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REVISTA PERUANA DE ENTOMOLOGÍA ESCORPIONES Y ESCORPIONISMO EN EL PERÚ.— EL VENENO DEL "ESCORPIÓN DE LAMBAYEQUE" '
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Vol. 16, № 1

III:

E. Graciela Arboleda C.

Oswaldo Meneses G.

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Pedro G. Aguilar F.

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SUMARIO Se hace referencia al veneno del "escorpión de Lambajeque", una especie del género Hadruroides. Además del aspecto macroscópico y microscópico, se hizo el estudio electroforético y cromatográfico cualitativo. La electroforesis mediante el método de micro-zona determinó 7 fracciones proteicas, 5 catódicas y 2 anódicas, cuya concentración va disminuyendo con la frecuencia de las extracciones, observándose una franca recuperación después de un mes de reposo de los especímenes. La cromatografía en capa fina permitió identificar 18 omino-ácidos: arginina, ácido aspártico, ácido glutámico, asparragina, alanina, cistina, fenilalanina, glicina, histidina, isoleucina, lisina, metionina, ornitina, prolina, tirosina, treonina, valina. Lisina fue la más abundante.

SUMMARY The study is related with the venom of Hadruroides sp. a scorpion from Lambayeque, north of Peruvian Coast. It is informed about macroscopic and microscopic aspect, and the result of a electrophoretic and chromatographic study. By the method of micro-zone, it was possible to determine 7 proteic fractions, 5 catodic and 2 anodic, which concentration decreases with the frecuency of extractions, and having a total recuperation having the specimens in resting, during a period of one month. The chromatography by the thin layer method identified 18 amino-acids: argynine, aspartic acid, glutamic acid, asparhagine, alanine, cystine, phenilalanina, glycine, histidine, isoleucine, leucine, lysine, methionine, ornitine, proline, tyrosine, threonine, and valine. Glycine was the most abundant.

INTRODUCCIÓN En esta tercera nota sobre "Escorpiones y Escorpionismo en el Perú", los autores hacen referencia a las características bioquímicas del veneno de estos arácnidos, acerca de lo cual no existen estudios para las especies peruanas. Los especímenes colectados por G. Arboleda C, en Motupe, parecieron corresponder, por su tamaño y aspecto, a Brachistosternus ehrenbergi, y también por haber sido colectado en áreas areno-arcillosas del Norte del Perú. La identificación posterior correspondió a una especie del género Hadruroides, pero claramente diferente de H. lunatus, tan frecuente en Lima, y al cual se refiere la Nota II de esta serie ( 8 ) . En ocasión de encontrarse en París el Dr. Emilio Maury ( * ) , le fue enviado el material que él consideró como Hadruroides charcasus, una especie que se había incluido entre los sinónimos de H. lunatus, pero que él
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estimaba como una buena especie que posteriormente revalidaría, conforme lo confirmó después en el trabajo cuyo Resumen fue presentado a la XVI Convención de la Sociedad Entomológica del Perú, en Agosto de 1973 ( 1 2 ) . Es por esto que, al no tener todavía la publicación oficial del nombre de Hadruroides charcasus, en el título de este trabajo se hace referencia sólo al "Escorpión de Lambayeque", por ser la zona donde se colectó la especie: Distrito Motupe, Prov. Lambayeque, Dpto. Lambayeque (Fig. 1 ) . Tampoco se dan características morfológicas de la especie (Fig. 2 ) .

MATERIALES Y MÉTODOS Las localidades donde se coleccionaron los especímenes para este estudio pertenecen al Dpto. de Lambayeque, Distrito Motupe, en los fundos "El Abrojal", "Sta. Bárbara" y "Mercedes", del área llamada Las Humedades (Fig. 1 ) . Corresponde a la zona norte de la Costa Peruana, aproximadamente entre 79° 45' a 80° Longitud Occidental y los ó° a 6 15' de Latitud Sur. Generalmente se les halló bajo troncos caídos o bajo la corteza de los mismos. Raras veces bajo piedras, terrones u otros objetos. Desde junio a diciembre se colectaron 161 especímenes que fueron transportados vivos hasta Lima, al Laboratorio del Dpto. de Animales Venenosos del Instituto de Salud Pública, donde se mantuvieron en cajas especiales para efectuar el estudio.
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Recibido para p u b l i c a c i ó n s e t i e m b r e 1973. A d a p t a c i ó n de la Tesis para Bachiller en Ciencias B i o l ó g i c a s : " E s t u d i o E l e c t r o f o r é t i c o y C r o m a t o g r á f i c o del v e n e n o de una especie de Escorpión del género Hadruroides Pocock, 1893". Univ. Nac. M a y o r de San M a r c o s , 1971. Bachiller en C i e n c i a s Biológicas, Univ. Nac. M a y o r de San Marcos. M é d i c o V e t e r i n a r i o , J e f e del D p t o . A n i m a l e s V e n e n o s o s . I n s t i t u t o de Salud Pública. M i n i s t e r i o de Salud, Lima. B i ó l o g o , Dr. CC.BB., D p t o . Biología Univ. Nac. A g r a r i a La Molina. (*) I n v e s t i g a d o r del M u s e o A r g e n t i n o de Ciencias Naturales " B e r n a r d i n o R i v a d a v i a " , Buenos A i r e s , A r g e n t i n a .

RESULTADOS Y DISCUSIÓN Hadruroides sp.Un espécimen FIG. para proceder a la extracción del veneno.Las flechas indican el lugar de donde se toma el espécimen con las pinzas. o sea conforme fue extraído. 5 . ambos. El veneno extraído fue desecado al vacío para su conservación y guardado en refrigeración. El hidrolizado del veneno se preparó por hidrólisis acida. FIG. entre 22° a 30°C y de junio a diciembre de 18° a 22°C. 1 .PIG. ("El escorpión de Lambayeque") Del estudio efectuado sobre el veneno del "Escorpión de Lambayeque" (prob. de modo que quedara libre sólo el aparato venenoso. Sólo se representan los resultados de una placa bidimensional (Fig. Se procesaron en total 38 membranas. 1973 ARBOLEDA. Se efectuó la centrifugación para realizar ciertas observaciones. la primera gota de veneno ex- FIG. La Costa Norte del Perú tiene características diferentes a la Costa Central. . 2°—Sobrenadante. siguiendo fundamentalmente el método de Stahl (1965).Vista microscópica del veneno: A. Ver Figs. Para investigar la naturaleza química del veneno se usaron reactivos indicadores de proteínas. Se hicieron ensayos de solubilidad y determinación de pH. MENESES & AGUILAR: EL V E N E N O DE HADRUROIDES SP. Para evitar la molestia de los pellizcos efectuados con los pedipalpos. Se han elaborado gráficos o diagramas electroforéticos de manera que se indica el número y la intensidad de las bandas proteicas. 9 ? Estas dos últimas formas se obtuvieron de una centrifugación a 2. de una gota opalescente. de 30 días. 5 . según el método ideado por Biicherl (1953). . con el fin de conocer: a) Las fracciones proteicas existentes en el sobrenadante y en el sedimento del veneno. d) Si existían diferencias notables en la composición del veneno conservado en refrigeración.Forma en que se coge el espécimen con la mano. de veneno seco en 10 mililitros de HC1 6 N. El veneno se procesó en tres formas: 1 —En forma bruta. El estudio electrojorético se hizo en base al sistema de electroforesis de micro-zona.Diciembre. 3 —Sedimento. usando 50 mg. 3 y 4. 2 . usando el equipo de Beckman.Área de Colección. . Bajo el estímulo mecánico. Se desarrollaron 24 cromatoplacas. .FIG.p. sobresaliendo una mayor luminosidad y una mayor temperatura que. para proceder a la extracción del veneno por estimulo eléctrico.500 r. En un menor número de casos se efectuó el estímulo mecánico o manual. se envolvió el ejemplar con un papel. según el método de Bucherl. como con el estímulo eléctrico. .. 6 ) . b) La posible diferencia entre el veneno extraído por primera vez y el extraído por estímulos posteriores a intervalos de 14 días. da una gota cristalina. 4 . B. después de desecarse . Hadruroides charcasus) se han obtenido los siguientes resultados: La extracción del veneno fue efectiva tanto con el estímulo mecánico o manual. de azúcares y de lípidos. por lapsos diferentes de tiempo desde su extracción hasta su procesamiento.m. por 15 minutos. El estudio cromato gráfico en capa fina se llevó a cabo para conocer los amino-ácidos que contiene el veneno bruto. La extracción del veneno se hizo usando el estímulo eléctrico. c) Si se recuperaba la concentración de las fracciones proteicas después de un período de reposo de los individuos. en la zona de colección oscila de diciembre a junio.

llegando a hacerse transparente y dejando una mínima cantidad de precipitado en el fondo. . además de los 18 anteriores fueron encontrados en el veneno de Androctonus australis por Rochat (1966). CÜADEO № -1 SOLVENTE Agua destilada . — N o se ha determinado si la fracción o fracciones tóxicas están en el sobrenadante o en el sedimento. 9 Del Estudio Cromato gráfico se ha podido identificar 18 aminoácidos. Para el estudio de la variación de concentración del veneno.A o . № 6 ) . bahiensis sólo 1 fracción. para luego obtener el veneno. se obtuvo muestras cada 14 días. № 1 pelida fue cristalina y las siguientes son opalescentes. b) Identificados con Revelador Específico: Lisina. al secarse las gotas transparentes. Cistina. Leucina. todas las gotas obtenidas fueron opalescentes. Éter Acerca de la naturaleza química. Prolina. La solubilidad del veneno varía con diferentes solventes.NaCN (75 « 25 . de proteínas por mililitro de veneno. 2:30 h r s Revelador: Ninhidrina policromática T e m p e r a t u r a a m b i e n t e 25 . ni cisteina ni serina. acético Q. Á la cuarta extracción llega a desaparecer por completo Ta.Agua. 16. predominando el ácido glutámico. el cual recupera su concentración óptima. No se identificaron triptofano. Metionina y Ornitina. es decir. 2:$0 h x s 2da d i r e c c i ó n : p H 5 . Ellos son: a) Identificados con Ninhidrina Policromática: Cistina. a partir de los tres días. № 6. 5 ) . f á r m i o o . procesándose al día siguiente de su F I G U R A N 2 6 CROMATOPLACA BIDIMENSIONAL DE MUESTRA DE VENENO 1 r a d i r e c c i ó n : p H 3 . S o l v e n t e " A " . La variación es notable y se puede apreciar en los Gráficos № 5. mostró 7 bandas proteicas. Ver Gráfico № 3. Guardado en refrigeración. Arginina. Alcohol de 9 5 ° Metanol Sol. S o l v e n t e " B " . " A " i 2 . Prolina. Isoleucina. No existe Tf ni Tg. Arginina. Bajo estimulación eléctrica. Acido Aspártico.A g u a (75 : 15 * 10 v / v ) S o l v . Glicina. el veneno empieza a perder su aspecto lechoso. influye en el dosaje de anticuerpos en la preparación de sueros. Tf y Tg. 2 anódicas y 5 catódicas. que se vuelve opalescente. bahiensis. Esto coincide con lo observado por Bü- cherl (5) para Tityus serrulatus y T. Lisina. sino únicamente su aspecto. las pruebas de Biuret y Ninhidrina fueron positivas. Fenil-alanina y Vahna.P. El pH del veneno es de 6. pero en T. se obtuvo 47 mg. En el Gráfico № 4 se muestran los resultados del re­ poso de un mes que se dio a los especímenes. de los cuales la mayor centración corresponde a la glicina (Ver Fig. Bücherl encontró lo mismo en el veneno de Tityus serrulatus. Tyrosina. persistiendo muy tenues Te.80 REVISTA PERUANA DE ENTOMOLOGÍA Vol. de acuerdo al número de extracciones. presentan las "configuraciones cristaloides" que describe Bücherl ( 5 ) . 5 # Carbonato de sodio Acido fórmico Ac. Alanina. Histidina. y por otro lado. —En el sedimento se observan rezagos de Ta y Tb. si la disminución de la concentración del veneno por extracciones frecuentes. —La conservación en refrigeración no afecta la naturaleza química del veneno. Ver Gráfico N? 2. salina 8 . № 7 y N° 8.SOLUBILIDAD DEL VENENO VENENO SECO insoluble insoluble insoluble poco soluble poco soluble poco soluble soluble soluble insoluble insoluble VENENO FRESCO insoluble precipita precipita soluble tardíamente poco soluble poco soluble soluble soluble insoluble insoluble extracción. Los resultados del Estudio Electroforético se refieren a que: — N o existen diferencias en el veneno extraído por estímulo químico y por el estímulo manual. según se expresa en el Cuadro № 1. Tb.0 a 6. Metionina. Comparar con el Gráfico N 1. salina 8°/oo Sol.02 v / v ) Quedaron 6 aminoácidos sin identificar. de aspecto lechoso. —El estudio electroforético del veneno en bruto. Asparragina. " B " i F e n o l . Acido Glutámico. acético diluido Ac. anódica Ta y Tb.27 °C S o l v . Las gotas lechosas se secan a manera de una capa opaca y amorfa (Fig. Observadas al microscopio. Será muy útil determinar si la desaparición de algunas fracciones proteicas corresponde a la pérdida de toxicidad. siendo Te la fracción más concentrada.. Las reacciones para azúcares y lípidos fueron negativas.0.b u t a n o l . Bücherl halló 18 en Tityus bahiensis. tanto recién extraído como el conservado en refrigeración hasta 40 días. Los porcentajes correspondientes a cada fracción están dados en base al total integrado. los cuales. Td y Te. Threonina.5.

— E l veneno mg/ml. 197} ARBOLEDA. Tf. En el sobrenadante persisten las 7 fracciones siendo más intensas las dos primeras. 81 CONCLUSIONES De la discusión de los resultados se pueden obtener las siguientes conclusiones: 1. Tc. ? . Tb. diferente de la que existe en la Costa Central.Diciembre. Te. En el sedimento la mayor concentración la tiene la 5 fracción. 2 . tiene concentración proteica de 47 3 .—El "escorpión de Lambayeque" pertenece a una especie de Hadruroides (Fam. Vejovidae). T g ) . — P o r electroforesis de microzona se han separado 7 bandas proteicas en el veneno total (Ta. MENESES & A G U I L A R : EL V E N E N O DE HADRUROIDES SP. Td.

17. W i l l i a m H e i n e m a n n . . Ed. 1968. 1966.. Thin-Layer C r o m a t o g r a p h y . Ciencia y Naturaleza. Vol. Enero-Junio. Estudio e l e c t r o f o r é t i c o en a c e t a t o de c e l u l o s a de las p r o t e í n a s en el r e c i é n nacido n o r m a l . — N o existen diferencias notables en la composición proteica del veneno conservado en refrigeración. Estudio s i n ó p t i c o s o b r e la t é c n i c a de la c r o m a t o g r a f í a en capa delgada. Igualmente a la Dra. A c a d e m i c Press. A n a l e s C i e n t í f i c o s . Edit. XL. 1970. V o l . Ana María Esquerre de Ramírez. A G U I L A R F. 7 . por las facilidades brindadas en los estudios de electroforesis. Nac. I I .—ZWEIG & WHITAKER. 1965. . entre los cuales la glicina es la que existe en mayor concentración. A g r a r i a . — S e hacen necesarios más estudios sobre la toxicidad de las diferentes fracciones proteicas. . En: Analyt i c a l C h e m i s t r y . Biologa Asistente del Instituto de Salud. 21. Ed. I I . DE. 1957. AGRADECIMIENTOS De manera especial a la Dra. C. & O S W A L DO MENENSES. de Animales Venenosos. I. por la colaboración ofrecida. 20.—WUNDERLY. M e m o r i a s del Instituto Butantán. A c a d e m i c Press. I. 5. 1973. № 1. 1966. 1959. . C H . 1968. M e d i c a l Books. V o i . DINIZ & c o l . Se logra una recuperación óptima cuando se deja en reposo por lo menos un mes. C h e m i c a l p r o p e r t i e s and b i o l o g i c a l a c t i v i t y of Tltyus v e n o m . p. Ed. Revisión de sus p r i n c i p i o s y a p l i c a c i o n e s . and London. Pub. 1956. A n a l e s C i e n t í f i c o s . 15. 1963. Vol. XXIX (4). 16. 10.—MELLO LEITAO. 1962..Y. EGON. V o l . V o l . . en M e d i c i n a . Buenos A i r e s . — M A U R Y . & O S W A L D O MENESES. & PUCCA. . W a s h i n g t o n . 1 4 — RANDERATH. J U D I T H . IVOR. Nota p r e l i m i n a r sobre los S c o r p i o n i d a p e r u a n o s . Mayor de San Marcos. V o l . 1 2 . M é t o d o s y Resultados. V e j o v i d a e ) .. PEDRO G. V o i .82 REVISTA PERUANA DE ENTOMOLOGÍA 6. EMILIO. " E s c o r p i o n e s Sul-americ a n o s . 13. Inc.D i c i e m b r e H° 3-4. M e m o r i a s Ins­ t i t u t o B u t a n t a n . Escorpiones y Escorpionismo en el Perú. W O L F G A N G . Univ. Sao Paulo. Buenos A i r e s .—STAHL. 1893 ( S c o r p i o n e s . 1 6 — S M I T H . — D e l estudio cromatogràfico ha sido posible identificar 18 aminoácidos. A c a d e m i c Press. Escorpioes e e s c o r p i o n i s mo no Brasil. 1966. efectuadas a intervalos de 14 días. Dpto. A la Dra.—AGUÍ LAR F. A c t a C i e n t í f i c a Venezolana. por su ayuda en los estudios de cromatografía. C i e n t í f i c o M é d i c a . A g r a r i a La M o l i n a . C h r o m a t o g r a p h y and e l e c t r o p h o r e t i c t e c h n i q u e s . N e w Y o r k and London. Nac. XXXIV 7. 5 . Lima. VI (2) Quito. N' 1-2. 1945. Ed. A r g e n tina. 1960. Manutencao de escorpioes em viveiros e e x t r a c a o do v e n e n o . BIBLIOGRAFIA 1. Rosa Vásquez de Cisneros. con el veneno fresco. Escorpioes e e s c o r p i o n i s mo no B r a s i l . Nac. PEDRO G. V I .—VALAREZO. XXXIII.—VELASCO H. 1967.. Univ. Sao Paulo.—CACERES C. V o l . XIII № 5. 11. J u l i o . JOSÉ. El A t e n e o . B r a s i l . N.—BROWNELL. 6 . Heavy. Edit. La e l e c t r o f o r e s i s en papel. 19-24 de agosto de 1973. 2. de Bioquímica de la Univ. M e m o r i a s d e l I n s t i t u t o B u n t a n t á n . Virginia Garro. del Dpto. Efectos d e l Veneno del "Escorpión de los P e d r e g a l e s " en la C o s t a C e n t r a l . Univ. HAROLD & C o l . V i l i . 1968. 1972.Paper Techn i q u e f o r p r e p a r a t i v e c h r o m a t o g r a p h y . Paper C h r o m a t o g r a p h y and E l e c t r o p h o r e s i s . V o l . Rev. Sociedad Entomológica d e l Perú. P u r i f i c a t i o n des n e u r o t o x i n e s du s c o r p i o n Androctonus australis. Ed. Barcelona. 3. 1960. Caracas. Tomo X X V I I . Peruana E n t o m o l o g í a . V o l . JOSE FELIX. — L a concentración del veneno disminuye sucesivamente de una primera extracción hasta una cuarta. 3 1 . Resum e n de los Trabajos Presentados a la XIV Convenc i ó n SEP y I C o n v e n c i ó n SEDE. Thin Layer C h r o m a t o g r a p h y . Nota s o b r e los escorp i o n e s d e Lima. A t l a s de Diagramas Elect r o f o r é t i c o s . Biologa del Dpto. N? 1 4 .—CHAVEZ. Revisión d e l género Hadruroídes Pocock. M a y o r de San M a r c o s . 15. Sao Paulo. Tumbes y Guayaq u i l . A r q u i v o s d o M u s e u N a c i o n a l . A r t é c n i c a . .—GOMEZ. M e m o r i a s do I n s t i t u t o Butantan. 1962. B r a s i l .—AKIYOSHI-GERSZTEN.—ROCHAT et col. 8. Vol XXXIII (3). 1. de Bromatologia Especial de la Univ. V o l . 19. Mayor de San Marcos. Nac. 1953. 18. I R M A . Técnica c r o m a t o g r a f í a en capa delgada. Brasil. C r o m a t o g r a f í a .—LEDERER & LEDERER. Escorpiones y E s c o r p i o n i s m o en el Perú. 9. KURT. 4 — B U C H E R L . B r a s i l . Tesis Br.