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Acta Veterinaria Brasilica, v.5, n.3, p.

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PERFIL HEMATOLGICO E BIOQUMICO DE CES COM GASTROENTERITE HEMORRGICA POR PARVOVRUS DIAGNOSTICADOS PELO MTODO DE IMUNOCROMATOGRAFIA
[Hematological and biochemical profile of dogs with parvovirus gastroenteritis diagnosed by immunochromatography method]

Rodrigo de Souza Mendes1, Almir Pereira de Souza1, Rosangela Maria Nunes da Silva1, Olivia Maria Moreira Borges1, Leonardo Mendes Torres2, Alinne Kttia Fernandes Pereira Dantas2
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Universidade Federal de Campina Grande (UFCG), Patos, PB Centro Mdico Veterinrio Dr. Leonardo Torres (CMVLT) , Patos, PB

RESUMO - Objetivou-se com a realizao deste trabalho determinar as caractersticas hematolgicas e bioqumicas, de ces acometidos por gastroenterite por Parvovrus, diagnosticados pelo mtodo da imunocromatografia rpida. Foram utilizados ces procedentes de Patos, PB, apresentando sinais de distrbios gastroentricos, evidenciados aps avaliao clnica geral e laboratorial como quadro gastroentrico infeccioso viral atravs ensaio imonocromatogrfico. O mtodo de imunoensaio cromatogrfico empregado neste estudo mostrou-se eficiente no diagnstico do CPV em ces acometidos por gastroenterite hemorrgica evidenciando de forma precisa o agente primrio envolvido. Porm o diagnstico definitivo no pode ser baseado em apenas um nico teste, devendo ser reportado ao profissional Mdico Veterinrio sua utilizao sob aspecto complementar correlao com outros achados para sua elucidao. Os dados obtidos nesta pesquisa referentes hematologia e bioqumica srica apresentaram variaes significativas, dignas de serem consideradas frente a achados laboratoriais e suspeita clnica presuntiva de quadros gastroentricos virais, bem como serviro como valores referenciais para animais acometidos por gastroenterites hemorrgicas, auxiliando clnicos de pequenos animais em sua rotina ambulatorial na elucidao do agente causal.
Palavras-Chave: Doenas gastroentricas, parvovirose, ensaio imunocromatogrfico.

ABSTRACT - The objective of this work was to determine the hematological and biochemical characteristics of dogs with parvovirus gastroenteritis diagnosed by rapid immunochromatgraphy method. It was used dogs from Patos municipality, SP, Brazil, showing clinical signs of a gastrointestinal disorder, evident after clinical and laboratory admitted as a general framework gastrointestinal viral infection through testing immunochromatography. The method of chromatographic immunoassay used in this study proved effective in the diagnosis of CPV in dogs affected by hemorrhagic gastroenteritis showing the primary agent involved. However, the diagnosis cannot be based on just a single test, should be reported to the professional veterinarian complementary aspect of its use in correlation with other findings for their elucidation. Data from this survey relating to hematology and serum biochemistry showed significant variations, worthy of considerations before the laboratory finding sand clinical suspicion of presumptive viral gastrointestinal frames, as well as serve as reference values for animals affected by hemorrhagic gastroenteritis, helping small animal clinical in their routine outpatient clinic in the elucidation of the causative agent.
Keywords: Gastrointestinal diseases, canine parvovirus, immunochromatographic assay.

INTRODUO Doenas gastroentricas compem grande parte da casustica da clnica mdica de pequenos animais, cujos sinais clnicos tpicos so evidenciados atravs de vmitos e diarreias (Burrows et al., 1995). Desde 1970, as enterites virais so consideradas uma das causas mais comuns de diarreia infecciosa em ces 278

com menos de seis meses de idade, esto entre as principais enfermidades da espcie canina e so responsveis por ndices considerveis de morbidade e de mortalidade em ces de todo o mundo (Hoskins, 1997; Leghaus, 1982; Baggini, 1991). Esta maior predisposio dos animais jovens est relacionada a mltiplos fatores: grande nmero de clulas em diviso celular nesta faixa etria, presena de

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parasitas intestinais e de um incompleto desenvolvimento do sistema imunolgico (Brunner & Swango, 1985). Alguns estudos epidemiolgicos envolvendo a sensibilidade de algumas raas a infeco pelo parvovirus revelaram uma maior morbidade das raas Rottweiller e Doberman, com quadros clnicos mais graves (Glickman et al. 1985). O parvovrus, dentre os vrus de tropismo digestivo, vem sendo o mais importante agente etiolgico das afeces digestivas, responsvel por altas taxas de morbidade e mortalidade no interior de coletividades, estando a alta frequncia relacionada com a grande resistncia do vrus no meio externo (Pollock & Carmichael, 1990). J a coronavirose canina, presente em canis, no conduz a altas taxas de mortalidade, embora esteja mais difundida que a parvovirose. Entretanto, a infeco dupla favorecida pela superposio dos mecanismos patognicos de ambos os vrus (Appel, 1988). Os sinais clnicos da infeco so tpicos e o diagnstico clnico da infeco apoiado por exames sanguneos nos quais predomina intensa leucopenia. No entanto, existem outros agentes causadores de gastrenterite e que frequentemente induzem erro no diagnstico e, consequentemente, podem sub ou superestimar a prevalncia da parvovirose em relao a outras enfermidades com sinais clnicos semelhantes (Strotmann et al., 1999). O diagnstico precoce e definitivo da etiologia das gastrenterites caninas torna-se essencial para o tratamento e controle da disseminao do agente etiolgico, principalmente se o CPV estiver envolvido, e para a alocao adequada de ces com outras infeces gastroentricas (Strotmann et al., 1999). Assim, a utilizao de mtodos de diagnstico que permitam evidenciar de forma imediata o agente envolvido, a exemplo do imunoensaio cromatgrafico, contribui no estabelecimento do diagnstico definitivo do agente envolvido, permitindo a adoo de condutas teraputicas especficas no controle da enfermidade. Neste contexto, achados hematolgicos e bioqumicos vinculados a definio da patologia envolvida por testes que evidenciam qualitativamente o agente, determinam um padro desses achados quando comparada aos valores de referncia, propiciando aos clnicos um prognostico e direcionamento teraputico (Coles, 1986). Desta forma, objetivou-se com a realizao deste trabalho determinar o perfil hematolgico e bioqumico em ces acometidos por gastroenterite

por parvovrus evidenciados aps exame clinico geral e diagnosticado pelo mtodo de imunocromatografia rpida.

MATERIAL E MTODOS O estudo foi desenvolvido no setor de Clnica Mdica de Pequenos Animais do Hospital Veterinrio da Universidade Federal de Campina Grande, Campus de Patos (HV/UFCG) e no Centro Mdico Veterinrio Dr. Leonardo Torres (CMVLT), Patos, PB. Foram utilizados ces da rotina de atendimento ambulatorial do HV/UFCG e do CMVLT, sem prrequisitos quanto idade, sexo ou raa, apresentando sinais de distrbios gastroentricos, evidenciados aps avaliao clnica geral e laboratorialmente admitido como quadro gastroentrico infeccioso viral por parvovrus atravs de ensaio imonocromatogrfico. Para o diagnstico do parvovrus canino e do vrus da cinomose canina foram utilizados kits de imunoensaio cromatogrfico para deteco qualitativa do Ag parvovrus canino (Anigen CPV Ag Test Kit - BIOEASY) nas fezes frescas dos ces enfermos. No momento da consulta ambulatorial foram colhidos 5 mL de sangue, mediante puno da veia ceflica esquerda ou direita, que foram divididas em duas alquotas, 2 mL e 3ml, e, acondicionadas em dois tubos de ensaio com e sem anticoagulante etilenodiaminotetractico (EDTA) a 10%. As amostras foram devidamente identificadas e conduzidas ao Laboratrio de Patologia Clnica do HV/UFCG sob refrigerao. Para o hemograma foram utilizadas as amostras de sangue com EDTA. Os parmetros hematolgicos avaliados foram: hematcrito (Ht), obtidos pela tcnica de microhematcrito, com o uso de tubos capilares; hemoglobina (Hb), pelo mtodo de espectrofotometria (Espectrofotmetro Baush-Lomb Spectronic 20); contagem global de eritrcitos e leuccitos; ndices hematimtricos absolutos, volume globular mdio (VGM), hemoglobina globular mdia (HGM) e concentrao de hemoglobina globular mdia (CHGM). Em seguida, foram confeccionados esfregaos sanguneos, corados pelo mtodo de Pantico, para realizao da contagem diferencial de leuccitos. Para avaliao dos parmetros bioqumicos, foram utilizadas amostras de sangue sem EDTA as quais foram submetidos macrocentrifugao durante 15 minutos, sendo os soros separados e acondicionados

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sob congelamento at o momento da realizao das anlises bioqumicas. Foram dosadas a Alanina aminotransferase (ALT), fosfatase alcalina (FA), creatinina, ureia, protenas totais (PT) e albumina (Alb) pelo mtodo colorimtrico, com o uso de kits comerciais LABTEST, sendo a leitura obtida atravs de analisador bioqumico BIOPLUS 2000. Os valores de Globulina srica foi determinado pelo clculo da diferena entre PT e Alb. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente atravs de um delineamento inteiramente casualizado, com determinao das mdias aritmticas, desvios padro e amplitude de variao, segundo Snedecor & Cochran (1994).

O parvovrus apresenta um tropismo para as clulas progenitoras de eritrides e outras clulas do sistema hematolgico, como neutrfilos e plaquetas, que podem ser igualmente afetadas (Ribeiro & Proietti, 2005). A infeco pelo parvovrus frequentemente associada a alteraes de outras linhagens medulares que no a eritrocitria podendo ser observados graus diversos de neutropenia e trombocitopenia, devido ao efeito sobre os megacaricitos (Setbal et al. 2001; Carvalho & Ferreira, 2000). Apesar de alguns animais terem apresentado redues nos valores de Ht e plaquetas, estas mantiveram-se sempre dentro dos intervalos de normalidade, no sendo possvel inferir uma participao significativa do parvovrus no sistema hematopoitico. No leucograma, as mdias das variveis estudadas encontram-se dentro dos padres de normalidade para a espcie (Tabela 1), com exceo da contagem total de eosinfilos, a qual apresentou mdia inferior ao intervalo de normalidade (Garcia-Navarro, 2005). A respeito da contagem global de leuccitos (Tabela 1), 58,3% dos animais enquadraram-se dentro do padro de normalidade, 33,4% leucopenia e apenas 8,3% apresentaram leucocitose. Em relao aos neutrfilos, mais especificamente aos neutrfilos imaturos (bastonetes), 94,5% permaneceram dentro do intervalo referencial de normalidade e, 5,5% com valores superiores ao limite mximo. Quanto aos segmentados, 50% incluam-se dentro do padro de normalidade e, 30,5% e 19,5% dos ces, com valores abaixo e acima do padro referencial para espcie, respectivamente. Em trs ces (8,4%) foi observada leucocitose por neutrofilia, e apenas um (2,7%) por desvio a esquerda. Os resultados no foram compatveis com os obtidos por Ferreira et al. (2004), onde observou leucopenia em 72% dos ces acometidos por gastroenterite viral, contrariando consideraes a respeito da ao do parvovrus sobre as clulas de alto poder de multiplicao, como o caso da medula ssea, visto que esse agente foi incriminado como determinante dos quadros gastroentricos em 83,4% do ces estudados. Porem, segundo Carman & Povey (1985), fala de leucocitose por neutrofilia em ces aps inoculao do CPV-2 em torno do quinto e, pode-se observar tambm leucocitose com desvio a esquerda em condies de convalescena (Jacob et al, 1980). Em 60% dos casos de parvovirose canina aguda, foi observada leucopenia, com desvio esquerda no exame hematolgico inicial e em 100% dos casos, entre o segundo e terceirodia de evoluo da doena (Hagiwara et al. 1984), com normalizao ou tendncia leucocitose entre o quinto e oitavo dia, indicando-se, assim, o carter agudo do processo inflamatrio decorrente da infeco (Kogica et al, 2003).

RESULTADOS E DISCUSSO

O exame das amostras fecais pelo mtodo de imunoensaio cromatografico atravs do kit Anigen Rapid CPV, ensaio este que detecta qualitativamente o antgeno viral, evidenciou partculas virais em fezes de 30 ces com gastroenterite. O mtodo permitiu precocemente, estabelecer correlaes clnicas do quadro com a etiopatogenia do agente desencadeador envolvido. Um ponto relevante a ser considerado, mesmo na elucidao do parvovrus em gastroenterites, a participao concomitante de outros agentes no mesmo distrbio, o que determina quadros ainda mais debilitantes e difceis de serem tratados. Em uma pesquisa utilizando a tcnica de imunofluorescncia direta (IFD) em 18 ces clinicamente portadores de gastroenterite, 10 animais (55,5%) foram positivos para coronavrus, um caso (5,5%) foi positivo para parvovrus e sete casos (39%) foram positivos para a associao de ambos os vrus (Ferreira et al., 2004). Por outro lado, em um estudo anterior realizado com 63 ces acometidos por gastrenterite em Porto Alegre, observaram atravs da tcnica da IFD que 34 deles (54%) foram positivos para agentes virais, sendo 27% para parvovrus, 44% para coronavrus e 29% positivos para ambos vrus (Ferreira et al., 2004). Ambos os estudos ressaltam, como esta pesquisa, a importncia do diagnstico da etiologia viral nas afeces gastrentricas em ces, no direcionamento efetivo de controle da enfermidade. No tocante aos achados hematolgicos (Tabela 1), em particular srie vermelha, as mdias obtidas da contagem de eritrcitos, hemoglobina e dos valores de hematcrito, bem como dos ndices hematimtricos (VCM, HCM e CHCM) e plaquetas, comportaram-se dentro dos padres de normalidade estabelecidos para espcie (Garcia-Navarro, 2005).

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Tabela 1. Mdias e desvios padro dos parmetros hematolgicos de 30 ces, provenientes do atendimento ambulatorial do Hospital Veterinrio (HV) e do Centro Mdico Veterinrio Dr. Leonardo Torres (CMVLT), com quadro de gastroenterite por Parvovrus, diagnosticados pelo mtodo de imunoensaio cromatogrfico. Variveis Eritrcitos Hemoglobina Hematcrito VCM* HCM** CHCM*** Plaquetas Leuccitos Mielcitos Metamielcitos Bastonetes Segmentados Eosinfilos Basfilos Moncitos Mdia 5,61 12,56 38,55 65,435 23,33 32,37 204837 10172 0 0 345,42 7418,8 70,02 0 331,36 Desvio Padro 1,502 4,426 10,277 9,407 3,671 4,291 145468 7623,3 1406,3 6764,5 120,1 370,55 Amplitude de Variao 1,7 - 8,6 9,0 - 28,0 11,0 - 66,00 21,0 - 85,0 18,0 - 33,0 15,0 - 42,0 119000 - 661000 1300,0 - 43300 0 - 8256,0 364,0 - 35939 0 - 548,0 17,0 - 1551,0 710,0 - 4330,0 Valores Normais 1 (5,7 - 8,7 x 106 mm3) (12,0 - 18 g/dl) (36 - 56%) (60 - 77 fl) (19 - 23 pg) (32 - 36 %) (2x105 9x105 mm3) 6x103 - 17x103 mm3) (0 mm3) (0 mm3) (0 - 540 mm3) (3000 - 11500 mm3) (100 - 1250 mm3) ( 0 - 1 %) (150 - 1350mm3) (1000 - 4800 mm3)

Linfcitos 2137,7 968,66 1 Valores segundo Garcia-Navarro (2005). * Volume corpuscular mdio ** Hemoglobina corpuscular mdia *** Concentrao de Hemoglobina corpuscular mdia

Foi observado eosinopenia em 69,5% dos ces e 30,5% dos animais permaneceram dentro dos padres de normalidade (Tabela 1), configurando uma prevalncia eosinopnica dentre os animais estudados. Entretanto, redues relativas de eosinfilos sugerem efeitos dos glicocorticides endgenos, que liberados diante de situaes de estresse e infeces graves, reduzem sua liberao na corrente sangunea determinando quadros eosinopnicos (Bush, 2004).

No entanto, comumente ces acometidos por parvovirose, manifestam um quadro hematolgico de leucopenia por neutropenia e no por diminuio no total de linfcitos (Mason et al, 1987). Os dados referentes s mdias da bioqumica srica de ces acometidos por gastroenterite viral podem ser visualizadas na Tabela 2, onde foi possvel observar que todas variveis avaliadas na pesquisa em questo, mantiveram-se dentro dos padres de normalidade referencial para espcie (Jain, 1993), com exceo das protenas totais (PT), albumina e globulina, que revelaram mdias abaixo dos limites inferiores de referncia. Os valores inerentes ao perfil protico dos animais estudados, representados pelas PT, albumina e globulina, apresentaram de forma predominante, sem exceo, nveis sricos inferiores ao limite inferior do intervalo referencial (Jain, 1993), com 88,9%, 69,4% e 80,5%, respectivamente. Presente condio que reproduz os baixos ndices destas dosagens observadas nas respectivas mdias gerais (Tabela 2).

Embora as mdias dos linfcitos e moncitos permanecessem dentro dos padres de normalidade para espcie (Tabela 1), esse ltimo expressaram baixos ndices em 44,5% dos ces estudados e, 50% concordando com a normalidade referencial, diferente do nmero de linfcitos, que predominou dentro da faixa de normalidade com 91,6% dentre os animais estudados. ndices superiores de linfopenia foram observados em ces acometidos apenas por coronavrus, quando comparados aos parvovrus (Ferreira et al., 2004), embora citem que na infeco por esse vrus a linfopenia seja pouco frequente.

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Tabela 2. Mdias e desvios padro da ureia, creatinina, fosfatase alcalina, alanina aminotransferase (ALT), protenas totais, albumina e globulina de 30 ces, provenientes do atendimento ambulatorial do Hospital Veterinrio (HV) e do Centro Mdico Veterinrio Dr. Leonardo Torres (CMVLT), com quadro de gastroenterite por Parvovrus, diagnosticados pelo mtodo de imunoensaio cromatogrfico. Variveis Ureia Creatinina Fosfatase alcalina ALT Protenas Totais Albumina
1

Mdia 32,56 0,99 88,86 37,36 4,52 2,33 2,18

Desvio Padro 12,11 0,24 39,37 17,27 0,71 0,52 0,42

Amplitude de Variao 14 67 0,5 - 1,5 39 237 10 - 98,0 3,3 - 6,2 1,5 - 3,5 1,5 - 3,2

Valores Normais 1 21 - 60 mg/dL 0,5 - 1,5 mg/dL 33 - 102 UI/L 21 - 73 UI/L 5,4 - 7,1 g/dL 2,6 - 3,3 g/dL 2,7 - 4,4 g/dL

Globulina Valores segundo Kaneko (1989).

Baixos nveis de globulinas e de protenas totais (89% dos casos) em ces acometidos por gastroenterite viral so atribudos a perdas proticas no intestino (Ferreira et al., 2004). A concentrao de albumina tambm diminuiu, porm com menor severidade (61,1% dos casos), o que sugere uma resposta compensatria do organismo atravs de maior sntese heptica desta protena para manter a osmolaridade sangunea (Kaneko, 1989). Diante da perda integridade da mucosa intestinal por destruio parvoviral, protenas so perdidas para lmen intestinal, causando hipoproteinemia por hipoalbuminemia (McCandlish et al, 1981). O teor de protena srico se comporta como um importante indicador de hipoproteinemia principalmente em distrbios gastroentricos graves (Jacobs et al. 1980). Na maioria dos casos de enteropatia com perda de protenas, os nveis sricos de albumina e globulina esto diminudos (Silva et al., 2005). Em contraste com a maioria das enteropatias com perda protica, a hipoproteinemia devida molstia heptica ou a molstia renal geralmente envolve apenas albumina (Kaneko, 1989). O comprometimento da integridade intestinal em infeces virais associado a inapetncia so fatores que determinam baixos nveis sricos de albumina no curso da doena (Jacobs et al. 1980), justificando a hipoproteinemia observada na maioria dos animais.

infeces virais, bem como a trombocitopenia geralmente incriminadas ao envolvimento de hemoparasitas. Sobretudo, os achados evidenciados nesta pesquisa, podem ser considerados frente a achados por clnicos veterinrios como recurso auxiliar e referencial frente a suspeita clnica de quadros gastroentricos por Parvovrus.

REFERNCIAS
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CONCLUSES Os dados obtidos nesta pesquisa referentes hematologia e bioqumica srica, a leucopenia no foi um achado consistente comumente descritas em

Ferreira R.R., Barbosa P.R., Godinho E., Costa U.M., Gonzalez Felix H.D. & Ferreiro L. 2004. Alteraes hemato-bioqumicas em ces jovens com gastrenterite viral: relato de 18 casos. MEDVEP Revista Cientifica de Medicina Veterinaria 2(7):159163.

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