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A. InIBIDORES DA SNTESE DE RNA E DE SUAS FUNES 1. Rifampina, rifamicina, rifampicina (bactericidas) a.

Modo de ao Esses antimicrobianos se ligam RNA polimerase dependente de DNA e inibem a iniciao da sntese de RNA. b. Espectro de atividade Estes so antibiticos de largo espectro mas so usados mais comumente no tratamento da tuberculose c. Resistncia Resistncia a esses antibiticos comum. d. Terapia combinada Uma vez que a resistncia comum, rifampina normalmente usada em terapia combinada

Muitos antibiticos inibem processos biolgicos especficos. Entre eles, a rifampicina e a actinomicina inibem o processo de transcrio. Rifampicina As rifamicinas (derivadas de Streptomyces) e a rifampicina (produto semi-sinttico) inibem o incio da transcrio por impedir a formao da primeira ligao fosfodister da cadeia de RNA. Neste caso, a ligao da RNA polimerase ao molde de DNA e o alongamento da cadeia no so afetados. Por ser to especfica, a rifampicina pode ser til para bloquear o incio de novas cadeias de RNA sem, no entanto, atrapalhar a sntese dos transcritos que j estejam em andamento. A rifampicina atua sobre a subunidade da RNA polimerase. Existem mutantes que no se ligam a rifampicina e deste modo se tornam resistentes ao antibitico. Actinomicina A actinomicina D (tambm derivada de Streptomyces) inibe a transcrio por ligar-se fortemente e especificamente ao DNA dplex e, assim, impedir que ele seja molde para a transcrio. Essa ligao pode ser bastante reforada pela presena de guaninas. Provavelmente, o anel de fenoxazona da actinomicina se insere entre pares de bases complementares do DNA, num processo chamado intercalao. Em baixas concentraes, este antibitico no afeta significativamente a replicao do DNA, sendo usado como inibidor especfico da sntese de novos RNAs. Em altas concentraes, porm, a actinomicina D pode bloquear o crescimento de algumas clulas, sendo - ento - um forte

agente teraputico no tratamento de alguns cnceres. Sugere-se que a actinomicina reconhece a seqncia de bases GpC no DNA. Se a seqncia de um dos filamentos do DNA for 5' CG 3', a seqncia do filamento complementar 3' CG 5' e a, entre dois pares de bases GC, que a actinomicina se intercala. Repressores que se ligam aos promotores Algumas protenas repressoras inibem a transcrio ao se ligarem numa parte da regio promotora, impedindo, assim, a ligao da RNA polimerase nesses stios. Veja a figura:

Existem ainda outras formas de represso. Pode haver uma competio entre as molculas ativadoras e repressoras por um stio especfico do DNA e quem estiver em maior nmero tem uma chance maior de realizar seu "objetivo".

Pode acontecer ainda do repressor inibir o stio de ligao do ativador, inibindo-o.

Alm disso pode acontecer a ligao direta entre o inibidor da transcrio e os fatores de transcrio, inibindo-os.

As RNA polimerases so enzimas, geralmente formadas por muitas cadeias polipe catalisam toda transcrio do DNA. Em procariotos existe apenas um tipo de RNA enquanto nos eucariontes existem trs. Essas enzimas conseguem catalisar a ligao entre a extremidade 3' OH de um nu com a extremidade 5' fosfato do nucleotdeo seguinte, realizando a catlise no se para 3' e utilizando como molde uma das fitas de DNA.

As RNAs polimerases so enzimas muito importantes e, por isso, sua seqncia te conservada ao longo da evoluo, como podemos ver na figura abaixo, que mostr similaridades na seqncia de aminocidos da subunidade beta da enzima. As reg mostradas em verde possuem mais de 70% de homologia entre leveduras (yeast) Drosophila e mais de 40% entre Drosophila e E. coli. Uma seqncia adicional de aminocidos nica de eucariotos aparece repetida 26 vezes no terminal carboxila subunidade de levedura e mais de 40 vezes na de Drosophila (crculos verdes). Es repeties so fosforiladas como parte do processo que inicia a cadeia de RNA nos

Rifampicina: so resistentes pelo desenvolvimento de mutaes na subunidade B da RNA polimerase que tornam incapaz a enzima de fixar o antibitico A enzima que cataliza a transcrio em procariotos, RNA polimerase, composta por 5 subunidades: b, b, a, d e w A subunidade b o centro cataltico. Alguns antibiticos se ligam a esta subunidade e inibem a iniciao da sntese de RNA, outros inibem a elongao. A subunidade d no tem atividade cataltica A transcrio do RNA dividida em trs etapas: Iniciao Iniciao A subunidade d reconhece e se liga a uma sequncia de iniciao (promotor) que est na molcula de DNA. A partir da ligao da RNA polimerase na molcula de DNA, atravs do promotor, d-se incio a elongao da molcula de RNA. O Promotor corresponde a uma sequncia especfica de bases reconhecida pela RNA polimerase. Existem duas sequncias promotoras mais comuns no DNA, ambas contendo 6 nucleotdeos. Uma localizada a cerca de 10 pares de bases (-10) e outra de 35 pares de bases (-35) do ponto onde se inicia a sntese de RNA. Portanto a RNA polimerase entra em contato com as bases e com os grupos fosfatos nas sequncias -l0 e -35 do DNA. Embora os hexmeros -l0 e -35 de um promotor sejam as sequncias onde a RNA polimerase se liga e age, outra sequncia vizinha tambm pode afetar a funo do promotor, por exemplo as sequncias normais entre os nucleotdeos -l50 e -50 do gene do rRNA so essenciais para a atividade do promotor. O incio da sntese ocorre, geralmente 12 a 13 pares depois do incio da regio -l0.

Elongao Elongao Depois de iniciada a transcrio, a subunidade d se desprende do complexo enzimtico e fica livre para se ligar a outro complexo. Sem esta subunidade, a afinidade da enzima pelo promotor diminui de modo que tem incio o processo de elongao.

A medida que a RNA polimerase migra atravs do DNA, ela desenrola e enrola o DNA.

No ponto de crescimento da cadeia de RNA, h um hbrido RNA-DNA de cerca de 12 pares de bases, que termina quando a cadeia de RNA se separa do molde e a dupla fita de DNA volta a se enrolar.

A quantidade de DNA mantido desenrolado pela enzima um pouco maior que o hbrido RNA-DNA, correspondendo a cerca de 17 pares de bases. Este nmero pode variar quando a RNA polimerase encontra sequncias no DNA denominadas sequncias de terminao, que fazem com que o DNA se enrole completamente e o RNA se desprenda do molde. Esta etapa do processo de transcrio em procariotos, denominada de terminao . Terminao Terminao Terminadores so sequncias de bases no DNA cuja funo parar a sntese de RNA em pontos especficos. Existem dois grupos de terminadores: r independentes (no dependem do fator r) uma sequncia de 6 nucleotdeos adenina no molde de DNA, que so transcritos em uracila no RNA. Quando ocorre elongao nesta regio as pontes formadas entre desoxiA e riboU so instveis fazendo com que a cadeia de RNA seja expelida. r dependentes (dependem do fator r) A enzima necessita do fator r para liberar o RNA. Estas sequncias terminadoras no contm a sequncia de poli A e o fator r se liga RNA polimerase e faz com que ela se "desligue"; do DNA, terminando o processo de transcrio. SUBUNIDADE : Uma subunidade beta () est presente na RNA polimerase. O antibitico rimfacina e as estreptolidiginas ligam-se subunidade . A subunidade pode estar envolvida tanto no incio da transcrio quanto no alongamento. OBS:O importante antibitico rifampicina um potente inibidor de RNA polimerase que bloqueia a iniciao mas no o alongamento. Esta classe de antibitico no inibe as polimerases eucariticas e tem, portanto, sido usado pelos mdicos para tratamento de infeces bacterianas Gram-positivas e tuberculose.

SUBUNIDADE : Uma subunidade beta primo () est presente na RNA polimerase. Ela pode estar envolvida na ligao ao molde de DNA. A heparina ligase subunidade liga-se subunidade . INIBIDORES DA TRANSCRIO: Derivados da Rifamicina A rifampicina e seu derivado estrutural, a rifabutina, so dois derivados semi-sintticos do antibitico de ocorrncia natural, a rifamicina B (Fig. 32.8). Embora a rifampicina possa ser utilizada para profilaxia da doena meningoccica e tratamento de algumas outras infeces bacterianas, seu principal uso no tratamento da tuberculose e de outras infeces micobacterianas. A rifampicina mostra-se particularmente efetiva contra micobactrias que residem em fagossomos, visto que bactericida para bactrias tanto intracelulares quanto extracelulares. Alm disso, a rifampicina aumenta a atividade in vitro da isoniazida, outro frmaco de primeira CH3COO CH3O CH3COO CH3O cido nalidxico Ciprofloxacina Rifampicina Rifabutina Fig. 32.8 Estruturas dos agentes antimicrobianos cujos alvos consistem nas topoisomerases e transcrio bacterianas. O cido nalidxico e o ciprofloxacino so antibiticos da quinolona que inibem as topoisomerases tipo I bacterianas. A rifampicina e a rifabutina inibem a RNA polimerase DNA-dependente bacteriana. 554 | Captulo Trinta e Dois linha utilizado na terapia de combinao da tuberculose (ver Caps. 3 e 39). A rifampicina exerce sua atividade bactericida atravs da formao de um complexo estvel com a RNA polimerase DNA- dependente bacteriana, inibindo, assim, a sntese de RNA. O alvo da rifampicina a subunidade da RNA polimerase bacteriana. O frmaco permite o incio da transcrio mas bloqueia, em seguida, o alongamento quando o RNA nascente atinge um comprimento de 2 a 3 nucleotdios. O mecanismo exato desse processo ainda no foi totalmente elucidado; no caso de certas RNA polimerases bacterianas h evidncias de que a rifampicina provoca ocluso da via pela qual o RNA nascente emerge da enzima. A rifampicina exibe uma alta seletividade para as bactrias, visto que as polimerases dos mamferos (at mesmo as das mitocndrias, que so consideradas semelhantes s dos procariotas) so inibidas pela rifampicina apenas em concentraes muito mais altas. Por conseguinte, a rifampicina geralmente bem tolerada, e a incidncia de efeitos adversos (tipicamente exantema, febre, nusea, vmitos e ictercia) baixa. Como o rpido desenvolvimento de resistncia torna a monoterapia da tuberculose no apenas ineficaz mas tambm contraproducente, a rifampicina administrada em associao com outros frmacos antituberculose. Experimentos in vitro mostraram que um em cada 106 a 108 bacilos da tuberculose pode desenvolver resistncia rifampicina atravs de um processo de mutao em uma etapa, que parece ocorrer no stio de ligao do frmaco sobre a polimerase. Entretanto, como componente de um esquema teraputico de mltiplos frmacos, a rifampicina pode reduzir acentuadamente a taxa de reativao da tuberculose latente (ver Cap. 39). 15 .1 RIFAMPICINA Classe: Anti tuberculoso / Macroldeo Ao:

Inibe a biossntese do RNA bacteriano ao inibir fortemente a subunidade beta da RNA polimerase que depende do DNA, evitando a unio da enzima do DNA e bloqueando, assim, o incio da transcrio do RNA. Espectro de ao: Myco bacterium leprae, M. tuberculosis , diversas outras microbactrias e bactrias Gram positivas e Gram negativas. Microorganismos resistentes: M. fortuitum. Absoro: bem absorvida pelo trato gastrintestinal , mas esta absoro se reduz quando administra da com alimentos. Metabolismo/Excreo: metabolizada no fgado. 6 a 30% da rifampicina so excretados na urina; 30 a 60% sob forma desacetilada e aproximadamente 50% inalterada. Principais usos: Nos esquemas (rifampicina+isoniazida+pirazinamida) de pri motratamento para a tuberculose. Doses usuais: 1 0 mg /kg para crianas e adultos; mximo de 60 0 mg Ajuste de dose para funo renal: No necessita. Interaes: Trata se de um potente indutor das enzimas microssomais hepticas, diminuindo a meia vida de v rios frmacos, incluindo inibidores da protease e inibidores no nucleosdeos da transcriptase reversa, digoxina, bloqueadores, clofibrato, verapamil, metadona, ciclosporina, corticosterides, anticoagulantes orais, teofilina, barbitricos,

contraceptiv os orais, fluconazol, halotano e sulfonilurias. Reaes adversas: As mais comuns so manifestaes digestivas (diarria, dor abdominal, nuseas, vmitos, epigastralgia) e dermatolgicas (erupes urticariformes e prurido cutneo). Gravidez e lactao: N o se conhece o efeito da rifampicina (isolada ou associada a outros frmacos antituberculosos) sobre o feto humano (risco C). No existem estudos bem controlados sobre o uso de rifampicina na lactao. Passa ao leite materno, portanto no deve ser utiliza da, a menos que os benefcios para a me superem os possveis riscos para o recm nascido Rifamicinas, C43H58N4O12

auto-giro

As Rifamicinas constituem um grupo de antibiticos macrocclicos complexos e estruturalmente semelhantes. A rifampicina, um derivado semi-sinttico, frmula C43H58N4O12 - 822,94 g.mol-1 uma substncia slida (T.F. 183 oC) nas condies ambiente. Na molcula de rifampicina, salienta-se: Anel naftalnico; Anel piperazina; Hidroxilas; Grupo Amida; Grupo ster. As rifamicinas pertencem a famlia dos antibiticos conhecidos como ansamicinas. Este nome (ansamicina) foi dado devido a arquitetura molecular desses antibiticos ser parecida com uma cesta, compreendida por uma poro aromtica ligada a cadeias alifticas em posies no adjacentes (Fig.1: Geldanamicina).

As rifamicinas formam um grupo de antibiticos, isolados primeiramente em 1959, de um processo de fermentao da bactria Streptomyces mediterranei (hoje conhecida como

Amycolatopsis rifamycinica), no laboratrio Lepetit SA em Milo por Sensi e colaboradores. Cerca de sete rifamicinas foram descobertas, conhecidas como rifamicinas A, B, C, D, E, S, e SV. Dentre as vrias rifamicinas, a rifamicina B foi a primeira disponvel comercialmente, obtendo sua patente no Reino Unido em 1958. Ela ajudou a combater cepas de tuberculose resistentes aos antibiticos disponveis na poca. Apesar da rifamicina B apresentar uma fraca atividade antibacteriana, conhecida por ser a precursora de vrios outros derivados com elevada ao e de uso clnico, como por exemplo a rifampicina, que um derivado semisinttico com grande biodisponibilidade oral. Devido ao grande nmero de derivados e anlogos disponveis, as rifamicinas tm sido amplamente utilizadas na eliminao de bactrias patognicas que se tornaram resistentes aos antibiticos comumente utilizados. As rifamicinas atuam inibindo a sntese de RNA dependente de DNA nas clulas procariticas atravs da formao de um complexo estvel frmaco-RNA polimerase, impedindo a formao da cadeia de RNA. Elas interagem com a RNA polimerase de bactrias mas no inibe a enzima em mamferos. Em geral, as Rifamicinas inibem o crescimento de muitas bactrias, tanto Gram-positivas quanto Gram-negativas. A associao da rifampicina com a isoniazida muito utilizada para o tratamento da tuberculose. A rifamicina SV um antibitico tpico utilizado no o tratamento ou preveno de infeces em superfcies externas do corpo causadas por microrganismos sensveis. Apesar da rifamicina SV ser um precursor biossinttico da rifamicina B, a produo deste ltimo antibitico atravs da fermentao muito maior. Logo, ela produzida atravs de transformaes da rifamicina B.

Converso da rifamicina B na rifamicina SV e alguns derivados de uso clnico (Floss, H.G.; Yu, T. Chem. Rev. 2005). Fonte: Hardman JG, Limbird LE, Gilman AG. Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics. 10th ed. New York: McGraw-Hill, 2001. http://en.wikipedia.org/wiki/Rifamycin (Acessado em 21/07/11) Floss, H.G.; Yu, T. Rifamycin-Mode of Action, Resistance, and Biosynthesis. Chem. Rev. 105 (2): 621-632, 2005.

Crditos: Karen Ventura Paiva, graduanda do curso de Farmcia da UFRJ e Rafael Garrett, doutorando da PG em Qumica do IQ/UFRJ. 4.1 Rifamicinas: rifapentina, rifabutina, rifalazil As rifamicinas so provenientes de produtos naturais e foram isoladas em 1957. So seletivos e potentes inibidores da RNA polimerase bacteriana, enzima chave na transcrio do DNA. Trs representantes semi-sintticos dessa classe so utilizados no tratamento de vrias doenas microbianas infecciosas. So eles a rifapentina (RFP), rifabutina (RFB) e o rifalazil (RFL) (figura 9). Figura 9 . Estruturas qumicas da rifabutina e rifapentina e rifalazil respectivamente. 20 Um dos principais problemas da rifampicina no tratamento da TB o longo tempo de tratamento. Em virtude disso, vem sendo considerada a substituio desse composto por outros da mesma classe que mostraram potencialmente encurtar o tempo de tratamento. A rifapentina foi descoberta em 1965, mas apenas em 1998 teve seu uso aprovado pelo U.S Food and Drug Administration (FDA) para o tratamento de doenas pulmonares. Ela um anlogo mais potente e de meia-vida mais longa que a RIF. Seu mecanismo de ao o mesmo que as demais rifamicinas, portanto, no exerce atividade sobre os microorganismos resistentes RIF. Elas inibem a sntese do RNA bacteriano pois se ligam subunidade da RNA polimerase-DNA dependente. Assim como a RIF, esse frmaco indutor das enzimas do citocromo P450, porm em menor extenso, causando o inconveniente da interao com outros frmacos 34 . Em um estudo clnico fase I constatou-se que a RFP causa auto-induo enzimtica 35 . Estudo realizado em roedores na Johns Hopkins University sugeriu que a substituio da RIF pela RFP mantendo a posologia padro de tratamento poderia encurtar drasticamente o tempo de tratamento. Outro estudo realizado pelo mesmo grupo, tambm em roedores, mostrou que a combinao de RFP, MFX e PZA administrado diariamente ou trs vezes por semana diminuiu o tempo de tratamento de seis para trs meses 36 .

A RFP tambm est sendo considerada para ser utilizada em um regime de tratamento para TB latente. Um regime de doses semanais de RFP, MFX e INH dado a roedores por trs meses mostrou ser mais efetivo que o regime de doses dirias de INH por 6 meses 37 . Estudos clnicos esto sendo conduzidos para assegurar a eficcia de altas doses de RFP, administradas uma ou duas vezes por semana, associada MFX e a eficcia de doses dirias de RFP com o regime padro empregado para frmacos de primeira linha em encurtar o tempo de tratamento 5 . A rifabutina, comparada com as demais rifamicinas, um fraco indutor das enzimas do citocromo P450, por isso indicada, principalmente, para regime de tratamento de pacientes co-infectados com avanada infeco de HIV. Entretanto, no h muitos estudos clnicos avaliando esse grupo de pacientes 38 . Outra rifamicina que foi sintetizada com o intuito de melhorar a atividade contra o M.tb foi o rifalazil (RLZ), tambm conhecido como KRM1648 ou benzoxazinorifamicina. Esse frmaco apresenta tempo de meia-vida longo, alm de apresentar maior atividade, in 21 micotiol foi obtido a partir de glicosamina paracetilada e analisado como substrato para o M.tb na enzima amidase micotiol S-conjugada demonstrando possuir boa afinidade
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. Figura 8 . Estrutura do micotiol 4.1 Rifamicinas: rifapentina, rifabutina, rifalazil As rifamicinas so provenientes de produtos naturais e foram isoladas em 1957. So seletivos e potentes inibidores da RNA polimerase bacteriana, enzima chave na transcrio do DNA. Trs representantes semi-sintticos dessa classe so utilizados no tratamento de vrias doenas microbianas infecciosas. So eles a rifapentina (RFP), rifabutina (RFB) e o rifalazil (RFL) (figura 9).

Figura 9 . Estruturas qumicas da rifabutina e rifapentina e rifalazil respectivamente.


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Um dos principais problemas da rifampicina no tratamento da TB o longo tempo de tratamento. Em virtude disso, vem sendo considerada a substituio desse composto por outros da mesma classe que mostraram potencialmente encurtar o tempo de tratamento. A rifapentina foi descoberta em 1965, mas apenas em 1998 teve seu uso aprovado pelo U.S Food and Drug Administration (FDA) para o tratamento de doenas pulmonares. Ela um anlogo mais potente e de meia-vida mais longa que a RIF. Seu mecanismo de ao o mesmo que as demais rifamicinas, portanto, no exerce atividade sobre os microorganismos resistentes RIF. Elas inibem a sntese do RNA bacteriano pois se ligam subunidade da RNA polimerase-DNA dependente. Assim como a RIF, esse frmaco indutor das enzimas do citocromo P450, porm em menor extenso, causando o inconveniente da interao com outros frmacos
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. Em um estudo clnico fase I constatou-se que a RFP causa auto-induo enzimtica


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. Estudo realizado em roedores na Johns Hopkins University sugeriu que a substituio da RIF pela RFP mantendo a posologia padro de tratamento poderia encurtar drasticamente o tempo de tratamento. Outro estudo realizado pelo mesmo grupo, tambm em roedores, mostrou que a combinao de RFP, MFX e PZA administrado diariamente ou trs vezes por semana diminuiu o tempo de tratamento de seis para trs meses
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. A RFP tambm est sendo considerada para ser utilizada em um regime de tratamento para TB latente. Um regime de doses semanais de RFP, MFX e INH dado a roedores por trs meses mostrou ser mais efetivo que o regime de doses dirias de INH por 6 meses
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. Estudos clnicos esto sendo conduzidos para assegurar a eficcia de altas doses de RFP, administradas uma ou duas vezes por semana, associada MFX e a eficcia de doses dirias de RFP com o regime padro empregado para frmacos de primeira linha em encurtar o tempo de tratamento

. A rifabutina, comparada com as demais rifamicinas, um fraco indutor das enzimas do citocromo P450, por isso indicada, principalmente, para regime de tratamento de pacientes co-infectados com avanada infeco de HIV. Entretanto, no h muitos estudos clnicos avaliando esse grupo de pacientes
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. Outra rifamicina que foi sintetizada com o intuito de melhorar a atividade contra o M.tb foi o rifalazil (RLZ), tambm conhecido como KRM1648 ou benzoxazinorifamicina. Esse frmaco apresenta tempo de meia-vida longo, alm de apresentar maior atividade, in
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vitro e in vivo , que a RIF e a RFB. O uso do RLZ restrito a cepas no resistentes s rifamicinas. Um estudo preliminar fase I em humanos mostrou que doses de 10 mg e 25 mg so seguras e que doses acima de 100 mg podem desencadear sintomas de gripe e diminuir a contagem de leuccitos e plaquetas no sangue. Alm disso, no mostrou ser mais eficaz que a RIF. At o momento, nenhum estudo clnico fase II foi realizado para avaliar o uso do RLZ para o tratamento da tuberculose
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