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EVALUACION DE ADITIVO ALIMENTICIO SOBRE LA RESPUESTA INMUNE INNATA DE TRUCHA ARCOIRIS SOMETIDA A UN DESAFIO CON VIRUS IPN.

Daz-Ojeda D., Valencia-Rivera L., Mandiola-Quililongo C.,Escobar-Fica J. Laboratorio Qumica Biolgica, Pontifica Universidad Catlica de Valparaso.

INTRODUCCIN La industria acuicultora chilena, cubre el 38% del mercado mundial de las exportaciones de S.salar y O. mykiss. Estos peces estn sometidos a diversas condiciones de estrs, lo cual impacta negativamente en el sistema inmune, hacindolos susceptibles a enfermedades como Necrosis Pancretica Infecciosa (IPN) , lo que se traduce en un baja del rendimiento productivo. La presente investigacin busca evaluar un aditivo alimenticio que mejore la respuesta inmune innata de O. kykiss infectados con IPN, determinando los niveles de expresin de biomarcadores: IFN-1, IFN- , Mx, IL-1 e IL-8, en rganos asociados a la respuesta inmune innata: Rin anterior (RA) y bazo. METODOLOGA DE TRABAJO
Peces y muestras Los peces fueron divididos en tres grupos. El primero de ellos es Grupo Control, consistente en 60 peces, sin sntomas de infeccin por IPNv y con alimentacin normal sin aditivos. En el segundo grupo (t0), los peces fueron dispuestos en 3 tanques individuales, teniendo 20 peces de estudio por estanque. Las dietas utilizadas son 0,02%, 0,04%, 0,08% de aditivo denominada A1, A2, A3. Diseo experimental

RESULTADOS

El desafo biolgico al cual fueron sometidos los peces de cada grupo fue realizado mediante cohabitacin con un pez vector infectado con IPNv. Las muestras fueron tomadas cuando el 50% de los peces mueren. Los peces fueron sacrificados 60 das despus de comenzado el proceso de alimentacin con las dietas. El RA y bazo fueron diseccionados en BioMar Chile S.A y preservados en 1 ml de RNAlater Solution (Ambion) o 1 ml de una solucin de Chomckzinsky (Winkler)

Los resultados expresan los niveles de expresin relativos de cada gen en estudio, respecto a lo expresado por el grupo control.
* p > 0,05

RT-qPCR One Step


La extraccin del ARN total fue llevada a cabo mediante el protocolo descrito por Chomczynski y Sacchi. El RT-qPCR se realiz utilizando el kit LightCycler RNA Master SYBR Green I (Roche) en el equipo LightCycler System (Roche). El programa seguido fue: Retrotranscripcin, 55C (10min), Denaturacin 95C (30s). Amplificacin (45ciclos): 95C (10s) , 59C (10s) para IL-8/IL-1, 63C (10s) para IFN-1/IFN-, 73C (10s) para Mx y elongacin a 72C (10s). Se cargaron 500ng de ARN total.

CUADRO RESUMEN

CONCLUSIONES
Por las grandes variaciones en la expresin de Los peces sometidos a la dieta A3, son los que presentan un comportamiento similar al control a los biomarcadores en R.A, en este rgano es los 60 das, lo que puede evidenciar algn tipo de posible evidenciar de mejor manera la efecto temprano del aditivo sobre el sistema respuesta innume innata en O.mykiss frente a inmune innato desafo por IPNv. A los 60 das, los peces de la dieta A1 y A2 producen las mayores variaciones en la expresin de los biomarcadores estudiados. El uso de la ms alta concentracin de aditivo (A3), evidencia una mejor respuesta a los 60 dias, puesto que los niveles de expresin de los biomarcadores propuestos, se asemejan a los niveles expresados por grupo control.

PROYECCIONES
Realizar tomas de muestras a intervalos de tiempos regulares durante el transcurso de la infeccin por IPNv, con el objeto de estudiar el comportamiento de la expresin de los genes utilizados en el presente estudio. Evaluar la posibilidad de hacer estudios sobre otras molculas inmunes, no solo aquellas relacionadas con la inmunidad innata, sino incluyendo aquellas que tengan relacin con las funciones inmunes adaptativas en salmnidos.