République algérienne démocratique et populaire Université Djillali Liabes Faculté de Médecine Département de Pharmacie

TP N°01 Dosage de l’hémoglobine.
Réalisée par: • CHAREF KHODJA Meriem. • GHERMI Mohamed. • TAHRI Mahmoud. • BETTAYEB Mohamed Amine. • ZIDOUR Mehdi Nabil 4 ème année pharmacie G05. Année universitaire : 2008 / 2009

TP N 01

HEMATOLOGIE – DOSAGE DE L’HEMOGLOBINE

I- Généralités :
1- Définition :
L'hémoglobine est un pigment de coloration rouge contenu par les globules rouges (hématies) et permettant le transport de l'oxygène des poumons vers les tissus. Une hémoglobinopathie appelée également hémoglobinose est une affection héréditaire sanguine concernant l'hémoglobine et dont la transmission est variable des parents dans les enfants, selon la variété d'hémoglobinose).Un pigment est une substance élaborée par l'organisme, donnant aux tissus leur coloration.

2- Fonction :
L'hémoglobine fournit 33% du poids des globules rouges. Chez l'homme, le taux normal d'hémoglobine est de 14 à 16 g/dl de sang. La quantité d'hémoglobine présente dans la totalité du sang circulant d'un homme de 70 kg est estimée à 750 g. La capacité de transport d'un décilitre de sang est d'environ 20 ml d'oxygène. Ce même volume de plasma ne peut transporter sous forme dissoute que 0,5 ml d'oxygène. L'hémoglobine est une hétéroprotéine constituée de globine et d'une petite globine, molécule non protéique, l'hème Sur l'hème se fixe, transitoirement, hème. hème
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soit un atome d'oxygène, pour former l'oxyhémoglobine HbO2. L'oxygène est oxyhémoglobine libéré par simple dissociation de la molécule d'oxyhémoglobine ; soit une molécule de dioxyde de carbone venant de la respiration cellulaire pour le transporter vers les poumons sous forme de carbohémoglobine carbohémoglobine.

La carboxyhémoglobine, formée par association d'hémoglobine et de monoxyde de carboxyhémoglobine carbone, est plus stable, ce qui explique sa toxicité. Lorsque la pression partielle en oxygène pO2 chute de 100mm Hg (dans les artères) à 40 mm Hg (dans les capillaires veineux), un décilitre de sang libère entre 4 à 5 ml d'oxygène. Dans le globule rouge humain, le 2,3 diphosphoglycérate joue un rôle régulateur fondamental dans le transport de l'oxygène. Il se lie à l'hémoglobine désoxygénée. En stabilisant cette conformation il facilite la libération d'oxygène dans les tissus.
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3- Structure :
L'hémoglobine est une grosse molécule protéique de 64000 daltons. Ce tétramère est constituée de 4 sous-unités identiques deux à deux et qui se distinguent en type alpha et béta le plus souvent. Il en existe, en effet, différentes formes, en particulier plusieurs formes foetales et adultes. La globine est associée à un hème (protoporphyrine III). Elle contient un atome de fer ferreux, enserré par les quatre cycles pyrroliques et capable de se lier à l'O2.

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4- Utilisation clinique : En médecine, plusieurs termes se rapportent à l'hémoglobine : Le taux d'hémoglobine est exprimé en g/100 mL. Les valeurs normales du taux d'hémoglobine dépendent du sexe et de l'âge du sujet. Un taux d'hémoglobine inférieur à la norme définit une anémie. La saturation SaO2 définie en % est calculée par la quantité d'oxyhémoglobine divisée par la quantité totale d'hémoglobine du sang. La saturation SaO2 peut être mesurée sur du sang veineux ou du sang artériel. La saturation en oxygène du sang est un des paramètres d'un examen appelé gaz du sang. La valeur de la saturation est considérée comme dangereuse si elle est inférieure à 90 % pour du sang artériel. La valeur normale est de 100 % pour des conditions atmosphériques normales. À cette valeur, on parle de

capacité en O2 du sang.
La cyanose est un signe clinique. Il s'agit de la coloration bleutée des téguments. Elle apparaît lorsque la concentration en hémoglobine réduite dépasse les 5 g/100 mL de sang capillaire. Elle peut être masquée par une anémie.

IIII- Dosage de l’hémoglobine :
1- Principe 2- Dosage en images 3- Résultats

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HEMATOLOGIE – DOSAGE DE L’HEMOGLOBINE

1- Principe du dosage de l’hémoglobine :
a- Ajout de réactif de Drabkin au sang b- Hémolyse les globules rouges libérant l’hémoglobine c- Oxydation de l’hémoglobine en méthémoglobine (Fe3+) par les ions ferricyanure (Hexacyanoferrate III de potassium K3[Fe(CN)6] ). d- Formation d’un complexe : la cyanméthémoglobine grâce aux ions cyanures (Cyanure de potassium KCN). e- Mesure de l’absorbance (A) de la solution diluée obtenue parallèlement à un étalon de concentration massique connue : A 540 nm (pic d’absorption maximale de la cyanméthémoglobine) avec proportionnalité entre l’absorbance et la concentration massique pour des solutions très diluées (Loi de Beer Lambert)

2- Dosage en images :
a- Organisation du poste :

Préparation du matériel nécessaire et en particulier remplissage des tubes par 5 mL de réactif de Drabkin

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TP N 01 b- Prélèvement du sang :

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Homégénisation

Aspiration de 20 µL

Essuyage du cône

Dilution c- Dilution dans le liquide de Drabkin :

Dépôt des 20 µL dans les 5 mL de réactif de Drabkin

Rinçage du cône par aspiration refoulement du réactif de Drabkin surnageant.

d- Homogénéisation de la solution :

Homogénéisation par retournement après bouchage du tube par du parafilm

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e- Mise en cuve et lecture au spectrophotomètre :

- Remplissage d’une cuve de spectrophotomètre - Lecture à 540 nm du témoin réactif, de l’étalon et de l’essai

f- Gestion des déchets : Élimination des solutions contenant du réactif de Drabkin dans un conteneur dont le contenu sera traité par de l’eau de Javel Élimination immédiate des déchets : cônes, papiers souillés … gants

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HEMATOLOGIE – DOSAGE DE L L’HEMOGLOBINE

3- Résultats :
Expression de la concentration massique d’hémoglobine contenue dans un li de litre sang pur

ρessai en g d’Hb/L de sang = Aessai x ρ étalon / Aétalon
Le taux d’hémoglobine obtenu : Echantillon N° 01: Mr SGHIR 14 g /dl. (Y) chantillon /dl. Echantillon N° 02 : Melle YOUSFI 09 g/dl (X) chantillon g/dl. Interprétation : Valeurs de référence : 120 à 160 g d’Hb /L sang chez 140 à 180 g d’Hb /L sang chez Pour le patient (Y) le taux d Hb est compris dans les valeurs normales, cependant t d’Hb celui de la patiente (X) est nettement inférieur à celui de la norme chez la femme, on posera ainsi le diagnostic d d’une anémie, d’éventuel autres examen préciseront xamen l’étiologie de cette anémie. étiologie

IIIIII- Variations pathologiques :
1- Résultat inférieur aux valeurs seuils
Anémie : - Microcytaire - Macrocytaire - Hémolytique -…

2- Résultats supérieurs aux valeurs seuils
Polyglobulie : - Primitive - Secondaire

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