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MANEJO DE MUESTRAS

La fiabilidad de un resultado laboratorial y su interpretación dependen en gran parte de la calidad del material enviado al laboratorio. Por lo tanto, el manejo adecuado de las muestras, desde que se obtienen hasta que se procesan, es fundamental. Aunque las características de las muestras se indican concretamente en cada análisis existen algunas normas de manejo de muestras que son bastantes generales. Estas normas se pueden clasificar en dos grandes apartados: Obtención de la muestra  En las extracciones de sangre, la punción debe ser lo más limpia posible evitando “explorar” con la aguja  Enviar el volumen requerido y el tipo de muestra adecuado a el/ los test/s que se piden, utilizar el tubo indicado para cada caso, y respetar las señales de llenado del tubo.  Mantener la muestra a temperatura ambiente o en nevera según se indique. No congelar nunca la muestra a no ser que se especifique en la lista de pruebas.  Para evitar la Lipemia que interfiere en muchos tests, es imprescindible dejar al animal en ayunas durante unas 12 horas Identificación de la muestra  Rellenar correctamente y lo mas completo posible el formulario de petición de análisis (facilitado por Vet Lab o disponible en www.vetlabsl.com) de forma legible. Dar al laboratorio la mayor información posible. No existen detalles insignificantes. Indicar tratamientos y vacunaciones así como una lista de sospechas de la enfermedad y la fecha y hora de obtención de la muestra A nadie le gusta rellenar formularios, pero el laboratorio no puede trabajar sin ellos. La muestra se procesa según las peticiones escritas en el formulario no en el tubo de la muestra.  Se debe marcar claramente en todos las muestras, a quien pertenece y el origen de la muestra. A menudo de se remiten muestras de más de un animal en el mismo envío, en ese caso, marcar los nombres diferenciables en cada tubo de forma clara y legible 1.- HEMATOLOGIA Las muestras de sangre entera para Hematología son relativamente frágiles y requieren un cuidado especial:  Evitar el exceso de succión durante la extracción sanguínea para no provocar hemólisis.  Después de la extracción, la sangre debe ponerse en tubos con anticoagulante y mezclar cuidadosamente. El EDTA es el anticoagulante preferido para la mayoría de exámenes hematológicos  Siempre que sea posible, asegurarse de que la relación anticoagulante/sangre sea la correcta, llenando el tubo hasta el lugar indicado para evitar fenómenos de dilución y/o distorsión celular por exceso.

BIOQUIMICA CLINICA  La existencia del gran número de tests bioquímicos actualmente disponibles hace que esta disciplina aporte una amplia información sobre diferentes aspectos del metabolismo del paciente. Evitar la toma de muestras a partir de catéteres...3 x 9) 3.. El contacto prolongado de la sangre con el anticoagulante induce distorsiones celulares e incluso hemólisis a los 3 días a temperatura ambiente.  La relación anticoagulante/sangre. El anticoagulante a usar es 1 parte de citrato sódico al 3.8 % y 9 partes de sangre. y usar siempre tubos de plástico con Citrato Sódico al 3. | | 2. unas normas de manejo para este tipo de muestras: . deben ser una extensión de los exámenes clínicos y no una alternativa.8% específicos para pruebas de coagulación.  Para evitar errores debidos al manejo de las muestras. es importante recordar que no se deben usar los tests bioquímicos como sustitutos de otros procedimientos clínicos (examen físico.  Los sistemas de coagulación de los animales se activan a menudo ex vivo durante la toma o el transporte de la muestra. Los estudios de coagulación.3 cc de citrato y extraer 2. Realizar frotis sanguíneos inmediatamente y/o refrigerar la sangre. Si se quieren congelar las muestras. una vez separado el plasma debe realizarse una congelación rápida en alícuotas para prevenir la formación de cristales. y sin excesivos pinchazos. No se pueden realizar contajes celulares en sangres de mas de 4 días de antigüedad.) Las investigaciones laboratoriales.7 cc de sangre (0. Ejemplo: para conseguir un volumen total de muestra de 3 cc se deben poner en la jeringa 0. • Una vez obtenida la muestra. | |  Se pueden aplicar. o congelar en caso de envío retardado (pueden aguantar 2 semanas). Sin embargo. centrifugar la muestra a 2500-3500 rpm durante 15 minutos y separar el plasma por pipeteado a otro tubo de plástico dentro de los 30 primeros minutos post-extracción. son reacciones enzimáticas que están marcadamente influenciadas por manejos inadecuados de las muestras.. es crítica. Si se observa hemólisis o algún coágulo. repetir la extracción. Existirán algunos casos donde sea aconsejable la extracción de la muestra con “jeringa citratada”. se deben seguir las siguientes recomendaciones: • Las muestras deben obtenerse con un grado de excitación del animal mínimo. Refrigerar en caso de envío rápido. RX. La congelación o descongelación lentas pueden producir la crioprecipitación de algunos factores de coagulación. mezclar el tubo suavemente y dejar reposar 5-7 minutos. La desviación de esta relación limita la disponibilidad del calcio en el sistema y puede ser una causa de error. A continuación. en general. En estos casos es mejor poner la cantidad justa del anticoagulante en la jeringuilla y hacer la venipunción. Evitar los tubos de vidrio.COAGULACION  La evaluación laboratorial de los pacientes con defectos hemostáticos requiere una atención meticulosa en la metodología y en los controles de calidad.

4.. Asegurarse de que todas los hematíes se han quedado en el primer tubo para evitar la hemólisis durante el envío. Para un diagnóstico correcto es vital extraer las muestras ANTES de cualquier terapia. Separar el plasma a tubos de plástico sin nada y refrigerar o congelar según se indique. |  Actualmente y en nuestro laboratorio. aunque la interpretación del resultado. Es decir. y aunque los inmunoensayos que actualmente se utilizan sean fiables. Por lo tanto. son: • Interferencias por Hemólisis.• Para obtener suero. • El envío de una muestra de sangre entera coagulada y no separada no es muy aconsejable.es imprescindible consultar con el laboratorio el tipo de muestra requerido para cada fármaco. las causas más frecuentes de resultados erróneos. y que es imprescindible seguir escrupulosamente.. podemos decir que para las pruebas de Endocrinología.3 cc de suero.ENDOCRINOLOGIA  Excepto algunas hormonas que requieren unas condiciones de manejo especiales (indicado en el listado de pruebas analíticas). Marcar el tubo. Estas monitorizaciones están indicadas cuando no hay una respuesta terapéutica. recoger la sangre en tubos con anticoagulante. Ictericia o Lipemia • Muestra insuficiente • Interferencia por extracción sanguínea post-tratamientos. recoger la muestra sin anticoagulante y dejar coagular durante 1-3 horas. Normalmente por cada 1 cc de sangre entera se pueden obtener 0. separar el suero y ponerlo en un tubo de plástico. Esto implica que cada laboratorio debe realizar sus propios procesos de validación de estas técnicas.  Debido a que ciertas proteínas transportadoras del plasma pueden producir interferencias en el test . desde el punto de vista clínico. el resultado debe interpretarse en relación a los valores de referencia determinados para cada laboratorio. 5. | |  El análisis hormonal ideal no existe. se deben seguir exactamente las condiciones de manejo explicadas en el apartado de Bioquímica.  La concentración de droga requerida en plasma para producir una respuesta terapéutica adecuada se llama rango terapéutico de la droga. y centrifugar dentro de los 15 primeros minutos. | • En caso de que la muestra solicitada se plasma (EDTA o Heparina). Una vez coagulada la muestra y retraído el coágulo. existen hormonas que tienen estructuras químicas muy similares en todas las especies y otras que no. cuando existe sospecha de toxicidad o para confirmar un abordaje terapéutico. Concentraciones por debajo de este rango se consideran sub-terapéuticas. de la misma muestra en laboratorios diferentes se pueden obtener resultados diferentes. mientras que las concentraciones superiores al rango se consideran como tóxicas.FARMACOLOGIA – TOXICOLOGIA  La monitorización de las concentraciones plasmáticas de un fármaco durante una terapia se usa para optimizar el régimen de administración a un paciente. y refrigerar o congelar si no se va a enviar en los próximos 3 días. la mayoría de ellos suelen ser específicos de especie. En los animales. debe ser el mismo en todos ellos. . centrifugar.

es muy importante obtener una muestra de orina no contaminada. La pérdida del agente etiológico suele ser por que el medio de transporte o las técnicas de conservación son inadecuados. estos mismos cultivos. El método de elección para recoger la muestra es la Cistocentesis realizada de forma aséptica Se debe realizar el cultivo a las 2 horas de la recogida.MICROBIOLOGIA  Si los usamos de forma correcta. una muestra obtenida en cualquier tiempo del día puede ser satisfactoria para realizar análisis de screening... el urianálisis presenta algunas peculiaridades: • Aunque la composición de la orina puede variar considerablemente durante el día. | | Cuando empleamos una torunda es importante obtener una muestra suficiente. • Para el urianálisis hay que enviar una cantidad suficiente de orina reciente en un recipiente estéril y especial para orina y herméticamente cerrado.) • No se sabe bien cuanto tiempo pueden mantenerse las muestras de orina a temperatura ambiente sin que se afecta su composición. mantener el recipiente refrigerado y sin luz para las pruebas químicas. ya que los organismos existentes en la torunda son menos que los existentes en el tejido y puede que se pierdan algunos de los organismos más lábiles durante el transporte de la muestra . (no se deben cultivar orinas que han estado 2-3 horas a temperatura ambiente) o bien refrigerar la muestra al momento.  Tanto desde el punto de vista citológico como químico. • Indicar siempre el método de recogida de la orina ( Cistocentesis. por esta razón. los cultivos microbiológicos pueden identificar agentes etiológicos y por lo tanto. sondaje. La orina es una mezcla inestable e impredecible. Si se sospecha un ligero retraso en el análisis o en el envío... para el ensayo cuantitativo de bacteriuria y piuria... contribuir al diagnóstico final. en cambio. La mayoría de errores en el manejo de las infecciones del tracto urinario son debidos a errores en la recogida de muestras. se guarda y se envía la muestra.  El valor de los cultivos microbiológicos depende en gran parte de cómo se toma.6. • Las muestras se deben tomar asépticamente y ponerlas en el recipiente adecuado. • En las infecciones de orina. es recomendable que las muestras de orina sean examinadas tan pronto como sea posible o bien sean debidamente conservadas (aunque no exista preservativo ideal para todos los tests rutinarios en orina). sean similares a las existentes in vivo.URIANALISIS  El objetivo del laboratorio es analizar muestras cuyas características in vitro. usados incorrectamente pueden identificar agentes contaminantes y llevar a diagnósticos incorrectos. Los contajes bacterianos son estables durante 24-36 horas en muestras refrigeradas 7.

| • Los tests de susceptibilidad (antibiogramas) se efectúan en aquellos cultivos donde ha habido un crecimiento suficiente. y es el que puede abandonar el huésped a través de excreciones como heces o orina. y enviar a temperatura ambiente. La mejor muestra son los pelos fluorescentes a la lámpara de Wood. el área cutánea afectada debe ser limpiada. e incluso algunos organismos pueden requerir alrededor de 30 días 8. Los especímenes para el aislamiento de patógenos anaérobicos. y tomar raspados y/o arrancar pelos de los bordes activos. ya que el EDTA es muy tóxico para las bacterias. y si esto no es .. ponerlos en un contenedor estéril. El aislamiento e identificación de algunos agentes micóticos requiere a menudo un tiempo considerable y no se deben esperar los resultados antes de los 21 días.  Normalmente los tests usados están destinados a detectar parásitos adultos o sus diversos estadíos del ciclo. • Algunos especímenes requieren medios de transportes especiales. Las muestras de fluidos (cavidad corporal..ENFERMEDADES INFECCIOSAS Y PARASITARIAS 8. El ciclo de vida de la mayoría de parásitos tiene al menos un estadío en el cual se transmite de un huésped a otro.. las muestras fecales deben ser recogidas del recto. sobre todo en muestras donde pueda existir una flora bacteriana normal (heces.1... requieren un cuidado especial. o puede ser transmitido al próximo huésped por artrópodos. bajo condiciones de calidad controladas y que se consideran que contribuyen a la enfermedad. las placas que llegan al laboratorio con crecimientos mixtos no se examinan • Para el cultivo de dematofitos.. Además dependiendo del tejido y de la especie de origen. Las muestras obtenidas de animales bajo tratamiento puede que no den resultados satisfactorios por algún grado de supresión del organismo. se pueden requerir diferentes medios de cultivo para identificar y aislar agentes patógenos específicos • Especificar siempre los tests que se piden y los patógenos que se sospechan. El mismo agente bacteriano puede ser mucho o poco significativo dependiendo del tejido y/o de la especie de donde se obtiene la muestra. como huevos. Si se tienen dudas sobre que muestras obtener y como obtenerlas llamar al laboratorio primero. articulaciones . ). mucosas orales .PARASITOS INTERNOS  Los diversos parásitos internos. ya que las bacterias anaeróbicas mueren en presencia de oxígeno. | • Los cultivos enviados para la identificación deben ser cultivos puros. tienen varios ciclos de vida.  Parásitos en heces: • Preferiblemente. Este estadío es el que frecuentemente se detecta por los tests laboratoriales y se le llama estadío diagnóstico.• Marcar todas las muestras con el tejido de origen y la especie. piel. pericardio. Nunca enviar fluidos u otros especímenes en tubos con EDTA.) es mejor enviarlos en botellas de hemocultivo. larvas en las excreciones o sangre de nuestros animales.

ya que en principio. Esta técnica de examen del frotis sanguíneo se está sustituyendo por la búsqueda de DNA del organismo mediante técnicas de PCR. usada para la detección de antígeno de adulto circulante. En estos casos se deben guardar las muestras con Formol al 10 %. se debe recoger la parte superior de heces recién depositadas.PARASITOS EXTERNOS  Son técnicas destinadas a identificar los agentes causantes de ciertas lesiones dérmicas. pero que un número bajo de huevos no indica necesariamente un número bajo de parásitos. y la metodología ELISA. existen ciertas ocasiones donde el tiempo entre la recogida y el examen puede ser mayor (o no se puedan refrigerar las muestras).  La toma de muestras de estos procesos consiste en: • Mojar la hoja de bisturí en aceite mineral o glicerina y realizar raspados cutáneos en los bordes de la lesión. y los huevos de los parásitos pueden eclosionar. incluyen La IFI. Notoedres. que suelen ser parásitos profundos (Sarcoptes.. Fijacion complemento.  En la actualidad disponemos de un test ELISA para la detección de anticuerpos en muestras de suero frente a Sarcoptes Scabiei y frente a dermatofitos.. Y NO EN OTRO TIPO DE CONTENEDOR • Normalmente estas muestras no necesitan otra conservación que la refrigeración.2. Es muy raro que este test sea negativo en una animal infectado. La hoja de bisturí debe estar en ángulo recto a la piel y asegurarse de que el raspado es lo suficientemente profundo mediante la aparición de una hemorragia puntual mínima. Inmunodifusion. y la flotación separa las heces de los huevos de varias especies de helmintos y quistes de protozoos (no detecta los trofozoitos de Giardia.posible. • Las muestras fecales deben enviarse en los contenedores especiales para este uso. y fundamental. La mayoría de parásitos (excepto algunos protozoos) pueden identificarse incluso 2–3 días después de la recogida Ahora bien. Es importante recordar que un alto número de huevos puede indicar un alto número de parásitos. NO CONGELAR NUNCA UNA MUESTRA DE HECES • Es recomendable notificar la sospecha clínica. es hablar con el laboratorio ya que el tipo de muestra sanguínea a obtener variará según la sospecha clínica que se tenga  Para el diagnóstico de Filariosis existen principalmente dos tets. cada una de las técnicas empleadas tienen objetivos distintos.: El test de Knott. el veterinario práctico no . • Poner la hoja de bisturí junto al material obtenido en un recipiente cerrado.  Para la detección de Hemoparásitos el primer paso. Aglutinación por latex.  Para otros hemoparásitos se realizan evaluaciones (normalmente del buffy coat) de frotis sanguíneos obtenidos de sangre periférica. ELISA.3. 8.Immitis circulante. La técnica de Baermann separa las larvas de primer estadío de las heces (útil para Strongyloides Stercolaris). bastantes. Demodex ). o numerosos organismos. La muestra obtenida.. 8. Inmunoblots. que se usa para detectar e identificar microfilarias de D. que deben buscarse en heces muy recientes o utilizar tecnología ELISA) • Los resultados se informan como NEGATIVO o como la presencia de algunos.. En general. debe ser de color rosado.SEROLOGIA  Las técnicas usadas en Medicina Veterinaria.

no es más que el resultado directo de la capacidad de la técnica.. además de las deseadas.  Una de las etapas más importantes para la puesta en marcha de una PCR es la selección del segmento específico de DNA que desea amplificar y diseñar y encargar la síntesis de cebadores. La PCR es una técnica capaz de generar “in vitro” grandes cantidades de un fragmento determinado de DNA con una secuencia específica. La gran sensibilidad y versatilidad de este método ha revolucionado tanto las estrategias de estudio de la genética. pero no es una prueba categórica de que exista infección o de que la enfermedad actual este causada por el organismo en cuestión. la IgM se produce durante un periodo de tiempo corto post-infección (7-10 días).CITOLOGIA Y ANALISIS FLUIDOS  Para evaluaciones citológicas se requieren varios frotis fijados. La aparición de amplificaciones inespecíficas puede complicar la interpretación de los resultados obtenidos. la diferenciación entre IgM e IgG sirve de ayuda. . no teñidos. y siempre debe efectuarse la interpretación con el conjunto de signos clínicos.4. y una segunda muestra obtenida aproximadamente 3 semanas después.  Obviamente.  Al ser una técnica que detecta DNA del agente infeccioso. a partir de cantidades mínimas del mismo. de los procesos evolutivos y de determinados aspectos diagnósticos. | |  La otra etapa crítica de esta técnica es el control de la técnica en sí misma. Debido a la gran sensibilidad de la técnica para detectar DNA. un animal permanecerá seronegativo durante las primeras 3-4 semanas siguientes al inicio de la enfermedad. el tipo de muestra dependerá del ciclo de cada organismo. 9. o impresiones de masas u órganos. La composición de los cebadores es un factor muy decisivo en el éxito o el fracaso de una reacción de amplificación. Entre los diferentes problemas que pueden aparecer al utilizar la técnica de PCR. el proceso de extracción y la contaminación tienen especial relevancia. Si el test detecta sólo IgG hacia el organismo agresor. Por lo tanto se requerirá la documentación de una seroconversión (un aumento x 4 en el título de anticuerpos para propósitos diagnósticos) para la confirmación del diagnóstico. y el tipo de test usado. y su vida media es corta (4-6semanas). El problema con las IgM es que no son muy específicas.  En general.necesita saber las peculiaridades de cada método. Se deben evaluar una muestra obtenida durante la enfermedad aguda temprana. ya que al ser pentámera. En general. es la fisiopatologia de la enfermedad. Cada técnica tiene un tipo de muestra preferencial que incluso puede ser variable según el protocolo.. es crítico mantener un control estricto en la extracción y manejo de la muestra. la presencia de anticuerpos específicos a un organismo indica una exposición previa a este organismo.BIOLOGIA MOLECULAR  En medicina veterinaria La PCR es el mecanismo de biología molecular más utilizado en procesos de diagnóstico. sino que lo que el clínico debe saber para interpretar un resultado positivo. y realizados a partir de líquidos. Esta amplificación inespecífica de otras secuencias. En algunas situaciones. puede experimentar más reacciones cruzadas con antígenos no específicos. aspiraciones con aguja fina. 8. estos tests serológicos detectan IgM y/o IgG.

<http://www. se necesita el líquido en EDTA para realizar las pruebas complementarias a la citología. 10 2011.buenastareas. goteo de la muestra.  No refrigerar los frotis  Se deben enviar fluidos en jeringuillas correctamente preparadas o en un tubo estéril. Esto previene el sobrecrecimiento bacteriano.com/ensayos/Manejo-De-Muestras/2912542. . y evita daños al personal. 10 2011.html>.com. Para la completa evaluación de los líquidos en cavidades además de los portas fijados.  Es mejor no utilizar muestras obtenidas y conservadas con escobillones." BuenasTareas. Los cambios autolíticos aparecen muy rápidamente en estas torundas Bibliografía "Manejo De Muestras. BuenasTareas. Web.com.