentos de pesaje de funcionamiento no automtico que utilizan la accin de la gravedad para determinacin de la masa. Se compone de un nico receptor de carga (plato) donde se deposita el objeto para medir. Una clula de carga de carga mide la masa a partir de la fuerza (peso) ejercida por el cuerpo sobre el receptor de carga. El resultado de esa medicin (indicacin) aparecer reflejado en un dispositivo

indicador; con un grado de exactitud 0.0001g por lo cual nos arrojan mejores resultados. La balanza digital suele ser un equipo de laboratorio y resultan equipos imprescindibles en operaciones qumicas, analticas y de formulacin en industrias y en laboratorios de calidad. Bao Mara. El bao Mara o bao de Mara es un mtodo empleado en las industrias (farmacutica, cosmtica, de alimentos y conservas), en laboratorio de qumica y en la cocina, para conferir temperatura uniforme a una sustancia lquida o slida o para calentarla lentamente, sumergiendo el recipiente que la contiene en otro mayor con agua que se lleva a o est en ebullicin. El concepto de bao mara implica el calentamiento indirecto, por conveccin trmica del medio agua. Para calentar al bao mara hay que introducir un recipiente pequeo dentro de otro ms grande lleno de agua y llevarlo al fuego. De este modo, lo que se calienta en primer lugar es el agua contenida en el recipiente de mayor tamao y sta es la que poco a poco va calentando el contenido del recipiente menor, de un modo suave y constante. Incubadora La Incubadora es un equipo con funciones especficas que permite controlar, segn su diseo, temperatura y humedad para crear un ambiente adecuado apto para la reproduccin y desarrollo de organismos vivos. Algunas de las aplicaciones

ms comunes son los cultivos microbiolgicos, micolgicos y virales, entre otros. Las incubadoras de laboratorio pueden ser diseadas para aplicaciones donde se puede controlar parmetros como temperatura, demanda biolgica de oxigeno (DBO) o condiciones atmosfricas, estos parmetros van acorde a las aplicaciones que se pretendan realizar en el laboratorio, estas incubadoras suministran CO2 (Bixido de carbono). Laminas portaobjetos In-vitro diagnostica. El da 7 de diciembre de 2003 la directiva europea 98/79/EG ha entrado en vigor; y son fabricadas de vidrio sdico-clcico de la clase hidroltica 3 de acuerdo con la norma ISO 8037-1. Las lminas porta-objeto son lminas de vidrio de cerca de 1 mm. De espesor sobre las cuales los objetos pueden ser observados

microscpicamente bajo una cubierta de vidrio. Hay tambin especiales para microscopio con una indentacin en el medio, lo cual facilita el examen de lquidos. Dentro de los diagnsticos nativos, la secrecin a ser examinada es extrada mediante un aplicador de algodn y luego mezclada con una solucin salina fisiolgica sobre una lmina portaobjetos de microscopio. Se le aade una cubierta de vidrio y luego la secrecin puede ser evaluada bajo el microscopio. Autoclave Un autoclave de laboratorio es un dispositivo que sirve para esterilizar material de laboratorio, utilizando vapor de agua a alta presin y temperatura, evitando con las altas presiones que el agua llegue a ebullir a pesar de su alta temperatura. El fundamento de la autoclave es que coagula las protenas de los microorganismos debido a la presin y temperatura, aunque recientemente se ha llegado a saber de

algunas formas acelulares, tal como los priones, que pueden soportar las temperaturas de autoclave. Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generacin de vapor de agua pero restringiendo su salida, hasta obtener una presin interna de 103 kPa, lo cual provoca que el vapor alcance una temperatura de 121 grados centgrados. Un tiempo tpico de esterilizacin a esta temperatura y presin es de 15-20 minutos. Ciertos materiales no pueden ser esterilizados en autoclave, como el papel y muchos plsticos (a excepcin del polipropileno). Este producto es de uso general en laboratorio y no es un producto sanitario por tanto no lleva marcado CE segn la directiva 93/42/EEC ni le es de aplicacin esta legislacin. Cuando el autoclave est destinado a la esterilizacin de productos sanitarios tiene unos requisitos especiales. Descripcin de una autoclave Por ejemplo esta autoclave marca STERICLAV-S es un modelo AES-12 y su cdigo 13070112. Temperatura regulable desde 105 C hasta 139 C presin mxima: 2,5 bar. Esterilizador Especialmente para la destruccin de los

microorganismos, sean cuales sean sus caractersticas, siendo lo mismo que sean patgenos o no, que estn sobre el material o dentro del mediante el calor seco.

Se trabaja a una temperatura de 180 C por un tiempo de 2 horas con determinados materiales; ya sean de vidrio, madera o metal. MICROSCOPIO OPTICO El microscopio ptico es un instrumento que sirve para aumentar el tamao de un objeto a travs de un sistema de lentes. Puede conseguirse con este mtodo un aumento de hasta 2000 veces. Las partes de las que se compone un microscopio se pueden dividir en: mecnica y en parte ptica.

PARTE MECANICA Sistema de soporte Pie: Sirve de apoyo y para darle estabilidad al microscopio. En l est integrada la fuente luminosa. Brazo: Es una columna que parte del pie sirve para sujetar el tubo. Puede ser recto o arqueado. Tubo: Es una cmara oscura que est unida al brazo. En su parte inferior est el revolver son los objetivos y en su parte superior los oculares. Platina: Es una plataforma horizontal sobre la que se engancha con dos pinzas el portaobjetos. Tiene en su zona central un orificio que permite el paso de la luz y un sistema de cremallera manejado por dos tornillos que permiten el movimiento de la muestra. Revolver: Sujeta los objetivos y gira para permitir el cambio de objetivo. Sistema de ajustes:
Tornillo macromtrico: Tornillo de enfoque que mueve la platina hacia arriba y hacia abajo de forma brusca y poco precisa. Tornillo micromtrico: Tornillo de enfoque que mueve la platina hacia arriba y hacia abajo de forma lenta y muy precisa.

PARTE OPTICA

Fuente de iluminacin: Es una lmpara halgena que permite el encendido o el apagado con un interruptor y cuya intensidad puede ser graduada. Puede tener en su parte superior un anillo para permitir la colocacin de filtros que facilitan la visualizacin. Condensador: Es un sistema de lentes situado bajo la platina que permite concentrar la luz de la fuente de iluminacin hacia la preparacin. Diafragma iris: Est en el interior del condensador y sirve para limitar el haz de rayos que atraviesa el sistema de lentes eliminando los rayos demasiado desviados (regula la luz y ajusta la apertura numrica). Oculares: Estn colocados en la parte superior del tubo y su funcin es captar y ampliar la imagen obtenida por los objetivos. Actualmente se suelen usar los microscopios binoculares que tienen dos oculares unidos por un mecanismo que permite ajustar la separacin interpupilar. Son normalmente de x10 y x12. Objetivos: Estn colocados en la parte inferior del tubo insertados en el revlver y obtienen la imagen real aumentada e invertida. Sobre su superficie est indicado su aumento y su apertura numrica. Suelen llevar dibujado un anillo de color que indica su aumento y suelen ser de x4 (rojo), x10 (amarillo), x40 (azul) y x100 (blanco).

MEDIOS DE CULTIVO MAC CONKEY AGAR Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios

facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

Fundamento En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.

Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en las colonias, y la precipitacin de las sales biliares.

Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras. OGYE La formulacin de este medio corresponde a la formulacin dada por Mossel y colaboradores en 1970 para el recuento de hongos y levaduras. Fundamento La Glucosa y el Extracto de Levadura son la base nutritiva del medio. La adicin de la Oxitetraciclina o de la Gentamicina confiere el carcter selectivo al medio. Se presentan ciertas variaciones en la formulacin de este medio, segn las publicaciones consultadas; principalmente a nivel de la concentracin de glucosa. Modo de empleo La muestra se diluye y se siembra en superficie. Se incuba entre 22-25C durante 5 das. Pueden precisarse mayores tiempos de incubacin para microorganismos de crecimiento lento. LAURIL SULFATO CALDO. Medio recomendado por A.P.H.A. para deteccin y recuento de coliformes en aguas, aguas residuales y alimentos. Fundamento

Medio rico en nutrientes, que permite un rpido desarrollo de los microorganismos fermentadores de la lactosa, an de los fermentadores lentos. La triptosa es la fuente de nitrgeno, vitaminas, minerales y aminocidos, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, las sales de fosfato proveen un sistema buffer, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico

Es un medio selectivo, ya que el lauril sulfato de sodio inhibe el desarrollo de la flora acompaante. Por la fermentacin de la lactosa, se produce cido y gas, ste ltimo se evidencia al utilizar las campanas Durham.
LEIFSON

El medio Hugh Leifson es un medio diferencial que nos permite clasificar a las bacterias en oxidativas y/o

fermentativas. Tambin es usado para la identificacin de las bacterias fitopatgenas, principalmente para el gnero Erwinia, ya que tienen la capacidad de oxidar y fermentar la glucosa, aunque el gnero Bacillus y Clostridium lo pueden hacer, sin embargo estos ltimos son Gram Positivos. Las Pseudomonas, Xanthomonas, Agrobacterium y Corynebacterium, solo pueden oxidar la glucosa, mas no fermentarla. OXOID Oxoid, una marca lder mundial de microbiologa, se complace en anunciar la adicin de cuatro medios de cultivo importante para la creciente gama de productos de Oxoid compatible con ISO para el examen microbiolgico de alimentos y muestras ambientales, permitiendo que los microbilogos de alimentos para confiar en que las formulaciones de cumplir con el requerido ISO especificaciones.

Oxoid Modificado semi-slidos Rappaport Vassiliadis (MSRV) Agar (ISO) se utiliza para el enriquecimiento selectivo de las especies de Salmonella de alimentos, muestras de heces de los animales y del medio ambiente y se ajusta a la norma ISO 6579:2002 anexo D. Este medio se ha demostrado para detectar ms de Salmonella muestras positivas que los procedimientos tradicionales para el enriquecimiento de las heces animales y muestras ambientales 1-4

BIBLIOGRAFIA (Jos Gonzlez Alfaro 2012) (Leonardo Lpez Wilson 2010) (Carlos Gamazo 2005)

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ESCUELA INGENIERIA AGRICOLA MENCION AGROINDUSTRIAL ASIGNATURA: MICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS 2 TRABAJO AUTNOMO N 2 TEMA: STAPHYLOCOCUS AUREUS DOCENTE: DRA. TAMARA BORODULINA ESTUDIANTE: DIANA CAJAPE TUBAY CURSO: 2DO A FECHA: JUNIO 2013 CAMPUS GUAYAQUIL

STAPHYLOCOCCUS AUREUS INTRODUCCION Staphylococcus aureus comnmente estafilococo dorado, es una bacteria anaerobia facultativa, grampositiva, productora de coagulasa, catalasa, inmvil y no esporulada que se encuentra ampliamente distribuida por todo el mundo, estimndose que una de cada tres personas se hallan colonizadas, aunque no infectadas, por ella. Puede producir una amplia gama de enfermedades, que van desde infecciones cutneas y de las mucosas relativamente benignas, tales como foliculitis, forunculosis o conjuntivitis, hasta enfermedades de riesgo vital, como celulitis, abscesos profundos, osteomielitis, meningitis, sepsis, endocarditis o neumona. Tambin puede afectar al aparato gastrointestinal, ya sea por presencia fsica de Staphylococcus aureus o por la ingesta de la enterotoxina estafiloccica secretada por la bacteria. En la actualidad, este microorganismo se encuentra como el principal causante de las infecciones nosocomiales. Esta situacin se ve favorecida por el hecho de que esta especie habita tanto en las mucosas como en la piel de los seres humanos, lo que permite que a travs de las heridas quirrgicas pueda penetrar en el torrente sanguneo del paciente por medio del contacto directo o indirecto con el personal sanitario, con un objeto contaminado o incluso con otro paciente. Las cepas habituales de Staphylococcus aureus son resistentes a la penicilina, dejando como los antibiticos ms eficaces para combatirlos a los

aminoglucosidos, las cefalosporinas, la oxacilina o la nafcilina. Adems de la administracin del tratamiento antimicrobiano correspondiente, puede ser conveniente, en funcin del caso, la eliminacin de puertas de entradas como catteres venosos permanentes o drenajes quirrgicos.

MORFOLOGIA S. aureus es un coco inmvil, de 0,5 a 1 m de dimetro, que se divide en tres planos para formar grupos de clulas irregulares semejantes a racimos de uvas. En

extendidos de pus los cocos aparecen solos, en pares, en racimos o en cadenas cortas. Los racimos irregulares son caractersticos de extendidos tomados de cultivos que se desarrollan en medios slidos, mientras que en otros cultivos son frecuentes las formas de diplococos y en cadenas cortas. Unas pocas cepas producen una cpsula o capa de baba que incrementa la virulencia del microorganismo. S. aureus es un microorganismo grampositivo pero las clulas viejas y los microorganismos fagocitados se tien como gramnegativos. Debido a la morfologia que adoptan las celulas de staphylococcus en las tinciones que se realizan a partir de cultivos en medios de agar. En las tinciones de muestra aparecen como celulas unicas o en parejas o forma de tetradas. ESTRUCTURA 1. Pared celular Como en todos los Gram positivos, la pared est formada por una gruesa capa de peptidoglicano, a la que estn unidas molculas de protenas y otros compuestos. El peptidoglicano, es un polmero formado por un esqueleto glucdico y cadenas tetrapeptdicas que se unen formando una red o malla. En S. aureus las uniones entre las cadenas tetrapeptdicas estn formadas por puentes de pentaglicina que le dan la sensibilidad a la lisostafina caracterstica del gnero Staphylococcus. El rol biolgico del pentaglicina es mantener la rigidez de la pared bacteriana y su resistencia osmtica. En la patogenia, al parecer coadyudara al

desencadenamiento de la inflamacin por activacin del complemento. Acidos Teicoicos: Son compuestos caractersticos del gnero Staphylococcus. Los de S. aureus son polmeros de ribitol fosfato con sustituyentes D alanina y N

acetil glucosamina. Son antgenos especie especficos. Los anticuerpos son positivos en las infecciones profundas, por lo que su determinacin puede ser til en establecer el diagnstico, el pronstico, la evolucin y la duracin del tratamiento. En la patogenia actan de modo similar a las endotoxinas de los Gram negativos, activando los mecanismos de la inflamacin, pudiendo llegar a producir un cuadro de shock sptico. Protena A: Especfica de S. aureus, esta protena se encuentra unida al peptidoglicano, haciendo saliencia en la superficie bacteriana. Tiene la propiedad de unirse al segmento Fc de la IgG en forma inespecfica. Esto ha posibilitado una variedad de aplicaciones prcticas en Inmunologa, desde tcnicas de

coaglutinacin hasta purificacin de inmunoglobulinas por cromatografa. Inoculada a animales de experimentacin, tiene propiedades inflamatorias. Se especula adems que podra favorecer la diseminacin impidiendo la opsonizacin y el reconocimiento inmune. Clumping factor: Es otra protena superficial, antignicamente relacionada con la Protena A, pero con una funcin distinta. Como vimos, determina la formacin de fibrina sobre la superficie bacteriana, en una reaccin importante para el diagnstico, pero que tambin tiene implicancias en la patogenia. 2. Membrana Celular Es una estructura trilaminar convencional, cuya capa ms externa est parcialmente sustituida por ACIDOS LIPOTEICOICOS. Estos son compuestos similares a los cidos teicoicos, es decir, polmeros de glicerol fosfato, que estn unidos por un puente disacrido a un glicolpido. Mientras ste constituye la unin a la membrana, el polmero penetra en la pared y la atraviesa, sobresaliendo en la superficie. En la patogenia, podra cumplir un rol de adherencia. 3. Cpsula Los estafilococos no poseen cpsula visible, se ha determinado que algunas cepas son encapsuladas. Estas cepas son: fagoresistentes, clumping factores negativos, virulentos en el ratn, y con un crecimiento difuso en suero agar blando. La cpsula est compuesta de cido manosamn urnico y es antignica,

habindose determinado 4 serotipos capsulares. Por inmunofluorescencia, es posible adems comprobar la presencia de material capsular superficial en un gran porcentaje de cepas. La cpsula por sus propiedades antifagocticas determina la mayor invasividad de la bacteria.

MTODOS NORMALIZADOS

TCNICA DE CULTIVO para identificar Staphylococcus aureus NORMA ISO 6888 Este mtodo se basa en la siembra en superficie en un medio de cultivo slido, preparando dos series de placas, con una cantidad determinada de la muestra problema si es lquida o una cantidad determinada de la suspensin madre para otros productos. En las mismas condiciones, siembra de diluciones decimales obtenidas de la muestra o de la suspensin madre. Incubacin de las placas a 35

C durante 24 48 horas. Clculo del nmero de Staphylococcus aureus por mililitro o por gramo de muestra a partir del nmero de colonias caractersticas obtenidas en las placas escogidas a los niveles de dilucin que dan un resultado significativo, y confirmadas mediante la prueba de la coagulasa.
ISO 6888 Directiva general para el recuento de Staphylococcus aureus. Mtodo mediante enumeracin de colonias

NF V 08-057-1 Mtodo de rutina para la enumeracin de estafilococos cuagulasa positivosmediante recuento de colonias a 37C. Tcnica de confirmacin de las colonias.

Este mtodo se basa en la siembra en superficie en un medio de cultivo slido selectivo, repartido en placas de Petri, con una cantidad determinada de la muestra problema si es lquida o una cantidad determinada de la suspensin madre para otros productos. Incubacin de las placas a 37 C durante 24 48 horas. Clculo del nmero de estafilococos cogulasa positivos por mililitro o por gramo de muestra a partir del nmero de colonias caractersticas y/o no caractersticas obtenidas en las placas escogidas a los rdenes de dilucin que dan un resultado significativo, y confirmadas mediante la prueba de la coagulasa.

NF V 08-057-1

Mtodo de rutina para la enumeracin de estafilococos cuagulasa positivos mediante recuento de colonias a 37C. Tcnica de confirmacin de las colonias.

BIBLIOGRAFIA: (Ruera 2006) (AENOR 2010) (Uruguay 2008)

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ESCUELA INGENIERIA AGRICOLA MENCION AGROINDUSTRIAL ASIGNATURA: MICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS 2 TRABAJO AUTNOMO N 3 TEMA: CLOSTRIDIUM BOTULINUM DOCENTE: DRA. TAMARA BORODULINA ESTUDIANTE: DIANA CAJAPE TUBAY CURSO: 2DO A FECHA: JUNIO 2013 CAMPUS GUAYAQUIL

CLOSTRIDIUM BOTULINUM INTRODUCCION Botulismo El botulismo de origen alimentario ocurre despues del consumo de un alimento que contiene la potente toxina botulinum producida por la bacteria Clostridium botulinum. Se trata de una neurotoxina, por ende causa sintomas nerurologicos junto con algunos trastornos gastricos. Si no se administra tratamiento muy pronto es muy letal. La mayoria de los brotes suceden con los alimentos preparados en el hogar. CARACTERISTICAS Microorganismos Las cepas de Clostridium botulinum son bastoncillos ayarse cadenas, grampositivos o que pueden

solos

formando las

pequeas cuales son

muchas de

moviles, anaerobios obligados y forman esporas terminales sencillas. Las celulas son sensibles a un pH bajo (< 4,6), baja Aw (0,93) y un ambiente moderablemente alto en sal (5,5%). Las esporas no germinan en presencia de nitritos (250 ppm). En contraste, son altamente resistente al calor (mueren a 115C) pero las celulas mueren con calor moderado (de pasteurizacion). Las toxinas se forman durante el crecimieto; las cepas pueden ser proteoliticas o no proteoliticas. Esta bacteria tiene una tolerancia variable al oxgeno, pero no crece jams en atmsferas que contienen ms de un 10% de oxgeno. Sin embargo, tolera trazas de oxgeno debido a la enzima superxido dismutasa (SOD), que es una defensa antioxidante importante en casi todas los organismos expuestos al oxgeno.

Clostridium botulinum slo es capaz de producir la neurotoxina durante la esporulacin, que puede o no ocurrir en un ambiente anaerbico. Pero en si produce esporas en un ambiente de crecimiento desfavorable para preservar la viabilidad del organismo hasta que las esporas estn expuestos a condiciones favorables.

Crecimiento Con base en las diferentes clases de toxinas se producen en las cepas de Clostridium botulinum se divide en seis tipos: A, B, C, D, E y F. de estas, A, B, E, F se han asociado a intoxicaciones de seres humanos transmitidas por alimentos. Las sepas tipo A son proteoliticas, las de tipo E, no proteoliticas, pero las B y F pueden ser proteoliticas y no proteoliticas. Las proteoliticas crecen entre 10 y 48C. el crecimiento optimo propicia la produccion mas alta de toxinas. Se requieren condiciones anaerobicas para su proliferacion. La germinacion de esporas, y su florecimiento antes de su multiplicacion celular, se deben favorecidos en el ambiente en el que prosperan las celulas. De manera congruente, las condiciones que previenen el crecimiento celular afectan en forma adversa la greminacion de esporas como antes se menciono un pH de 4,6, Aw de 0,93 o 55% de NaClnevitan el crecimiento celular, pero con el uso de dos o mas parametros, junto con baja temperatura, es posible reducir los limites de crecimiento a un nivel mas bajo que con cualquiera de los parametros mencionasdos antes. ESTRUCTURA Su estructura qumica la forma un polipptido de 2 cadenas. La cadena ligera es una endopeptidasa que contiene Zn++ y que bloquea las vesculas presinpticas de acetilcolina (Ach). Estas toxinas pierden su actividad: 1) a 800 grados durante 30 minutos o a 1.000 grados durante 5 minutos; 2) a la luz solar en 1-3 horas; 3)

en aire ambiente en 12 horas; 4) en 20 minutos con la cloracin (destruccin del 84%). La toxina botulnica es un pptido, relativamente termolbil que est compuesto por una cadena pesada (cadena H) y una liviana (cadena L) unidas por un puente disulfuro. La cadena ligera se asocia con un tomo de zinc. La botulina es soluble en agua, inodora, inspida e incolora y puede ser inactivada por medio de calor usando 85 grados centgrados al menos durante cinco minutos o al punto de ebullicin durante 10 minutos. Tambin se puede inactivar con formaldehdo o leja y agua con jabn o con los mtodos usuales de potabilizacin del agua (clorinacin, aireacin, etc.). Las esporas de este microorganismo son particularmente resistentes al calor, soportando una temperatura de 100C durante 3 5 horas: esta resistencia al calor disminuye en pH acido o en concentraciones elevadas de sal. La toxina botulnica es liberada en el medio solo despus de la muerte de la bacteria. La toxina es sintetizada por el Clostridium botulinum en siete formas antignicamente diferentes y cada una de estas formas es producida por un polipptido de cadena nica y de baja toxicidad adems, la toxina puede ser activada con tripsina. Casi todos los Clostridium son proteolticos y por lo tanto son capases de convertir la toxina progenitora de una sola cadena en la molcula activa de dos cadenas pero el C. botulinum de tipo E no es proteoltico y requiere el uso de enzimas proteolticas dentro del tracto gastrointestinal para la activacin de la toxina. BIBLIOGRAFIA: (Bhunia 2008) (A. PUMAROLA s.f.) (VINCENTI s.f.)

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FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
ESCUELA INGENIERIA AGRICOLA MENCION AGROINDUSTRIAL ASIGNATURA: MICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS 2 TRABAJO AUTNOMO N 4 TEMA: BACILLUS CEREUS DOCENTE: DRA. TAMARA BORODULINA ESTUDIANTE: DIANA CAJAPE TUBAY CURSO: 2DO A FECHA: JUNIO 2013 CAMPUS GUAYAQUIL

BACILLUS CEREUS INTRODUCCION Bacillus cereus es una bacteria Grampositiva formadora ampliamente productora de de esporas y

toxinas

termoestables en el medio

distribuida

ambiente, que puede ser transmitida al ser humano a travs de alimentos una

contaminados,

generndole

toxiinfeccin alimentaria de dos tipos: por una parte, una intoxicacin debido a las propias toxinas y, por otra parte, una infeccin por la ingesta de clulas que producen enterotoxinas en el intestino delgado. Es un patgeno ubicuo en el medio ambiente, que se encuentra en suelos, polvo, aguas y vegetacin, por lo que se est presente habitualmente en una gran variedad de materias primas y alimentos de origen agrcola y ganadero: cereales, especias, hierbas aromticas, hortalizas, frutas, leche, carne, etc. Las concentraciones de Bacillus cereus presentes en dichos alimentos son bajas para producir toxiinfecciones alimentarias, sin embargo, su habilidad para formar esporas hace que sobreviva a lo largo del procesado, y una inadecuada conservacin excediendo tiempo y temperatura potencia su multiplicacin a niveles que producen toxiinfecciones. TAXONOMIA Dominio Clase Orden Familia Genero Especie Bacteria Bacilli Bacilliales bacillaceae Bacillus cereus

CARACTERISTICA Microorganismos Su temperatura mnima de crecimiento es de 15C a 20C y la mxima es entre 40C a 45C con una ptima de 37C. Su pH ptimo va de 4,5 a 9,3 y su concentracin de sal es de 7,5%. Por ese motivo, las esporas son bastante resistentes, y pueden crecer y multiplicarse en ambientes hmedos, cidos y alta concentracin de sales. Por otro lado, las toxinas emticas de B. cereus son termoestables, no pudiendo destruirse con tratamientos trmicos estndar. No obstante, las cepas de B. cereus no pueden producir sus toxinas por debajo de 10C o en ausencia de oxgeno. El pH bajo (<4,5), la baja actividad de agua (<0,92) y la refrigeracin (<4C) inhiben el crecimiento de B. cereus.

MORFOLOGIA Es un bacilo Gram positivo, con forma de bastn alargado, aerobio facultativo y formador de esporas, las cuales no son liberadas del esporangio. Es una bacteria perteneciente a la familia de las Bacillaceae, la espora es ovoidea, central y no deformante; la formacin de esporas en presencia de oxigeno es un rasgo que define al gnero. Fermenta la sacarosa, la lactosa, la salicina y el glicerol; no fermenta el manitol ni la arabinosa y produce lecitinasa. Esta bacteria puede ser cultivada en medios de enriquecimiento como es el agar nutritivo, agra sangre y el agar chocolate. El cultivo de del bacilo cereus es de colonias grandes, blancas grisceas, opacas y beta-hemolticas. ESTRUCTURA Esporulado: las esporas son centrales, forma elipsoide y al formarse en el interior de la clula dan lugar al hinchamiento de esta.

Es normalmente mvil, mediante flagelos pertricos (distribuidos en toda la superficie celular), aunque existen especies inmviles, generalmente aparecen agrupados en cadenas. Poseen antgenos somticos, flagelares y de esporas. Los antgenos de las esporas son termoresistentes al igual que las propias esporas. Tcnicas de cultivo para identificar Bacillus cereus Basado en la norma ISO 7932

BIBLIOGRAFIA (Corrie Allaert Vandevenne 2002) (Bhunia 2008) (Alimetaria 2013) (FDA 2012)