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FACULTAD DE CIENCIAS Y FILOSOFIA DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA, BIOLOGIA MOLECULAR Y FARMACOLOGIA SECCION BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR

PRACTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

PRACTICA # 1 : BUFFERS TAMPONES O BUFFERS: a) Acidos y bases: La comprensión de los conceptos de ácido y base son esenciales para el entendimiento de las propiedades biológicas y comportamiento bioquímico de las moléculas orgánicas. Las macromoléculas poseen características fisicoquímicas que son muy importantes en la homeostasis; por ejemplo: las cargas eléctricas son importantes en las catálisis enzimáticas, así como en la estabilidad de las proteínas y ácidos nucleicos. En general, se define un ácido como un donador de protones y una base como un aceptor de protones. b) Ionización del agua: Debido a que la masa del átomo de hidrógeno es muy pequeña y a que su único electrón está fuertemente atraído por el átomo de oxígeno, existe poca tendencia a que el ion hidrógeno se disocie del átomo de oxígeno de una molécula de agua y salte al oxígeno de una molécula de agua cercana, liberando iones hidrógeno e hidroxilo, resultando el equilibrio: H2O --------- H+ + OH(1)

A 25 °C solo una de cada 10 millones de moléculas en un litro de agua pura se encuentra ionizada. Aunque la concentración de estos iones es muy baja, ellos tienen efectos biológicos muy importantes. Es preciso entonces expresar la ionización del agua de modo cuantitativo. Podemos escribir la constante de equilibrio para la reacción (1): [H+] [ OH-] Keq = --------------[H2O] (2)

Ahora podemos simplificar esta expresión ya que la concentración de H 2O es relativamente muy alta (55,5 M) y por lo tanto se mantiene casi constante en relación a la concentración de H + y OH- (1,0 x 10 –7). De esta manera, podemos sustituir 55,5 en la expresión de equilibrio: 55,5 K’ eq = [H+] [OH-] (3)

El valor de K’eq ha sido cuidadosamente estimado a partir de mediciones de conductividad eléctrica del agua (sólo los iones que surgen de la ionización del agua pueden conducir corriente eléctrica). Encontrándose que a 25 °C es 1,8 x 10-16. Sustituyendo este valor en la ecuación (3) tenemos: (55,5) (1,8 x 10-16) = [H+] [OH-] 1

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0 M H + y 1.0x10-14= [H+] [OH-].5 K’eq. la regulación del pH del suero es necesaria para la supervivencia. de modo que entre dos soluciones que difieran en pH por 1 unidad. c) Tampones: El buen funcionamiento de los sistemas biológicos requiere de un control estricto del pH. Las enzimas son bastante sensibles a cambios de pH. habrá una diferencia de concentración entre ellas de 10 veces.4.0 x 10–14 = [H+] [ OH-] Si usamos Kw para designar al producto 55.1.+ H+ Calculando la constante de equilibrio: Keq = [H+] [A-] [HA] Si tomamos logaritmos: log Keq= log [H+] + log [A-] . Un tampón es una solución que ante la adición de cantidades pequeñas de H+ u OH.⇒ A. tienen una actividad enzimática máxima a un pH característico llamado óptimo fuera del cual su actividad se ve afectada notablemente.0.4 +/. menor será la concentración de iones H + y viceversa. el organismo mantiene el pH sérico en el rango de 7.log [HA] De donde: pH= pkac + log [A-] / [HA] Que en su forma general es: pH = pKac + log aceptor de protones donador de protones Esta ecuación permite calcular la relación molar entre una sal y un ácido que forman parte de un tampón para un pH y pK determinados. la escala es logarítmica. Los tampones comunes están formados por dos sustancias: un ácido y su base conjugada: HA. Prácticas de Laboratorio de Bioquímica-2006-DBBMF-FCF 2 . Valores de pH fuera de este rango pueden ser perjudiciales para el organismo. pH= -log [H+] A mayor valor de pH. Kw es llamado el producto iónico de agua y es la base para la escala de pH. un modo conveniente de expresar la concentración de protones (y OH --) en cualquier solución acuosa en el rango de acidez de 1. por ejemplo. Los organismos tienen un control muy estricto de pH. tenemos: Kw=1.se resiste a cambios dramáticos de pH.0 M OH-.

05N para preparar 50 ml de 0. pH 5.34. 15.2M. ¿Cuál es el pH del tampón? 4. 13. 2. ¿Cuáles son las concentraciones de ácido acético y acetato en un tampón acetato 0. Teniendo en cuenta los valores de pK del fosfato. 9.52 x 10-2M. Cuáles son las diferentes especies iónicas que tiene la Lisina a los siguientes pHs: 14. Si el pKR del ácido acético (CH 3-COO-) es 4. 8. y el de la metil amina (CH 3NH3+) es 10. Cuáles son las diferentes especies iónicas que tiene el Acido aspártico a los siguientes pHs: Prácticas de Laboratorio de Bioquímica-2006-DBBMF-FCF 3 .95.Si el pH del agua es 7.20.60? 2.7 x 10 -5.53 y 12. Teniendo en cuenta los valores de pK del fosfato.5 pero para hacerlo sólo tiene NaH2PO4 0.0.05N HCl? 8.PROBLEMAS: 1. Asuma que el pKa es 3.1M fosfato. cómo explica que el pK 1 (COO-) de la glicina sea 2.0.pH 1. Cuáles son las diferentes especies iónicas que tiene la Glicina a los siguientes pHs: pH 1. 7.60 y 12.5 si le agregamos 1 ml de 0.1M y una solución de NaOH 0.1N.05N HCl 11. Cuál es el pH de 50 ml de agua luego de agregársele 1 ml de 0.0.05N HCl? 6. cuánto cambiará el pH de esta solución si le agregamos 1 ml de 0. 3. El plasma sanguíneo contiene carbonatos (fundamentalmente HCO 3. cuánto cambiará el pH de 50 ml de una solución 0. Cuál será el volumen que requiere de ambas soluciones.1N NaOH? 10.0.0.0? El Ka para el ácido acético es 1. cuál es el pH de 50 ml de agua luego de habérsele adicionado 1 ml de 0.2M Na 2HPO4 y de HCl 0.0.5. pH 7.0.6. 10. 9. Teniendo en cuenta los valores de pK del fosfato. 6. A Ud le encargan preparar buffer fosfato 150 mM.34 y el pK 2 (NH3+) sea 9. pH 7.Si el pH del agua es 7. Suponga que prepara un tampón a partir de un ácido débil 0.02M fosfato. • ¿Cuál es la relación HCO3-/CO2 y la concentración de cada uno a pH 7.1N NaOH? 12.40? • ¿Cuál será el pH si se añade un ácido 10 -2M en condiciones en las cuales el incremento de Co2 no puede ser liberado? 5. Cuál será el volumen que se requiere de 0. 2.y CO2) en concentración 2.8. cuánto cambiará el pH de esta solución si le agregamos 1 ml de 0.10 M.0.10 M y una sal de sodio 0. pH 7.

Añadir 1ml de NaOH 0. mezlar y medir el pH.05N.1M y agregar 1 ml de una solución de NaOH 0. Conociendo el pK de fosfato. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 1. Agregar 1ml de HCl 0.2M + solución de HCl 0. Añadir 1ml de NaOH 0.6. Medir el pH de una solución NaH 2PO4 0.1M + solución NaH2PO4 0. Preparar 50ml de una solución 0. a. a. 9.1N. 4.5 a partir de una solución Na2HPO4 0. Preparar 50ml de una solución 0. Añadir 1ml de NaOH 0.1 a la solución (a). b. Tomar 100 ml de NaH2PO4 0. Medir el pH.5 a partir de: solución Na2HPO4 0. 1. Preparar 50ml de una solución 1/50M de tampón fosfato pH 7.1M + solución de HCl 0. 3. Prácticas de Laboratorio de Bioquímica-2006-DBBMF-FCF 4 . a.1N.1N. Medir nuevamente el pH. b. Medir el pH.0.1N al agua.pH 1. 5.60 y 12.05M.1N.1N. Medir el pH.1M y agregar 1 ml de una solución de HCl 0.1M.1M + solución NaOH 0. c.5 a partir de: solución NaH2PO4 0.10 M de tampón fosfato pH 7. Medir el pH en el potenciómetro. 2.1N HCl al tampón (a). b.9. Medir el pH. Medir el pH. Preparar 50ml de una solución 0.0. c. Añadir 1ml de HCl 0. mezlar y medir el pH. Medir el pH. Repetir este procedimiento hasta haber agregado 10 ml de NaOH 7. b. Medir el pH de 50ml de agua destilada.1 a la solución (a).1N a 50ml de agua. Agregar 1ml de 0. 7.0. cuál será la relación ácido base que existe en esta solución para que tenga el pH que usted ha medido? 6. 3. Repetir este procedimiento hasta haber agregado 10 ml de HCl Cuestionario e Informe 1) Indique las reacciones involucradas en cada experimento. a.5 a partir de: solución Na2HPO4 0.02M de tampón fosfato pH 7. Medir el pH. Tomar 100 ml de Na2HPO4 0.02M de tampón fosfato pH 7. Medir el pH.

3) Anote las lecturas obtenidas en el potenciómetro. igual a la respuesta del agua? 7) Grafique la respuesta del buffer ante la adición de diferentes cantidades de ácido o base (ejercicios 6 y 7) Ionizaciones del ácido fosfórico H3PO4 + H2O H2PO4 + H2O HPO4-2 + H2O Acido fosfórico 1° ionización 2° ionización 3° ionización H2PO4– + H3O+ HPO4 –2 + H3O+ PO4-3 + H3O+ Constante de ionización K1 = 1.44 Prácticas de Laboratorio de Bioquímica-2006-DBBMF-FCF 5 . 5) ¿Cambió el pH del agua al añadírsele HCl o NaOH?.1 x 10-2 K2 = 1. 6) ¿Fue la respuesta del tampón a la adición de ácido o base.2) Efectúe los cálculos para la determinación de las cantidades a usarse de las diferentes soluciones.57 x 10-7 K3 = 3.96 6.6 x 10-13 1° ionización 2° ionización 3° ionización pKac 1.82 12. 4) ¿Cómo reaccionaron las soluciones tampón al añadírseles ácido o base? ¿Cómo cambió el pH?.