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Artigo

Determinao de alguns constituintes inorgnicos em amostras de vinhos por espectrometria atmica: ICP OES e ETAAS
Resumo
A determinao de Al, Ca, Fe, K, Mg, Mn, Na Pb e Zn em amostras de vinhos brasileiros, foi feita por espectrometria de emisso ptica com fonte de plasma induzido de argnio (ICP OES) aps preparo das amostras em linha, usando sistema de injeo em fluxo acoplado a um forno de microondas focalizado, exceto para o Zn, para o qual foi apenas efetuada diluio das amostras. Tambm foi feita a determinao de Cd, Cr e Cu, por espectrometria de absoro atmica com atomizao eletrotrmica (ETAAS), aps diluio adequada das amostras, exceto para o Cd, para o qual no houve necessidade de preparo das amostras. Foram feitos testes de adio e recuperao para a validao da metodologia. Os elementos potencialmente txicos Cd, Cr e Pb apresentaram valores inferiores aos de controle da Legislao Brasileira. Aplicandose a anlise hierrquica de grupos aos resultados obtidos observou-se que a separao dos vinhos em diferentes grupos com base nos teores dos diferentes elementos determinados foi influenciada pelo tipo do vinho, pela regio de procedncia e pelos processos de cultivo. Palavras-chave: vinho, ICP OES, ETAAS, constituintes inorgnicos
Marina Spaziani1, Pedro Vitoriano de Oliveira1, Solange Cadore2 e Elisabeth de Oliveira*1 Instituto de Qumica USP Instituto de Qumica UNICAMP, CP 6154, 13.084971, Campinas - SP, Brasil
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*Autor para correspondncia: Instituto de Qumica USP Sala 804, B8T Av. Prof. Lineu Prestes, 748 CEP 05508-900. So Paulo. SP edolivei@iq.usp.br

Summary
Al, Ca, Fe, K, Mg, Na and Pb presents in Brazilian wine samples were determinate by inductively coupled argon plasma atomic emission spectrometry after on line focused microwave assisted sample dissolution. For Zn determination a simple dilution of the samples was made. The determination of Cd, Cr and Cu by eletrothermal atomic absorption spectrometry was performed after adequate sample dilution for Cr and Cu. For Cd no sample preparation was required. Recuperation and validation tests were made. The potentially toxic elements Cd, Cr and Pb presented levels below ones of the Brazilian Legislation. The clusters analysis showed that the separation of the samples wine depend of the type of the wine, the production zone and cultivation process. Keywords: wine, ICP OES, ETAAS, inorganic constituents

Introduo
A qumica analtica ocupa um espao relevante na sociedade, sobretudo devido necessidade constante de controle da qualidade dos diversos alimentos que comemos e bebemos, do ar que respiramos, dos medicamentos que ingerimos e dos diversos produtos industrializados que utilizamos no nosso dia a dia. A monitorao dos teores de ons metlicos e seus compostos importante, devido s suas caractersticas essenciais ou txicas aos organismos vivos (1). Alguns constituintes inorgnicos podem afetar todo o processo de produo do vinho principalmente devido influncia que exercem sobre as propriedades organolpticas da bebida. Elementos como Ca, K, Al, Cu, Mg e Na, influenciam a estabilidade, a cor e a limpidez do vinho. A presena
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de cobre pode estar associada ao uso de CuSO4 como fungicida nas plantaes de videiras. A quantidade de potssio presente no vinho est relacionada a um sabor mais cido ou inspido e devese ao uso de fertilizantes. J a quantidade de mangans presente afeta o processo de fermentao e caracterstico da regio de produo e da adio de fungicidas. Os ons metlicos tambm desempenham um papel importante na dieta, seja pelo carter de essencialidade ou de toxidez. Muitos estudos revelam que o vinho uma importante fonte de ferro e que a razo potssio/sdio desperta o interesse para investigar o efeito do vinho na dieta em casos de hipertenso. Mg e Al apresentam carter txico, especialmente para pessoas que sofrem de disfuno renal (2). Cr, Cd e Pb so
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espcies que podem causar cncer, problemas hepticos, danos ao pulmo, problemas sseos, dentre outros males (3-5). A grande maioria das tcnicas analticas utilizadas para a determinao de ons metlicos requer que a amostra esteja na forma de uma soluo aquosa, sendo a preparao das amostras a etapa crtica na seqncia de uma anlise. Assim, grande nmero de trabalhos de qumica analtica tem como objetivo principal o desenvolvimento de mtodos visando a automatizao da etapa de tratamento das amostras, tornando a anlise mais rpida, segura e com menor risco de interferncias (6.7). Neste trabalho foi adotado o procedimento combinado de mineralizao assistida por microondas em sistema de injeo em fluxo (8). As determinaes de Al, Ca, Fe, K, Mg, Mn, Na, Pb e Zn foram efetuadas por espectrometria de emisso atmica com fonte de excitao de plasma indutivo (ICP-OES), a qual possui capacidade de realizar anlise multi-elementar com adequada preciso (9). Os elementos Cd, Cr e Cu foram determinados usando espectrometria de absoro atmica com atomizao eletrotrmica (ET-AAS), cujas caractersticas principais so excelentes sensibilidade e limite de deteco, podendo ser utilizada na determinao de metais em quantidades traos em diversos tipos de amostras (9,10).

Materiais, equipamentos e condies de operao A determinao de Al, Ca, Fe, K, Mg, Mn, Na e Pb por ICP OES foi realizada usando o espectrmetro de emisso atmica Spectroflame Modula com configurao radial (Spectro Analytical Instruments). A determinao de Zn foi feita usando o espectrmetro de emisso ptica com plasma induzido de argnio com configurao axial Spectro CirosCCD, (Spectro Analytical Instruments). Os parmetros instrumentais utilizados nos espectrmetros de emisso ptica foram potncia 1200W para o de configurao radial e 1400W para o de configurao axial, fluxo de gs Ar refrigerante 12L min-1, fluxo de gs Ar auxiliar 1,2L min-1, fluxo de gs Ar no nebulizador 1,0L min-1, volume de introduo de amostra 1,5mL e comprimentos de onda em nm: Al 309,270; Ca, 422,673; Fe 259,940; K 766,491; Mn 257,610; Na 588,995; Pb 168,220 nm e Zn 213,856 (configurao axial). Para os comprimentos de onda utilizados no foram detectadas interferncias espectrais e de matriz, exceto para o Zn, cujo comprimento de onda (213,856nm) apresentou elevao da radiao de fundo, a qual foi corrigida instrumentalmente. Para a determinao de Cd, Cr e Cu por ETAAS, utilizou-se o espectrmetro de absoro atmica com atomizao eletrotrmica AAS ZEEnit 60 (Analytik Jena AG), dotado de forno de grafite com plataforma de LVov e aquecimento transversal, corretor de radiao de fundo por efeito Zeeman, policromador Echelle e lmpadas de catodo oco (HCL) Narva (Cd e Cr) e Analytic Jena AG (Cu). A Tabela 1 apresenta os parmetros instrumentais do espectrmetro de absoro atmica para as espcies estudadas.
Tabela 1. Parmetros instrumentais do espectrmetro de absoro atmica

Parte Experimental
Amostras e solues de referncia Foram analisadas 20 diferentes marcas de vinhos, provenientes de seis cidades brasileiras: Almadn (merlot), Almadn (cabernet), Almadn (rose), Almadn Light (branco) e Forestier (tinto), produzidas em Santana do Livramento (RS); Marcus James (cabernet), Sangue de Boi (tinto), Cannico (rosado licoroso), Grand Vall (cabernet), Country Wine (tinto), Ratz Wein (branco) e Moscatel Pallocino (rosado licoroso), produzidas em Bento Gonalves (RS); Chteau Duvalier (branco e tinto) e Baron de Lantier (branco e tinto) provenientes de Garibaldi (RS); Chteau Lacave (branco e tinto) produzidas em Caxias do Sul (RS); Chapinha (tinto) de Jundia (SP) e Piagentini (branco) de Andradas (MG). As solues analticas de referncia foram preparadas por diluio adequada de solues-padro de 1000mg L-1 Titrisol, Merck. As concentraes destas solues variam de 0,1 a 500 mgL-1 para as anlises em ICP OES e de 1mg L-1 a 1mg L-1 para as anlises em ETAAS. Para evitar perda dos ons por hidrlise ou adsoro, as solues analticas de referncia foram preparadas em soluo 1% v/v de HNO3 (Synth), a qual foi utilizada tambm como branco analtico. Essas solues foram utilizadas para calibrao dos equipamentos e para os testes de adio e recuperao. As amostras de vinho diludas para as anlises foram preparadas em 1% v/v HNO3 (Synth), purificado abaixo do seu ponto de ebulio em destilador de quartzo. Os modificadores qumicos foram preparados por diluio adequada de solues padro de 10g L-1 de Mg(NO3)2 (Merck) e 50g L-1 de NH4H2PO4 (Merck).
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Preparao das amostras para anlise em ICP-OES A digesto das amostras de vinho a serem analisadas por ICP-OES, foi realizada utilizando um sistema de injeo em fluxo acoplado ao forno de microondas focalizadas SPEX (Rapid Digestion System) equipado com frasco de digesto de borossilicato de 30 cm de comprimento por 4 cm de largura. O sistema de injeo em fluxo constitudo de uma bomba peristltica (Ismatec), um comutador manual e linhas de transmisso de poli (tetrafluoretileno) (PTFE), carregava alquotas de 2mL da amostra (ala de amostragem) e de 4mL de cido ntrico 10%, misturadas em uma confluncia para a bobina de reao de PTFE de 4m de comprimento e 1,6mm de dimetro interno, colocada dentro do frasco de digesto devidamente localizado na regio das microondas, usando-se ar como carregador. Para minimizar o efeito de expanso da amostra devido ao aquecimento, utilizouse uma camisa de resfriamento logo acima da bobina de digesto.
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Para evitar a expanso da amostra no sentido de volta, foi mantido um fluxo mnimo durante o aquecimento da amostra. O tempo de digesto foi de 8 min a uma potncia do forno de microondas de 30W e volume final de 10,00mL. A Figura 1 mostra o sistema utilizado. Para o Zn apenas uma diluio de 1:4 (v:v) foi efetuada, no necessitando de preparo de amostra. Preparao reparao das amostras para anlise em ETAAS A determinao de Cd, Cr e Cu em amostras de vinhos no requereu preparo de amostra, uma vez que a matriz pode ser eliminada com sucesso na etapa de pirlise, com ou sem a diluio das amostras, e com o uso ou no de modificador qumico. Para avaliar o fator de diluio mais apropriado foram realizados estudos baseados nos sinais de absorbncia relativos ao elemento e radiao de fundo. Aps a avaliao dos resultados (melhor sinal de absorbncia e menor radiao de fundo), optou-se por trabalhar com a amostra de vinho sem diluio para a determinao de Cd, com diluio de 1:4 para a determinao de Cr e com diluio de 1:8 para a determinao de Cu. Devido alta volatilidade do Cd (3,10), NH4H2PO4 e Mg(NO3) 2 foram utilizados como modificadores qumicos na sua determinao em amostras de vinhos. Para a determinao de Cr, utilizou-se Mg(NO3)2 e, para a determinao de Cu nas amostras de vinhos, no foi necessrio o uso de modificador qumico. O procedimento para a determinao de Cd consistiu na injeo de 10L da amostra no forno de grafite, juntamente com 10L da mistura 20g de NH4H2PO4 e 10mg de Mg(NO3)2, como modificador qumico. Para o Cr, foram introduzidos 10L da soluo da amostra no forno de grafite, juntamente com 10mL do modificador qumico Mg(NO3)2 (3g), enquanto a determinao de Cu foi feitas aps a injeo de 10L da soluo da amostra no forno de grafite. As Tabelas 2, 3 e 4 apresentam os programas de aquecimento para a determinao de Cd, Cr e Cu por ETAAS. Para comprovar a exatido do mtodo de preparo da amostra e determinao por ICP OES dos elementos Al, Ca, Fe, K, Mg, Mn, Na, Pb, Zn, Cd, Cr e Cu em amostras de vinhos, foram realizados testes de recuperao adicionando-se para os elementos de 1 a 100mg L-1, de acordo com a faixa de concentrao esperada nas amostra (9).

Tabela 3. Programa de aquecimento para a determinao de Cr, modificador qumico Mg(NO3)2

Tabela 4. Programa de aquecimento para a determinao de Cu

Resultados e Discuso
As Tabelas 5, 6 e 7 apresentam os valores obtidos para Al, Ca, Cd, Cr, Cu, Fe, K, Mg, Mn, Na, Pb e Zn nas amostras de vinhos.

Tabela 5. Valores obtidos para Mg, Ca, Na e K para as amostras de vinhos, n=6, valores expressos como mdia e estimativa do desvio padro

Tabela 2. Programa de aquecimento para a determinao de Cd, modificador qumico Mg(NO3)2 + NH4H2PO4

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Tabela 6. Valores obtidos para Mn, Al, Fe e Pb para as amostras de vinhos, n=6, valores expressos como mdia e estimativa do desvio padro

A Tabela 8 mostra os valores dos testes de recuperao obtidos para os diferentes tipos de vinho.
Tabela 8. Valores de recuperao obtidos para os constituintes inorgnicos nas amostras de vinhos

Tabela 7. Valores obtidos para Cd, Cr, Cu e Zn para as amostras de vinhos, n=6, valores expressos como mdia e estimativa do desvio padro

Os resultados obtidos nos testes de recuperao, entre 80 e 120% para os diferentes tipos de vinho, mostram que os mtodos utilizados para a determinao de Al, Ca, Cd, Cr, Cu, Fe, K, Mg, Mn, Na Pb e Zn so adequados. Os valores obtidos neste trabalho, para os constituintes inorgnicos, mostram mesma ordem de grandeza de concentrao daqueles descritos na literatura (3,4,9,11-15) (Tabela 9). Em relao aos contaminantes, os valores obtidos encontram-se abaixo do limite mximo permitido pela Legislao Brasileira 16.

Tabela 9. Comparao dos valores obtidos com os da literatura

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Figura 1 (A). Diagrama do injetor comutador: S: amostra; R: reagentes; C: carregador (3 mL min-1); D: dreno; LS: ala de amostra; LR: ala de reagentes. (B): Diagrama da digesto em linha assistida por forno de microondas focalizadas: a: magnetron; b: guia de ondas; c: frasco de borossilicato; d: bobina de digesto de PTFE; f: rolhas de borracha; g: tubos de PTFE e h: balo volumtrico de 10mL

Figura 2. Dendograma das amostras de vinho (Mtodo de Ward)

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Na Figura 2 est apresentado o dendograma, correspondente anlise hierrquica de grupos, obtido com o programa estatstico SPSS17, com base no contedo dos ons inorgnicos determinados. A anlise hierrquica mostrou um grupo, contendo os vinhos tintos 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9 e 11, todos de procedncia do Rio Grande do Sul, com similaridade de 96,5% e sem similaridade (75%) com os outros grupos. O segundo grupo constitudo pelos vinhos brancos 1, 3 e 5, rose 2 e 3 e tinto 10 com 94,5% de similaridade, o qual tem 86,5 % de similaridade com o grupo formado pelos vinhos branco 2 e 6 (similaridade 98,5%) e rose 1 com similaridade de 90,5% e sem similaridade com os outros grupos (75%). A separao do vinho rose 1 foi atribuda ao tipo de vinho, cannico, ao contrrio dos demais vinhos ros, que so licorosos. Por outro lado, todos os vinhos ros eram de procedncia do Rio Grande do Sul. Como os vinhos branco 2 e 6 so provenientes de uma mesma cidade do Rio Grande do Sul, o solo, a adubao, o uso de pesticidas e o processo de fabricao e industrializao podem ter contribudo para a sua diferenciao, em relao aos demais. O mesmo vlido para o vinho tinto 10, produzido em So Paulo e que se separou dos demais vinhos tintos procedentes do Rio Grande do Sul. O terceiro grupo dos vinhos tinto (6) e branco (4) no apresentou similaridade (75%) com os outros dois grupos e entre eles a similaridade foi de 94,5%. A separao destes dois vinhos foi devida ao teor de Na encontrado cerca de uma ordem de grandeza maior em relao aos demais vinhos e ao teor de

Cu, que foi cerca de trs vezes maior que nos demais vinhos analisados. O vinho branco (4) proveniente de Minas Gerais e o tinto (6) do Rio Grande do Sul, indicando que somente a regio ou o tipo de vinho no fornece informaes sobre o contedo dos ons metlicos presentes nos vinhos. Os resultados obtidos mostraram que a separao dos vinhos em diferentes grupos foi com base nos teores dos diferentes elementos determinados e no devido apenas ao tipo do vinho e/ ou a regio de procedncia das amostras de vinho analisadas.

Concluso
O mtodo analtico empregado mostrou-se adequada para a determinao de Al, Ca, Fe, K, Mg, Mn, Na e Pb por ICP OES com configurao radial; Cd, Cr e Cu por ETAAS e de Zn por ICP OES com configurao axial, de acordo com os valores obtidos para os testes de recuperao. A anlise estatstica permitiu concluir que a presena dos ons metlicos nas amostras de vinhos dependente do tipo de vinho (tinto, branco ou rose), do solo (regio de cultivo), do uso de fertilizantes e de pesticidas no cultivo das uvas. A partir dos resultados obtidos pode-se concluir que os vinhos nacionais esto livres de contaminao, considerando-se as espcies determinadas, uma vez que os teores estiveram sempre abaixo do limite mximo permitido pela Legislao Brasileira (16).

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