You are on page 1of 2

CREATININE -J

Creatinina
Jaff. Colorimtrico - cintico
Determinacin cuantitativa de creatinina IVD
Conservar a 2-8C PRINCIPIO DEL MTODO
El ensayo de la creatinina esta basado en la reaccin de la creatinina con el picrato alcalino descrito por Jaff. La creatinina reacciona con el picrato alcalino formando un complejo rojizo. El intervalo de tiempo escogido para las lecturas permite eliminar gran parte de las interferencias conocidas del mtodo. La intensidad del color formado es proporcional a la concentracin de creatinina en la muestra ensayada1. 3. Pipetear en una cubeta: Blanco 1,0 --Patrn 1,0 100 -Muestra 1,0 -100

RT (mL) Patrn (Nota1,2) (L) Muestra (L) 4. 5. 6.

Mezclar y poner en marcha el cronmetro. Leer la absorbancia (A1) al cabo de 30 segundos y al cabo de 90 segundos (A2) de la adicin de la muestra. Calcular: A= A2 A1 .
A Muestra A Patrn

CLCULOS
x 2 (Conc. Patrn) = mg/dL de creatinina en la muestra

SIGNIFICADO CLNICO
La creatinina es el resultado de la degradacin de la creatina, componente de los msculos y puede ser transformada en ATP, fuente de energa para las clulas. La produccin de creatinina depende de la modificacin de la masa muscular. Vara poco y los niveles suelen ser muy estables. Se elimina a travs del rin. En una insuficiencia renal progresiva hay una retencin en sangre de urea, creatinina y cido rico. Niveles altos de creatinina son indicativos de patologa renal1,4,5. El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clnicos y de laboratorio.

Factor de conversin: mg/dL x 88,4= mol/L. CONTROL DE CALIDAD Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados: SPINTROL H Normal y Patolgico (Ref. 1002120 y 1002210). Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el instrumento, los reactivos y el calibrador. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.

VALORES DE REFERENCIA REACTIVOS R1


Reactivo Pcrico

cido pcrico Hidrxido sdico

17,5 mmol/L 0,29 mol/L

R2
Reactivo Alcalinizante

CREATININE CAL PRECAUCIONES

Patrn primario acuoso de Creatinina 2 mg/dL

Suero o plasma: Hombres 0,7 - 1,4 mg/dL 61,8 - 123,7 mol/L Mujeres 53,0 - 97,2 mol/L 0,6 - 1,1 mg/dL Orina: 15-25 mg/Kg/24 h Hombres 10 - 20 mg/Kg/24 h 88 - 177 mol/Kg/24 h Mujeres 8 -18 mg/Kg/24 h 71 - 177 mol/Kg/24 h Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.

CARACTERSTICAS DEL MTODO


Hidrxido sdico: Irritante (Xi): R36/38: Irrita ojos y la piel. S26: En caso de contacto con los ojos, lavar de inmediato con abundante agua y acudir al medico. S37/39: Usar guantes adecuados y proteger cara y ojos. S45: En caso de accidente o malestar, acudir inmediatamente al mdico.

Rango de medida: Desde el lmite de deteccin de 0,09 mg/dL hasta el lmite de linealidad de 15 mg/dL. Si la concentracin es superior al lmite de linealidad, diluir la muestra 1/2 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2. Precisin:

PREPARACIN Reactivo de trabajo (RT): Mezclar volmenes iguales de R 1 Reactivo Pcrico y de R 2 Reactivo Alcalinizante. Estabilidad del reactivo de trabajo: 10 das a 15-25C. CONSERVACIN Y ESTABILIDAD Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8C, protegidos de la luz y se evita su contaminacin. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. CREATININE CAL Una vez abierto, es estable 1 mes si se mantienen los viales bien cerrados a 2-8C, protegidos de la luz y se evita su contaminacin. Indicadores de deterioro de los reactivos: - Presencia de partculas y turbidez. - Absorbancia (A) del Blanco a 492 nm 1,80. MATERIAL ADICIONAL - Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 492 nm. - Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. - Equipamiento habitual de laboratorio. MUESTRAS 1 - Suero o plasma heparinizado . Estabilidad de la creatinina: al menos 24 horas a 2-8C. 1 - Orina : Diluir la muestra al 1/50 con agua destilada. Mezclar. Multiplicar el resultado obtenido por 50 (factor de dilucin) Estabilidad de la creatinina: 7 das a 2-8C. PROCEDIMIENTO 1. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 492 nm (490-510) Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz Temperatura. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37C / 15-25C 2. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente al blanco de reactivo.
BSDTT13 Ed.2004

Media (mg/dL) SD CV (%)

Intraserie (n=20) 1,06 3,58 0,22 0,06 2,07 1,54

Interserie (n=20) 1,03 3,31 0,04 0,06 3,97 1,75

Sensibilidad analtica: 1 mg/dL = A 0,03 A/min . mg/dL. Exactitud: Los reactivos de SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemticas significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x). Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes: Coeficiente de correlacin (r): 0,986 Ecuacin de la recta de regresin: y= 0,975x + 0,047 Las caractersticas del mtodo pueden variar segn el analizador utilizado.

INTERFERENCIAS
Hemoglobina (1 g/L), Bilirrubina (55 mg/dL), interfiere1. Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la determinacin de la creatinina2,3.

NOTAS
1. La calibracin con el Patrn acuoso puede dar lugar a errores sistemticos en mtodos automticos. En este caso, se recomienda utilizar calibradores sricos. 2. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensacin. 3. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicacin de este reactivo en distintos analizadores.

BIBLIOGRAFA
1. 2. 3. 4. 5. Murray R.L. Creatinine. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1261-1266 and 418. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.

PRESENTACIN Ref: 1001111


Cont.

2 x 150 mL

SPINREACT,S.A. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com

CREATININE -J

Creatinine
Jaff. Colorimetric - kinetic
Quantitative determination of creatinine IVD
Store at 2-8C PRINCIPLE OF THE METHOD The assay is based on the reaction of creatinine with sodium picrate as described by Jaff. Creatinine reacts with alkaline picrate forming a red complex. The time interval chosen for measurements avoids interferences from other serum constituents. The intensity of the color formed is proportional to the creatinine concentration in the sample1. CLINICAL SIGNIFICANCE Creatinine is the result of the degradation of the creatine, component of muscles, it can be transformed into ATP, that is a source of high energy for the cells. The creatinine production depends on the modification of the muscular mass, and it varies little and the levels usually are very stable. Is excreted by the kidneys. With progressive renal insufficiency there is retention in blood of urea, creatinine and uric acid. Elevate creatinine level may be indicative of renal insufficiency1,4,5. Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should integrate clinical and other laboratory data.
REAGENTS R1
Picric Reagent

3.

Pipette into a cuvette: Blank 1.0 --Standard 1.0 100 -Sample 1.0 -100

WR (mL) Standard(Note 1,2) (L) Sample (L) 4. 5. 6.

Mix and start stopwatch. Read the absorbance (A1) after 30 seconds and after 90 seconds (A2) of the sample addition. Calculate: A= A2 A1.
A Sample

CALCULATIONS
x 2 (Standard conc.) = mg/dL of creatinine in the sample
A Standard

Conversion factor: mg/dL x 88.4 = mol/L.

QUALITY CONTROL
Control sera are recommended to monitor the performance of assay procedures: SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and 1002210). If control values are found outside the defined range, check the instrument, reagents and calibrator for problems. Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective actions if controls do not meet the acceptable tolerances.

REFERENCE VALUES

Picric acid Sodium hydroxide

17.5 mmol/L 0.29 mol/L

R2
Alkaline Reagent

Serum or plasma: Male 0,7 - 1,4 mg/dL 61.8 123.7 mol/L Female 53.0 97.2 mol/L 0,6 - 1,1 mg/dL Urine: 15-25 mg/Kg/24 h Male 10 - 20 mg/Kg/24 h 88 177 mol/Kg/24 h Female 8 18 mg/Kg/24 h 71 177 mol/Kg/24 h These values are for orientation purpose; each laboratory should establish its own reference range.

CREATININE CAL PRECAUTIONS

Creatinine aqueous primary standard 2 mg/dL

PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Measuring range: From detection limit of 0.09 mg/dL to linearity limit of 15 mg/dL. If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/2 with NaCl 9 g/L and multiply the result by 2. Precision: Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20) Mean (mg/dL) 1.06 3.58 1.03 3.31 SD 0.22 0.06 0.04 0.06 CV (%) 2.07 1.54 3.97 1.75 Sensitivity: 1 mg/dL = A 0,03 A/min . mg/dL Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show systematic differences when compared with other commercial reagents (x). The results obtained using 50 samples were the following: Correlation coefficient (r): 0.986 Regression equation: y= 0.975x + 0.047 The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.

Sodium hydroxide: Irritant (Xi): R36/38: Irritating to eyes and skin. S26: In case of contact with eyes, rinse immediately with plenty of water and seek medical advice. S37/39: Wear suitable gloves and eye/face protection. S45: In case of accident or if you feel unwell, seek medical advices immediately.

PREPARATION Working reagent (WR): Mix equal volumes of R 1 Picric Reagent and R 2 Alkaline reagent. The working reagent is stable for 10 days at 15-25C. STORAGE AND STABILITY All the components of the kit are stable until the expiration date on the label when stored tightly closed at 2-8C, protected from light and contaminations prevented during their use. Do not use reagents over the expiration date. CREATININE CAL Once open is stable up to 1 month when stored tightly closed at 2-8C, protected from light and contaminations prevented during their use. Signs of reagent deterioration: - Presence of particles and turbidity. - Blank absorbance (A) at 492 nm 1.80. ADDITIONAL EQUIPMENT - Spectrophotometer or colorimeter measuring at 492 nm (490-510). - Matched cuvettes 1.0 cm light path. - General laboratory equipment. SAMPLES 1 - Serum or heparinized plasma . Creatinine stability: 24 hours at 2-8C. 1 - Urine : Dilute sample 1/50 with distilled water. Mix. Multiply results by 50 (dilution factor); Creatinine stability: 7 days at 2-8C. PROCEDURE 1. Assay conditions: Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . 492 nm (490-510) Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm. light path Temperature. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37C / 15-25C 2. Adjust the instrument to zero with reagent blank.
BSDTT13 Ed.2004

INTERFERENCES
Hemoglobin (1 g/L), Bilirrubin (55 mg/dL), interfere1. A list of drugs and other interfering substances with creatinine determination has been reported by Young et. al2,3.

NOTES
1. Calibration with the aqueous Standard may cause a systematic error in automatic procedures. In these cases, it is recommended to use a serum Calibrator. Use clean disposable pipette tips for its dispensation. SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers. Instructions for many of them are available on request.
Murray R.L. Creatinine. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1261-1266 and 418. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.

2. 3.

BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. 4. 5.

PACKAGING Ref: 1001111


Cont.

2 x 150 mL

SPINREACT,S.A. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com

Related Interests