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HEMATOLOGIA

-------------------------------------------------------------TOMA DE MUESTRAS DE SANGRE VENOSA Tranquilizar al paciente Distraerlo Colocarle cmodamente Proceder a la tcnica de la extraccin

ANTICOAGULANTES EDTA (sal di sdica o di potsica del tetra acetato de etilen diamina) Citrato trisdico al 3,8% Oxalato amonico potsico Heparina SISTEMA AL VACIO VENOJECT a) Hemogramas - Rto. Plaquetas Tubo tapa lila ( 3 cc. de sangre ) Rto. Eosinfilos - Rto. Reticulocitos * El mnimo de muestra, para procesar ser inferior a 1cc. b) Vsg * Tubo tapa Negra (1cc. de sangre) 1

* Exacto, volumen inferior a este, el equipo no lo lee. PRUEBAS DE COAGULACION T.T.P.A Fibrinogeno P.D.F. dimero D. Anticoagulante Lpico - T.P. + INR. - Factor VIII - Cofactor de Ristocetina

Tubo tapa Celeste (recomendable tomar en tubo de 3,5cc. si son varias las determinaciones). Tubo de 2cc. para procesar pruebas de rutina bsicas T.P, T.T.P.A. y Fibrinogeno

La sangre es un tejido fluido que circula por capilares, venas y arterias de todos los vertebrados. Su color rojo caracterstico es debido a la presencia del pigmento hemoglobnico contenido en los eritrocitos La volemia es un trmino mdico que se refiere al volumen total de sangre circulante de un individuo humano o animal, que es de aproximadamente de 5-6 litros FUNCIONES DE LA SANGRE Respiratoria. Nutritiva. Hormonal. Excretora. Trmica. Volumen intersticial. pH. Defensiva. Hemosttica.

FUNCIN RESPIRATORIA Con los hemates transporta el oxgeno desde los pulmones a las clulas Y el anhdrido carbnico desde estas a los pulmones FUNCIN NUTRITIVA Conduce las sustancias de la digestin de los alimentos hasta las clulas FUNCIN DE REGULACIN HORMONAL Transporta hormonas desde las glndulas que las producen hasta los rganos donde actan FUNCIN DE REGULACIN TRMICA Distribuye el calor a lo largo de todo el cuerpo SI CENTRIFUGAMOS SANGRE OBTENEMOS...

COMPOSICIN DE LA SANGRE

Hematocrito normal 45 %

SANGRE VENOSA Sangre venosa: Rojo oscuro Fluye de manera continua No forma espuma Se utiliza para todo tipo de analtica

SANGRE ARTERIAL Sangre arterial: Rojo vivo Fluye a borbotones Si forma espuma Se utiliza para gasometras arteriales

ELEMENTOS FORMES Y PLASMA Plasma: la parte lquida Elementos formes: glbulos rojos, blancos y plaquetas FRACCIN FORME DE LA SANGRE 4

45% del volumen total de la sangre, lo que se conoce como hematocrito. Debido a esto es un lquido espeso. Son los hemates, leucocitos y plaquetas. FRACCIN LQUIDA O PLASMA SANGUNEO Supone el 55% del volumen total de sangre. Lquido trasparente, de color mbar. 90% de agua. Glcidos, lpidos, protenas, electrolitos, reguladores y desechos Sin fibringeno es el suero.

SUERO Y PLASMA Suero: A partir de sangre sin anticoagulante No tiene fibringeno Plasma: A partir de sangre con anticoagulante Tiene fibringeno Composicin del plasma Agua Solutos no proteicos Protenas Albmina Globulinas Fibringeno 91,5 % 1,5 % Electrolitos (Cl-, Na+) Glucosa, lpidos, vitaminas, etc. 7% Protenas plasmticas (7 %) 55 % 40 % 4% HEMATIES, ERITROCITOS O GLBULOS ROJOS Forma de disco bicncavo y sin ncleo. Contienen hemoglobina. 4.500.000/mm3. Nacen en mdula sea y se destruyen en el SRE Vida Media de 120 das. La hemoglobina se cataboliza a bilirrubina y se elimina por la bilis. 5

LEUCOCITOS O GLBULOS BLANCOS Grandes y con ncleo. Granulocitos a agranulocitos 5.000-11.000/mm3. La frmula leucocitaria es el porcentaje de cada uno. Se forman en mdula sea y en los ganglios linfticos. Se destruyen en el SRE

TROMBOCITOS O PLAQUETAS Son fragmentos de megacariocitos. Redondas, sin ncleo y pequeas. Contienen factores de la coagulacin. 140.000-400.000/mm3. Nacen en la mdula y se destruyen por el SRE Vida media de 10 das.

CLULAS SANGUNEAS Recuento (por mm3) Glbulos rojos (hemates, eritrocitos) 5 millones Vida media 120 das Funcin Transporte O2

Plaquetas (trombocitos) Glbulos blancos (leucocitos)

150 400.000 4.000-11.000

8-10 das Variable

Hemostasia Defensa

HEMATOPOYESIS: FORMACIN DE CLULAS SANGUNEAS

Se produce en la mdula sea Todas las clulas de la sangre proceden de la clula madre hematopoytica (stem cell) Proceso muy activo Requiere muchos factores de crecimiento: eritropoyetina (EPO), trombopoyetina, citoquinas, etc

TINCIONES HEMATOLGICAS La realizacin de extensiones y tinciones es prctica habitual en el laboratorio. Pese a no realizarse a todas las muestras, al no ser considerado procedimiento de rutina, es necesario en aquellos casos en los que se detecte mediante anlisis previos alguna alteracin. La correcta realizacin, as como una buena interpretacin de lo observado, permite en muchos casos el diagnstico de hematopatas Las tinciones hematolgicas son un conjunto de procesos que conducen a la coloracin de las estructuras que componen las clulas sanguneas Tienen por objeto el aumentar el contraste entre esas estructuras y el medio que las rodea, y permite por tanto que las clulas sean visual izadas microscpicamente con mayor facilidad TIPOS DE TINCIONES Las tinciones hematolgicas pueden clasificarse segn distintos criterios: Atendiendo al nivel de vitalidad de las clulas que se pretende colorear, se dividen en tinciones vitales y no vitales. Atendiendo al momento en el que empezaron a ser utilizadas para el diagnstico hematolgico, se dividen en tinciones tradicionales y especiales TINCIONES VITALES Y NO VITALES. Las tinciones vitales y supravitales son aquellas que se practican sobre clulas que estn vivas Las Tinciones Vitales son en las que se introduce de un colorante en la circulacin de un organismo vivo. Son colorantes vitales, por ejemplo, el verde Jano y el azul de metileno 7

Las tinciones supravitales son aquellas que se realizan sobre clulas o tejidos vivos, pero que estn aislados del organismo del que proceden

LAS TINCIONES NO VITALES: Se realizan sobre clulas muertas. La coloracin de clulas muertas requiere un proceso previo de fijacin, que tiene por objeto el mantener inalterada su estructura y el adherirlas firmemente a la superficie del portaobjetos. La fijacin puede realizarse mediante calor, aunque habitualmente se realiza con etanol o metanol. TINCIONES TRADICIONALES Y ESPECIALES.

Tradicionalmente, las tinciones se han logrado mediante el uso de colorantes que con frecuencia derivan de la anilina (tinciones tradicionales o clsicas). Estos colorantes se renen en 4 grupos: Colorantes cidos: tienen una especial afinidad por las estructuras alcalinas de las clulas, como por ejemplo la hemoglobina. El principal de ellos es la eosina. Colorantes bsicos: tienen una especial afinidad por las estructuras cidas de las clulas, como por ejemplo los cidos nucleicos. Uno de ellos es el azul de metileno. Colorantes neutros: son sales de un cido y de una base coloreados. Tien el ncleo de un color y el citoplasma de otro. Uno de ellos es el eosinato de azul de metileno. Colorantes indiferentes: son los que no tienen afinidad por estructuras cidas o bsicas. Son insolubles en el agua y tien a aquellas sustancias que tienen un poder de disolucin superior al del lquido empleado para preparar la solucin colorante. Uno de ellos es el Sudn III empleado para teir las grasas.

El primero que tuvo la idea de realizar una de estas combinaciones fue Romanowsky, y los colorantes hematolgicos utilizados en la actualidad suelen derivar del que l prepar. Los colorantes de tipo Romanowsky constan de un colorante cido (eosina) y de colorantes bsicos (tiacinas). Las tiacinas son el azul de metileno y sus derivados obtenidos por desmetilacinoxidatiya (colorantes tipo azur). Las tinciones realizadas con colorantes de tipo Romanowsky, que ms frecuentemente se emplean en el diagnstico hematolgico, son la de Wright y la de Giemsa Tambin hay tinciones panpticas rpidas que producen una coloracin fcil y rpida de las estructuras celulares. Las tinciones especiales slo se usan en circunstancias especficas. Son de dos clases: Tinciones fluorescentes: emplean colorantes (fluorocromos) que se fijan a las clulas y que, cuando son estimulados por una luz ultravioleta, emiten una radiacin visible, de un color caracterstico. Los fluorocromos ms utilizados en esta clase de tinciones son el naranja de acridina y el rojo neutro. Tinciones citoquimicas: demuestran la presencia, ms o menos abundante, o la ausencia de determinadas sustancias, localizadas en el interior de los grnulos citoplasmticos de los leucocitos. Sirven para reconocer clulas leucocitarias (normales o anmalas) y, por tanto, para diferenciar unas clases de leucemias de otras. Por ejemplo, permite atribuir el origen de unas clulas leucocitarias inmaduras a la lnea granuloctica o a la monoctica. DENOMINACIN DE LAS ESTRUCTURAS COLOREADAS 8

Atendiendo a sus apetencias tintoriales, las estructuras celulares pueden nombrarse de las siguientes formas: Estructuras acidfllas u oxifilas: son aquellas que fijan colorantes de naturaleza cida. Si el colorante cido que captan es la eosina, se dice que son eosinfilas. Con las tinciones tradicionales adquieren un color rosado. Estructuras basfllas: son aquellas que fijan colorantes de naturaleza alcalina. Con las tinciones tradicionales adquieren un color azulado. Si se tien de lila o prpura con colorantes de tipo azul, se llaman azurfllas.

CAUSAS DE ERROR EN LAS TINCIONES REALIZADAS A FROTIS SANGUNEOS. Si la tincin de una extensin sangunea es demasiado rosa, probablemente esto se deba a: Un pH bajo del colorante. Un tiempo de coloracin insuficiente. Un lavado excesivamente prolongado. Si la tincin es demasiado azul, posiblemente, esto est causado por: un grosor excesivo de la extensin, o un pH alto del colorante. Una coloracin excesivamente prolongada. Un lavado insuficiente Si tras la tincin aparecen artefactos o precipitados en la extensin, probablemente esto se deba a: Un empleo de portaobjetos sucios. Una falta de filtracin del colorante. Una coloracin excesivamente prolongada. Un secado del colorante durante la tincin. Un lavado insuficiente. TINCIN GIEMSA Tincin que es capaz de discriminar entre las distintas estructuras celulares segn se tian stas con el colorante cido, con el bsico o con la mezcla de ambos. Tcnica Preparamos un frotis sanguneo segn la tcnica Colocamos el frotis en posicin horizontal. Cubrimos el frotis con metanol durante 3 minutos. Escurrimos y lo dejamos secar al aire. Con esto procedemos a fijar el frotis. Diluimos en un tubo de ensayo 0,2 ml de Giemsa con 2 ml de solucin tampn pH 7,2. Es importante realizar esta dilucin en el momento de la tincin, ya que el colorante precipita y no es vlido para otro da. Mezclamos suavemente en el tubo y con una pipeta Pasteur cubrimos el frotis con la dilucin de colorante, dejndolo actuar durante 5 min Escurrimos y lavamos con agua del grifo. Dejamos escurrir y secamos en posicin vertical. TINCIN DE WRIGHT Dada la presencia de metanol en la composicin del colorante, no es necesario un paso previo de fijacin antes de la coloracin 9

Cubrir toda la superficie de la extensin con Wright. Esperar 2 -3 minutos (el tiempo ptimo es determinado por ensayo). Agregar solucin buffer suficiente para cubrir la lmina. Soplar suavemente el extendido para mezclar hasta obtener una pelcula uniforme de apariencia metlica verdosa. Esperar 8 - 7 minutos.

FROTIS

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