Frotes de Nielsen Tincin de Ziehl-Neelsen

Visualizacin de Mycobacterium tuberculosis usando la tincin de Ziehl-Neelsen. La tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una tcnica de tincin diferencial rpida y econmica, usada para la identificacin de microorganismos patgenos, comoM. tuberculosis o el gnero Apicomplexa (coccidios intestinales) entre otros. La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua, provoca una nueva solidificacin de lo cidos grasos de modo que el colorante ya no puede salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta la energa cintica de las molculas del colorante lo cual tambin facilita su entrada a las bacterias. Las bacterias que resisten la decoloracin son de color rojo y las que no, se ven de color azul ya que se utiliza azul de metileno como tincin de contraste. Esta tcnica puede realizarse tanto en muestras histolgicas como citolgicas. El procedimiento es el siguiente: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. desparafinar e hidratar los cortes cido peridico 5%, 10 min lavar con agua destilada fucsina fenicada, 15 min decolorar en alcohol cido al 50% lavar con agua destilada hematoxilina, 10 min azulidificar con, por ejemplo, carbonato de litio deshidratar, aclarar y montar preparaciones

Resultados BAAR: rojo. Ncleos: azul semiamarillo.

CARACTERISTICAS MORFOLGICAS Y ESTRUCTURALES DE Mycobacterium tuberculosis.

Las mycobacterias en general pueden variar mucho en su morfologa, desde formas cocoides pequeas a largos filamentos, M. tuberculosis suele tener una morfologa caracterstica, bacilo delgado de forma recta o ligeramente curvada en frotis teidos, y su tamao suele ser de 1-4 micras de largo por 0,3-0,5 micras de ancho. Ocasionalmente, forma ramificaciones verdaderas que se observan en cultivos enriquecidos y en frotis de ganglios linfticos gaseosos.

Son bacilos no formadores de esporas, sin flagelos ni cpsula. La estructura celular de M. tuberculosis consta de una gruesa pared, separada de la membrana celular por el espacio periplsmico, con cuatro capas. La ms interna es el glicopptido o peptidoglicano con molculas de Nacetilglucosamina y cido-N-glucolilmurmico (en lugar del habitual Nacetilmurmico) con cortas cadenas de alanina. Esta capa es el esqueleto de la bacteria que le da forma y rigidez. Externamente, hay otras 3 capas compuestas, una por polmeros de arabinosa y galactosa, otra formada por cidos miclicos (que son cidos grasos derivados) y otra superficial formada por lpidos como los sulfolpidos, el cord factor,llamado as por su aparente asociacin con la forma acordonada con que se agrupan las mycobacterias virulentas, y los micsidos que son al igual que el anterior glicolpidos. No difiere del resto de las bacterias en cuanto al citoplasma y el ADN nuclear. Las mycobacterias son aerobios estrictos y no crecen en ausencia de oxgeno.

ENFERMEDADES GRANULOMATOSAS CRONICAS. Cuando los tejidos vivos se exponen a un factor irritante capaz de lesionar, responden de distintas maneras, A s por ejemplo, pueden experimentar una rpida proliferacin, como la que sucede en el epitelio daado, o producir una respuesta que se caracteriza por edema y migracin de neutrfilos, como en la inflamacin aguda, o por infiltracin de plasmocitos linfocitos y proliferacin fibroblstica, como en la inflamacin crnica, o bien responder con un proceso inflamatorio que, adems de otras caractersticas, se distingue por una gran proliferacin de histiocitos. Este ltimo tipo de respuesta inflamatoria es caracterstico de las enfermedades granulomatosas crnicas: Entre los granulomas infecciosos especficos se cuentan la tuberculosis Caractersticas Histopatolgicas: Lo mas importante es el granuloma tuberculoso el cual en una primera etapa es duro, conformado por clulas epiteloides (debido a ciertas semejanza con las clulas epiteliales) son clulas de citoplasma acidfilo y ncleo ovalado, que pueden contener bacilos cido alcohol resistentes, entre estos se encuentran clulas gigantes multinucleadas, con abundante citoplasma eosinfilo y sus ncleos dispuestos en forma de herradura que caracterizan a la clula gigante de Langhans, por fuera de estos se encuentran abundantes linfocitos dispuestos en forma de corona. Para luego reblandecerse y conformar el tubrculo blando. donde se observa una necrosis central, conformado una sustancia amorfa homognea y eosinfila demoninada caseun, clulas epiteloides gigantes y la corona linfocitaria lo que constituye el " Granuloma tuberculoide caseificado" Macroscpicamente se observa tejido blanco (parecido al queso fresco) y blando. Mezcla de zonas de necrosis caseosa y coagulativa. Los granulomas tuberculosos caseificantes (tubrculos) se observan como pequeos puntos blanco-amarillentos. Microscpicamente el foco aparece como restos granulares amorfos compuestos por clulas coaguladas, fragmentadas, encerradas dentro de un borde inflamatorio definido como reaccin granulomatosa. Hay prdida de detalle y arquitectura celular. Zona acidfila central amorfa con zonas basfilas (calcificacin distrfica, no se observan en las imgenes de esta pgina). Alrededor del foco necrtico hay una zona de PMN. Granuloma: zona focal de inflamacin granulomatosa formada por acmulo de clulas epiteliodes (son caractersticas del proceso) y necrosis caseosa rodeados por clulas gigantes, linfocitos, y por fuera fibroblastos y tejido conjuntivo. Pueden existir focos de calcificacin distrfica.

Necrosis caseosa - Aspecto macroscpico. En la imagen de la izquierda se observa necrosis caseosa en un linfondulo con tuberculosis. El nodulo tiene un aspecto blanco amarillento parecido a queso. Este tipo de necrosis es una combinacin de necrosis coagulativa y licuefactiva que es caracterstica en inflamaciones granulomatosas. En la imagen derecha la necrosis caseosa est ms extendida, con granulomas amarronados y de color similar al queso, en la porcin superior de este pulmn en un paciente con tuberculosis. La destruccin de tejido es tan extendida que hay reas con cavidades siendo formadas mientras los restos necrticos (principalmente lquidos) son drenados por va bronquial.

La naturaleza focal de la inflamacin granulomatosa se demuestra en esta seccin microscpica de pulmn en la cual hay granulomas dispersos en el parnquima. Por esto la radiografa de torax en pacientes con tuberculosis u otras enfermedades granulomatosas es a menudo descripta como "reticulonodudular". Una biopsia puede llegar a fallar y no captar lesiones por un error en el lugar de toma de muestra o de tcnica.

Aqu se observan dos granulomas pulmonares. Estas inflamaciones granulomatosas contienen macrfagos epiteliales, clulas gigantes, linfocitos, clulas plasmticas y fibroblastos. Puede llegar a presentarse, adems, algn neutrfilo.

Microscpicamente la necrosis caseosa est caracterizada por reas de necrosis acelulares acidfilas, como se ven en la imagen en el sector superior derecho, rodeado de un proceso inflamatorio granulomatoso.

Medicina Estomatologica Dr. Hugo Tejada Pradell Facultad de Odontologia UCSM Pagina web: http://htejadapestomatologia.blogspot.com/p/enfermedadesgranulomatosas-cronicas.html

Manual para el Diagnostico Bacteriologico de la Tuberculosis Organizacin Panamericana de la Salud Parte 1 (Baciloscopia) Redaccin Mara Delfna Sequeira de LatiniINER, ANLIS Dr. Carlos G. Malbran, ArgentinaLucia BarreraINEI, ANLIS Dr. Carlos G. Malbran, Argentina Pagina web: http://es.scribd.com/doc/20867570/25/Caracteristicas-morfologicasdel-bacilo-de-la-tuberculosis Patologa General Pagina web: http://www.caninum.com/atlas/lesion-celular/11.htm

ARP, ed. Mtodos Histotecnolgicos. Instituto de patologa de las Fuerzas Armadas de los EEUU (AFIP). Esta pgina fue modificada por ltima vez el 25 abr 2013, a las 16:23. http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Ziehl-Neelsen http://es.wikipedia.org/wiki/Granuloma