You are on page 1of 6
ATIVIDADE DE BACTÉRIAS ASSOCIADAS A FOLHAS DE NIM ( AZADIRACTHA INDICA ) SOBRE MORTALIDADE E

ATIVIDADE DE BACTÉRIAS ASSOCIADAS A FOLHAS DE NIM (AZADIRACTHA INDICA) SOBRE MORTALIDADE E MOBILIDADE DE MELOIDOGYNE JAVANICA, IN VITRO - Bruna Hanielle Carneiro dos Santos, Isac Pereira Soares Martins, Regina Cassia Ferreira Martins, Adelica Aparecida Xavier, Leandro de Souza Rocha, Acleide Maria Santos Cardoso, Josiane Gonçalves da Silva (bruninha_agro@hotmail.com)

Josiane Gonçalves da Silva (bruninha_agro@hotmail.com) Introdução Dentre os vários nematóides parasitas de

Introdução

Dentre os vários nematóides parasitas de plantas, o gênero Meloidogyne se destaca como o principal responsável por grandes perdas na produção, pois ataca quase todas as culturas de interesse econômico e algumas de interesse na rotação de culturas [1]. O controle desses organismos pode ser feito pelo uso de defensivos químicos, entretanto, muitos desses produtos, por serem persistentes e acumulativos em ecossistemas naturais, podem ser perigosos para animais e humanos [2]. As plantas antagonistas são também bastante utilizadas no controle de fitonematóides. Destas destaca-se o nim que produz exsudatos radiculares tóxicos aos nematóides afetando a sua mobilidade e ou a eclosão [3] e/ou por meio de mecanismos de resistência afetando o desenvolvimento e reprodução do nematóide no sistema radicular [4]. Outra característica marcante de plantas antagonistas é a presença de bactérias endofiticas (vivem no interior das plantas) e epifitas (aquelas que vivem na superficie das plantas) associadas. Entretanto, os efeitos dessas bactérias no controle de

fitonematoides devem ser investigados. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro o efeito de bactérias epífitas, endofíticas e do extrato fermentado de folhas de nim (Azadirachta indica) sobre a mortalidade e mobilidade de M.

javanica.

Material e métodos

A. Inóculo de M. javanica

Raízes de tomateiro „Kada‟ cultivado em casa de vegetação com sintomas de galhas foram levados ao laboratório de fitopatologia, sendo cuidadosamente lavadas em água parada para não eliminar massas de ovos aderidas, em seguida com auxílio de estilete retirou-se as massas de ovos presentes nas galhas. Essas massas foram colocadas em câmara de eclosão, que foi montada em placa de Petri de nove centímetros de diâmetro, na qual foi colocada peneira e, sobre essa duas folhas de papel absorvente. Sobre este adicionaram-se as massas de ovos coletadas. Abaixo da peneira foram adicionados 10 mL de água destilada e autoclavada. Em seguida a placa foi acondicionada em câmara de incubação a

28°C.

Após 48 horas os juvenis de segundo estádio (J2) eclodidos foram retirados da incubadora e levados para centrifuga, onde foram lavados por três vezes em rotação de 3000 rpm por 6 minutos com água destilada esterilizada. Os nematóides foram recolhidos de tal forma que a suspensão final contivesse 1000 juvenis de M. javanica/mL.

B. Obtenção da suspensão bacteriana.

Foram avaliados 28 isolados bacterianos obtidos de folhas de nim, sendo 10 bactérias epifitas, 1 bactéria endofitica e 17 bactérias do extrato fermentado de folhas de nim. Em câmara de fluxo laminar, os 28 isolados foram repicados em meio líquido “Trypic Soy Broth” (TSB) e levados para agitador orbital “shaker”, onde permaneceram sob agitação constante por 48 horas, rotação de 100 rpm a 28ºC. Após esse período as suspensões bacterianas foram centrifugadas a 10.000 rpm por 15 minutos e o sobrenadante (filtrado) descartado. Em seguida, foi adicionada solução salina (0,85%) sobre o pélete retido no tubo. A suspensão obtida foi calibrada em espectrofotômetro para OD 540 = 0,5 de absorbância.

C. Mortalidade e mobilidade de M. javanica

Apoio financeiro: FAPEMIG.

ISSN: 1806-549X

http://www.fepeg.unimontes.br/index.php/eventos/forum2011/schedConf/presentations

Para a montagem do ensaio in vitro , em células de 300 L de placas
Para a montagem do ensaio in vitro , em células de 300 L de placas
Para a montagem do ensaio in vitro , em células de 300 L de placas

Para a montagem do ensaio in vitro, em células de 300 L de placas tipo Elisa foram colocados 20 L da suspensão contendo de 20 J2 de M. javanica, e 100 L do extrato de folhas ou da suspensão bacteriana. Após 48 horas, a avaliação de mobilidade foi realizada pela contagem dos nematóides móveis e imóveis. A seguir foi realizada a avaliação de mortalidade, conforme metodologia descrita por Chen e Dickson [5], que consistiu em adicionar uma a duas gotas de NaOH 1 N à suspensão de nematóides. A contagem foi feita logo a seguir, considerando-se mortos os nematóides retos e imóveis, e vivos os retorcidos e móveis. O ensaio foi montado em delineamento inteiramente ao acaso com seis repetições e, como testemunhas foram utilizadas água, solução salina e temik. Os dados foram convertidos em porcentagem e submetidos à análise de variância, sendo as médias comparadas pelo teste de Scott e Knott a 5%.

as médias comparadas pelo teste de Scott e Knott a 5%. Resultados e Discussão Por meio

Resultados e Discussão

Por meio da análise de variância verificou-se efeito significativo dos isolados bacterianos testados em relação às testemunhas sobre a mortalidade e imobilidade de J2 de M. javanica (P≤0,05). Pelo teste de médias, verificou-se que para a mortalidade (Tabela 1), dos 28 isolados testados, 23 diferiram das testemunhas água e solução salina, sendo que o temik juntamente com 22 dos isolados apresentaram mortalidade entre

23,04 e 100%. Cinco isolados provocaram a morte de 100% dos juvenis após 48 h de exposição.

Para a mobilidade (Tabela 1), verificou-se que 9 isolados proporcionaram imobilidade superior a solução salina variando de 36,53 a 95,61%. A água juntamente com 20 isolados apresentou as menores taxas de imobilidade. Dos 28 isolados testados apenas a bactéria 11 do nim fermentado não teve efeito sobre a mortalidade e a mobilidade. Naves & Souza [6] trabalhando com filtrados das culturas de 40 isolados de bactérias endofíticas, obtidos a partir do sistema radicular de diferentes espécies de plantas testados na motilidade, mortalidade e eclosão de juvenis de segundo estádio (J2) de M. javanica, verificaram que dos isolados testados, sete imobilizaram juvenis em 24 h, não ocorrendo recuperação da mobilidade após serem transferidos para água, provocando, dessa forma, porcentagens de mortalidade semelhantes à induzida pelo nematicida aldicarbe utilizado como controle.

Conclusão

Conclui-se que os isolados bacterianos apresentam efeito nematicida e nematostático, exceto o isolado da bactéria 11 do nim fermentado que não teve efeito sobre a mortalidade e mobilidade.

Agradecimentos

À FAPEMIG pelo apoio ao desenvolvimento da pesquisa e pela concessão de bolsa de pesquisa.

Referências

[1]

Nematology, Maryland: Society of Nematoloists.

SASSER, J.N. & FRECKMAN, D.W., A world perspective on nematology:the role of the society, Pp. 7-14, 1987. In: J.A. VEECH and D.W.DICKSON, ed. Vistas on

[2]

1988. Effects of rhizobacteria on root-knot nematodes and gall

formation. Phytopathology 78: 1466-1469.

BECKER, J.O., ZAVALETA-MEJIA, E., COLBERT, S.F., SCHROTH, M.N.,WEINHOLD, A.R., HANCOCK, J.G., GUNDY, S.DV. and VAN-GUNDY, S.D.

[3]

plant growth. Plant Disease Reporter 56(8): 642-646.

MILLER, P.M. & AHRENS, J.F. 1971. Influence of growing marigolds, weeds, two cover crops and fumigation on subsequent populations of parasitic nematodes and

[4]

conditions. Nematologica 4: 43-55.

PEACOCK, F.C. 1959. The development of technique for studying the host/parasite relationship of the root-knot nematode Meloidogyne incognita under controlled

[5]

CHEN, S.Y.; DICKSON, D.W. 2000. A technique for determining live second-stage juveniles of Heterodera glycines. Journal of Nematology, v. 32, n.1, p.117-121.

[6]

NAVES, R.L., CAMPOS, V.P. & SOUZA, R.M. Filtrados de culturas bacterianas endofíticas na motilidade, mortalidade e eclosão de

juvenis de segundo estádio de Meloidogyne javanica. Fitopatologia Brasileira 29:384-388. 2004.

ISSN: 1806-549X

http://www.fepeg.unimontes.br/index.php/eventos/forum2011/schedConf/presentations

Tabela 1. Porcentagem de mortalidade e imobilidade de juvenis de segundo estádio (J2) de Meloidogyne

Tabela 1.Porcentagem de mortalidade e imobilidade de juvenis de segundo estádio (J2) de Meloidogyne javanica submetidos a

diferentes isolados bacterianos obtidos de folhas de nim, in vitro.

Tratamentos

Mortalidade de J2 M. javanica (%)

Tratamentos

Imobilidade de J2 M.javanica (%)

H 2 O Nim fermentado 11 Nim fermentado 17 Epifita 08 Nim fermentado 14 Nim fermentado 18 Nim fermentado 05 Solução salina Nim fermentado 15 Nim fermentado 12 Nim fermentado 16 Nim fermentado 13 Epifita 11 Epifita 12 Epifita 01 Nim fermentado 04 Epifita 09 Nim fermentado 09 Epifita 03 Nim fermentado 10 Nim fermentado 06 Temik Nim fermentado 02 Epifita 16 Epifita 10 Nim fermentado 01 Epifita 06 Epifita 03 Endofitica 01 Nim fermentado 07 Nim fermentado 08 Epifita 02

0,00

g

Epifita 03 Epifita 02 Nim fermentado 08 Nim fermentado 07 Endofitica 01 Epifitica 06 Epifitica 16 H 2 O Nim fermentado 01 Epifitica 10 Nim fermentado 11 Nim fermentado 02 Epifitica 12 Temik Nim fermentado 06 Nim fermentado 10 Epifitica 03 Nim fermentado 09 Epifitica 09 Nim fermentado 18 Nim fermentado 14 Epifitica 01 Solução salina Nim fermentado 04 Nim fermentado 12 Epifitica 11 Nim fermentado 16 Nim fermentado 13 Nim fermentado 15 Nim fermentado 17 Nim fermentado 05 Epifitica 08

0,00 f

0,00

g

0,00 f

1,50

g

0,00 f

2,63

g

0,00 f

5,82

g

0,00 f

10,32

f

0,66 f

12,52

f

0,66 f

17,66

f

1,66 f

23,04

e

1,66 f

27,71

e

1,96 f

34,09

d

2,50 f

35,75

d

6,28

e

39,91

d

7,88

e

40,75

d

7,93

e

58,30

c

8,91

e

63,46

c

9,12

e

88,80 b

10,00 e

89,26

b

10,73 e

90,00

b

11,19 e

90,87

b

11,27 e

91,08

b

11,39 e

91,31

b

34,57 d

92,43

b

35,26 d

93,66

b

36,53 d

98,04

a

52,38 c

98,33

a

60,08 c

99,33

a

64,20 c

100,00 a

64,24 c

100,00 a

76,95 b

100,00 a

84,16 b

100,00 a

84,81 b

100,00 a

95,61 a

Média

58,22

Média

25,30

CV (%)

13,96

CV (%)

36,18

ISSN: 1806-549X

http://www.fepeg.unimontes.br/index.php/eventos/forum2011/schedConf/presentations

ISSN: 1806-549X http://www.fepeg.unimontes.br/index.php/eventos/forum2011/schedConf/presentations

ISSN: 1806-549X

http://www.fepeg.unimontes.br/index.php/eventos/forum2011/schedConf/presentations

ISSN: 1806-549X http://www.fepeg.unimontes.br/index.php/eventos/forum2011/schedConf/presentations

ISSN: 1806-549X

http://www.fepeg.unimontes.br/index.php/eventos/forum2011/schedConf/presentations

ISSN: 1806-549X http://www.fepeg.unimontes.br/index.php/eventos/forum2011/schedConf/presentations

ISSN: 1806-549X

http://www.fepeg.unimontes.br/index.php/eventos/forum2011/schedConf/presentations