Guía de Estudio para el Examen Final del Laboratorio de Análisis Instrumental 

  Preparó: Prof. Jorge Castillo 22/Abril/2012 

  Espectroscopia de Absorción Atómica (AA1 y AA2)    Al término del laboratorio de análisis Instrumental Ud. debe ser capaz de:    1. Explicar el proceso de absorción a nivel atómico y expresarlo mediante un diagrama de energía.  2. Explicar el proceso por el cual se genera la señal de absorción en un instrumento de absorción  atómica.  3. Explicar los aspectos cualitativos y cuantitativos de la técnica de absorción atómica.  4. Indicar las partes esenciales de un instrumento de absorción atómica y la función (importancia)  de cada una de ellas.  5. Dibujar un diagrama de bloques del instrumento empleado en el laboratorio que incluya todas  sus partes esenciales, en orden.  6. Definir y explicar como se determinan los siguientes términos:    (a).   Límite de detección (LOD)  (b).   Límite de cuantificación (LOQ)  (c).   Límite de linealidad (LOL)  (d).   Sensitividad  (e).   Rango de trabajo    7. Identificar  (localizar) los términos anteriores en una curva de calibración.  8. Explicar claramente las ventajas de emplear las condiciones de análisis que reportan una mayor  sensitividad.  9. Indicar las ventajas y desventajas del análisis por curva de calibración con estándar externo  (sobre adición de estándar y estándar interno).  10. Indicar y dar ejemplos de posibles fuentes de error que pudieran afectar su determinación.      Espectroscopia de Emisión Atómica (EA)    Al término del laboratorio de análisis Instrumental Ud. debe ser capaz de:    1. Explicar el proceso de emisión a nivel atómico y expresarlo mediante un diagrama de energía.  2. Explicar el proceso por el cual se genera la señal de emisión en un instrumento de emisión  atómica.  3. Indicar las partes esenciales de un instrumento de emisión atómica y la función (importancia) de  cada una de ellas.  4. Explicar los aspectos cualitativos y cuantitativos de la técnica de emisión atómica.  5. Explicar el funcionamiento del atomizador de flujo laminar, indicar sus partes mediante un  diagrama, e indicar sus ventajas.  6. Dibujar un diagrama de bloques del instrumento que incluya todas sus partes esenciales  en  orden.  7. Explicar el efecto que tiene la adición de ácido fosfórico sobre la determinación de calcio e  indicar formas para expresar el cambio observado.  8. Indicar y dar ejemplos de posibles fuentes de error que pudieran afectar su determinación. (ej.  autoabsorción).  9. Indicar las ventajas que tienen las regresiones no‐lineales  
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Espectroscopia del Ultravioleta (UV)    Al término del laboratorio de análisis Instrumental Ud. debe ser capaz de:    1. Explicar el proceso de absorción a nivel molecular y expresarlo mediante un diagrama de  energía.  2. Explicar el proceso por el cual se genera la señal de absorción molecular en un instrumento de  absorción ultravioleta/visible.  3. Explicar los aspectos cualitativos y cuantitativos de la técnica de absorción UV/Vis.  4. Indicar las partes esenciales de un instrumento de absorción UV/Vis y la función (importancia)  de cada una de ellas.  5. Dibujar un diagrama de bloques del instrumento que incluya todas sus partes esenciales  en  orden.  6. Definir la propiedad aditiva de la ley de Beer y aplicarla al análisis de mezclas  (multicomponentes) por espectroscopia UV/Vis.  7. Identificar las ventajas y desventajas del análisis de mezclas (multicomponetes).  8. Indicar y dar ejemplos de posibles fuentes de error que pudieran afectar su determinación.      Cromatografía Líquida de Alta Presión (LC1 y LC2)    Al término del laboratorio de análisis Instrumental Ud. debe ser capaz de:    1. Explicar el principio de la cromatografía de líquidos en columna.  2. Explicar los aspectos cualitativos y cuantitativos de la cromatografía de líquidos.  3. Explicar en qué consiste la cromatografía de partición y dar ejemplos de la misma.  4. Explicar en qué consiste la cromatografía con gradiente e isocrática, poder diferenciar entre  ellas, indicar sus ventajas y desventajas y dar ejemplos de cada una.  5. Explicar porque se deben de desgasificar y filtrar las fases móviles (indicar y dar ejemplos de los  errores a incurrir de no hacerlo) y dar ejemplos de las formas más comunes de desgasificar.  6. Explicar el efecto que tiene el cambio en composición de la fase móvil (LC2) sobre la separación  cromatográfica.  7. Indicar las partes esenciales de un instrumento de cromatografía de líquidos y la función  (importancia) de cada una de ellas.  8. Dibujar un diagrama de bloques de los instrumentos empleados en el laboratorio que incluya  todas sus partes esenciales, en orden.  9. Explicar claramente el funcionamiento del detector empleado en los instrumentos del  laboratorio (UV/Vis) y poder describir el funcionamiento básico de otros detectores empleados  comúnmente en HPLC (fluorescencia e índice de refracción).  10. Explicar claramente el funcionamiento del inyector (manual) de un HPLC.  11. Definir y explicar los siguientes términos:    (a).   Cromatografía de fase Inversa   (b).  Cromatografía de fase Normal  (b).   ODS (C18)  (c).   Resolución cromatográfica    12. Explique el efecto que ocurriría en un cromatograma al variar (aumentar o disminuir):    (a).   Flujo de fase móvil  (b).   La polaridad de la fase móvil 
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(c).   La polaridad de la fase estacionaria  (d).   Volumen de inyección  (e).   Cambiar la longitud de onda del análisis    13. Indicar las ventajas y desventajas del análisis por curva de calibración con adición de estándar  (sobre estándar externo y estándar interno).  14. Indicar las ventajas y desventajas del análisis por curva de calibración con estándar externo de  un solo paso sobre la curva de calibración de varios pasos    15. Indicar y dar ejemplos de posibles fuentes de error que pudieran afectar su determinación (LC1  y LC2).      Cromatografía de Gases (GC1 y GC2)    Al término del laboratorio de análisis Instrumental Ud. debe ser capaz de:    1. Explicar el principio de la cromatografía de gases.  2. Explicar los aspectos cualitativos y cuantitativos de la cromatografía de gases.  3. Explicar en qué consiste una columna capilar (FSOT), indicar sus partes esenciales  y dar  ejemplos.  4. Explicar en qué consisten la cromatografía isotermal y con temperatura programada, poder  diferenciar entre ellas, indicar sus ventajas y desventajas y dar ejemplos de cada una.  5. Explique en que consiste el problema general de la elusión  6. Explicar la importancia de las gráficas de Van Deempter.  7. Indicar las partes esenciales de un instrumento de cromatografía de gases y la función  (importancia) de cada una de ellas.  8. Dibujar un diagrama de bloques del instrumento empleado que incluya todas sus partes  esenciales, en orden.  9. Explicar claramente el funcionamiento del detector empleado en los instrumentos del  laboratorio (FID) .  10. Explicar claramente el funcionamiento del inyector empleado para columnas capilares en modo  split.  11. Definir los siguientes términos:    (a).   Tiempo de retención (tR)  (b).   Tiempo muerto (tm)  (c).   Tiempo de retención relativo (t’R)  (d).   Velocidad lineal (µ)  (e).   Numero de platos teóricos (N)  (f).    Altura de plato teórico (H)  (g).   Resolución Cromatográfica (R)  (h).   Factor de Respuesta    12. Explique el efecto que ocurriría en un cromatograma al variar (aumentar o disminuir):    (a).   Volumen de inyección  (b).   Temperatura (empleando condiciones isotermales)  (c).   La velocidad de calentamiento (empleando condiciones de temperatura programada)  (d).   Flujo de fase móvil  (e).   Split rate   
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13. Explicar en que consisten los factores de respuesta y que información aportan al análisis (GC2)  14. Indicar las ventajas y desventajas del análisis por curva de calibración con estándar interno  (sobre estándar externo y adición de estándar).   15. Explicar que es un estándar interno, cual es su utilidad y que requisitos debe cumplir una  sustancia para ser considerada para ser estándar interno.  16. Indicar y dar ejemplos de posibles fuentes de error que pudieran afectar su determinación (GC1  y GC2).      Cromatografía de Gases (GCMS)    Al término del laboratorio de análisis Instrumental Ud. debe ser capaz de:    1. Explicar los aspectos cualitativos y cuantitativos de la cromatografía de gases acoplada a un  espectrómetro de masas (GCMS).  2. Explicar brevemente como se genera la señal (como trabaja) en el cromatografo de gases   acoplado a un espectrómetro de masas y dibujar un diagrama del mismo.  3. Definir los siguientes términos:    (a).   Pico base  (b).   Ion Molecular   (c).   TIC  (d).  Abundancia total    4. Explicar la utilidad e importancia del Perfluorotributilamina (PFTBA)   5. Indicar las partes esenciales de un espectrómetro de masas mediante un diagrama de bloques y  explicar claramente la función (importancia) de cada una de ellas:    (a).   Inlet (de columnas capilares)  (b).   Fuente de iones (EI)  (c).   Analizador de Masas (Trampa de iones)  (d).   Detector de Masa (Multiplicador electrónico)  (e).  Sistema de Vacio (Utilidad e importancia únicamente)    6. Explicar como es que el instrumento produce el espectro de masas.  7. Explicar como es que el instrumento utiliza los espectros de masas generados para obtener el  cromatograma (TIC).  8. Explicar como es que se puede extraer del cromatograma (TIC) el espectro de masas de cada  pico (en base a la forma de almacenaje de los datos).    Espectroscopia del Infrarrojo (FTIR)    Al término del laboratorio de análisis Instrumental Ud. debe ser capaz de:    1. Explicar el proceso de absorción de la radiación infrarroja por moléculas y expresarlo mediante  un diagrama de energía.  2. Explicar los aspectos cualitativos y cuantitativos de la espectroscopia del infrarrojo.  3. Explicar el funcionamiento básico de un Interferometro de Michelson, (dibujar un diagrama de  las partes de que consta).  4. Explicar el proceso por el cual se genera la señal de absorción en un instrumento de infrarrojo. 
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5. Dibujar un diagrama de bloques del instrumento empleado en el laboratorio que incluya todas  sus partes esenciales, en orden.  6. Explicar el funcionamiento del aditamento de ATR y Dibujar un diagrama del mismo con sus  partes.  7. Indicar las ventajas y desventajas del análisis por estándar interno  sobre los análisis hechos con  estándar externo  y adición de estándar.   8. Indicar y dar ejemplos de posibles fuentes de error que pudieran afectar su determinación.    Polarografia de Pulso Diferencial (DPP1 y DPP2)    Al término del laboratorio de análisis Instrumental Ud. debe ser capaz de:    1. Explicar el principio de las técnicas voltamétricas.   2. Explicar en que consisten las técnicas polarograficas.  3. Explicar en qué consisten y las diferencias entre: polarografia DC, LSV y pulso diferencial  4. Explicar los aspectos cualitativos y cuantitativos de las técnicas polarograficas (DPP)  5. Indicar en un diagrama las siguientes partes esenciales de una celda electroquímica:     (a).  Celda  (b).  Electrolito soporte   (c).   Electrodo de Referencia (Ag/AgCl sat.)  (d).   Electrodo de trabajo (Hg)  (e).   Electrodo auxiliar (Pt)  (f).    Entrada y salida de gas inerte (N2)    6.  Explicar la función (importancia) de cada uno de los componentes de la celda electroquímica.  7. Definir los siguientes términos:    (a).  Oxidación  (b).  Reducción  (c).  Potencial de media celda (E½)  (d).  Potencial Estándar (Eo) de oxidación o reducción  (e).   Corriente de difusión (id)  8. Indicar las ventajas y desventajas del análisis por curva de calibración con adición de estándar  (sobre  estándar interno y estándar externo)  9. Indicar las ventajas y desventajas del análisis por curva de calibración con estándar externo  (sobre adición de estándar y estándar interno)  10. Indicar y dar ejemplos de posibles fuentes de error que pudieran afectar su determinación  (DPP1 y DPP2).    Problemas:    Prepárese para la posibilidad de resolver problemas numéricos del siguiente tipo:    1. Curva de calibración con estándar externo  (a). Un solo paso (un estándar y un desconocido ej. LC2)  (b). Varios Pasos (dos estándares y un desconocido) (ej. AA2, EA, DPP2)    2. Curva de calibración con adición de estándar (ej. DPP2, LC1)    3. Curva de calibración con estándar interno (ej. GC2 y FTIR) 
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  4. Análisis de Mezclas (dos componentes, ej. UV)    5. Determinación de algunos parámetros cromatográficos:   (a).  Tiempo de retención relativo (T’R)  (b).  Velocidad lineal (ߤ)  (c).  Número de platos teóricos (N)  (d).  Altura de un plato teórico (H)  (e).  Resolución Cromatográfica (R)  (f).   Factor de Respuesta    6. Determinación del potencial estándar de reducción y/o oxidación de una especie, empleando un  electrodo de referencia de Ag/AgCl saturado a 25 °C (DPP1,DPP2)    7. Problemas que involucren el empleo de:  %DV, Serving Size, Daily Values (ej. AA2, DPP1, EA)    (a).   Determinar la cantidad de muestra necesaria para preparar una solución con cierta  concentración de analito, empleando los datos de la etiqueta del producto y conociendo la  cantidad diaria recomendada del analito por la FDA.    (b).   Determinar el %DV que debería aparecer en la etiqueta de un producto sabiendo: La  cantidad de muestra empleada para preparar una solución, la concentración de analito en la  solución, la cantidad diaria recomendada del analito(FDA)    8. Determinaciones de LOD y LOQ para un análisis químico. (ej. AA1)      Preguntas Adicionales:    1. En LC2 se varían las composición de la fase móvil (% de Acetonitrilo/Agua), pero la cantidad de ácido  acético permanece siempre igual (aprox. 5%) en todos los análisis. ¿por qué se adiciona el ácido  acético a la fase móvil?    2. En el estándar que preparó en LC2 empleo igual concentración de salicilamida/acetaminofén y  cafeína/ácido acetilsalicílico. Luego de inyectarles debió observar que las áreas de los picos de cada  par son muy diferentes entre sí a pesar de tener la misma concentración. Porque razón ocurre esto,  justifique.    3. Explique claramente  como se genera la señal en: ___(cualquier instrumento empleado)___  incluya  un diagrama de bloques del instrumento con las partes más importantes, en orden.    4. Al analizar los compuestos A y B en un cromatógrafo de gases se encuentro que los factores de  respuesta de A= 1.0 y el de B=2.0. Si se inyecta una solución 50% p/p de ambos componentes en el  mismo cromatógrafo y se reporta un área de 500u2 para A determine:    (a). ¿Con cuál de los dos compuestos será más sensitivo el instrumento? Justifique.  (b). ¿Cuál sería el área del compuesto B en la mezcla?       
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5. _____ Es la fórmula con la que se determina la altura de un plato teórico:    b).  = t’R / tM  c).  = Lc / N   a).  = 16 (tR/Wb)2    e).  = tR ‐ tM  d).  = t’R(2) / t’R(1)     6. _____ Los estándares de alcoholes en GC2 se separaron en función a su:    a).   Peso molecular    b).  Afinidad por la fase estacionaria  c).  Afinidad por la fase móvil  d).  Punto de ebullición  e).  Opciones b y c    7. ¿Por qué razón se burbujea nitrógeno en las soluciones de DPP1 y DPP2? ¿Que ocurriría si no se  efectúa un buen purgado?    8. ¿Que es un voltamograma?¿Que es un Polarograma? ¿Que datos obtenemos en ambos y cual de  ellos es el parámetro cualitativo y cual el cuantitativo?    9. ¿Cuál es la razón de emplear ácido clorhídrico 6N en el experimento de AA2?   10. ¿Cuál es la función de la solución buffer de acetatos en la determinación de vitamina C en jugos por  voltametria/polarografía?(DPP2)    11. ¿Por qué se debe de desgasificar las fases móviles a emplear en HPLC?¿Que errores pueden ocurrir  de no hacerlo?    12. Explique claramente porque es mejor emplear la condición de mayor sensitividad en la  determinación de hierro en AA2. Justifique su respuesta.    13. ¿Porque es tan importante la obtención de curvas del tipo de Van Deempter en cromatografía?    14. ¿Cómo es que la curva de calibración empleando estándar interno elimina los errores de inyección  en GC2? Explique claramente.  En las siguientes preguntas (15‐19); coloque en  el  espacio  provisto  la  letra  del  cromatograma  que  muestre  el  efecto  observado  al  variar  la  condición  indicada  sobre  la  separación  inicial  (REF)  (solo  puede  emplear  una  vez  cada  letra  y  considere  que  se  trate  de  separaciones  isotermales)    15. _____Cambiar de tipo de fase estacionaria    16. _____ Aumentar la temperatura del horno    17. _____Aumentar el Split del inyector    18. _____Disminuye la temperatura del Horno    19. _____Diferente persona inyecto   
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20. ¿Qué diferencias existen entre una separación isotérmica y una programada? ¿Cuáles son las  ventajas y desventajas de ellas?  21. ¿Cuáles son las ventajas/desventajas del método de adición de estándar sobre el método de  estándar externo?  22. Es la función de la solución de KCl en la celda electroquímica (DPP1)  23. Explique cómo funciona el inyector  de HPLC, dibuje un diagrama del mismo  24. ______________________________________  Es la ecuación de Van Deemter  25. ______________________________________ Es el electrodo de referencia empleado en DPP  26. ______________________________________ Es la ecuación de Resolución Cromatografía  27. ______________________________________ Es el tipo de filtro de masas empleado en GCMS  28. ______________________________________ Es el tipo de fuente de iones empleado en GCMS  29. ______________________________________ Es el compuesto empleado para calibrar el MS  30. ______________________________________  Son dos detectores (además de UV/Vis y MS)          empleados en LC  31. _______________________________________ Es la ecuación con la que se determina el potencial           estándar de ox/red.    32. _______________________________________ Es el parámetro que nos permite separar los           componentes de la mezcla de analgésicos en LC1             (primera parte)    33. _______________________________________  Es el parámetro  cualitativo en los análisis            Voltamétricos/polarográficos.    34. Indique cual es el detector  empleado en GC1 y GC2  y explique cómo trabaja  35. Explique cómo funciona el detector de UV/Vis empleado en las técnicas de HPLC, dibuje un  diagrama del mismo  36. Explique cómo trabaja el aditamento de ATR empleado en FTIR, Dibuje un diagrama del mismo.  ¿Qué es la onda evanescente (Evanescent Waves)?  37. Explique cómo trabaja un Interferometro de Michelson, dibuje un diagrama del mismo.  38. ¿Cómo trabaja el inyector de los GC en modo Split?¿Cual es el efecto sobre los cromatogramas?  (GC1)  39. ¿Por qué razón cuando se analizan las muestras  siempre se recomienda comenzar con la más  diluida?  40. a). Defina claramente los siguientes términos: LOL, LOD, Sensitividad, LOQ  b). Identifíquelos en una curva de calibración  c). Explique para que se emplean. 
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41. La determinación de Hierro en AA1 se hace empleando los datos de absorbencia a 248.3nm. ¿Por  qué razón se uso esta longitud de onda y cuales son las ventajas de hacerlo?  42. Explique claramente cómo trabaja el atomizador de flama, ilustre su explicación con un  diagrama.  43. ¿Como se determinaría cualitativamente la presencia de cubre en un vino por emisión atómica y  absorción atómica?  44. ¿Cómo se determinaría cualitativamente la presencia de zinc en una muestra de tierra por  polarografía?  45. ¿Que ventajas tiene el empleo de regresiones no lineales sobre las lineales en un análisis  químico?¿Desventajas?  46. ¿ En que consisten  y cuales son las diferencias entre la cromatografía isocrática y por gradiente?  47. ¿Como determina el LOD/LOQ  en el laboratorio de AA2?  48. Cual será la concentración de acetaminofén en una pastilla (%p/p) cuando se obtienen los siguientes  datos (FTIR):   
Mezcla 1 2 3 Pastilla NA NA 50 mg Acetaminofén 40 mg 80 mg NA Almidón 460 mg 420 mg 450 mg Abs 1076 0.04226 0.037682 0.021445 Abs 837 0.024587 0.035976 0.014991

      a).  20.2%    b).  38.5%    c).  46.3%    d).  87.2%    e).  92.6%    49. Cuando una solución 8.50 x10‐5M del compuesto A es medida en una celda de 1.0 cm reporta unas  absorbencias de 0.129 y 0.764 a 475 y 700 nm, respectivamente. Una solución de concentración  4.65x10‐5 M del compuesto B exhibe absorbencia de 0.567 y 0.083 bajo las mismas circunstancias.  Calcule la concentración de A y B en una solución que reporte las siguientes absorbencias: 0.675 a  475nm y 0.696 a 700 nm, en una celda de 1cm: (UV)  50. ¿Cuál será la cantidad de Cereal que será necesario pesar para obtener 100 ml de una solución de  Zinc, 25ppm para ser analizada por EA si la etiqueta del cereal dice que el serving size es de 1 taza  (222 gr), el % daily value para Zinc es 17%, y la FDA dice que la dosis diaria recomendada para  adultos es 250mg?  51. Se preparan 100 ml de  una solución que contiene 40 mg de cafeína y 20 mg de acetanilida en  metanol/agua . Al ser analizada en un cromatógrafo de líquidos se encontró un área de 21345 para  el pico de cafeína  y 9345 para acetanilida. Se preparan además 100 ml de una solución que contiene  100 mg de un desconocido que se sabe contiene cafeína y 20 mg de acetanilida. Cuando se inyecta  en el cromatógrafo se obtiene un área de 8234 para el pico de cafeína y 8102 para acetanilida.     a). Calcule los factores de respuesta relativos (ojo… Acetanilida es el estándar interno)  b). Determine el % de cafeína en el desconocido   
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Considere los siguientes cromatogramas para  los preguntas 52 a la 53, el primer pico es del disolvente.   

 

 

    52. Empleado los datos del cromatograma A, determine:  a) la velocidad lineal, b) Tiempos relativos,       c) Números de platos teóricos, d) Alturas de platos teóricos, e) Resolución cromatográfica entre los  picos  53. Determine la concentración de los compuestos mostrados en el cromatograma A, empleando los  datos de los cromatogramas B y C.  54. Se desea calcular la cantidad de Hierro en una pastilla de un complemento alimenticio, para ello se  pesaron 0.230gr de una de las pastillas y se disolvió completamente en 30 ml con una solución 3M  de ácido clorhídrico. Una alícuota de 10 ml de la solución anterior se mezclo con 10 ml de una  solución 50 ppm de Hierro solución resultante se aforó a 50 ml con agua desionizada, al introducirla  en un instrumento de AA esta reporto una absorción de 0.345 unidades empleando una longitud de  onda de 248.3 nm. Cuando se emplea una segunda alícuota de 10 ml de la primera solución, se  mezcla con 20 ml de la misma solución estándar de 50 ppm de Hierro y se aforó a 50 ml con agua  destilada y se analiza empleando las mismas condiciones, esta reporta una absorción de 0.473.    55. Con el fin de determinar el contenido de sodio en una cerveza, 10.00 ml de ella se le agrega 10.0 ml  de ácido clorhídrico 6N, la solución resultante se filtra y se aforá a 50.0 ml con agua desionizada; la  muestra así preparada fué aspirada en una flama de aire/acetileno para obtenerse una emisión de  0.123 a 589 nm. De manera similar a la alícuota de cerveza es tratada 1.0 ml de una solución  estándar de sodio que contiene 100.0 ppm de sodio. Al ser aspirada la solución de estándar (ya  tratada y aforada como la cerveza) se obtuvo una emisión de 0.397 a la misma longitud de onda y  condiciones que la muestra. Calcule la concentración de sodio en la cerveza, suponiendo que se  cumple completamente la ley de Beer. 

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56. El contenido de cafeína en un refresco de cola fue determinado por HPLC de la siguiente manera:  Una alícuota de 25 ml del refresco  es mezclada con 1.0 ml de una solución de cafeína (200.0 ppm) y  son aforados a 50.0 ml con agua desionizada. Otros 25.0 ml de muestra son diluidos hasta 50.0 ml  empleando la misma agua desionizada. Luego de calibrar el HPLC se encontró que las áreas de las  soluciones fueron: 235  la primera y 133 la segunda. La concentración de cafeína (ppm) en la  muestra será:  RECOMENDACIÓN:   Como observara se pregunta mucho sobre las diferencias, ventajas y desventajas de los métodos de  calibración de estándar externo (uno y varios pasos), estándar interno y adición de estándar, por lo que  si hace una tabla comparando estos métodos  le ahorrara mucho tiempo a la hora de estudiar. 

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