Pemeriksaan Kadar Interleukin 6 (IL-6

)
Peeriksaan IL-6 hepar dilakukan dengan menggunakan metode ELISA (Enzym Linked Immunosorbent Assay ) model sandwich. Rangkaian kerjanya adalah sebagai berikut : 1. Pengambilan organ hepar terlebih dahulu, kemudian hepar tersebut disuntik dengan menggunakan PBS kemudian masukkan kedalam frezer. Kemudian timbang masing-masing hepar letakkan pada wadah 2. Haluskan hepar, setelah halus beri larutan RIPA + DMOS, setelah itu masukkan kedalam microtube kemudian di sekker. 3. Kemudian diinkubasi selama 30 menit pada suhu 4 °C

4. Sentrifuse mikrotube dengan kecepatan 12000 rpm selama 20 menit 5. Pembuatan Coating antigen IL-6 pada mikrotube dengan mencampur serum

dengan coating buffer 50 µL dengan perbandingan 1:20 tujuannya adalah untuk melekatkan antigen 6. Inkubasi 24 jam pada suhu 4 °C 7. Pencucian dengan larutan PBS-T (PBS + Tween -20) 0,2% 50 µL sebanyak 6x masing-masing 3 menit 8. Pembuatan Blocking buffer dengan menambahkan BSA 1% dalam PBS 9. Inkubasi 30 menit dalam suhu ruangan 10. Pencucian dengan larutan PBS-T (PBS + Tween -20) 0,2% 50 µL sebanyak 6x masing-masing 3menit 11. Pembuatan coatng antibody primer dengan penambahan anti IL-6 +PBS dengan perbandingan 1: 500

2% 50 µL sebanyak 6x masing-masing 3menit 17. Diukur absorbsinya pada gelombang 450 nm dengan ELISA reader . Pembuatan coating antibodi sekunder dengan penambahan Anti Rabbit IgG AP Conjugated +PBS dengan perbandingan 1:1000 15.12.2% 50 µL sebanyak 6x masing-masing 3menit 14. Stop reaction dengan HCl 1N 23. Inkubasi 1 jam pada suhu ruangan 16. Inkubasi 1 jam pada suhu ruangan 19.2% 50 µL sebanyak 6x masing-masing 3menit 20. Penambahan SA-HRP 1:8000 18. Inkubasi 30 menit pada suhu ruangan 22. Inkubsi dan disekker 2 jam pada suhu ruangan 13. Pencucian dengan larutan PBS-T (PBS + Tween -20) 0. Penambahan TMB (Toluen Metilen Blue) 21. Pencucian dengan larutan PBS-T (PBS + Tween -20) 0. Pencucian dngan larutan PBS-T (PBS + Tween -20) 0. Inkubasi 15 menit pada suhu ruangan 24.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful