GRADO DE MEDICINA. PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA MEDICA Y CLINICA.

PRIMER CICLO
DIAGNOSTICO DIRECTO DE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS

Da 1: Siembra Da 2: Da 3: Da 4:

Recogida de muestras. Medios de cultivo. Tipos de

Observacin macroscpica y microscpica de la siembra Identificacin bioqumica. Antibiograma. Lectura e interpretacin de las pruebas bioqumicas y del antibiograma Nomenclatura Bacteriana. Taxonoma Bacteriana

Da 1. Recogida de muestras. Medios de cultivo. Tipos de Siembra Recogida de muestra: Para un estudio microbiolgico, lo primero y ms importante es la recogida de una buena muestra, ya que de esto va a depender que los resultados obtenidos sean exactos. Normas generales 1. La muestra debe recogerse antes de la implantacin de una terapia de antimicrobiana. Ya que la presencia de antibitico puede falsear una posible infeccin. 2. Hay que tener en cuenta el estadio de la enfermedad, as la toma de sangre para hemocultivo debe realizarse cuando est subiendo la fiebre, ya que ste es el momento en el que hay ms posibilidad de encontrar microorganismos en sangre y en mayor cantidad. 3. En algunas muestras se necesita la colaboracin activa del paciente , por ej. Esputo. 4. La muestra debe tomarse en cantidad suficiente y ser representativa de la lesin. 5. Debe ir acompaada de una orientacin clnica, para realizar el procesamiento adecuado en cada caso. 6. La rapidez de la entrega de la muestra al laboratorio es fundamental, ya que algunos microorganismos son muy sensibles y puede que mueran o sean enmascarados antes de ser procesadas la muestra. Ej. Shigella es inhibida en poco tiempo por el resto de la flora intestinal. 7. Rotulacin de la muestra para evitar errores en la manipulacin. Supervisin del mdico !!

Normas especiales Dependen del tipo de muestra. LCR: Debe ser enviado inmediatamente al laboratorio, sobre todo si se sospecha una meningitis meningoccica, ya que ste germen tiende a lisarse. Incubacin a 37C hasta su cultivo, igual que la sangre. Orina: Miccin espontnea. Debe recogerse la primera de la maana, despus de un lavado de los genitales para evitar la contaminacin con grmenes que constituyen la flora normal de piel. Debe desecharse la primera porcin de la miccin, as eliminamos los grmenes que podran encontrarse en uretra y que daran lugar a resultados errneos. La orina debe enviarse rpidamente al laboratorio ya que, al ser un excelente medio de cultivo, los microorganismos como por ejemplo E. coli se pueden multiplicar rpidamente, y para cuando la muestra vaya a ser procesada haber alcanzado una concentracin en orina compatible con la aceptada para el diagnstico de infeccin del tracto urinario ( 105 unidades formadoras de colonias/ml), cuando en el momento de la recogida de la muestra la concentracin era muy inferior a esta cifra. En caso de que no pueda ser enviada al laboratorio inmediatamente, mantener a 4 C, pues a esta temperatura las bacterias no se multiplican . Medios de cultivo Se denomina medio de cultivo a todos aquellos sustratos slidos, lquidos o semislidos que favorecen y permiten el desarrollo de los microorganismos en el laboratorio. Composicin

1. Elementos bsicos: Carbono. Normalmente lo proporcionan los azcares. Hidrgeno y oxgeno. Nitrgeno. Lo proporcionan las peptonas y aminocidos 2. Oligoelementos. Son el Na, K, Fe, Mg, Mn, etc. que se administran al medio en forma de sales. ClNa acta regulando la presin osmtica. Extracto de carne. Constituye una de las bases ms importantes del medio de cultivo por su riqueza nutritiva. Extractos de levadura. Es un factor de crecimiento importante para la mayora de los microorganismos incluso para los ms exigentes. Clasificacin 1. Segn su estado fsico: Medios lquidos: Favorecen el crecimiento de microorganismos pero no pueden utilizarse para el aislamiento de grmenes y la obtencin de colonias, sino para observar el tipo de respiracin; aerobios estrictos, anaerobios estrictos, microaerfilos y anaerobios facultativos. Medios slidos: Llevan en su composicin una sustancia solidificante que es el agar. Es una sustancia polisacardica, obtenida de algas marinas y cuya propiedad fundamental es la de formar gel. La gelatina tambin es una sustancia solidificante, en este caso de naturaleza proteica, pero tiene el inconveniente de que algunos grmenes actan sobre ella licundola por la accin de enzimas proteolticos producidos por los mismos.

Las sustancias solidificantes se aaden al medio en una proporcin del 1-2%. 2. Segn el crecimiento bacteriano que permitan. Medios enriquecidos. Son aquellos que contienen una serie de sustancias que favorecen el crecimiento de todos los microorganismos: Columbia. Medios de enriquecimiento. Son aquellos que llevan un sustrato determinado para favorecer el crecimiento de determinados microorganismos: Caldo Selenito. Medios selectivos y diferenciales. Son aquellos que llevan sustancias inhibitorias que impiden el crecimiento de determinados microorganismos. Ej. Levine, MacConkey. Muestras que se van a procesar en las prcticas: ORINA FROTIS NASAL Medios que se usan en la prctica. COLUMBIA: Est compuesto de extracto de carne, extracto de levadura, peptonas, glucosa, NaCl y sangre (sta favorece el crecimiento de microorganismos. Patgenos para el hombre). MACCONKEY: En su composicin hay sales biliares y violeta de genciana (inhibidores del crecimiento de los microorganismos Gram positivos), por lo que es un medio selectivo, pero tambin es un medio diferencial (permite conocer si las bacterias que crecen son capaces de fermentar o no la lactosa por el tipo de colonia que

presenten, los fermentadores de lactosa dan colonias de color rosa y los no fermentadores dan colonias no coloreadas). TIOGLICOLATO: Medio semislido compuesto de Cistina (aminocido azufrado que acta con funcin reductora) tioglicolato, agar y resazurina que se colorea de rosa en presencia de oxgeno. Este medio sirve para conocer si los microorganismos son estrictos, anaerobios estrictos, microaerfilos o facultativos. Inoculacin o Siembra: ORINA: Se inocularn los medios de cultivo rotulados con nmero impar.
*

aerobios anaerobios

Tioglicolato: Recoger una gota con el asa previamente esterilizada en la llama del mechero, e introducir en el tubo hasta el fondo y sacarlo. Flamear la boca del tubo antes y despus de introducir el asa. Columbia: Depositar una gota de orina recogida con el asa sobre el centro de la superficie del medio. Realizar una siembra en tapiz que permitir valorar la concentracin de bacterias que existe en la orina. MacConkey: Depositar una gota de orina recogida con el asa sobre un extremo de la superficie del medio. Hacer estras muy juntas sobre la superficie, hasta haber cubierto aproximadamente un tercio de la superficie. Volver a esterilizar el asa y tocando las ltimas estras comenzar a hacer estras en otra direccin y ms separadas entre s, con objeto de obtener colonias aisladas. Este tipo de siembra se denomina siembra por agotamiento o en aislamiento.

FROTIS NASAL: se inocularn los medios rotulados con nmero par.

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Tioglicolato: Una vez tomada la muestra con la torunda, introducirla en el tubo hasta el fondo y sacarla. Flamear la boca del tubo antes y despus de introducir la torunda. Columbia: En el borde de la placa, hacer la inoculacin con la torunda, haciendo estras muy juntas hasta cubrir aproximadamente un tercio de su superficie. A partir de este punto y con el asa previamente esterilizada y enfriada continuar la siembra, tocando las ltimas estra y realizando estras en otra direccin ms separadas (siembra por agotamiento).

TODOS LOS MEDIOS DE CULTIVO SERN INCUBADOS EN LA ESTUFA A 35C DURANTE 24 HORAS.

DIA

2.

Observacin

macroscpica

microscpica

de

la

siembra Observacin macroscpica Medios slidos: Especificar tipos de colonias, color, brillo, hemlisis, bordes, dimetro... En el caso del medio de Columbia sembrado en recuento correspondiente a la muestra de orina hacer una estimacin de la concentracin de bacterias en la muestra suponiendo que hubisemos inoculado 10 l. Tioglicolato: Especificar formas de crecimiento y tipos de respiracin. Observacin microscpica: Tinciones Tincin de Gram Esta tincin nos sirve para clasificar a los microorganismos en dos grandes grupos, Gram positivos y Gram negativos. A la vez podemos observar la forma de las bacterias: cocos, bacilos, etc. y cmo se agrupan: parejas, cadenas, etc. Fundamento: La tincin permite dividir las bacterias en dos grandes grupos, Gram positivas y Gram negativas. Se cree que la diferencia de espesor, la concentracin de cargas y la composicin qumica de la pared celular, son las responsables de la coloracin final con la que permanecen las bacterias teidas por este mtodo. Las bacterias Gram positivas permiten que un colorante bsico (violeta de genciana) se una a las estructuras de la pared, la membrana y el citoplasma; esta unin se refuerza con la adicin de lugol. La accin decolorante del alcohol, se ve impedida por las caractersticas de la pared celular antes mencionadas de forma que la bacteria permanece teida con el colorante inicial; la adicin de un

segundo colorante (safranina) no modifica dicha coloracin y la bacteria se observar con una tonalidad azul-violeta. En las bacterias Gram negativas, el alcohol arrastra al colorante inicial (por la distinta naturaleza de la pared celular) de manera que la adicin de safranina tie finalmente la bacteria de color rojo. Tcnica. Suspensin Extensin Fijacin. Para que las protenas queden fijadas al porta pasaremos el porta tres veces por la llama del mechero (fijacin con calor). Dejar enfriar antes de teir. Cubrir el porta con Violeta de genciana y dejar actuar 1 min. Lavar con agua. Lugol. Acta de mordiente formando un complejo con el violeta de genciana que hace que se fije al colorante. 30 seg. Lavar con agua. Decolorar con alcohol. 10-15 seg. Lavar con agua para impedir que el alcohol siga ejerciendo su accin. Safranina. Colorante de contraste. 1 min. Lavar con agua. Secar. Observar al microscopio con objetivo de inmersin.

Tincin de Ziehl-Neelsen Esta tincin se utiliza para diagnstico de BAAR (Bacilos cido alcohol resistentes) como Mycobacterium tuberculosis. Fundamento. Estos microorganismos poseen en su membrana cidos miclicos, lo que determina que sean muy difciles de teir, pero una

vez teidos es muy difcil decolorarlos, de forma que resisten a la accin decolorante de la mezcla de cido clorhdrico y etanol. Tcnica Suspensin Extensin Fijacin Fuchina bsica. Calentar hasta la emisin de vapores durante 6 minutos (3 veces) con lo cual se favorece la penetracin del colorante a travs de la cubierta crea de estos microorganismos. Dejar enfriar Decolorar con etanol- cido clorhdrico Lavar con agua Azul de metileno 1 minuto (colorante de contraste) Lavar con agua Secar. Observar al microscopio con el objetivo de inmersin Los BAAR se observan de color rojo sobre un fondo azul. Esta tincin no la realizaremos en prcticas pero podremos observar extensiones con BAAR al final de la prctica.

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DIA 3. Identificacin bioqumica. Antibiograma. La identificacin bioqumica debe hacerse partiendo de un cultivo puro o colonias perfectamente aisladas. Tras observar la morfologa de las colonias, el tipo de crecimiento en medio lquido, la morfologa bacteriana y la tincin de Gram, se procede a la identificacin empleando diversas pruebas bioqumicas. Pruebas para cocos Gram positivos (frotis nasal): Catalasa Coagulasa

Pruebas para bacilos Gram negativos (orina): TSI Urea

Prueba de catalasa: Los microorganismos que tienen la enzima catalasa descomponen el agua oxigenada en agua y oxgeno. Al depositar sobre una colonia bacteriana (de un medio sin sangre) una gota de agua oxigenada se observarn burbujas (de oxgeno) si la bacteria produce catalasa. Prueba de coagulasa: La coagulasa es una enzima que tiene la facultad de coagular las protenas sricas del plasma. Se utiliza para la identificacin de estafilococos. Composicin del medio: Infusin cerebro-corazn, TSA, manitol, prpura de bromocresol y suero humano. Forma de siembra: Tomar una colonia y hacer una estra radial en la placa.

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Lectura: Los microorganismos que son coagulasa y manitol positivos dan un cerco amarillo con precipitado. Los que fermentan el manitol pero son coagulasa negativos dan un halo amarillo pero no precipitado. Los que no fermentan manitol y son coagulasa negativos, no producen ni halo ni precipitado. TSI (Triple Sugar Iron): Composicin: tres azcares Glucosa (al 0.1%), Lactosa (al 1%) y Sacarosa (al 1%). ms sulfato ferroso, tiosulfato sdico y rojo fenol como indicador. pH cido color amarillo; pH bsico color rojo. Los microorganismos que fermentan la glucosa amarillean el medio slo en la base, ya que la produccin de cido es limitada, al ser la concentracin de glucosa en el medio muy baja. Los que adems fermentan los otros azcares lo amarillean tanto en la base como en el pico. Los no fermentadores hacen que el medio se vuelva ms rojo. Tambin se puede observar la produccin de gas que se manifiesta por la formacin de burbujas en el medio y la produccin de SH 2 a partir del tiosulfato a sulfhdrico y luego sulfuro ferroso que es de color negro. Forma de siembra: Tomar una colonia aislada con un asa, pinchar el medio alcanzando la parte inferior del mismo; sacar el asa e inocular la superficie de la lengeta. Prueba de la ureasa: La ureasa es una enzima que desdobla la urea produciendo amonaco. Esta sustancia de naturaleza bsica eleva el pH del medio haciendo virar el color del indicador de pH. Composicin: medio base, agar, urea y rojo fenol. Forma de siembra: Extender la colonia sobre la lengeta del medio.

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Interpretacin: Rosa ureasa positivo. Amarillo ureasa negativo.

Antibiograma El antibiograma es el mtodo usual para determinar la sensibilidad in vitro de un microorganismo frente a los antimicrobianos. El estudio de la sensibilidad antimicrobiana de las bacterias es necesario porque el espectro de actividad de los antimicrobianos es limitado y las bacterias tienen capacidad para desarrollar resistencia. Para ello es necesario conocer los conceptos concentracin mnima inhibitoria (CMI), que es la menor concentracin de antimicrobiano capaz de impedir el crecimiento de un microorganismo en unas condiciones normalizadas, y concentracin mnima bactericida (CMB) que es la menor concentracin de antimicrobiano capaz de destruir el 99,9% de una muestra inoculada en unas condiciones normalizadas.

El estudio de la CMI es el que se realiza de forma habitual en los laboratorios de microbiologa. Para llevarlo a cabo se utilizan procedimientos de referencia y cepas control que proporcionan a estos mtodos unos resultados reproducibles, comparables y que permiten clasificar los microorganismos en diferentes categoras: a) sensible: Cuando la CMI de un antibitico para una bacteria se puede conseguir in vivo con dosis teraputicas y la experiencia ha demostrado su eficacia b) resistente: Cuando el microorganismo no es inhibido por las concentraciones que normalmente se pueden obtener. c) intermedio: Cuando las bacterias se inhiben a concentraciones que no se alcanzan con dosis teraputicas,

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pero que pueden alcanzarse con dosis ms altas sin que sean txicas cuando el antibitico se encuentra a altas concentraciones en el lugar de la infeccin, generalmente en las vas de eliminacin. El medio de cultivo en el que se realizan la mayora de los antibiogramas (excepto para bacterias exigentes) es el medio Muller-Hinton (extracto de carne, aminocidos y almidn . Este medio se puede usar en estado lquido o slido. Mtodos 1.- Difusin en agar, que se puede realizar: a) disco-placa. Con este sistema se puede probar la eficacia de varios antimicrobianos al mismo tiempo realizando una siembra de una suspensin bacteriana, con un inculo normalizado sobre la superficie de un medio slido, colocando sobre la misma discos de papel impregnados de una cantidad conocida de antibitico. difunden Por y se el agua crea un del medio los de antimicrobianos gradiente

concentraciones decrecientes a medida que nos alejamos del disco. Tras un periodo de incubacin se obtiene, alrededor del disco, una zona de inhibicin del crecimiento bacteriano. La valoracin del halo se hace por patrones obtenidos de forma que se hayan correlacionado la CMI, el dimetro del halo de inhibicin y la carga del antibitico del disco. Los resultados se expresan en trminos de categora clnica (S, I, R). Es un mtodo sencillo y til para determinar la sensibilidad de microorganismos de crecimiento rpido, no se debe usar en bacterias de crecimiento lento y anaerobios. Es el mtodo que vamos a utilizar en las prcticas. b) test epsilon (E test). Es un mtodo que utiliza tiras de plstico que contienen un gradiente de antibitico para la

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determinacin cuantitativa de la sensibilidad o resistencia de los microorganismos. El fundamento es el mismo que el del mtodo disco-placa. Es una tcnica sencilla que puede ser utilizada en la mayora de los microorganismos (aerobios, anaerobios y levaduras). 2. Dilucin. Son los mtodos cuantitativos de referencia para determinar la sensibilidad y resistencia de las bacterias. Consiste en determinar el crecimiento de una bacteria en presencia de concentraciones crecientes de un antibitico. Se pueden realizar en medio slido o lquido; este ltimo en forma de macrodilucin en tubo o microdilucin en placas de plstico con mltiples pocillos. En los medios lquidos, cuando las bacterias se multiplican aparece turbidez, pero cuando el antibitico inhibe el crecimiento el medio no se vuelve turbio; la dilucin del antibitico correspondiente al primer tubo o pocillo en que no existe crecimiento es la CMI. A partir de los tubos, donde no hay crecimiento se puede determinar la CMB, resembrando el contenido de estos tubos sobre un medio de cultivo y observando si existe o no desarrollo de colonias. Mtodos mecanizados y automatizados La introduccin de estos sistemas ha relegado a los mtodos anteriores en el uso cotidiano del laboratorio de microbiologa. La mayora emplea sistemas de microdilucin y la lectura se hace determinado el crecimiento bacteriano por espectrofotometra y nefelometra. La lectura se realiza de forma automtica o semiautomtica y puede ofrecer la informacin en forma de CMI o definir si la bacteria es sensible, resistente o intermedia. En todos estos sistemas la interpretacin de los resultados la realiza un ordenador que llevan incorporado. La determinacin de la sensibilidad de bacterias como micobacterias, treponemas, clamidias, micoplasmas y rickettsias, por tratarse de

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microorganismos con unas caractersticas muy especiales, requieren tcnicas complejas. Tcnica de difusin con discos a realizar en prcticas: Se prepara una suspensin bacteriana con una turbidez equivalente al 0,5 de McFarland en solucin salina. Se introduce una torunda en dicha suspensin y con la torunda se hace una siembra en tapiz en la superficie del medio. Sobre ella se colocan los discos de antibiticos, que llevan una carga determinada. Se incuba a 37 C durante 18-24 horas. Haremos un antibiograma al bacilo Gram negativo y otro al coco Gram positivo. Lectura e interpretacin del antibiograma: Con una regla milimetrada se miden los dimetros de los halos de inhibicin que aparezcan alrededor de los discos de antimicrobianos. Los resultados se comparan con unas tablas en las que se correlacionan dimetros de halo con categoras clnicas (S, I, R).

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DIA

4.

Lectura

interpretacin

de

las

pruebas

de

identificacin bioqumica y Antibiograma. NOMENCLATURA BACTERIANA. TAXONOMIA BACTERIANA

TAXONOMIA BACTERIANA

La taxonoma se define como la ciencia de la clasificacin biolgica. En principio se utiliz una clasificacin filogentica pero se abandon por la dificultad de establecer relaciones evolutivas. La taxonoma microbiana se encuentra actualmente en un proceso de cambio continuo, debido a la aplicacin de tcnicas de anlisis molecular para el estudio de de clasificacin. Se han utilizado distintos enfoques: 1. Enfoque clsico: Se valoran caractersticas estructurales y morfolgicas (forma celular, movilidad, flagelos, esporas...) Estas son ms estables e independientes del medio externo que las caractersticas fisiolgicas y bioqumicas por lo que tienen ms peso a la hora de clasificar los microorganismos. 2. Enfoque Adamsoniano: Es una taxonoma numrica en la que todas las caractersticas tienen la misma importancia. Requiere el uso de ordenadores. 3. Enfoque gentico o molecular: Las caractersticas fenotpicas son expresin de un gran nmero de genes, que son el ADN. Estudiando este, se pueden clasificar los microorganismos ms correctamente. Se estudian tambin diversas propiedades: a. Composicin de bases del ADN: ndice G + C los microorganismos que aportan nueva y abundante informacin que permite la definicin de nuevos criterios

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b. Porcentaje de hibridacin de los cidos nucleicos de dos o ms microorganismos. c. Secuenciacin. NOMENCLATURA BACTERIANA. Consiste en la asignacin de nombres a los grupos taxonmicos. A cada especie se le asigna un primer nombre que se refiere al gnero. Suele ser una palabra latina o latinizada basada en la morfologa del microorganismo, el nombre del descubridor u otro carcter diferencial. Se escribe con maysculas. El segundo trmino es el de la especie y suele ser un adjetivo descriptivo del mismo, que se refiere al color, produccin de enfermedad, descubridor... Se escribe con minsculas. Tanto el gnero como la especie se escriben en cursiva subrayado. Ej. Bacillus anthracis. Bacillus: Bacilo Anthracis: ntrax (carbunco) Shigella: Shiga (cientfico japons descubridor) La nomenclatura viene regulada por el International Committee on Systematic and Evolutionary Bacteriology (ICSB) a travs del International Code on Nomenclature of Bacteria (ICNB). La lista aprobada de denominaciones bacterianas se publica y actualiza peridicamente Systematic desde 1980 en el International en su Journal List of of Bacteriology (IJSB), Approbed

Bacterial Names. El Manual Bergey es un tratado que se ocupa de la identificacin y clasificacin de las bacterias. Su reconocimiento y prestigio mundial lo han convertido en la referencia y consulta obligada de todos los microbilogos interesados en taxonoma e identificacin.

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Bergeys Manual En 1923, David Bergey, catedrtico de bacteriologa en la

Universidad de Pennsylvania, y cuatro colaboradores ms, publicaron un manual sobre caractersticas de las bacterias de inters mdico conocidas hasta entonces, que poda utilizarse para la identificacin bacteriana. Este manual, el Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, ha sido utilizado en muchos laboratorios de Microbiologa de todo el mundo y ha ido actualizndose a lo largo de los aos, hasta que apareci la novena y ltima edicin en 1994. En 1984, se public la primera edicin de un manual enfocado ms a la clasificacin que a la identificacin: el Bergey's Manual of Systematic Bacteriology. Esta publicacin volmenes. La clasificacin propuesta por esta primera edicin del Bergey's Manual of Systematic Bacteriology est basada en la tincin de Gram. As, agrupa a todas las bacterias en un solo Reino: el Procaryotae, en el que se reconocen cuatro divisiones: Gracilicutes (procariotas, con pared celular fina, gramnegativas), Firmicutes (procariotas, con pared celular gruesa, grampositivas), Tenericutes (procariotas, sin pared celular) y Mendosicutes (procariotas filogenticamente anteriores a las divisiones mencionadas, como las arquebacterias y otras). Ha habido un progreso considerable en el campo de la taxonoma bacteriana desde 1984, el ao de la publicacin del primer volumen del Bergey's Manual of Systematic and Bacteriology. El nmero de especies nombrada se ha duplicado, y hay ms de 200 nuevos gneros descritos. En particular, el anlisis del rRNA, del DNA y de las protenas, ha hecho posible el anlisis filogentico de las bacterias. A consecuencia de ello, la segunda edicin del Bergey's constaba de cuatro

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Manual

of

Systematic

Bacteriology

es

fundamentalmente

filogentica en vez de fenotpica, y por consiguiente, muy diferente de la primera edicin. En 2001 apareci el primero de los cinco volmenes de la segunda edicin del Bergey's Manualof Systematic Bacteriology. En 2005 se public el volumen 2 y en 2009 se public el volumen 3. Los volmenes 4 y 5 estn previstos para este ao 2010. A diferencia de la primera edicin, la clasificacin de los procariotas se estructura en dos dominios, Archaea y Bacteria. Nuestro inters se centra en el Dominio Bacteria que posee un total de 25 Phylum. Aunque la edicin completa no est disponible, conocemos la organizacin de su estructura, que se puede consultar en la pgina web http://www.bergeys.org . Es la siguiente: Volumen I: Trata del dominio Archaea en su totalidad y de algunas bacterias Gram negativas especiales, como las Cianobacterias. En este volumen no hay casi ninguna bacteria de importancia clnica. Volumen II: Proteobacterias, bacterias Gram negativas. Dividido en cinco secciones (alfa, beta, delta, gamma y psilon proteobacterias), el reino Proteobacteria agrupa a la mayor parte de las bacterias Gram negativas de importancia clnica. Neisseria, Brucella, Legionella, Pseudomonas, Haemophilus, pertenecen a este reino. Volumen III: Campylobacter y Enterobacterias,

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Trat sobre los Firmicutes, grupo de Gram positivos con bajo contenido en G+C. Aqu estn gneros como Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, Clostridium y Bacillus Volumen IV: Contendr una sola seccin que agrupar a todos los Gram positivos con alto contenido en G+C Los gneros ms conocidos de este volumen son Mycobacterium y Corynebacterium. El Volumen V: Trata de otras bacterias Gram negativas (Actinobacterias), agrupadas en ocho secciones diferentes. No tienen ningn factor en comn. Los gneros ms importantes desde el punto de vista clnico son Chlamydia, Treponema, Borrelia y Bacteroides El ltimo ndice taxonmico publicado de la clasificacin de bacterias se actualiza peridicamente y est disponible en la pgina web del Manual Bergey: http://www.bergeys.org (Taxonomics outlines Release 5.0 May 2004) Tambin en la pgina http://www.catalogueoflife.org se puede ver la clasificacin taxonmica actualizada de todos los seres vivos, incluso de virus.

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OBSERVACIONES DEL ALUMNO: Da 1.

22

Da 2.

23

Da 3.

24

Da 4.

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IMAGENES RELACIONADAS CON EL PRIMER CICLO DE PRCTICAS DE MICROBIOLOGA MDICA

Esterilizacin del asa mediante flameado

Inoculacin de medio de cultivo slido

Siembra en tapiz, csped o recuento

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Inicio siembra Esterilizar el asa

Siembra en aislamiento o por agotamiento

Tipos de crecimiento en Tioglicolato: Aerobio estricto Anaerobio facultativo Anaerobio facultativo Anaerobio estricto

Crecimiento de bacilos gram negativos en Agar MacConkey: Colonias rosa: fermentador de lactosa Colonias sin color: no fermentador de lactosa

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Pasos de la tincin de Gram

Prueba de la Ureasa

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Distintos tipos de T.S.I.: Medio sin inocular No fermentador Lactosa neg. SH2 neg. Gas neg. Lactosa neg. SH2 pos. Gas neg. Antibiograma mediante la Lactosa pos. SH2 de neg. Gas pos. tcnica difusin con discos

Galeras comerciales para identificacin bioqumica de bacterias

Prueba de la catalasa

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Antibiograma mediante tcnica de dilucin en caldo. Determinacin de la Concentracin mnima inhibitoria (CMI)

Lectura de los halos de inhibicin en la difusin con discos

Epsilon- test

Elipse de inhibicin alrededor de tira de E-test

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