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Módulo 7.

NÚCLEO CELULAR: ESTRUCTURA Y FUNCIONES
INTERIOR DE LAS CÉLULAS EUCARIÓTICAS Antiguamente los biólogos pensaban que las células estaban formadas por una gelatina uniforme a la que llamaban protoplasma. Con la microscopía electrónica y otras herramientas modernas de investigación se ha extendido la percepción del mundo con respecto a las células. En la actualidad sabemos que la célula tiene un alto nivel de organización y que es sorprendentemente compleja: tiene su propio centro de control, su sistema de transporte interno, fuentes de energía, fábricas para procesar la materia que requiere, plantas de empaquetamiento e incluso un sistema de autodestrucción. En nuestros días el término protoplasma, si acaso se utiliza, es en un sentido muy general. La porción de protoplasma que se encuentra fuera del núcleo se llama citoplasma y el material interno del núcleo se llama nucleoplasma. Los organelos se encuentran suspendidos en el componente líquido del citoplasma (citosol). Cada uno de los organelos delimitados por sus membranas forma uno o más compartimientos independientes dentro del citoplasma. En una célula animal típica, todos los compartimientos en conjunto abarcan cerca de la mitad del volumen del citoplasma. ESTRUCTURA DEL NÚCLEO La estructura más destacada de la célula es el núcleo. Tiene forma esférica u oval, con un diámetro promedio de 5 µm. Debido a su tamaño y a que con frecuencia ocupa un lugar fijo cerca del centro de la célula, antiguos investigadores supusieron que era el centro de control de la célula, mucho antes de que existieran datos experimentales al respecto. La mayor parte de las células tienen un solo núcleo, aunque existen excepciones como por ejemplo algunas células de hígado que son binucleadas y las fibras musculares esqueléticas que son multinucleadas. Envoltura nuclear La envoltura nuclear consta de dos membranas que separan el contenido nuclear del citoplasma circundante (las membranas nucleares externa e interna). Las dos membranas de la envoltura se interrumpen en algunos puntos formando poros nucleares, de tal forma que el interior del núcleo se comunica con el citoplasma celular. Los poros nucleares permiten el paso de sustancias del interior de núcleo hacia el citoplasma y viceversa. El poro nuclear en realidad es una estructura altamente elaborada, denominada complejo del poro nuclear, compuesta de más de 100 proteínas diferentes, ordenadas con una simetría octogonal. Las moléculas pequeñas (5 kDa o menos) difunden en forma prácticamente libre, pero las proteínas de gran tamaño necesitan contar con una señal de localización nuclear, que generalmente consiste en una corta secuencia de aminoácidos (de 4 a 8. El proceso de entrada de una proteína destinada al núcleo necesita que otra proteína citosólica ("receptor nuclear de importación") se una a la señal de localización nuclear y requiere además de la energía que proporciona la hidrólisis de una molécula de trifosfato de guanidina (GTP). Esto provoca la dilatación del poro y permite el pasaje de la proteína. La salida de las subunidades

respectivamente. donde son sintetizados. que van adheridas a las proteínas fosforiladas (fracciones de la lámina nuclear). En la telofase tardía las vesículas se reúnen y reconstituyen la envoltura nuclear de cada célula hija con sus poros nucleares y posteriormente se reimportan selectivamente las proteínas que llevan la señal de transporte nuclear por transporte activo. hacia el núcleo. Cuando el núcleo se desensambla durante la mitosis. Unida al interior de la membrana nuclear se encuentra una capa de proteínas específicas que al parecer funcionan como esqueleto del núcleo ( lámina nuclear) y que tiene un papel importante en la desorganización y reorganización de las membranas nucleares al comienzo y al fin de la división celular.BIOLOGÍA / Módulo 7 / Núcleo Celular 2 ribosómicas fabricadas en el nucleolo y el ARNt también dependerían de un sistema de transporte activo mediado por señales de exportación nuclear. Al mismo tiempo la membrana nuclear se desarma en vesículas membranosas. La lámina nuclear es un enrejado de subunidades proteicas. . del tipo de los filamentos intermedios que han sido vistos al tratar el citoesqueleto (proteínas fibrilares) y que. la lámina nuclear se depolimeriza por fosforilación. como todas las proteínas nucleares lleva una “señal de transporte nuclear” que los dirige desde el citosol. En la telofase temprana (una de las fases finales de la división celular) se produce la defosforilación de las proteínas y las vesículas se reorganizan alrededor de cada cromosoma.

están altamente condensados y transcripcionalmente inactivos. 1 . cuya composición fue anunciada en junio del 2000.000 proteínas esenciales y que sólo un 10% del genoma resulta de importancia A la izquierda se observa la estructura del nucleosoma. El núcleo controla la síntesis de proteínas enviando las moléculas de ARN mensajero (ARNm) través de la envoltura nuclear hacia el citoplasma que es el sitio donde se produce la síntesis de proteínas. pero durante la parte más larga del ciclo celular (interfase) están mucho menos condensados y son muy activos en la síntesis de ARN. En organismos diploides como los seres humanos hay dos copias de cada cromosoma. Una célula típica humana contiene entonces 46 cromosomas con un total de 6. una heredada de la madre y otra del padre1. Los ribosomas son compuestos supramacromoleculares donde a partir de la información de los mensajeros se realiza la síntesis de las proteínas. Además de proveer a su propia multiplicación en el proceso de división celular. Estas moléculas de ARNm son copias de los genes que codifican las proteínas. o fase M. a partir de la disociación en sus componentes.BIOLOGÍA / Módulo 7 / Núcleo Celular 3 Cromatina y los cromosomas La mayor parte del ADN celular se localiza dentro del núcleo . la función principal del genoma activo es copiar secuencias de ADN en forma de secuencias de ARN (proceso denominado transcripción). estudiando cuáles son las regiones que se han conservado en el curso de la evolución. Se considera que en los mamíferos existen alrededor de 60.10 9 pares de nucleótidos. Los cromosomas cambian su estructura y su actividad de acuerdo al estado de la célula: en mitosis. El ARN copiado puede ser un ARNm En los varones los cromosomas sexuales son diferentes: el cromosoma sexual Y es aportado por el padre y el cromosoma sexual X por la madre. vital para los vertebrados. Las moléculas de ADN forman los genes que contienen las instrucciones químicamente codificadas para producir casi todas las proteínas que la célula necesita. resultado de la organización de los nucleosomas en 6 unidades por vuelta. Cada molécula de ADN está empaquetada en un cromosoma separado y la información genética total almacenada en los cromosomas de un organismo constituye el genoma. Los genetistas de poblaciones han tratado de estimar cuánto de ese DNA es esencial para la vida. una secuencia de nucleosomas de 11 nm y una fibra de 30 nm.10 9 pares de nucleótidos. en el que el ADN se copia a sí mismo (replicación). No todo el ADN cromosómico codifica para proteínas o para moléculas de ARN. Puede verse el octámero compuesto de las ocho unidades de histonas. A la derecha se muestran distintos grados de empaquetamiento del ADN: una doble hélice de 2 nm de espesor. contiene alrededor de 3. El genoma humano.

que se tiñe en forma distinta a la cromatina circundante. Finalmente los nucleosomas se acomodan formando una especie de hélice (cada vuelta de la hélice compuesta por seis nucleosomas). A su vez. H3 y H4) y las no nucleosomales (H1) que son más grandes. Cada región del ADN que produce una molécula de ARN funcional constituye un gen. luego de ser procesado. El nucleolo. es el sitio de producción de estructuras especializadas llamadas ribosomas . Cada ribosoma está compuesto de dos subunidades de diferente tamaño. puede dar lugar a más de un ARNm final y en consecuencia codificar para más de una proteína). proporcionan el lugar donde la información contenida en el ARN mensajero es traducida en moléculas de proteínas. H2B.BIOLOGÍA / Módulo 7 / Núcleo Celular 4 (ácido ribonucleico mensajero). proceso en el que juega un papel importante la histona no nucleosómica H1. Este gen se transcribe muchas veces produciendo múltiples copias . pero las proteínas ribosómicas son sintetizadas en el citoplasma e ingresan al núcleo (y luego al nucleolo) a través de los poros nucleares porque contienen señales de importación específicas. Las histonas son proteínas básicas (ricas en lisina y arginina). lo que les permite unirse a la molécula de ADN (con carga negativa debido a los restos fosfóricos) independientemente de la secuencia nucleotídica. cada subunidad contiene ARNr y proteínas. De esta forma se obtiene una “fibra” de 30 nm de espesor. Muchas de las proteínas más abundantes. que se ensamblan separadamente en el nucleolo. Hay dos tipos de histonas: las nucleosomales (H2A. El ARNr se transcribe en el nucleolo. Cada nucleosoma está separado por una sección de ADN no enrollado de 0-80 pares de nucleótidos. las que. que traducirá su información generalmente en una única proteína (en algunos casos el ARNm transcripto. Para evitar ello es que están asociados a proteínas de dos clases. También del ADN se transcriben moléculas de ARNr (ribosómico) y ARNt (de transferencia). las histonas y las proteínas no histónicas. El complejo de ambos tipos de proteínas con el ADN es conocido como cromatina. Nucleolo En muchas células la porción más visible del núcleo es el nucleolo. un cuerpo compacto no delimitado por membranas. Si los cromosomas estuviesen compuestos solamente de ADN extendido. Las histonas nucleosomales integran un núcleo con forma de cilindro achatado compuesto por ocho subunidades de histonas (dos de cada uno de los cuatro tipos mencionados) en el que se enrolla la molécula de ADN dando dos vueltas (146 pares de bases). son sintetizadas a partir de un único gen. A esta estructura se la conoce como nucleosoma. como la hemoglobina o la mioglobina. es difícil imaginar cómo podrían replicarse y segregarse a las células hijas sin enredarse o romperse. con el ADN empaquetado con las proteínas histónicas. una vez localizadas en el citoplasma.

Por ello. 15.000 nucleótidos). A su vez cada copia de ARNm es traducida gran cantidad de veces a moléculas de hemoglobina. hacer una réplica de una obra original) y en este sentido es utilizado en Biología. En el hombre hay alrededor de 200 copias por genoma haploide. de 13. con pérdida de algunos nucleótidos y de las proteínas asociadas: ARNr 28S. lípidos o de los propios ácidos nucleicos. pero su segunda acepción es precisamente “copia” (copiar. separadas por regiones no codificantes. En castellano el término “réplica” es más utilizado como “argumento o discurso con el que se responde a una argumentación”. Ambas subunidades salen separadamente del nucleolo y del núcleo pasando al citoplasma. las moléculas de ARN polimerasa y los ribonucleótidos necesarios para su formación están fácilmente disponibles. 21 y 22). Concentrándose en una zona determinada del núcleo. Los genes que codifican para ARNr son transcriptos por la ARN polimerasa I. . Cada uno de los “rulos” (tándem de genes) recibe el nombre de Regiones de Organizadores Nucleolares (NORs). En el humano los genes ribosomales se encuentran en determinadas regiones de 5 pares de cromosomas (13. la información que contiene el ADN está destinada (toda o parte de ella. Los dos primeros. Dichos genes forman “rulos” (loops) y se ubican en el nucleolo. Este primer transcripto es procesado en tres fragmentos.II y III) que generan las diferentes moléculas de ARN. por lo que la única posibilidad de fabricar la cantidad de ARNr que necesita la célula es que en el ADN existan múltiples copias de los genes que codifican para el ARNr . ARNr 5. El término “replicación” proviene de la traducción directa del inglés “replication”. que se tiñen intensamente con los colorantes nucleares y que originaron en los primeros microscopistas la idea de que el nucleolo era “el núcleo del núcleo” (de allí su nombre). REPLICACIÓN (DUPLICACIÓN) DEL ADN 3 Es frecuente escuchar que “el ADN contiene toda la información necesaria para el buen funcionamiento de la célula”. ¿Es que en el ADN no existe información relacionada con los otros metabolitos primarios no proteicos? ¿No existe acaso en el ADN información para la síntesis o la modificación de hidratos de carbono. Sin embargo el ARNr ya es el producto final.BIOLOGÍA / Módulo 7 / Núcleo Celular 5 del ARNm. según el tipo de célula) a convertirse en primer término en algún tipo de ácido ribonucleico: ribosómico (ARNr). Analizado a nivel molecular.8S y ARNr 18S. dispuestas en tándem en determinadas regiones de algunos cromosomas. que es recubierto por proteínas (alrededor de 80 tipos moleculares) que provienen del citoplasma. ya que ente las muchas 2 3 Se denomina así al producto inmediato de la transcripción. 14. En muchos casos el “transcripto primario” sufre modificaciones posteriores (por ello denominadas post-transcripcionales). en un esquema de amplificación usual en proteínas. pero puede inducir a error. junto con una fracción de ARNr 5S transcripta fuera del nucleolo por la ARN polimerasa III forman finalmente la subunidad ribosómica mayor (60S). Esta zona del núcleo es de alta producción de ácidos nucleicos (moléculas de ARNr). mensajero (ARNm) o de transferencia (ARNt). En eucariotas existen tres tipos de ARN polimerasas (I. además de otras sustancias no incluidas en esos grupos? La respuesta es afirmativa. donde son activamente transcriptos por la ARN polimerasa I. que produce un transcripto primario 2 (ARNr 45S. Estas tres clases de ARN participan en el proceso de síntesis de proteínas. en tanto que el ARNr 18S integra la subunidad ribosómica menor (40S). como ocurre con el ARN mensajero de los ecuariotas. La ubicación de los extremos de los cromosomas que contienen las copias del gen del ARNr en un mismo sector (el nucleolo) obedece a un criterio de eficiencia. una expresión tal como “en el ADN está contenida la información para la síntesis de todas las proteínas que requiere la célula para su funcionamiento” no es incorrecta.

intermedia entre la posición que hubiera ocupado el ADN “pesado” (integrado exclusivamente por 15N)y el ADN “ligero” (integrado exclusivamente por 14N). determinando así el tamaño. Las estrictas reglas del apareamiento de bases (A con T y G con C) permitirán que cada cadena sea el molde para fabricar su respectiva cadena complementaria. Por lo expuesto. La replicación del ADN es semiconservadora Si cada cadena actúa de molde para la síntesis de una nueva cadena. Composición del medio Medio conteniendo sólo 15N ( ▐) Pasaje a medio con N 14 (│) Nueva división en medio con N 14 (│) Inicial ▐▐ ▐▐ ▐│ Final ▐▐ + ▐▐ ▐│ + │ ▐ ▐│ + ││ Resultado (ADN pesado) (ADN híbrido) (ADN híbrido y ADN liviano) La hipótesis de la replicación semiconservadora recibió aún más apoyo en la segunda parte del experimento: si se permitía que nuevamente se duplicara la población celular en el mismo medio de nitrógeno “ligero” (con 14N) se producían dos bandas. El experimento demostró que la replicación es semiconservadora. cada una con una cadena nueva y una vieja. las secuencias de nucleótidos del ADN describen en último término la estructura primaria de todos los ARN y proteínas celulares y mediante las enzimas pueden afectar indirectamente la síntesis del resto de los constituyentes celulares. Este proceso se denomina replicación semiconservadora. Watson y Crick. cuya expresión da lugar a su vez a la fabricación de todos los materiales que la misma requiere para su correcto funcionamiento. los científicos ya se habían sorprendido de la capacidad que mostraban todos los organismos para crear copias de ellos mismos . A continuación. Al cabo de un tiempo todo el ADN microbiano era “pesado” (las bases púricas y pirimídicas estaban constituidas exclusivamente por 15N). En este caso se pudo ver (por centrifugación en equilibrio en un gradiente de cloruro de cesio) que todo el ADN formaba una única banda. permanentes. El proceso de replicación (duplicación) del ADN fue el primer ejemplo biológico de la utilización de un molde molecular para guiar la síntesis de una macromolécula. así como de la capacidad de las células de producir muchas copias idénticas de macromoléculas grandes y complejas. éstos pueden tener consecuencias directas porque son. Si no se corrigen los errores en la síntesis del ADN. es decir una cadena con una secuencia nucleotídica predeterminada. En la síntesis de todas las macromoléculas que contienen información intervienen sistemas complejos que aseguran que la información se transmita intacta. incubando durante mucho tiempo células de la bacteria Escherichia coli en un medio que contenía como única fuente de nitrógeno cloruro de amonio con 15N. cada una de ellas. dando dos dobles hélices hijas que contienen. algunas de estas células “pesadas” se pasaron a un medio que contenía sólo cloruro de amonio con nitrógeno ligero ( 14N) hasta que se duplicara la cantidad de células presentes (indicador de una duplicación en la cantidad de ADN). proporcionaron la base teórica para comprender cómo el ADN podía actuar como molde para la replicación y transmisión de la información genética. Mucho antes de que se conociese la estructura del ADN. esencialmente. Una cadena es el complemento de la otra. al proponer su concepto de estructura del ADN. forma y función de cualquier objeto viviente. Esta teoría fue propuesta por Watson y Crick. La especulación del problema se centró en el concepto de molde. se producirán dos moléculas de ADN nuevas.BIOLOGÍA / Módulo 7 / Núcleo Celular 6 proteínas que se sintetizan en base a la información contenida en el ADN están las enzimas responsables de todas las reacciones químicas que ocurren en las células. una correspondiente al ADN “híbrido” (con una . De allí la importancia de asegurar que la información contenida en el ADN de una célula pueda ser transmitida sin errores a las células hijas formadas en el curso de la división celular. una hebra pesada y una hebra liviana. pero fueron Meselson y Stahl en 1957 quienes le dieron confirmación experimental.

según el tipo de célula. Los fragmentos de Okazaki tienen una longitud entre unos pocos centenares y unos pocos millares de nucléotidos. que a medida que el único cromosoma circular de la bacteria se desenrrollaba. . En este caso pudo verse. la replicación es bidireccional. son puntos dinámicos llamados horquillas de replicación en donde se desenrolla el ADN parental y las cadenas separadas se replican rápidamente. La síntesis de ADN transcurre siempre en dirección 5’→ 3’ y es semidiscontinua Una cadena nueva de ADN siempre se sintetiza en la dirección 5’→3’. transcurre en una única dirección o en ambas? Gran parte de la información de la que disponemos sobre este tema proviene de estudios realizados en Escherichia coli. de modo que la replicación procedía simultáneamente con el desenrrollamiento de las hebras. la síntesis en una cadena es continua hacia un lado y discontinua hacia el otro. se producen múltiples orígenes de replicación. la enzima que forma la nueva hebra (ADN polimerasa) “lee” la cadena que actúa de molde desde el extremo 3’ al 5’. o los dos. La replicación empieza en un punto de origen y normalmente es bidireccional En este momento aparece un buen número de preguntas: ( 1) ¿se desenrollan totalmente las cadenas del ADN parental antes de que cada una sea replicada o la replicación se produce simultáneamente con el desenrrollamiento? ( 2)¿empieza la replicación en sitios al azar o en un único punto? y (3) ¿después de iniciada la replicación en un punto. simultáneamente se iba produciendo la incorporación de nucleótidos radiactivos. La cadena continua o cadena conductora es aquella en la que la síntesis 5’→ 3’ transcurre en la misma dirección que el movimiento de la horquilla de replicación. 3H). ¿cómo se pueden sintetizar simultáneamente las dos cadenas si las dos hebras que constituyen el ADN están dispuestas en sentido antiparalelo (opuesto)? La respuesta la dio Okazaki en los años ´60. Ello condujo a la conclusión de que una cadena se sintetiza continuamente y la otra discontinuamente . La única diferencia con las células eucariotas es que.BIOLOGÍA / Módulo 7 / Núcleo Celular 7 cadena de 14N y otra de 15N) y otra de ADN exclusivamente “ligero” (producto de la replicación de las cadenas ligeras en un medio que contenía exclusivamente 14N). Como la síntesis es bidireccional (transcurre hacia ambos lados del punto de replicación). Mediante la aplicación de otras técnicas también se reveló que los lazos de replicación siempre se originan en un punto denominado origen de replicación y que tanto en el caso de las moléculas de ADN circulares. Si la síntesis transcurre siempre en la dirección 5’ → 3’. La cadena discontinua o cadena rezagada es aquélla en la que la síntesis 5’ → 3’ transcurre en la dirección opuesta a la del movimiento de la horquilla. el isómero pesado del hidrógeno. es decir que los dos extremos del lazo de replicación son horquillas de replicación activas y se unen en un punto del lado del círculo opuesto al origen . Un extremo del lazo. cultivando las células en un medio con timidina tritiada (conteniendo tritio. como también en el ADN no circular de las células eucariotas. debido al mayor tamaño del ADN. al encontrar que una de las dos cadenas se sintetiza en piezas cortas denominadas desde entonces fragmentos de Okazaki. como ocurre en bacterias. Debido a que las dos cadenas de ADN son antiparalelas.

necesario para que pueda separa parte de una bandita elástica actuar la ADN polimerasa (E). que se trasladan a lo largo (B) marca el momento de la unión de la helicasa a las proteínas del ADN y usan la energía química del iniciadoras. haciendo que las hélices sean más apretadas a ambos lados de la horquilla de replicación. permitiendo que se elimine una o más vueltas de hélice y retornan al ADN a su condición “relajada”(sin tensión). cada una llevando a cabo una tarea específica. se requiere un cebador (“primer”. Aunque aún no se ha E obtenido como una entidad física. Finalmente. La ADN polimerasa sólo puede añadir nucleótidos a una cadena preexistente (sin distinguir si se trata de ribo. La separación de las cadenas crea hebras del ADN e inicia la formación de la orquilla de replicación. en inglés). que luego deben ser reemplazados por sus equivalentes de ADN. enzimas que sintetizan ARN sí tienen la capacidad de iniciar la síntesis. Las cadenas separadas se estabilizan por medio de proteínas fijadoras de ADN. parte de la cadena nueva ya debe estar en su sitio antes que la polimerasa actúe. los cebadores de ARN deben ser eliminados y reemplazados por ADN. El extremo 3’ del cebador se denomina extremo cebador. Dicho de otro modo. Los cebadores deben estar presentes antes que la polimerasa pueda actuar y suelen ser fragmentos cortos de ARN formados por enzimas denominadas primasas. La reacción de polimerización es conducida por una cadena molde. de las cuales existen distintos tipos.5 pares de bases. el complejo completo se ha denominado sistema ADN replicasa o replisoma. una tensión en la estructura helicoidal La etapa (D) marca el comienzo de la acción de la primasa. Para eliminar dicha tensión actúan las topoisomerasas. En segundo lugar. por lo que los cebadores son a A menudo oligonucleótidos de ARN. .o de dexosirribonucleótidos). La fase helicasas. coli esta función es cumplida por la ADN 4 Dado que el ADN se encuentra enrollado y que cada vuelta de hélice contiene 10. que debe ser resuelta por la acción de las topoisomerasas4. B La replicación del ADN requiere muchas enzimas y factores proteicos En la actualidad sabemos que la C replicación de Escherichia coli requiere no solamente una sola ADN polimerasa (hasta el momento han sido aislada tres polimerasas.BIOLOGÍA / Módulo 7 / Núcleo Celular 8 El ADN es sintetizado por polimerasas. II y III) sino 20 o más D enzimas y proteínas diferentes. En (C) la helicasa ha comenzado a separar las dos ATP. En consecuencia. En (A) las proteínas iniciadoras se unen al origen de replicación. Todas las polimerasas requieren de un molde. Para tener acceso a las cadenas de ADN que han de actuar de molde deben separarse las dos cadenas parentales. ninguna enzima sintetizadora de ADN puede iniciar la síntesis de una cadena nueva. la separación de las cadenas por parte de las helicasas crea una tensión. es decir un segmento de cadena nueva (complementario al molde) con un grupo 3’-hidroxilo libre al que se puedan incorporar más nucleótidos. En E. enzimas que cortan una o las dos hebras del ADN. denominadas ADN polimerasa I. que (similar a la que se produce cuando se generará el cebador (“primer”) de ARN. Como veremos más adelante. enrollada). Esto se consigue generalmente mediante la acción de El esquema muestra el proceso de inicio de la replicación. de modo que donde hay una G se añade una C y donde hay una A se añade una T y viceversa.

la síntesis de la hebra conductora transcurre de manera continua al mismo ritmo que la horquilla de replicación. a partir del cual la ADN polimerasa III inicia la formación de la cadena complementaria de la hebra molde ( fragmento de Okazaki) en sentido contrario al avance de la horquilla de replicación. Terminación Finalmente. elongación y terminación.000 orígenes de replicación. Se sabe muy poco sobre esta fase. la síntesis del ARN y de las proteínas también proceden en etapas similares.000 a 300. . una ADN polimerasa de reparación (ADN polimerasa I) y finalmente la interrupción que queda entre dos fragmentos es sellada por una ADN ligasa. constituido por al menos siete proteínas diferentes.000 bp uno de otro. pero los rasgos esenciales de la replicación son los mismos que en las células procarióticas . La replicación del cromosoma de Escherichia coli tiene lugar en varias fases La síntesis de una molécula de ADN se puede dividir en tres fases: inicio. La velocidad de movimiento de la horquilla de replicación en los eucariotas es sólo una décima parte de la observada en Escherichia coli. aunque parece necesaria la acción de una topoisomerasa del tipo 2 para la separación final de dos moléculas completas de ADN circular. El inicio de la replicación debe estar regulado con precisión para que se produzca sólo una vez por cada ciclo celular. con lo que la replicación de un solo cromosoma humano tardaría unas 500 horas (21 días). Cuando el nuevo fragmento de Okazaki está completo se reemplaza el cebador de ARN por ADN. Sin embargo se ha detectado que la replicación en cromosomas humanos tiene lugar en forma bidireccional a partir de múltiples orígenes de replicación separados por unas 30. Como veremos más adelante. pero el mecanismo aún no se conoce con claridad. Una vez iniciada. El complejo multiproteico del primosoma viaja en el mismo sentido que la horquilla de replicación.BIOLOGÍA / Módulo 7 / Núcleo Celular 9 polimerasa I. En el inicio participan al menos 8 enzimas o proteínas diferentes. La síntesis de la cadena conductora empieza con la síntesis de un cebador de ARN corto (10 a 60 nucleótidos) por acción de la primasa en el origen de replicación. La síntesis de la hebra rezagada requiere de un conjunto proteico denominado primosoma. situación que es reparada por enzimas selladoras denominadas ADN ligasas. Inicio El inicio de la replicación en Escherichia coli está representado por un ordenamiento en tándem de tres secuencias de 13 pares de bases (bp) y cuatro secuencias separadas de 9 bp que funcionan como sitios de fijación de la proteína que inicia el proceso. pero a intervalos la primasa sintetiza un cebador corto de ARN de 10 a 60 residuos. A continuación se adicionan desoxirribonucleótidos al cebador por la acción de la ADN polimerasa III. acciones llevadas a cabo por tres enzimas adicionales: una nucleasa que elimina el cebador. En el genoma humano parece haber unos 10. Pero después de la eliminación del ARN y de su reemplazo por ADN quedan puntos en el ADN donde hay un enlace fosfodiéster roto. Elongación La fase de elongación consiste en dos operaciones muy similares en apariencia pero que son mecanísticamente muy diferentes: la síntesis de la cadena conductora y la síntesis de la cadena rezagada. las dos horquillas de replicación se encuentran en el otro lado del cromosoma circular de Escherichia coli. En levaduras se han identificado y estudiado orígenes de replicación denominados ARS (“autonomous replicating sequences”) de hasta 300 bp y que contienen varias secuencias conservadas que son esenciales para la función de inicio de la replicación. La replicación en las células eucariotas es más compleja Las moléculas de ADN de las células eucarióticas son considerablemente mayores que las de las bacterias y están además organizadas en estructuras nucleoproteicas complejas (cromatina).

106 bp.000 a 10. Las sustancias con capacidad mutagénica. Las mutaciones pueden ir desde el reemplazo de un par de bases por otro ( mutación por sustitución) a la adición o eliminación de uno o más pares de bases ( mutaciones de inserción o de deleción. sumando la eficiencia natural más la capacidad de corrección de pruebas. Es clásica la prueba de Ames. Aún así. esto significa que se comete un error cada 1. A veces sustancias no mutagénicas en la prueba directa sí lo son luego de ser incubadas con extractos de hígado. En Escherichia coli se comete un error solo cada 109 a 1010 nucleótidos. donde un cambio genético casi siempre constituye un trastorno en el afinado y extremadamente complejo sistema fisiológico y del desarrollo. especialmente en organismos multicelulares.7. Un mecanismo eficiente para corregir estos errores los posee la propia ADN polimerasa. todos los cambios genéticos resultan casi siempre perjudiciales. Las mutaciones favorables son raras. El ADN es una molécula relativamente estable. ya que la polimerasa chequea si los dos nucleótidos son los que corresponden y de no ser así no puede avanzar en la reacción de polimerización. A esta actividad adicional de la polimerasa se la denomina corrección de pruebas. debido a la reparación de ADN. La diferencia se logra a través de la actuación de distintas enzimas que reparan los pares de bases incorrectos que se han formado durante la replicación. una bacteria que ha perdido la capacidad de crecer en ausencia de un nutriente determinado no lo hace. El agregado de concentraciones variables de la sustancia en el ensayo de mutagenicidad determinará si ésta permite o no que la bacteria crezca como consecuencia de una mutación. son también mutagénicos 5 El genoma de una célula típica de mamífero acumula muchos millares de lesiones durante un lapso de 24 horas. análisis cuidadosos han demostrado que se inserta un nucleótido incorrecto por cada 10 4 a 105 nucleótidos correctamente incorporados. a menos que se produzca una mutación -en este caso retromutación.000 divisiones celulares. en un corto tiempo y desde la perspectiva de un organismo individual. simulando lo que ocurre en el organismo (donde los compuestos pueden ser modificados por las células hepáticas). revelando que ciertos compuestos sólo son mutagénicos luego de este tratamiento. son aquellas que estimulan la producción de mutaciones en el cultivo bacteriano.BIOLOGÍA / Módulo 7 / Núcleo Celular 10 REPARACIÓN DEL ADN La diversidad de los organismos vivientes y su éxito en colonizar casi cualquier parte de la superficie terrestre ha dependido de los cambios genéticos acumulados gradualmente durante millones de años. Sin embargo. La mayoría de los compuestos que se consideran carcinogénicos. Mutaciones Los cambios permanentes en la molécula del ADN se denominan mutaciones. El mantenimiento de la información contenida en el ADN es por lo tanto un imperativo celular. que le permite eliminar eficientemente un nucleótido mal apareado. la mayoría de las mutaciones son deletéreas para la célula. En los mamíferos existe una fuerte correlación entre la acumulación de mutaciones y el cáncer. es decir capacidad de readquirir una condición perdida. menos de una lesión de cada mil se transforma en una mutación. . Una célula sólo tiene uno o dos conjuntos de ADN genómico y mientras que las proteínas y las moléculas de ARN pueden ser reemplazadas rápidamente en caso de resultar dañadas utilizando información codificada en el ADN. es decir que son responsables de la producción de cáncer. estamos lejos de explicar la alta eficiencia de la reacción de polimerización que mencionamos al principio.por la cual readquiere la capacidad de crecer sin ese nutriente. pero sin sistemas de 5 Los ensayos de mutagenicidad se realizan midiendo la capacidad de producir mutaciones en bacterias: por ejemplo. Si la mutación afecta a ADN no esencial o si tiene un efecto insignificante en la función de un gen se denomina mutación silenciosa. permitiendo a los organismos adaptarse a las cambiantes condiciones ambientales y colonizar nuevos hábitats. donde se siembran células de Salmonella typhimurium (una enterobacteria) sin capacidad de crecer en un medio sin histidina porque carecen del gen que les permite biosintetizar este aminoácido. respectivamente). por lo que en cada célula se encuentra un complicado conjunto de sistemas de reparación del ADN. Las mutaciones pueden ser inducidas por agentes mutagénicos. o mutágenos. Las ADN polimerasas son muy precisas La replicación debe realizarse con un grado de fidelidad muy elevado. que pose una actividad exonucleasa 3’ → 5’. Dado que el cromosoma de E. es decir sustancias que estimulan la producción de mutaciones. Sin embargo. las propias moléculas de ADN son irremplazables. No obstante. coli tiene unos 4.

un sistema enzimático convierte la información genética de un segmento de ADN en una cadena de ARN con una secuencia de bases complementaria a una de las cadenas de ADN. Los dos procesos difieren en que la transcripción no requiere cebador. Durante la transcripción. La síntesis de ARN requiere de la presencia de enzimas específicas. que sólo afecta a segmentos cortos de ADN y que sólo una de las cadenas actúa como molde. Existen tres clases principales de ARN. coli transcurre a una velocidad de unos 50 nucleótidos por segundo. desenrollando el ADN por delante y enrollándolo por detrás. la ARN polimerasa de Escherichia coli mantiene generalmente unos 17 pares de bases desenrollados. la molécula de ADN se ha de desenrollar en una corta distancia formando una “burbuja” de transcripción. coli (y probablemente la de todos los procariotes) sintetiza todos los tipos de ARN. posee un grupo hidroxilo adicional en posición 2’. Los promotores han sido determinados en bacterias y están representados por dos zonas de secuencias cortas localizadas a unos 10 bp y 35 bp anteriores al sitio de inicio de la transcripción (por ello se denominan regiones “-10” y “-35”). en consecuencia. polaridad (dirección de la síntesis) y utilización de un molde. Además de ser una única cadena (no dos cadenas complementarias como en el ADN) el ARN difiere del ADN en que contiene ribosa (en lugar de 2-desoxirribosa como en el ADN) y. denominadas ARN polimerasas. La cadena que sirve de molde se denomina cadena molde. Para permitir que la ARN polimerasa sintetice una cadena de ARN complementaria a una de las dos hebras de ADN. El ARN de transferencia (ARNt) es un adaptador que lee la información codificada en el ARNm y transfiere el aminoácido adecuado a la cadena polipeptídica en crecimiento durante la síntesis proteica. Las moléculas de ARN ribosómico (ARNr) se asocian con proteínas. Como se ha adelantado.BIOLOGÍA / Módulo 7 / Núcleo Celular 11 reparación el efecto acumulativo de muchas mutaciones poco frecuentes pero dañinas haría que la vida fuese imposible. La transcripción en E. Además de éstos. la ARN polimerasa no requiere un cebador. Se trata de una enzima compleja y grande formada por 6 subunidades (5 forman el núcleo y una sexta sólo actúa al comienzo) que carece de actividad correctora de pruebas y por lo tanto su eficiencia es menor que la que exhibe la ADN polimerasa (se produce un error cada 104 a 105 nucleótidos) pero la trascendencia no es tan seria porque existen muchas copias del ARN y porque finalmente estas moléculas son degradadas más o menos pronto. todas las moléculas de ARN se forman a partir de información contenida permanentemente en el ADN. Con la excepción de los genomas de ARN de ciertos virus. el ribosoma. formando la intrincada maquinaria para la síntesis de proteínas. La ARN polimerasa de E. pero el inicio de la síntesis de ARN sólo tiene lugar a partir de una zona definida por la presencia de secuencias específicas llamadas promotores. SÍNTESIS DE ARN DEPENDIENTE DE ADN (TRANSCRIPCIÓN) En la expresión de la información genética contenida en un segmento de ADN siempre se genera una molécula de ARN. En el proceso denominado transcripción. y además la base pirimídica timina (5metil uracilo) es reemplazada por uracilo. La transcripción es muy similar a la replicación en términos de mecanismo químico (necesidad de una polimerasa que realice la unión de nucleótidos). El ARN mensajero (ARNm) es portador de las secuencias que codifican la secuencia de aminoácidos de uno o más polipéptidos especificados por un gen o un conjunto de genes en los cromosomas. existen muchos ARN especializados con funciones reguladoras o catalíticas. La ARN polimerasa se une al promotor en dos pasos: primero la enzima completa (con sus seis subunidades) se fija al ADN y migra a la región -35 formando el “complejo . que veremos más adelante.

típicamente. en tanto que los segmentos codificantes reciben la denominación de exones. ya que muchos intrones experimentan fenómenos de autocorte y empalme (“autosplicing”). que se encuentra en algunos ARNt. Ambos grupos comparten la propiedad de que no necesitan ATP para el proceso de corte y empalme.85S y 28S (que vimos al estudiar la función del nucleolo).000 nucleótidos). las secuencias que codifican el polipéptido normalmente no son contiguas. La cuarta clase de intrones. Una vez formados unos cuantos enlaces fosfodiéster se disocia la subunidad σ. II y III. La ARN polimerasa I (Pol I) es responsable de la síntesis de un sólo tipo de ARN. Existen cuatro clases de intrones. designadas Polimerasas I. La ARN polimerasa II (Pol II) tiene la función central de sintetizar ARNm así como algún ARN de función especial. En las células eucarióticas se han aislado tres tipos de polimerasas . En los ARNm eucarióticos la mayoría de exones tienen menos de 1. un transcripto prerribosómico que contiene el precursor de los ARNr 18S. 2 subunidades α. secuencias que corresponden a un gen. el Grupo III. que es llevado a cabo por un endonucleasa con un mecanismo de acción semejante al de las ligasas 6 .000 nucleótidos. mitocondriales y de cloroplastos que codifican ARNt. en la mayoría de casos la secuencia codificante está interrumpida por trechos no codificantes llamados intrones. Una de las pocas excepciones de genes sin intrones corresponde a las histonas. El tercero y más numeroso grupo de intrones. dejando que la polimerasa núcleo (las otras 5 subunidades. una cadena polipeptídica está codificada generalmente en una secuencia de ADN que es colineal con la secuencia de aminoácidos. por el contrario. en tanto que los del Grupo II se encuentran en genes mitocondriales y de cloroplastos que codifican ARNm. 2 subunidades β y una subunidad ω) complete la síntesis de la molécula de ARN. pero no se sabe si es realmente necesario en la reacción de corte y empalme. que contiene de 20 a 250 residuos adenilato. La sexta subunidad ( σ) es necesaria sólo para asegurar el reconocimiento específico del promotor por la ARN polimerasa. Esta capacidad catalítica del ARN (“ ribozimas”) ha conducido a uno de los descubrimientos más excitantes de la bioquímica y ha obligado a modificar el concepto de que todas las enzimas son proteínas. encontrado en los transcritos primarios de ARNm nuclear. La ARN polimerasa III (Pol III) produce ARNt. Los intentos de aislamiento de los enzimas que catalizan el corte y empalme de los intrones de los grupos I y II produjeron una enorme sorpresa. Los intrones del Grupo I se encuentran en genes nucleares. por un proceso de corte y empalme. en lugar de ello. cada una con una función específica. La síntesis de ARN transcurre hasta que la ARN polimerasas se encuentra con una secuencia que provoca su separación de la cadena molde. experimentan corte y empalme similar al que exhiben los del Grupo II. el ARNr 5S y algunos ARN pequeños especializados. Un transcripto primario contiene. En el proceso interviene el ATP. no interviniendo enzimas proteicos. con lo que queda al descubierto la hebra molde en el sitio de iniciación. Los ARNm eucarióticos también se modifican en ambos extremos: se añade una estructura denominada casquete en el extremo 5’ (una molécula de trifosfato de 7-metilguanosina) y un polímero de adenina.BIOLOGÍA / Módulo 7 / Núcleo Celular 12 cerrado” y luego se desenrolla el ADN en unos 17 pares de bases empezando en la región -10. proteínas que acompañan a los ácidos nucleicos en la estructura cromatínica. pero el corte y empalme es responsabilidad de complejos ARN-proteínas denominados ARN nucleares pequeños (ARNsn. Maduración del ARN Una molécula de ARN recién sintetizada se denomina transcripto primario. Los intrones6 se cortan del transcripto primario. En los eucariotes. con un valor promedio de 100 a 200 nucleótidos. En las bacterias. se distingue de los grupos I y II porque requiere ATP para el proceso de corte y empalme. pero los intrones presentan una variación de tamaño mayor (50 a 20. small nuclear RNA). 5. poli(A) en el extremo 3’. se eliminan y los exones remanentes se empalman dando el ARN maduro funcional.

que es característico de los ARNt. la infección incluye dentro de la célula huésped tanto el genoma vírico (ARN viral) como la enzima (transcriptasa inversa). Por otra parte. tanto de bacterias como de células eucarióticas. normalmente de la forma TxGy en una hebra y AxCy en la hebra complementaria. Esta parte de ARN actúa como molde para la síntesis de la hebra T xGy del telómero.000 nucleótidos añadidos. la transcriptasa inversa cataliza (1) la síntesis de una nueva hebra de ADN a expensas de ARN. en donde x e y pueden ser de uno a cuatro. responsable del SIDA. lo que puede ser un factor importante en la aparición frecuente de nuevas cepas de virus patógenos 7. Con respecto a los ARNt. 8 La pérdida de la actividad telomerasa en los protozoos da lugar a un acortamiento gradual de los telómeros con cada división celular. SÍNTESIS DE ARN Y ADN DEPENDIENTES DE ARN Ciertos virus constituidos por ARN contienen dentro de la partícula vírica una ADN polimerasa de características únicas. La telomerasa. la mayoría de las células tienen alrededor de 40 a 50 ARNt diferentes. La telomerasa es un complejo de ARN y proteína. En el hombre se ha observado una relación entre longitud telomérica y edad. los ARN ribosómicos. ARNt o ARNr. Como hemos visto al estudiar la función del nucleolo. Entre sus genes figura el gen env. está ausente en la secuencia de algunos precursores bacterianos y en todos lo eucarióticos. Los telómeros consisten generalmente de muchas copias en tándem de una secuencia oligonucleotídica corta. El ARNr de 5S se forma como un transcripto separado. procedimiento que constituye la base de la ingeniería genética. desaminación o reducción. lo que lleva a la muerte de la línea celular. se forman a partir de precursores más largos denominados ARN prerribosómicos. 7 . Ocasionalmente se encuentran dos o más ARNt diferentes sobre un único transcripto primario. la transcriptasa reversa del virus HIV es unas diez veces menos precisa que otras. Las transcriptasas inversas. en tanto que en los eucariotes se modifica un ARN prerribosómico de 45S en el nucleolo para dar ARNr de 18S. En estos casos. Dentro de la célula. Las transcriptasas inversas se han convertido en reactivos importantes en el estudio de las relaciones ARN-ADN y en el clonado de ADN. En efecto. Los precursores de ARNt pueden experimentar otros dos tipos de modificación post-transcripcional.BIOLOGÍA / Módulo 7 / Núcleo Celular 13 Los transcriptos primarios de los ARNt también se modifican mediante eliminación de secuencias de cada extremo y por eliminación de intrones. carecen de actividad correctora de pruebas y en consecuencia cometen un error cada 20. Permiten las síntesis de un ADN complementario (ADNc) a partir de cualquier molde de ARN. debiendo ser incorporado posteriormente por una enzima específica. la enzima responsable de incorporar las secuencias finales en los extremos (telómeros) de los cromosomas tiene características similares a la transcriptasa inversa. en el ARNt hay a menudo muchas bases (púricas o pirimídicas) modificadas. la telomerasa es una transcriptasa inversa que sólo sintetiza un segmento de ADN complementario sobre la base de un molde de ARN interno8 El virus de la inmunodeficiencia humana (HIV). el trinucléotido 3’-terminal CCA(3’). ya que es dirigida por el ARN: se trata de la transcriptasa inversa (o transcriptasa reversa). 23S y 5S surgen de un único precursor 30S. que muta a una velocidad muy rápida. sea ARNm. lo que perjudica la tarea de confeccionar una vacuna efectiva. en la que el ARN contiene la copia de la secuencia AxCy adecuada. Primero. Es probable que ambas modificaciones ayuden a proteger al ARNm de la destrucción enzimática que llevan a cabo las ribonucleasas La modificación post-transcripcional no se limita al ARNm. por lo que es responsable de la elevada tasa de mutación producida por este virus. al igual que las ARN polimerasas. así llamada porque forma copias nuevas de ADN a expensas de un molde de ARN. en una reacción de sentido opuesto al que realizan las ARN polimerasas que hemos visto al considerar el metabolismo del ARN. es un retrovirus. (2) degrada la hebra molde de ARN original y (3) replica la hebra de ADN recientemente formada. El tipo final de maduración del ARNt es la modificación de algunas bases por metilación. Los virus ARN que contienen transcriptasa inversa también se conocen como retrovirus y constituyen la prueba molecular de que la información genética puede a veces fluir hacia atrás (desde el ARN hacia el ADN). El ADN dúplex así formado se incorpora luego al genoma de la célula huésped. En las bacterias los ARNr 16S. 28S y 5. Los primeros fármacos disponibles para el ataque de la enfermedad están basados en la inhibición de la acción de esta enzima.8S.

careciendo de actividad correctora de pruebas. J.BIOLOGÍA / Módulo 7 / Núcleo Celular 14 El último aspecto que debemos considerar está relacionado con la replicación de los ARN víricos. 2ª edición.L. estructura y ultraestructura de los ribosomas? ¿En qué compartimento celular se sintetizan? 16) ¿Cuáles son los posibles resultados de un error en la replicación o en la transcripción del ADN? planteando una intrigante cuestión: ¿es este acortamiento gradual de los telómeros la clave del envejecimiento? ¿viene determinada la longitud natural de nuestra vida por la longitud de los telómeros con que nacemos? . Nelson y M. E. 6) ¿Dónde se sintetizan y cómo se ensamblan las proteínas histónicas a las moléculas de ADN recién replicadas? 7) ¿Qué es el nucleolo.L. La síntesis también sigue la dirección 5’ →3’. Martin & C. Lodish. 2002. S. K. Lehninger. b) desoxirribonucleótidos. y cuál será su localización predominante en la célula: a) histonas. Marbán Libros. G.L. Editorial Médica Panamericana.. c) proteínas ribosomales. Solomon. ARNt y el ARNr? ¿Cuál es su función en la síntesis de proteínas?. también llamada ARN replicasa. Darnell.. Zipursky.P. A. D. Bibliografía Alberts. Roberts y P. 3) Dadas las siguientes moléculas. L. B. An Introduction to the Molecular Biology of the Cell”. d) ARNt. Raff. P.M. Interamericana McGraw-Hill. México. España. Es simultánea y se realiza únicamente en sentido 5’→ 3’ 11)¿En qué se diferencian el ARNm. New York & London Cooper. 2a edición (traducido de la segunda edición inglesa. Matsudaira.M. siendo su frecuencia de errores similar a la de la ARN polimerasa. La síntesis de las dos nuevas cadenas de una molécula de ADN: a. Berk. 12) ¿Qué son las mutaciones y cuál es su trascendencia? 13) El ARN se transcribe a partir de una de las dos cadenas (hebras) del ADN dúplex. Es simultánea y se realiza en cualquier sentido (5’→ 3’ o 3’→ 5’) d. En estos casos la replicación del ARN del virus se produce por la acción de una ARN polimerasa dirigida por ARN. Ediciones Omega. Berg. que tienen genomas de ARN. Walter (1998) “Essential Cell Biology. No es simultánea pero se realiza únicamente en sentido 5’→ 3’ c. Baltimore & J. D. Cox (1993) “Principios de Bioquímica”. en qué dirección. Lewis. D.L. Inc. Villee (1996) 3ra. Biología Celular y Molecular. Johnson.W.. A.. 2002. Explique por qué es semiconservativa y por qué se dice que este proceso es semidiscontinuo 9) Mencione las principales diferencias entre la replicación en células procarióticas y eucarióticas 10) Seleccione la respuesta correcta.. R. Bray. CUESTIONARIO TEÓRICO 1) ¿Cuál es la estructura de la envoltura nuclear? ¿Qué son los poros nucleares y cómo funcionan? 2) ¿Existe algún tipo de selectividad en el pasaje de sustancias hacia o desde el núcleo? Relacione la permeabilidad de la envoltura nuclear con su ultraestructura. e) ARNm 4) ¿Cuál es la función de la lámina nuclear en el proceso de división celular? 5) ¿Cómo se denomina la unidad fundamental de empaquetamiento del ADN y cuál es su composición en cuanto a tipo y cantidad de proteínas? ¿Cuál es la característica principal que hace que dichas proteínas se unan al ADN?. S. Edición (traducido de la tercera edición inglesa. indique cuáles atravesarán la envoltura nuclear. como los que corresponden a los bacteriófagos de Escherichia coli. Garland Publishing. H. M. D. La Célula. dónde se ubica y cuál es su función? 8) Describa los mecanismos de la replicación del ADN.. Barcelona. 1993). No es simultánea y se realiza en cualquier sentido (5’→ 3’ o 3’→ 5’) b. ¿Es indistinto que lo haga a partir de una o de otra? 14) ¿Qué son los intrones y los exones? ¿Qué modificaciones sufre el ARNm luego de transcribirse en células eucariotas y procariotas? 15) ¿Cuál es la composición. A.

Corte histológico de hígado de rata. 1.Tomar un trozo de timo de aproximadamente 20 g y cortarlo con tijera en trozos lo más pequeño posibles. Observación de hepatocitos binucleados. ubicación. I. Triturar el material hasta que quede una suspensión homogénea y semilíquida. TRABAJO EXPERIMENTAL Objetivos: • Observar diferentes tipos celulares con distinto número. 4. ¿Qué diferencias se observan en los núcleos de ambos tipos celulares? ¿A qué se deben estas diferencias? II. • Obtención de hebras de ADN (constituidas por la agrupación de un gran número de moléculas ) poniendo en evidencia su estructura fibrilar. 4.Filtrar el homogenado a través de gasa para eliminar los restos groseros. tamaño y morfología nuclear. Observación de núcleos interfásicos en diferentes tipos celulares Describir y esquematizar células con diferente número. Colocar los trozos en un mortero. tamaño y morfología nuclear.BIOLOGÍA / Módulo 7 / Núcleo Celular 15 Módulo 7. Secar al calor suave. Lavar con agua.Corte histológico de músculo esquelético Observación de células plurinucleares 3. Cubrir el extendido con una solución de cristal violeta al 1% durante 1 minuto.Centrifugar el homogenado repartido en dos tubos plásticos a 3000 rpm durante 10 minutos para sedimentar los núcleos. Región de elongación celular (sector del preparado alejado del meristema) ¿Cómo identifica las células en interfase? Describa la estructura de los núcleos en interfase. 3.En cada tubo. 5. Meristema radical (extremo subterminal de la raíz) 2. El agregado de la . 2. 2. añadir un poco de arena lavada y 30 ml de solución hipotónica de citrato de sodio 0.Tomar una muestra del sedimento y extenderla sobre un portaobjetos. secar y observar al microscopio.Apice radical Observar e identificar células en interfase en dos sectores diferentes de un corte longitudinal del extremo en crecimiento de una raíz (ápice radical): 1.Frotis de sangre humana Observar e identificar diferentes tipos celulares de acuerdo a la presencia o ausencia de núcleo y a la morfología nuclear. agregar 10 ml de NaCl 2M y 4 ml de SDS (dodecil sulfato de sodio) al 10%.1 M. Con pipeta Pasteur extraer y desechar el sobrenadante. Resuspender suavemente por agitación e incubar durante 5 minutos con agitación ocasional. 1. Aislamiento y observación de núcleos interfásicos a partir de timo y obtención de hebras de ADN. • Aplicar y discutir los fundamentos de la metodología para el aislamiento de núcleos a partir de muestras biológicas y tinción de las estructuras nucleares.

8. 7. 6. Con el agregado del etanol el ADN precipita. Dejar reposar 2 a 3 minutos. fundamentalmnte ARN.BIOLOGÍA / Módulo 7 / Núcleo Celular 16 solución de NaCl y del detergente (SDS) provoca la ruptura de las envolturas nucleares y además contribuye a la separación de las proteínas que se encuentran unidas al ADN. Para obtener una preparación más pura es necesario añadir enzimas (ribonucleasas) que degradan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN. Pasar los sobrenadantes a un vaso de precipitado chico teniendo la precaución de no producir espuma. .Centrifugar 10 minutos a 3000 rpm para eliminar los restos insolubles. pudiéndose observar la formación en la interfase de unos filamentos blanquecinos que son un agrupamiento de un gran número de moléculas de ADN.Añadir lentamente. de manera que se formen dos capas.Introducir con cuidado una varilla de vidrio perpendicularmente al fondo del vaso y hacerla rotar suavemente en una misma dirección. 20 ml de etanol 96º frío. resbalando por las paredes del vaso. hay otras moléculas. entremezclado con él. El producto filamentoso obtenido durante la extracción no es ADN puro ya que. Estos agrupamientos se van enganchando y enrollando a la varilla.