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PRACTICA # 5 EFECTO DE LA REFRIGERACION EN LA INCIDENCIA DE ENFERMEDADES DE POSTCOSECHA EN CITRICOS. PATOGENOS DEBILES.

- Penicillium sp INTRODUCCION Las pérdidas postcosecha de productos hortofrutícolas debido a microorganismos durante el período de traslado de la huerta a la empacadora pueden ser críticas y ocurrir rápidamente; particularmente en zonas tropicales, en donde las altas temperaturas y la humedad relativa alta propician el desarrollo acelerado de dichos microorganismos. Además, el etileno producido por las pudriciones puede promover la maduración y senescencia prematuras de otros productos almacenados en el mismo lugar de almacenamiento y transporte, de manera que los productos sanos se pueden contaminar con los podridos. Además de las pérdidas reales debidas al desperdicio, se presenta otro tipo de pérdidas si los requerimientos del mercado demandan selección y reempaque de productos parcialmente contaminados. El conocimiento de la cantidad de pérdidas ocasionadas por cada enfermedad vegetal importante es esencial tanto para seleccionar líneas de investigación encaminadas a solucionar problemas de gran importancia económica como para determinar la factibilidad económica del establecimiento de medidas de control de dichas enfermedades. El hecho de derivar y utilizar estimadores fitopatológicos abarca tres aspectos: determinación y ponderación de la intensidad de la enfermedad; extrapolación de esto último en términos de pérdidas expresadas en unidades de producción o pérdidas monetarias, e interpretación del impacto de esta pérdida sobre el productor, el comerciante y el consumidor. Existe una gran variedad de técnicas disponibles para evaluar la intensidad de las enfermedades vegetales y su extrapolación a pérdidas por enfermedad. Muchas bacterias y hongos pueden causar la pudrición en postcosecha de frutas y hortalizas. Sin embargo, es muy común observar que el mayor número de pérdidas postcosecha es ocasionado por microorganismos tales como especies de hongos como Alternaria, Botrytis, Diplodia, Monilinia, Penicillium, Phomopsis, Rhizopus, y Sclerotinia y de las bacterias Erwinia y Pseudomonas. Muchos de estos microorganismos son llamados patógenos débiles debido a que sólo pueden infectar al órgano vegetal si éste está dañado por heridas. Algunos, como es el caso de Colletotrichum pueden penetrar la piel de órganos vegetales saludables. A menudo la relación entre hospedante y patógeno es razonablemente específica , por ejemplo, Penicillium digitatum pudre sólo a los cítricos y Penicillium expansum pudre a las manzanas y a las peras pero no a los cítricos.

Las pruebas de patogenicidad de microorganismos se obtienen siguiendo los postulados de Robert Koch: 1) Siempre se debe asociar un organismo específico con la enfermedad. La infección postcosecha también puede ocurrir a través de la penetración directa a la piel. los cuales disminuyen la velocidad de maduración. el organismo debe producir los síntomas característicos de la enfermedad bajo estudio en el hospedante. en cambio muchos vegetales tienen un pH por arriba de 4. e identificado como el que se aisló previamente. 3) Al ser inoculado a un hospedante saludable. Además de las altas temperaturas y humedad relativa el daño por frío también predispone a los productos de zonas tropicales y subtropicales al deterioro en postcosecha. 2) Se debe aislar dicho organismo en cultivo puro de hospedante enfermo.5 y son enormemente propensos al ataque de hongos. también retardan el crecimiento de microorganismos causantes de pudriciones. de manera que los tratamientos tales como las bajas temperaturas. OBJETIVO Demostrar la importancia de las heridas para la infección de tejidos vegetales en Penicillium spp. muchos hongos que ocasionan pérdidas postcosecha considerables son incapaces de penetrar a la piel intacta del producto pero lo invaden a través de la ruptura de la piel. . bajo condiciones favorables.Como se mencionó con anterioridad. El fruto en etapa de maduración es más susceptible al ataque de microorganismos que el fruto inmaduro. y las pudriciones del extremo peduncular son formas importantes de pérdidas postcosecha de muchas frutas y hortalizas. A menudo el daño es microscópico pero suficiente para que los patógenos presentes en la huerta y en la empacadora tengan acceso al producto. Muchos otros factores afectan la velocidad de desarrollo de una infección en frutos y hortalizas. los frutos generalmente tienen un pH por debajo de 4. Además el lugar de corte del tallo o pedúnculo es un punto por el que frecuentemente penetran los microorganismos invasores. consecuentemente las pudriciones bacterianas son mucho más comunes. El factor más importante que afecta al desarrollo de las pudriciones postcosecha de los productos hortofrutícolas es su medio ambiente. obtenido en cultivo puro. El pH del tejido vegetal actúa como medio selectivo.5 y. tomando como base los postulados de Koch. 4) El organismo debe ser reaislado del hospedante involucrado artificialmente.

1 cuchillo. Dicha evaluación servirá como referencia para realizar comparaciones posteriormente. en medio de 2 mecheros encendidos y lavarse las manos. NOTA: El pH del limón es muy bajo. Papel filtro o toallas de papel. 1-2 Mecheros de Bunsen. Estas determinaciones constituirán la evaluación inicial (condiciones de los frutos a su llegada al laboratorio).). Posteriormente tome sus alícuotas y registre el número de veces adicionales que diluyó dicha solución para tomarlo en cuenta al reportar los resultados de este parámetro. 27 Naranjas. Asas para siembra. Con el objeto de economizar la solución de NaOH para la titulación tome 1 mL de jugo y diluyalo al menos 20 veces (solución 1:20 v:v). posteriormente. . Exprimidor de cítricos 3 matraces de erlenmeyer de 125 mL 1 bureta de 50 mL 1 soporte con pinzas para bureta 3 pipetas volumétricas de 10 mL 1 refractómetro de mano 1 potenciómetro Agua destilada Cámara de refrigeración (7-10°C) Reactivos Solución de NaOH 0. MATERIALES 1 Naranja o limón infectada(o) con hongo azúl (P. Cling Wrap. Comparar los principales parámetros químicos de calidad en frutos sanos y enfermos para evaluar el efecto de la enfermedad en la calidad postcosecha de frutos cítricos.. Algodón o gasa. 4 Charolas de styrofoam. pH y acidez titulable de la misma manera en que lo realizó en la práctica # 2 en 3 frutos completamente sanos.Comparar dos temperaturas de almacenamiento. italicum) ó verde (P.Testigo: Dibuje un círculo con marcador en el ecuador de 6 frutos. I. navaja o bisturí. etc. digitatum). así como instrumentación utilizada después de cada inoculación para evitar contaminaciones cruzadas. 1 Paquete de películas plásticas (Kleen Pack . 1 Marcador. Campana de flujo laminar. refrigeración contra medio ambiente. 2) TRATAMIENTOS: Se recomienda efectuarlo en campana de flujo laminar. una inoculación en el fruto sano (sin heridas) adentro del círculo marcado.1N 250mL Fenolftaleína al 1% en etanol al 50% 10mL PROCEDIMIENTO 1) Evalúe los parámetros químicos de calidad: °Brix. Moje un algodón con agua destilada y expóngalo a la superficie infectada para realizar. mandarinas o limones en perfectas condiciones (sanos). con respecto al desarrollo de la enfermedad.

Tratamiento 1..II.Inocule 6 frutos con Penicillium transfiriendo segmentos de tejido infectado a la cicatríz del pedúnculo del fruto sano. Colóque 3 frutos de cada tratamiento en una cámara de refrigeración y los 3 frutos restantes de cada tratamiento se almacenarán a temperatura ambiental durante 7 días...Tratamiento 2.. pH y acidez titulable de los productos infectados. III. Para todos los tratamientos y el testigo: Colóque los frutos en cámaras húmedas elaboradas de la siguiente manera: Colóque los frutos inoculados en charolas individuales para cada tratamiento. Elabore un reporte a manera de artículo científico: Título Resumen Introducción (breve) Objetivos Materiales y Métodos (muy resumido) Resultados Discusión Conclusiones Literatura Citada ..Tratamiento 3. Cubra la charola con la película plástica. Compare estos resultados con las determinaciones en frutos sanos. Realice determinaciones de °Brix.Inocule 6 frutos con Penicillium transfiriendo segmentos de tejido infectado en pequeños cortes profundos que toquen los sacos de jugo (no importa en este caso si los rompen accidentalmente). IV.Inocule 6 frutos con Penicillium transfiriendo segmentos de tejido infectado a pequeños cortes superficiales en la piel del fruto sano SIN TOCAR LOS SACOS DE JUGO. Colóque una toalla de papel húmeda o papel filtro húmedo en la parte inferior (piso) de la charola.. Lávese las manos después de cada evaluación. Al cabo de 7 días retire los productos de sus respectivos lugares de almacenamiento. Determine el porcentaje de área infectada de los frutos bajo cada tratamiento de la siguiente manera: Mida el diámetro ecuatorial del fruto y determine qué porcentaje de dicho diámetro ha sido infectado por el hongo.

Relation of Wounds to Decay of Citrus Fruit by Penicillium spp.A p. U. Freeman and Company.S.E.BIBLIOGRAFIA Peterson. Sourcebook Commitee of the American Phytopathological Society. . W. J. en: Sourcebook of Laboratory Exercises in Plant Pathology. 1967.36.H.