INTRODUCCION A LA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION MOLECULAR UV/VIS Y DE INFRARROJO CERCANO

Cap. 13

Medición de la absorbancia y la transmitancia
• Recipiente produce pérdidas por:
– reflexión (aire/pared, pared/solución) – dispersión (moléculas grandes) – absorción (paredes recipiente)

Comparar potencias de recipiente de muestra con recipiente conteniendo disolvente (blanco).

Ley de Beer

Potencia radiante Es la energia (joules) de la radiacion incidente en el detector. . por m2 y por segundo. La potencia del haz se atenua de Po hasta P por la interacción entre los fotones y las partículas absorbentes.

Transmitancia Es la fraccion de radiacion incidente transmitida por la solucion. P T Po P %T  x 100 PO .

Absorbancia PO A   log 10T  log P A  abc .

y a la concentración c de la especie absorbente. A  abc Donde a es la absortividad (constante de proporcionalidad).Absortividad y absortividad molar • La absorbancia es directamente proporcional a la longitud b de la trayectoria a traves de la solución. .

• La magnitud de a depende de las unidades para b y c. • Si b esta en cm y c en mol/l. la absortividad se denomina absortividad molar. e (L mol-1 cm-1 ) A  ebc . Si b esta en cm y c en g/L. a esta en L g-1 cm-1.

An Atotal  e 1bc1  e 2bc 2  . 2. ….enbcn Donde 1..Aplicación de la ley de Beer a mezclas • Suponiendo que no haya interacción entre las distintas especies: Atotal  A1  A2  .. .. y n son los componentes absorbentes..

Limitaciones de la ley de Beer La ley de Beer solo describe absorcion en soluciones diluidas – A concentraciones > 0. alterando capacidad de absorber radiacion de determinada l – Interaccion ocurre tambien a bajas concentraciones de moleculas absorbentes pero a alta concentracion de otras especies (electrolitos) .01M la distancia promedio entre las moleculas absorbentes hace que cada molecula interactue con las moleculas vecinas.

Algunos iones o moléculas orgánicas de gran tamano no cumplen estrictamente la Ley de Beer aun en soluciones diluidas. . Los cambios de concentración no deben causar alteraciones significativas en el h de la solución.

Desviaciones de la ley de Beer • Desviaciones químicas – Ocurren cuando un analito se disocia. asocia o reacciona con el disolvente. – Indicadores ácido-base  H  In HIn  color2 color1   . resultando en un producto con espectro de absorción diferente.

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• A medida que aumente la diferencia entre las absortividades molares para las distintas longitudes de onda. .• Desviaciones instrumentales con radiaciones policromáticas “El cumplimiento estricto de la ley de Beer solo se da con radiaciones monocromáticas” • Los dispositivos seleccionadores originan una banda simétrica de longitudes de onda en torno al valor deseado. las desviaciones son mayores.

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. Se obtienen absorbancias menores a las teóricas.• Desviaciones instrumentales en presencia de luz parásita Radiación proveniente del dispositivo seleccionador esta contaminada con radiación dispersada o parasita (por dispersión y reflexión en superficies interiores del aparato).

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0.5 y 0. • Rendija: dos piezas de metal con bordes afilados. paralelos y en el mismo plano.1 mm (milímetro) se refiere a la anchura del dispositivo mecánico (rendija) que limita la cantidad de luz o radiación que llega a la muestra.Efecto de la anchura de la rendija en las mediciones de absorbancia • Anchura de la rendija: 1. .0.

• Para conseguir espectros complejos bien resueltos se requieren anchuras de rendija estrechas.1 mm Anchura de rendija = 0.0 mm . Anchura de rendija = 0.5 mm Anchura de rendija = 1.

Ejemplo: 0.• Ancho de banda: se define como el espacio de ajuste del monocromador necesario para mover la imagen de la rendija de entrada a través de la rendija de salida. 9.5 nm. • Se expresa en unidades de λ. 20 nm. .0 nm.

. • También se expresa en unidades de λ. 20 nm. Ejemplo: 0. 9.5 nm.• Anchura de banda efectiva: es la mitad de la anchura de banda cuando las dos anchuras de las rendijas son iguales. se aprecia que es el intervalo de longitudes de onda que salen del monocromador para un ajuste dado de longitud de onda.0 nm.

.  A menor ancho de rendija menor anchura de banda efectiva. A menor anchura de banda efectiva mayor resolución espectral.

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Instrumentación .

hay de haz simple y de doble haz. son sencillos y económicos.• Fotómetros: utlizan filtros como selectores de λ. .

Fotómetros • Sencillos • Económicos • Filtros (cada uno para distinta región del espectro: sol roja. filtro verde…) • Buena relacion senñal/ruido • Cuando la pureza espectral no es importante • Uno y doble haces .

3000 • UV/VIS (190 o 210 – 800 o 1000) – – – – Lamparas intercambiables W / H2 Tubos fotomultiplicadores Redes de dispersión $2000 – 8000 un haz.Espectrofotómetros • Región visible (380-800 nm) – – – – – – Sencillos Un haz Monocromador de red Análisis cuantitativo Spectronic 20 $1000 . $4000 – 15000 doble haz .

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Haz sencillo .

Doble haz en el espacio .

Dole haz en el tiempo .

KBr. y vis e IR  Vidrios de silicato o plástico 350-2000nm  NaCl. requieren de recipientes para las muestras: celdas o cubetas.  Cuarzo o sílice fundida • • • UV (<350 nm). TlBr o Tll cristalinos IR .RECIPIENTES PARA MUESTRAS  Todos los instrumentos espectroscopicos a exepción de los de emision.

 Calibrar cubetas para detedctar diferencias por rayaduras y desgaste  0.1-10 cm (1 cm + común)  Planas (perpendiculares al haz) mejores que cilíndricas (minimizan pérdidas por reflexión)  Limpieza • • • Eliminar huellas dactilares. grasa y otras manchas Limpiar antes y despues superficie externa con papel para lentes empapado con MeOH grado espectrométrico No tocar ventanas .

• • FUENTES DE RADIACION Continua Potencia no debe variar en el intervalo de l  Lámpara de D2 o H2 • Espectro continuo de radiación de 160-375 nm D2  Ee  D2*  D' D' 'hv E 2  ED 2*  ED' ED' 'hv  La suma de las energías cinéticas (ED’ y ED’’) pueden variar desde 0 hasta ED2* (energía cuantizada fija del D2*). ”La frecuencia del fotón puede variar de forma continua.” .

La lámpara de deuterio produce una esfera de radiación algo más grande e intensa (> 1 a 1. .• • Deben tener ventanas de cuarzo (el vidrio absorbe fuertemente las l menores a 350 nm).5 mm de diámetro) que el hidrógeno.

también en región UV. . mayor vida. Tungsteno/halógeno mas eficientes. Control estricto del voltaje. LAMPARAS DE FILAMENTO DE W • 350-2500nm • Límite inferior impuesto por cubierta de • • vidrio que aloja filamento.

cirrosis hepática. . enfermedades renales.1 molar aforando en un balón de 100 ml. que se administra en casos de hipertensión. peso molecular 330. es un diurético. etc.PROBLEMA: La furosemida.7 g/mol. Se analizó la cantidad de furosemida en una tableta disolviendo su contenido en disolución de NaOH 0. derivado del ácido antranílico.0 cm. Un volumen de 1. dando una absorbancia de 0. En disolución alcalina presenta en espectro de absorción UV/VIS con máximo de absorción centrado en 271 nm.475 en una cubeta de 1.0 ml de esta disolución se transfirió a un balón de 50 y se midió en un espectrofotómetro UV/VIS a 271 nm.

•Obtener la ecuación de la curva de calibración concentración versus absorbancia. . •Determinar la cantidad de fármaco presente en la tableta expresada en miligramos.0 cm. •Determinar la absortividad molar de la furosemida en las condiciones dadas. y se midieron a la misma longitud de onda en una cubeta de 1. •El porcentaje de transmitancia para una tableta de dicho fármaco con un contenido de furosemida igual al doble de la cantidad calculada en el inciso c). •El límite de detección del método.Para hacer la curva de calibración se prepararon una serie de disoluciones patrón de este fármaco. •La sensibilidad del método.

197 0.035 0.0098 .0109 0.0099 0.985 Desviación estándar de la señal A 0.00 1x10-5 2x10-5 3x10-5 4x10-5 5x10-5 Señal (A.59 0.395 0.0118 0.0039 0.Concentración mol/L 0.79 0.0089 0. absorbancia a λ=271 nm) 0.

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