You are on page 1of 9

INDICE

1. ANTECEDENTES 2. PROBLEMÁTICA 3. JUSTIFICACIÓN 4. ALCANCE 5. OBJETIVOS 5.1 OBJETIVO GENERAL 5.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS 6. HIPÓTESIS 6.1 HIPÓTESIS NULA 6.2 HIPÓTESIS ALTERNA 7. MARCO TEÓRICO 7.1 CARACTERÍSTICAS DEL TOMATE RIÑÓN 7.2 CARACTERISTICAS DEL MICROORGANISMO ANTAGONISTA 8. MARCO METODOLÓGICO 8.1 METODOS DE AISLAMIENTO, SELECCIÓN Y PRESERVACION DE LAS CEPAS DE TRICHODERMA 8.2 DISEÑO DEL MEDIO

1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 3 4

4

5 6 7

9. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 10. ANEXOS

1

Algunas de sus especies tienen la habilidad de producir metabolitos secundarios. y sus características nutricionales como fuente valiosa de vitaminas y sales minerales. templados a 24ºC .933 kilogramos/ hectárea frente 252. semillas. económica y efectiva obtener productos a partir de microorganismos. follaje y fruto. Cuando Trichoderma se pone en contacto con hifas de otro organismo susceptible.. Colletotrichum. El género Trichoderma es un hongo anaeróbico facultativo.43%. En el Ecuador el rendimiento del país es apenas de 88. Erwinia carotovora. Los cultivos de tomate son atacadas por microorganismos fúngicos: Phytophthora Infestans. involucra también microorganismos cuya actividad biológica disminuye el daño causado por los patógenos de las plantas. Verticillium alboatrum. La combinación de pequeñas cantidades de antibióticos y enzimas líticas de Trichoderma inhiben la germinación de esporas y elongación del tubo germinal del hongo huésped. penicilina. El control biológico utiliza organismos vivos. Oidium sp. de derivados de aminoácidos (alcaloides. tiene la capacidad de sobrevivir en el habitad donde es cultivado el tomate. ANTECEDENTES La mayoría de las enfermedades de plantas generalmente se controlan con fungicidas químicos. que es alrededor del 48. que hacen que el otro organismo detenga su crecimiento. ergosterol. acido giberélico). 2. La producción en el Ecuador de tomate riñón en el 2005 fue de 58778 has. Sclerotium rolfsii. y bacterias: Corynebacterium michiganense. Pseudomonas solanacearum. como enzimas que atacan o inhiben a los hongos fitopatógenos y que lo hacen un excelente agente de biocontrol. cefalosporina) y por último de policétido. Fusarium oxysporum f..25ºC y 50% . El tomate riñón se cultiva en casi todo el mundo. 1. Rhizoctonia solani. Macrophomina phaseolina. SELECCIÓN Y PRESERVACIÓN DEL TRICHODERMA COMO AGENTE DE BIOCONTROL DE MICROORGANISMOS QUE ATACAN A CULTIVOS DE TOMATE RIÑON. El acetil es el compuesto intermediario del metabolismo secundario de los hongos filamentosos productores de terpenos (carotenoides. PROBLEMÁTICA La necesidad de reducir el uso de fungicidas en el control fitosanitario hace necesario desarrollar tecnologías que permitan de forma fácil. en climas cálidos. con la calidad y cantidad suficiente para su aplicación masiva en áreas de cultivo. las plagas destruyen anualmente cerca del 35% de las cosechas. Ascochyta lycopersici.688 kilogramos/ hectárea que constituye la media del Continente 2 . que se controlan con una amplia variedad de fertilizantes. convirtiéndose en una de las hortalizas de mayor importancia comercial tanto por su nivel de consumo. que contiene materia orgánica mayor al 2%. tiende a segregar sustancias supresoras de crecimiento. los cuales se aplican al suelo. derivados de ácidos grasos (poliacetileno). Alternaria solani.60% de humedad. habitante natural del suelo de pH 6-7.sp.TEMA: AISLAMIENTO. que se originan a partir de intermediarios del metabolismo primario y son clasificados según su precursor.

En Cuba a partir de 1990 se iniciaron estudios para el biocontrol de hongos en los suelos de hortalizas. como el uso de biofertilizantes. entre ellos los agroquímicos. 6.1 OBJETIVO GENERAL • Evaluar el antagonismo entre el Trichoderma y los microorganismos causantes de enfermedades en el tomate riñón. selección y preservación del Trichoderma comportamiento con microorganismos antagonistas. ALCANCE Aislamiento. Preservar las cepas de mejor efecto antagónico aplicando la técnica de crioconservación. con incidencias de plagas. para evaluar su 5. además de encarecer los costos de producción. causan serios disturbios al medio ambiente y a la salud de los consumidores y de los mismos productores. OBJETIVOS 5.1 HIPOTESIS ALTERNATIVA Los metabolitos producidos por las cepas obtenidas del Trichoderma. Con el biocontrol se busca la regulación de la abundancia de organismos indeseables a través de la autodefensa y la competencia de la planta con organismos patógenos y su tasa de producción sana. lo que hace necesario innovar nuevas tecnologías para mejorar la producción. además. un alto porcentaje de los costos de producción está relacionado con la compra y aplicación de insumos. 3 . con una pérdida económica de USD 315. productos que los tomateros usan de una manera excesiva y que. 4. inhiben el crecimiento de microorganismos que atacan al tomate riñón. Determinar el antagonismo mediante enfrentamiento dual de Trichoderma vs. 3. Microorganismos patógenos. minimizando el uso de agroquímicos a corto y mediano plazo.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS • • • • Aislar los microorganismos fúngicos a partir del suelo donde se cultiva el tomate. obteniendo así aislamientos del Trichoderma que fueron seleccionados por su capacidad hiperparásita.Americano. siendo el costo de producción USD 900 por tonelada métrica. Identificar y seleccionar la mejor cepa del género Trichoderma. HIPOTESIS 6. lo que se puede contrarrestar con sistemas de agricultura orgánica. 5. organismos patógenos y poblaciones de malas hierbas. JUSTIFICACIÓN En el Ecuador se cultiva tomate bajo condiciones ambientales adversas.

1 CARACTERÍSTICAS DEL TOMATE RIÑÓN Las enfermedades del tomate se producen por varios microorganismos.6. Metabolitos y Necesidades Mínimas del Trichoderma para Producción de Biomasa 4 .2 mg Vitamina C 20 mg Niacina 0. B2 1.5 % Proteína 0.6mg Trichoderma. Departament of Agriculture. B1. MARCO TEORICO 7.7 mg Vitaminas A. su composición química promedio es la siguiente: Tabla 1. Composición Química del Tomate por cada 100g de Tomate Fresco Fuente: California Tomato Board. 7. 2000 7. El tomate tiene nutrientes que ayudan a que estos hongos crezcan. no inhiben el crecimiento de microorganismos que atacan al tomate riñón.8 g Fósforo 19 mg Calcio 7 mg Hierro 0.9 g Grasa 0.S.3 g Fibra 0.2 HIPOTESIS NULA Los metabolitos producidos por las cepas obtenidas del Trichoderma. U. para este problema se utilizan organismos biocontroladores de enfermedades como ELEMENTO CANTIDAD Agua 93.2 CARACTERISTICAS DEL MICROORGANISMO ANTAGONISTA Tabla 2.1 g Carbohidratos 3.

Produce toxinas como tricodermin y harzianopeiridona causando antagonismo por fungistasis y también produciendo enzimas líticas que destruyen las paredes celulares de los esclerocios o estructuras de resistencia del hongo. penetrando sus hifas y aprovechando sus nutrientes. Tolerancia al estrés por parte de la planta. 5.2 fitoparásito. Resistencia inducida 8 DISEÑO DEL MEDIO Tabla 3. al ayudar al desarrollo del sistema radicular. Competición por nutrientes y espacio 3. Las formas de acción de trichoderma como biocontrolador son: 1. Características del medio diseñado AGAR DEXTROSA 5 . Solubilización y absorción de nutrientes inorgánicos 6. Micoparasitismo y Antibiosis 2. aprovechar una fuente nutricional adicional.Grupo Trófico Fuente de Carbono Fuente de Energía Donador de electrones Aceptor de electrones Fuente de Nitrógeno Estos hongos antagonistas actúan mediante FUENTE Fuente de C Fuente de N Fuente de Energía Agar-Agar Agua Quimioheterótrofa Peptona Dextrosa Dextrosa Oxígeno Peptona la ruptura de paredes hifales del hongo CANTIDAD 500 ml 10 g 17. Desactivación de las enzimas de los patógenos 4.0 1000 ml COMPUESTO Extracto de cáscaras de tomate (Peptonas) Dextrosa Agente solidificante Agua destilada pH ≈ 7. El Trichoderma ha desarrollado mecanismos para atacar y parasitar a otros hongos y así.

Por ésta razón las peptonas producidas a un pH neutro se deben de utilizar para las fórmulas de los medios. oligoelementos. se coloca un disco de agar de 4 mm de diámetro con micelio del patógeno y en el extremo opuesto otro disco de 4 mm con micelio del antagonista a 5 cm aproximadamente entre ellos. En general las proteínas empleadas en la producción de peptonas son de dos tipos. el cultivo se incuba a 25±1 ºC durante 5 días. Otra posibilidad es la síntesis de glucosa a partir de moléculas no glucídicas. haciéndose mediciones cada 24 h del crecimiento radial del micelio de la colonia de los hongos. péptidos y proteosas que se mantienen en la solución después de calentarlas a 100º C. la alta concentración de dextrosa y el pH ligeramente ácido facilita el crecimiento de los hongos e inhibir al mismo tiempo el desarrollo de otros microorganismos. proceso conocido como gluconeogénesis. alcalino y enzimático.Todos los medios de cultivo utilizados han de contener los nutrientes suficientes para asegurar el desarrollo de los hongos (carbono. La presencia de metales alcalinos o fosfatos puede causar la precipitación de la peptona a un pH neutral. se logra la inhibición de bacterias saprofitas. METODOLOGIA 1. Las peptonas se obtienen a través de varios tipos de procesos de digestión como ácido. DEXTROSA Los seres heterótrofos. 2. TOMA REPRESENTATIVA DEL SUELO Las muestras se toman aleatoriamente del perfil del suelo aledaño a la base de las plantas de tomate. vitaminas. 6 . Se prepara con cáscara de tomate como base. como los animales. carne) y proteínas vegetales (cascaras de tomate). se obtiene un excelente medio para el aislamiento. Este azúcar simple es derivable de la conversión de almidón. CONTROL BIOLÓGICO (CULTIVOS DUALES) En un extremo de la placa de petri con Agar Dextrosa de pH 5. proteínas animales (caseína. gelatina. PEPTONAS Es un producto soluble en agua que se obtiene por hidrólisis particularmente de una proteína o varias proteínas. El Agar Dextrosa es un medio utilizado para el cultivo de hongos y levaduras. Este medio es utilizado para el cultivo de hongos patógenos. etc). Con la adición de antibióticos antibacterianos (cloranfenicol o gentamicina).5. Este material contiene una mezcla de aminoácidos libres. de 0 a 40 cm de profundidad. son incapaces de realizar este proceso y toman la glucosa de otros seres vivos o la sintetizan a partir de otros compuestos orgánicos. en este medio las peptonas proveen la fuente de carbono y nitrógeno para el crecimiento de los microorganismos. nitrógeno. la dextrosa actúa como fuente de energía y el agar es agregado como agente solidificante.

ya sea por enrollamiento o por penetración. 3. selectividad y reproducibilidad del medio. A partir de cada uno de los cultivos en fase exponencial (mantenidos en crecimiento toda la noche o 18 horas de incubación). 3. donde se analizan las interacciones de las hifas antagonistas con las del patógeno. Es importante en el caso de los medios selectivos demostrar un ICA alto para un organismo deseado frente a un ICA bajo de los organismos no deseados. Se evalúa la recuperabilidad. 1. por medio un microscopio binocular. por medio de: Radio de Crecimiento Antagonista (RCA) y Radio de Crecimiento Patógeno (RCP): midiendo los radios con un calibrador o pie de rey. Depositar el medio de cultivo a evaluar en una capa cuyo grosor deberá ser de unos 4 mm. Porcentaje de Inhibición del Crecimiento Radial (PICR): se medirá empleando la fórmula PICR = (R1 – R2)/R1 x 100 donde R1 es el radio del patógeno testigo y R2 es el radio del patógeno en enfrentamiento. o ICR). 2. Procedimiento. tomándose como índice de micoparasitismo. teniéndose en cuenta la escala siguiente: Esporulación de antagonista sobre patógeno1 Grado 0 1 2 3 4 Capacidad antagónica Ninguna invasión de la superficie de la colonia del hongo patógeno Invasión de ¼ de la superficie de la colonia del hongo patógeno Invasión de ½ de la superficie de la colonia hongo patógeno Invasión total de la superficie de la colonia del hongo patógeno. (2004) 7 . la invasión del antagonista sobre la superficie del micelio patógeno. tome con una asa calibrada de 1 microlitro y trace sobre la superficie del medio 5 estrías paralelas a las líneas 1 Elías y Arcos (1984) citada en Ezziyyani et al.El antagonismo se comprueba por la competencia de nutrientes y espacio. MÉTODO ECOMÉTRICO Este método utiliza un procedimiento normalizado de siembra en estrías para obtener una dilución progresiva de una suspensión de prueba de un microorganismo en una placa del medio que se está colocando a prueba. Micoparasitismo (MICMO): se realizan observaciones macroscópicas de los cultivos duales. se valora comparando las variables en la velocidad del crecimiento. Se dividen las placas en cuatro cuadrantes marcados sobre la base de la caja de petri. También se puede utiliza para determinar la acción inhibitoria del medio selectivo contra el organismo determinando la proporción del ICA en el medio selectivo y el ICA en un medio no selectiva óptimo de crecimiento (a esto lo denominó Mossel como el índice de crecimiento relativo. Se comprueba micoparasitismo. con aumento de 100x. Invasión total de la superficie de la colonia del hongo patógeno esporulación sobre ella.

1 ml en el primer plano de nuestro estriado. Tomar las muestras y cortar alrededor de treinta pedazos. 9. mientras no se observe crecimiento en ninguna estría del cuadrante siguiente. 7. 6. hojas y fruto. Incubar por 5 días a 37º C. 2° Paso: Sin levantar luego estriar el segundo plano perpendicular a nuestro primer estriado. Si hay crecimiento en las cinco estrías de los cuatro cuadrantes y la estría central (1).4. Observar el crecimiento en las cajas petri de todas las cajas y seleccionar los hongos de importancia. Una vez obtenida las lecturas en cada medio (ICA). 5. 1° Paso: tomar y descargar el Inoculo 0. Hacer lo mismo con el medio de referencia. Efectuar la misma operación con el medio de referencia. Sembrar los pedazos en cajas petri con medio PDA. efectuar la lectura de las cajas.2 y la estría central de 1. comparando el ICA del medio en evaluación y el medio de referencia. ESTRIADO El objetivo es esta técnica es extender lo más posible el inoculo con el fin de obtener colonias aislada. el ICA es igual a 5. a continuación con una pipeta. Multiplicar por el número de estrías en las cuales se observa crecimiento. Incubar las placas en posición invertida por el tiempo necesario y a la temperatura apropiada. almacenar en las fundas plásticas. 5. 3º Paso: Incubar: 7 días a 27º C. Metodología para el aislamiento de bacterias patógenas que atacan al tomate riñón Se debe tomar las partes afectadas del tallo. poner en vasos de precipitación y dejar reposar por treinta minutos con una solución de agua-cloro (2:1). teniendo en cuenta que cada estría tiene un valor de 0. sacar el Índice de Crecimiento Relativo ( ICR). repisar o esterilizar el asa. El ICA es igual al número del cuadrante cuando todas las estrías de este y de los cuadrantes anteriores muestren un crecimiento completo. Lavar con agua destilada tres veces. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 8 . ICR ICA medio evaluado ICA medio referencia 4. de forma progresiva y sin recargar. y repetir lo mismo con el último estriado logrando completar todo el espacio de la placa. y determinar el Índice de crecimiento absoluto (ICA). dibujadas en cada cuadrante y una estría central.0. retorcer. Transcurrido el tiempo. observar su morfología en el microscopio.

agro. STANIER.php 2. MC Limón & T Benítez http://www. http://www..org/docrep/fao/010/a1374s/a1374s02. Eva Casanova.org.reviberoammicol.sica.uy/publicaciones/documentos/ad/ad_457.unalmed. Improvement of Trichoderma strains for biocontrol (Mejora de cepas de trichoderma para su empleo como biofungicidas).reviberoammicol.springerlink. y otros. http://www.inia. ftp://ftp. cuarta edición.fao.pdf 5. J Delgado-Jarana.co/publicaciones/revista/docs/Art.com/content/d5581727x37h2202/? p=727eb9c105a341afa7fa8adb210b30c8&pi=5 4. Trichoderma Controls Fusarium Wilt Disease in Tomato Plants in Soilless Culture Through Competition (Trichoderma control de Fusarium en enfermedades de la planta del tomate).ph 3. 9 .pdf 6.com/search/index. Manuel Avilés and Isabel Trillas. Study of the effect of volatile metabolites of Trichoderma hamatum on the growth of phytopathogenic soilborne fungi (Efecto de los metabolitos volátiles de Trichoderma sobre el crecimiento de hongos fitopatógenos procedentes del suelo).AntagonismoInVitro deTrichoderma. Guillem Segarra.ec/agronegocios/Biblioteca/Convenio%20MAG %20IICA/productos/tomate_mag. AM Rincón. Editorial Reverte. Microbiología.com/search/index.gov. http://www.1. http://www.pdf 8. M Rey.pdf 7. CI Mónaco & AR Cháves http://www. España. GM Dal Bello GM. 1985.edu. R.