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I.

ANTECEDENTE

El 24 de marzo de 1989, un petrolero de mas de 300 metros de eslora, llamado Exxon Valdez y cargado son un millón y medio de barriles de crudo, navegaba bordeando la costa de Alaska. Había salido horas antes del puerto de Valdez con rumbo a california para depositar su carga en una refinería de la Exxon. Una inexplicable cadena de errores cometidos por el guardacostas, el capitán y su tercero llevo al barco hasta los arrecifes de Blight. Aunque intentaron evitarlos, no fue posible y el barco se incrusto en uno de ellos, produciendo así una enorme grieta de casco y derramándose parte del crudo . La bahía de Prince William se cubrió con mas de 30 000 toneladas de crudo (40 000 según otras fuentes) que pocos días después afectaron a amas de 1 000 km de la costa. Veinte años antes, quizá no el primer accidente de este tipo, pero si el que provoco un aldabonazo impórtate en la opinión publica, fue el del petrolero Torrey Canyon al suroeste de Cornwall, Inglaterra. Entonces, como en 1989, como ahora en 2003, las medidas que se tomaron para minimizar el vertido (en aquel caso utilizaron de detergentes y bombardeo del barco) fueron terriblemente controvertidas y finalmente, una buena parte de la cosa británica , incluso de la Bretaña francesa, fue seriamente afectada. Y ya en aquellos años sesenta, la idea de que la biodegradacion del petróleo vertido en un accidente se podía mejorar con la adicción de nitrógeno y fosforo inorgánico había aparecido en los círculos científicos. Uno de sus principales impulsores (Ronald Atlas) acabo tiempo después trabajando en la limpieza de las cosas de Alaska tras el vertido del Exxon Valdez. En efecto, lo cierto es que esta tecnología comenzó definitivamente a llamar la atención en los años sesenta, por entonces reducida a experimentos de laboratorio o a pequeñas demostraciones en el campo. Sin embargo, otro famoso accidente, el de Amoco Cadiz en 1978, supuso un nuevo impulso a la investigación. A partir de entonces, el numero fracaso comenzó a disminuir y a finales del ochenta, la comunidad científica ya tenia la certeza de que si no la mejor, si era una buena manera de enfrenarse a los efectos de los vertidos de petróleo. El último y más importante impulso vendría meses después del accidente del Exxon Valdez

II.

PETRÓLEO Y COMPOSICIÓN

El petróleo es un fluido natural mezcla de hidrocarburos y otros componentes minoritarios que se forman bajo la superficie terrestre como consecuencia de la descomposición de organismos marinos y, en menor medida, de organismos terrestres que han sido arrastrados al mar. Estos restos se mesclan con arena fina y limos y se depositan en cuencas marinas tranquilas. A medida que van acumulándose depósitos adicionales, la presión sobre los situados más bajos se multiplica por varios miles y la temperatura aumenta varios cintos de grados. El cieno y la arena se litifican y se transforman en esquistos y areniscas, los carbonatos precipitados y los restos de capazones se convierten en caliza y los tejidos blandos de los organismos muertos se convierten en petróleo y gas natural. En este proceso se pueden distinguir tres etapas diagénesis, catagénesis y metagenesis. La primera ocurre hasta una temperatura de 50 – 60°C, produciendo queroseno que es el precursor del petróleo. Dependiendo fundamentalmente de la temperatura, el queroseno evoluciona hacia petróleo o gas natural en las fases de catagenesis o metagenesis, respetivamente. Un vez formando el petróleo, fluye hacia arriba atravesó de la superficie terrestre al ser su densidad menor que las arenas y las rocas. Con frecuencia el petróleo se queda atrapado entre una capa impermeable, formando un deposito en el que los fluidos se segregan dependiendo de su densidad. Así, el petróleo se suele encontrar por debajo de una atmosfera de gas y flotando en el agua. El gas natural esta compuesto por metano y etano. El metano es el mas ligero de todo los hidrocarburos y es bastante en ambientes anaeróbicos. Es producido por un grupo de bacterias llamadas metanogenicas y forma los depósitos de gas natural. Este compuesto puede ser eliminado por bacterias metanotroficas. En cuanto a su composición, el petróleo es una mezcla compleja de hidrocarburos aromáticos, naftalenicos y parafinicos. La proporción varía según su origen. Existen muchas clasificaciones del petróleo, la mayoría enfocados a su valor comercial. Aquí se clasificaran por su composición química, propiedad que, a la postre, esta relacionad con s valor comercial. No obstante, a lo largo del capitulo se harán referencias a otras definiciones. Si se tienen en cuanta todos los posibles isómeros y que las fracciones mas pesadas del petróleo (asfalto) llegan a tener cadenas de mas de 20 C, resulta obvio concluir que el petróleo es una mezcla muy compleja. Ese echo, como se vera mas adelante, es clave a la hora de entender su biodegradación. Además de hidrocarburos, el petroleó contiene azufre, nitrógeno, metales pesados y otra serie de constituyentes en menor proporción. Desde un punto de vista técnico es muy importante el contenido total de hidrocarburos de un petróleo (TPH), y que es una medida

que junto con los azufre provoca lluvia acida. en los últimos años se ha puesto un gran . Un petróleo es de mejor calidad cuanto mayor sea su TPH.químicos. azufre elemental y ácidos sulfhídrica. existen datos que arecen contradictorios en cuanto al efecto que tiene el azufre orgánico del petróleo. aunque. hasta el puente de hacer que no sea rentable utilizar un determinado petróleo. evidentemente. Además. Entre los derivados del petróleo se encuentran las gasolinas. por lo que a continuación e trata de la manera que afecta cada uno. El petroleó se procesa normalmente antes de su uso mediante técnicas de destilación y modificación dando lugar a derivados con distinta composición. a) Azufre (<0. una y otra están relacionadas. aumenta su contenido en azufre. dibenzotiofenos.8 % en el petróleo crudo) El nitrógeno que se encuentra en el petróleo es de tipo orgánico y se localiza mayoritariamente en compuestos aromatices tipo piridina y en heterociclos aromáticos como el indol. pero el orgánico es muy difícil. Los componentes que no son hidrocarburos presentes en el petróleo tiene una gran influencia en su valor comercial y biodegradabilidad. Desde la perspectiva de la biotecnología ambiental.5 . Por otra. Estos compuestos son tóxicos debido al carácter mutagenico de algunos de sus congéneres.5% en el petróleo crudo) Esta presente en forma de tioles. La presencia de azufre en el petróleo es perjudicial. es decir de la biodegradabilidad.de la calidad del petroleó. Esto ultimo es indicativo de que se están degradando preferentemente fracciones no azufradas. Eso origina una nueva clasificación de los componentes del petróleo diferente a la química. El azufre inorgánico se puede retirar con relativa facilidad por métodos físicos. se sabe que cuando el petróleo se degrada. lo cual no contradice la utilización de parte del azufre por las bacterias ya que el contenido en azufre en carbono y además. ya que su combustión produce lluvia acida.25 – 0. dad la importancia del uso de los combustibles fósiles para el transporte. su combustión produce óxidos de nitrógeno. si bien es un parámetro que también resulta útil para predecir su biodegradabilidad y seguir la eficacia con que se esta produciendo la biodegradación del mismo. tiofenos o ácidos sulfonicos. el hidrocarburo es utilizado por las bacterias como fuente de energía. b) Compuesto nitrogenados (<0.

amil metil eter (TAME) o el diisopropil eter (DIPE). deshidrataciones e hidraciones permite a dichas bacterias utilizar el hidrocarburo como fuente de carbón y de energía. Gracias al empleo de estos aditivos se han bajado las emisiones de compuestos orgánicos volátiles.interés en promover un cambio en la composición de las gasolinas para evitar algunos de los efectos negativos de las mismas sobre el medio ambiente y la salud humana. El oxidante que emplean las bacterias anaeróbicas para activar los hidrocarburos suele ser fumarato. La degradación anaeróbica de hidrocarburos saturados lineales requiere también un primer paso de activación. Una vez activado el alcano. Dicho proceso se esquematiza. una serie de oxidantes. el pert. ter. . así como la limitación de los compuestos aromáticos y se han introducido nuevos aditivos oxigenados para adecuar el octanaje de las gasolinas. El MTBE tiene la ventaja de su bajo coste y su fácil producción.butil alcohol (TBA). A este fin responde la reducción y posterior prohibición de los aditivos plomadas. El mas empleado de estos ha sido el metil tert-butil eter (MTBE). óxidos de nitrógeno y otros compuestos tóxicos. seguido por el etanol y otros de uso mas limitado como el metanol.

.Imagen1. Estructura química de los compuestos mayoritarios del petróleo.

1.III. Hasta finales del siglo XX no empezaron a describirse procesos de biodegradación anaerobios. Una es que el petróleo se genera a grandes temperaturas por tanto se encuentra depositado en un medio prácticamente estéril (paleoesterilizacion). La biodegradación de los hidrocarburos ocurre mayoritariamente en condiciones aeróbicas. BASES BIOQUIMICAS Y GENTICAS DE LA DEGRADACION DE PETROLEO Bases bioquímicas Por su composición. Además. Este es el oxigeno en aeróbicos y nitrato. sulfato o Fe (III) en anaerobiosis. a) Hidrocarburo Alifáticos La degradación de hidrocarburos alifáticos saturados es un proceso que ocurre preferentemente en condiciones de aerobiosis. Lo que ahora se estudia son las rutas bioquímicas por las que las bacterias lo utilizan. La degradación anaeróbica. se pensó durante mucho tiempo que no era posible. las bacterias necesitan un comburente para oxidar los hidrocarburos. que pueden ser limitantes dada la enorme masa de las bolsas de petróleo. el petróleo resalta e una excelente fuente de carbono y energía. Es decir. III. sulfato y Fe(III) como oxidantes. Ello es debido a que la degradación anaeróbica es mucho más lenta que la aeróbica y tardo en describirse. Los hidrocarburos son químicamente muy inertes degradación. es un buen combustible para los microrganismos al igual que lo es para la industria. que es minoritaria aunque no despreciable. Sea su biodegradacion anaeróbica o aeróbica. y que estos habrían sido consumidos a lo largo de los periodos geológicos por acción bacteriana. con nitrato. La ruta consiste en la oxidación del grupo es necesario un primer paso de activación que los hacen mas hidrofilicos susceptibles de posteriores reacciones de . A ello se suma que para que el petróleo se degrade en condiciones anaeróbicas se necesitan oxidantes como el nitrato o el sulfato. Para explicar que las bolsas petrolíferas resistentes no se hayan degradado a lo largo de tiempo existente varias teorías. se supuso que si existía una degradación anaeróbicas no podrían formarse depósitos petrolíferos.

aldehído. Los microorganismos capaces de llevar a cabo estas reacciones son nocardia. pasado de metilo a alcohol. pseudomona y mycobacterium. convirtiéndose así un compuesto hidrófobo en un acido grao que se puede asimilar por B-oxidación. El petróleo contiene cantidad variables de hidrocarburos aromáticos simples. En condiciones anaeróbicas también se ha descrito la activación de aminoácidos aromáticos con fumarato. una serie de oxidaciones. al igual que ocurre con los alifáticos. La oxidación es secuencia. que posteriormente son atacados por dioxigenasas. De esta forma se generan intermediarios del ciclo de krebs tales como succinato. el primer paso requiere oxigeno molecular y esa catalizado por la alcano oxidasa. El produce final es acetil-CoA. Una vez activado el alcano.metilo terminal hasta carboxilo. No siempre la oxidación inicial ocurre en un carbono terminal de la molécula. y finalmente acido que queda activado en forma de acil-coenzima A. La degradación de muchos compuestos aromáticos transcurre a través de los intermediarios catecol y protocatecuato. b) Hidrocarburo aromáticos La degradación de compuestos aromáticos naturales en condiciones aeróbicas. y policiclicos (PAH) que son los más tóxicos. La degradación de anaeróbica de hidrocarburos insaturados lineales requiere también un primer paso de activación. como el benceno o el tolueno. deshidrataciones e hidraciones permiten a dichas bacterias utilizar el hidrocarburo como fuente de carbono y de energía.CoA y piruvato. En este contexto concreto cabe descarta que los hidrocarburos aromáticos son uno de los componentes de petróleo que presenta mayo persistencia en el medio ambiente debido a su estabilidad. El oxidante que emplean las bacterias anaeróbicas para activar los hidrocarburos suele ser fumarato. acetil. .

ya que la batalla legal que gano Chakrabarty en el tribunal Supremo de los Estados Unidos en 1980 sentó un precedente que abrió las puertas de nuevas patentes y permito en buena medida el desarrollo de una nueva industria.2. pero el resultado es algo: que no acurre accidentalmente en la naturaleza y. Este acontecimiento va mas allá de lo meramente anecdótico. la Biotecnología. Desde un punto de vista histórico merece destacar dos hitos. por tanto se considero que era susceptible de patentarse. en 1972-73). Cuadro1. Tipos de plasmido . como en otras rutas catabólicas. La patente Chakrababarty se baso en la construcción de una bacteria del género Pseudomonas en la que se introdujeron cuatro plásmidos. Todos los plásmidos eran naturales. y también la bacteria. y que codifican la degradación de varios componentes del petróleo. genes responsables de la degradación de algunos componentes del petróleo se encuentra localizados en plásmidos. es que a expansión de rutas catabólicas relacionadas con la biodegradación de petróleo mediante plásmidos fue la base de la primera patente que se hizo de un ser vivo. de los cuales al menos dos se mantienen establemente.III. muy importante para la biotecnología. Bases genéticas: En este apartado se comentaran brevemente los genes y operones que codifican las enzimas estudiadas anteriormente así como su regulación. Es de destacar que. El primer es que fueron los plásmidos catabólicos relacionados con la degradación de hidrocarburos los primeros que se descubrieron y dieron luz a la posibilidad de expansión horizontal de las rutas metabólicas (plásmidos SAL y OCT. El segundo.

IV. es capaz de degradar naftalenos. De acuerdo a su densidad. todos los fenómenos fisico-químicos definen el tamaño y distribución de la pluma de contaminación en una zona. además de las características del medio que los rodea como son: el tipo de suelo. que también se ha encontrado en otra estirpe de pseudónimas. profundidad del nivel del agua entre otros. . En términos generales. el comportamiento de los contaminantes está en función de sus características fisicoquímicas en las que se incluyen principalmente densidad. Los factores climatológicos como la temperatura y las precipitaciones pluviales también tienen influencia. aldehidoy acido pasando a formar pare de metabolismo de ácidos grasos. mientras que a los que poseen una densidad mayor a la del agua se les conoce como densos. Como proteínas reguladoras actúan XyIS y XyIR. viscosidad. b) El plásmido NAH7. permeabilidad.a) El plásmido TOL (pWWO) de pseudomonas confiere a esta bacteria la capacidad de degradar toluenos y xilenos. tamaño de las partículas. los fenómenos de capilaridad y gravedad los conducen hacia las aguas subterráneas. succión. solubilidad. En este caso los genes se agrupan en dos operones independientes: la ruta upper se encarga de la degradación de c) El plasmido OTC de peseudomonas oleovoran degrada alcanos liveanos (6-13 C) que van sufriendo una oxidacion desde alcohol. DISPERSIÓN DE CONTAMINANTES EN SUELOS Y ACUÍFEROS. Hay dos operones separados físicamente: el operon upper que es e responsable de la degradación de tolueno/xileno hasta benzoato/toluato y el operon meta que transforma esos compuestos en piruvato y acetaldehido a través de catecol. contenido de humedad y de materia orgánica. por ello. activador en presencia de alcanos. Una vez que ha ocurrido un derrame de contaminantes en el suelo. La proteína reguladora es AikS. los compuestos orgánicos se clasifican en dos grupos: aquellos cuya densidad es menor a la del agua se denominan ligeros. se hace necesario entender la forma del transporte. adsorción.

Para formarse el modelo conceptual de un derrame.La densidad determina los procesos de transporte en el acuífero. por ejemplo: los ligeros tienden a formar una capa en forma de nata en el nivel freático y se mueven horizontalmente en la dirección del flujo del agua subterránea. se hace el análisis del esquema que aparece Image1. sus representantes son los Bifenilos Policlorados. aceites y el petróleo crudo. Contaminación suelo y de acuífera . su migración y dispersión. tal y como lo hacen las gasolinas. en cambio los densos migran hacia la base del acuífero creando una columna a partir de la cual pueden viajar en la dirección del flujo de agua subterránea contaminando el acuífero.

. La comunidad microbiana presentes en los suelos contaminados tienden a estar dominadas por aquellas bacterias que pueden sobrevivir a la toxicidad presente en el ambiente siendo capaces de utilizar al hidrocarburo para vivir. la temperatura ambiental. su habilidad para degrada compuestos orgánicos y su capacidad de degradar los contaminantes presentes en el suelo. Teniendo condiciones apropiadas los microrganismos se multiplican y compiten por el espacio. la disponibilidad de oxigeno. el ataque por enzimas degradadoras es mayor y los contaminantes se descomponen acelera durante el rango de temperatura mas que . especialmente oxigeno. y las concentraciones de nutrientes. Muchas bacterias que se han aislado de los suelos que reciben petróleo son capaces de utilizar los hidrocarburos gaseosos etano. beneficiando la calidad ambiental la capacidad de degradación de los microrganismos. BIODEGRADACION HIDROCARBURO DEL PETROLEO La actividad de lo microrganismos es fundamental en el proceso de biorremedacion. El crecimiento microbiano o el tamaño y productividad de una comunidad están limitados por factores biológicos y ambientales tales como: el numero de microrganismos presente en el suelo.V. entonces si la proporción del área superficial y el volumen del suelo con los adecuados hay mas área disponible para la colonización y por ende. pero estos microrganismos no oxidan hidrocarburos de mayor número de átomos de carbono. etc. oxigeno. El metano. Los microrganismos degradadores de diversos compuestos pueden aislarse de suelos de cultivo. el hidrocarburo más sencillo. es degradado por un grupo especializado de bacterias llamadas bacterias metanotroficas. y hierro. en estas condiciones es posible que haya mas competencia por espacio utilizable que por espacio total. pero hay un numero limitado de microrganismo hábitats apropiados que contienen nutrientes. bosques o praderas. pero no el metano. propano y butano. utilizándolos como donadores de electrones. mohos y levaduras pueden oxidar hidrocarburo. Se ha demostrado que una gran variedad de bacterias. para que produzcan la oxidación significativa de los hidrocarburos es necesario la presencia de oxigeno. La cantidad de espacio disponible en el suelo disponible por lo general no esta limitada. sugieren su importancia en los procesos naturales de recuperación de suelos contaminados. fosforo.

Entre los tipos de métodos para medir TPH tenemos: . Los TPM son una mezcla de compuestos químicos compuestos principalmente por carbono o hidrogeno. La misma muestra analizada por diferentes métodos pueden producir diferentes valores de TPH. y que hay sido divididos en grupos llamados fracciones de hidrocarburos de petróleo por eso es que la concentración TPH es utilizado para establecer niveles de recuperación de suelos o aguas contaminadas con petróleo mediante diferentes métodos. Se usan para descubrir una gran familia de varios cientos de compuestos químicos originarios de petróleo crudo. siendo necesario la presencia de oxigeno molecular en el medio. acelerando al máximo los proceso de biodegradación. degradadoras de hidrocarburo son: BACTERIAS HONGOS Acinetobacter Arspergillus Artobacter Fusarium Brevibacterium Cladosporium Micrococcus Mucor Pseudmona Rhodotorula Strptomyces Sacharomycos Vibrio Trichorderma Cuadro2. Los géneros de bacterias y hongos más comunes. por lo que es importante saber como se realizar cada determinación. La biodegradación de compuesto requiere la de oxidación de sustratos por oxigenasas.apropiado para la biorremediacion se presentes entre 20º°C y 40°C . La oxigenación del suelo permite la volatilización de los compuestos tóxicos. si el contenido de oxigeno es muy bajo algunas proporciones del medio pueden volverse anaeróbicos y afectar de manera negativa la biodegradación. Bacterias y hongos que degradan hidrocarburo El termino hidrocarburo total de petróleo TPH . La concentración de oxigenación es una variable limitante para las fases de biodegradación de lo hidrocarburos. a la que se intensifica la actividad enzimática de los microrganismos.

espectrometría infrarroja. y. cromatografía de líquido de alto rendimiento y cromatografía de capa delgada. - Método que mide concentración de constituyentes individuales de petróleo: miden BTEX y PAM. VI. Ello es así porque si la cantidad de hidrocarburo vertido es muy grande la adición de los fertilizantes necesarios de una sola vez podría resultar toxica. VI. ya que estos suelen encontrarse en el suelo en las cantidades requeridas. Comparado con la formulación de los medios de cultivo empleados en el laboratorio cabe reseñar que no es necesaria la adición de micronutrientes. Para la medición TPH en suelos contaminados por hidrocarburos de petróleo. Visto así. análisis gravimétrico e inmunoensayo - Método que miden la concentración de un tipo petróleo. el método mas recomendable es el recomendado por la EPA () los resultados son expresados en miligramos de TPH por kilogramo de suelo.- Método que miden la concentración de TPH: los mas comunes son cromatografía de gases. si es posible. optimizar las condiciones ambientales. al estar los microorganismos mejor adaptados a las nuevas condiciones y al haberse producido un . la segunda vez se observa un efecto mas drástico en la biodegradacion de hidrocarburos que tras la primera.1. cromatografía de gases. Conviene resalar que cuando se añade fertilizante. BIORREMEDIACION SUELO CONTAMINADO POR HIDROCARBURO Bioestimulacion in situ El método mas empleado cuando ocurren catástrofes por accidentes en el transporte de petróleo o de sus derivados. Se estimas que una proporción razonable en peso C:N:P es 100:10:1. Como ya hemos explico. aunque esta puede variar dependiendo del residuo. al único que nos referiremos. por tanto. Cuando se aplica la bioestimulacion suele ser necesario fertilizar el suelo que se quiere descontaminar varias veces sucesivas. los hidrocarburos pueden constituir una excelente fuente de carbono para muchos microorganismos. De lo que se trata al aplicar esa tecnología de la bioestimulacion es de equilibrar el carbono (hidrocarburo) con el resto de nutrientes y. la bioestimulacion no varia conceptualmente de las técnicas de abonado empleadas en agricultura.

Recientemente se ha propuesto la adición de fertilizantes orgánicos para estimular la degradación de hidrocarburos en el suelo. Estos dos elementos. el nitrato puede desaparecer con rapidez y no solo no tener efecto. por ser muy solubles en agua la mayoría de sus sales. Ello se puede hacer a la vez que se fertiliza disolviendo en agua los compuestos a aplicar Surfactantes. Despendiendo de las condiciones climatológicas puede ser necesario regar el suelo. además de servir de fuente de nitrógeno para las bacterias. Parece en principio poco adecuado añadir mas carbono a un ecosistema que se encuentra sobresaturado de carbono. No es necesario añadirlos al suelo. A continuación se detallan los aditivos que emplean en la bioestimulacion. En cualquier caso. El oleaje lo ate con el agua formando una emulsión que favorece su degradación. Sin embargo antes de su uso hay que tener en cuenta otros dos factores. No obstante. En los vertidos que se producen al mar. En primer lugar que si la zona esta muy drenada. El estado físico en que se encuentre el petróleo es de enorme importancia en su biodegradación. Ambos factores hacen que su uso se prevea como muy adecuado. cosa que ocurre en mucha menor medida en el vertido del suelo. Nitrógeno y fosforo. el petróleo tiende a expandirse sobre la superficie del agua formando una mancha. los datos experimentales que existen son escasos y no cabe descartar de antemano esta tecnología. Oligoelementos. en relación con el carbono del petróleo.enriquecimiento selectivo de las estirpe degradadoras. En segundo lugar hay que tener en cuenta que puede ocurrir justo lo contrario si el nitrato queda atrapado por interacciones iónicas al suelo. Agua. Carbono. son la base para el diseño de un ¨medio de cultivo ¨ que sirva de alimento a los microorganismos autóctonos. en las zonas poco aireadas puede ser el oxidante utilizado por las bacterias desnitrificantes para degradar hidrocarburos. sino que podría contaminar el acuífero todavía más. el la formación de la emulsión es clave la presencia de surfactantes (detergentes o humectantes) bien sean . El nitrato. El nitrógeno se puede añadir en forma oxidada (nitrato) o reducida (amonio de urea).

o biosurfractantes. las zonas tratadas con el dispersante tardaron en recuperarse del vertido el doble del tiempo que las zonas no tratadas. ya que el primer paso para la degradación es la biodisponiblidad.1. El efecto de los dispersantes sobre la biodegradación depende de la composición del dispersante y del tipo de vertido. Sin embargo. en las aguas francesas se empleo arcilla natural que contenía acido esteárico y se mostro mucho mas eficaz que el dispersante artificial. Sin embargo. Bioventing o inyección de aire . los producen la enorme mayoría de los microorganismos que degradan alguna fracción del petróleo. como en el tratamiento del derrame del Exxon Valdez ocurrido en julio de 1989.naturales o añadidos. compuesto que se sospecha que puede ser nocivo. Además. Desde entonces se han desarrollado dispersantes artificiales mucho menos tóxicos y eficaces. Debido a la toxicidad del detergente empleado. La adición de dispersión exógenos para el tratamiento de vertidos se viene utilizado desde hace mucho tiempo pero con resultados variados. VI. En 1967 se emplearon mas de 10 000 toneladas del detergente BP1002 (que contiene 12% de detergente noiónico y 3% de estabilizante) para el tratamiento del vertido ocasionado por el hundimiento del petróleo Torrey Canyon en las costas Britanicas.1. como el Corexit 9527 (desarrollado por la compañía Exxon) que se ha mostrado eficaz en varias ocasiones. Ello es más importante cuanto mas insoluble en agua sea el hidrocarburo. habiéndose encontrando efectos tanto positivo como negativos tras su uso. uno de los componentes conocidos del surfactante es 2-butoxietanol (del 10 al 40% en peso). e resultado fue que se agravo el problema y hubo un incremento considerable en la mortabilidad de la flora y fauna de la zona tratada. Lo detergentes naturales.

El principal problema es la biodisponibilidad de los microorganismos. Debido a la aireación del suelo se va a favorecer la degradación de los hidrocarburos por dos motivos: por volatilización. aceptores de electrones y energía suficientes. con un valor de permeabilidad al aire adecuado (> 10-10 cm2). En general. facilitando la migración de la fase volátil de los contaminantes. ya que al incrementar la oxigenación del suelo sevan a estimular la actividad bacteriana. de humedad (12-30% en peso). siendo más fácilmente biodegradables los compuestos parafinados o de cadena lineal que los compuestos aromáticos. y por biodegradación. Los suelos deben contener bajos contenidos en arcilla y ser lo más homogéneamente posible. así como la existencia de fuentes de carbono. potencial redox mayor de -50 mV. Necesidad de tiempos de actuación cortos (meses) y coste medio-alto. Los aportes de oxígeno deben ser suficientes. consistente en la ventilación forzada del suelo mediante la inyección a presión de oxígeno (aire) en la zona no saturada del suelo a través de pozos de inyección. Deben existir unas condiciones óptimas de pH (6 y 8). temperatura entre 0 y 40 ºC y los nutrientes del suelo en relación N:P de 10:1. Los factores a tener en cuenta en la aplicación del bioventing o inyección de aire natural son: Se degradarán más fácilmente las moléculas más pequeñas (hasta C20). son favorables los compuestos de alta volatilidad (presión de vapor mayor de 10 mm de Hg a 20ºC).La técnica del bioventing es un tratamiento de biorrecuperación de tipo “in situ”. . No debe existir de producto libre en flotación sobre el nivel freático. Cuanto menor es la solubilidad de los contaminantes menor será la biodisponibilidad.

Imagen 2. Ex situ El tratamiento ex-situ de suelos. aireación. presencia de inhibidores y biodisponibilidad del contaminante. concentración de nutrientes. Tecnica de bioventing VI. sedimentos y otros sólidos contaminados con hidrocarburos se puede realizar en un variado número de procesos en fase sólida y en fase lodo. Los parámetros críticos a considerar en un tratamiento biológico son: tipo y concentración de contaminante. Por otro lado los sistemas sólidos son capaces de sustentar el crecimiento de microorganismos que no desarrollan bien en fase líquida (hongos) y producen complejos enzimáticos capaces de oxidar compuestos complejos. condiciones macro ambientales. En el caso de los procesos en fase lodo se suspende el suelo en agua. Una ventaja de los procesos en fase sólida es que las bajas velocidades de transferencia de materia permiten trabajar a niveles de contaminación que serían tóxicos para los microorganismos si se realizaran en fase líquida. Los procesos en fase sólida son aquellos en donde el suelo se trata con un contenido de agua mínima. . concentración de microorganismos.2.

mediante tubos perforados de aireación.000 CFU/gramo de suelo). Dada la necesidad de excavación y posterior depósito del suelo contaminado. condiciones de humedad (40-85% de capacidad de campo).1. Biopilas La técnica de biopilas es un tratamiento de biorrecuperación de tipo “ex situ” en condiciones no saturadas.VI. formadas por suelo contaminado y materia orgánica (compost) en condiciones favorables para el desarrollo de los procesos de biodegradación de los contaminantes. . volteando la pila. temperatura (10 y 45ºC). se requiere una superficie de trabajo relativamente grande cuyas dimensiones dependen del volumen de suelo a tratar. Estas pilas de compost pueden ser aireadas de forma activa. siendo más eficaz en los compuestos de carácter más ligero. las biopilas se pueden aplicar a la mayoría de los compuestos orgánicos. En principio. o bien de forma pasiva.000 ppm. Entre los factores que influyen en la aplicación de las biopilas destacan: Los hidrocarburos deben ser no halogenados y deben encontrarse en el suelo en concentraciones menores a 50. La técnica consiste en la formación de pilas de material biodegradable de dimensiones variables. Necesidad de una densidad de poblaciones microbianas (>1.2. consistentes en la reducción de la concentración de contaminantes derivados del petróleo en suelos excavados mediante el uso de la biodegradación.

Landfarming El LandFarming es aplicado sobre la superficie de un terreno previamente acondicionado. los hidrocarburos que contiene son fácilmente atacados en condiciones aeróbicas. y el establecimiento de un sistema aeróbico. Imagen 4.2. Técnica de landfarmnig 6.Imagen 3. precursores enzimáticos. El proceso consiste en el control de la degradación del material contaminado. Ya que el petróleo es rico en materia orgánica. Inoculum de bacterias especializadas. ajuste de pH y humedad. Una vez que todos estos aditivos se hayan aplicado. población microbiana y un incremento de la transferencia de oxígeno mediante la promoción de la difusión atmosférica. Degradación natural Es de considerable importancia económica y ambiental. lo que permitirá una distribución más homogénea. Técnica de biopilas 6. . por ejemplo en sus aplicaciones la eliminación de las ¨mareas negras¨. mediante la optimización de aquellas variables que afectan al sistema microbiológico aplicando: Nutrientes. Algunas veces se opta por colocar una cama de arena.3. emulsificantes .2. es decir en condiciones de aire y humedad. tanto de las sustancias adicionadas. donde se colocan liners de polietileno de alta densidad (HDPE) y un sistema de recolección de lixiviados. para proteger el liner contra rasgaduras y evitar así la migración del contaminante.surfactantes. el suelo contaminado es aireado mecánicamente ( tractor con rastra o roto-till).

Imagen 5. hongos oxidantes de los hidrocarburos. de los ecosistemas y de las condiciones meteorológicas. las fracciones de hidrocarburos volátiles se evaporan con rapidez. Entre los organismos degradadores del petróleo destacan pseudomonas putida y oleovorans. b) Fase de estabilización de los contaminantes que puede durar entre 6 meses y un año dependiendo de la naturaleza de los contaminantes. En los grandes derrames. Pseudomona bacteria que metaboliza hidrocarburos. Los hidrocarburos de cadenas más ramificadas y los policiclicos permanecen por más tiempo. Experimentos con radioisótopos muestran que el 80% de hidrocarburos son oxidados entre 6 meses y un año desde el derrame. Cuando ocurre un vertido de un hidrocarburo en medio acuoso se diferencia tres etapas: a) Fase de expansión que tiene lugar tanto en superficie como en profundidad. en menor cuantía. en esta fase se produce una gran mortandad de organismo vivo.Los principales organismos degradadores del petróleo son bacterias y levaduras y. dejando los componentes alifaticos y aromáticos de cadena más larga para ser atacados por los microorganismos que oxidan parte del petróleo hasta dióxido de carbono. . c) Fase de reconstitución de una mancha de petróleo dependerá de la proporción de componentes volátiles que tenga y de la temperatura del agua. la levadura del género Candida y diversos géneros de los hongos tales como aspergillus y fusarium.

conductividad. Se utilizaron nueve pozos como centros de monitoreo durante todo el proyecto. Este sistema de recuperación fue instalado en todos los pozos donde había presencia de diesel flotando en el agua subterránea. 7. 7. Se analizaron las muestras del agua subterránea en busca de la presencia de estos nutrientes. la A.VII. Una vez el producto es almacenado en el tanque. se realizó una inyección de nutrientes a gran escala. PROYECTO PILOTO CIAPR El proyecto consistió en la construcción de cuatro pozos de inyección en un lugar contaminado. El monitoreo consistió en recolectar muestras del agua subterránea de los pozos señalados. 15 y 20 pies). Este sistema no requiere el uso de maquinaria especial o electricidad y recupera hasta 50 galones de agua diarios. 7.1 Sistema de Bioventilación La bioventilación es una biorremediación “in-situ” que utiliza microorganismos endógenos para degradar contaminantes de las aguas subterráneas contaminadas. nitritos.E(Autoridad de Energía Eléctrica). Las mismas fueron analizadas para determinar las concentraciones de pH. Se prepararon e inyectaron 50 galones de una solución de nutrientes al pozo. hierro y microorganismos heterotróficos. Las muestras de agua se recolectaron a diversos niveles de profundidad para observar la dilución de nutrientes en el agua subterránea antes y después de la inyección. Las muestras fueron recolectadas a diversos niveles de profundidad (10. .E.1.2. fosfato.1 Sistema de Recuperación de Producto A través de este proceso se separa el agua del contaminante que se encuentra flotando en la superficie del agua subterránea.1 BIORREMEDIACION DEL AGUA CONTAMINADO POR HIDROCARBURO Recuperación de producto libre o “diesel” del agua subterránea 7. amonio.2 Biorremediación “In-Situ” del agua subterránea contaminada por hidrocarburo. Basados en los resultados de la prueba piloto. coordina su retirada y almacenamiento. nitratos.

es muy prometedora para la restauración. la cual fue inyectada a una profundidad de 14 y 18 pies en los pozos monitoreados. 7. Se realizó además una bioaumentación. Luego se demostró que los microorganismos endógenos del lugartenían la capacidad de utilizar el oxígeno para biodegradar la contaminación de hidrocarburos en una proporción aceptable. Los resultados de reducción de diesel unidos a la evidencia de bioestimulación anaerobia fueron consistentes con el estudio piloto CIAPR. Se cultivaron bacterias endógenas desnitrificadoras del lugar contaminado. . En primer lugar se determinó que era posible la producción y provisión de oxígeno a través de la zona de las aguas contaminada. y a través de ellos se inyectan nutrientes y soluciones específicas preparadas en laboratorio. Estos se instalan en varios puntos del área contaminada. Se cumplieron dos condiciones para aplicar el sistema de bioventilación como tecnología remediativa en este lugar (AEE). BIOALIMENTACIÓN Para poder acelerar el proceso biorremediativo. Esta alternativa. en esas condiciones metabólicamente no se puede consumir el carbono. fosfato. y dejar que los microorganismos que ya están presentes “hagan su trabajo”. lo que descompensa los niveles de nitrógeno y fosfato. fue necesario determinar la conductividad hidráulica y la permeabilidad intrínseca para saber cuán efectivo sería el sistema de bioventilación en el lugar afectado. Estas bacterias fueron enriquecidas con nutrientes en una solución bioactiva. la actividad biológica de la bacteria endógena se estimula por medio de la inyección de aire a través de los pozos de ventilación. en algunos casos biodesinfectantes. se desarrolló un consorcio de microorganismos degradadores de diesel bajo condiciones anaeróbicas. Además.2 Biorremediación anaerobia El monitoreo fue efectuado cada dos semanas para realizar los análisis químicos de las muestras de agua.2. La biorremediación de petróleo consiste en verter los mismos nutrientes que están descompensados. Los derrames de crudo provocan un desequilibrio al aumentar la cantidad de carbono. nitrógeno. que consistió en la integración de varios microorganismos para aumentar o incrementar la actividad biodegradativa en ese medio.Mediante esta técnica. que requiere de una implementación cuidadosa. Esta estrategia de bioestimular la degradación bajo condiciones favorables a la respiración anaerobia fue muy útil. para recupera el equilibrio y regenerar el ambiente.

Eduardo Ayesa. CEIT. frente a la costa de la Muerte. y tras varios días de maniobra para su alejamiento de la costa gallega.3 Biorremediación del agua contaminada en la costa de la muerte.Típico Pozo de Inyección para Biorremediación Anaerobia 7.000 toneladas de petróleo. El desastre accidentado del Prestige se el 13 de produjo cuando un buque petrolero monocasco resultó transitaba cargado con noviembre de 2002. en el noroeste de España. mientras 77. acabó hundido a unos 250 . desastre de Prestige. director de la Unidad de Ingeniería Medioambiental del Centro de Estudios e Investigaciones Técnicas de Gipuzkoa. Apuesta por la biorremediación para combatir el vertido del Prestige.

en concreto.1 el doble que la explosión del Challenger pero por detrás de la desintegración del Columbia y el accidente nuclear de Chernobyl. una zona comprendida desde el norte de Portugal hasta las Landas de Francia.km de la misma. Se pueden inocular nuevos hongos o bacterias que estén especialmente preparados para degradar la mancha. Se han implementado con las técnicas de "bioestimulación". en conferencia de prensa. se intenta aumentar la actividad de estos microorganismos. "no podemos evitar que se ensucien las playas. en Muxía. El derrame de petróleo del Prestige ha sido considerado el tercer accidente más costoso de la historia. pero precisó que habrá que esperar para decidir su uso en otros espacios hasta que se conozcan las conclusiones de las pruebas realizadas. El comisionado Xoán Novoa informó.000 millones de dólares. que consiste en facilitar a ciertas bacterias nutrientes. . 1 la limpieza del vertido y el sellado del buque tuvieron un coste de 12. por la acción de bacterias. "Mediante la adición de nutrientes. " Experimentos en la Costa da Morte: Las bacterias podrían acabar con el fuel del Prestige. Dice Eduardo Ayesa. según algunos documentos. tanto por la cantidad de contaminantes liberados como por la extensión del área afectada. que consiste en potenciar la degradación del petróleo por efecto de la naturaleza. mientras que los equipos que trabajan en la Costa da Morte podrían ofrecer ya un "protocolo de actuación" a finales de noviembre Los resultados de la biorremediación han sido muy alagüeños. de que las investigaciones realizadas desde junio en las playas de Moreira y Cuño. El tratamiento de biorremediación consiste en estimular la eliminación de la mancha de fuel mediante microorganismos que ya existen en el mismo vertido. confirman la "utilidad" de esta técnica de limpieza. La marea negra provocada por el vertido resultante causó una de las catástrofes medioambientales más grandes de la historia de la navegación. Novoa consideró los resultados obtenidos hasta ahora como "esperanzadores". medioambientalmente es la solución más sostenible. como nitrógeno y fósforo mezclados con agua. Está previsto que a mediados de septiembre se informe sobre los resultados de los experimentos en el Parque Nacional Illas Atlánticas. La biorremediación como método para combatir el vertido del buque Prestige en las costas gallegas. pero a medio y largo plazo estas bacterias van degradando la mancha y.

para finalizar tenemos que mencionar a los principales protagonistas de esta técnica que son microorganismos específicos para este tipo de problemas y se pueden ser autóctonos o foráneos ya que gracias a su metabolismos puede degradar los diferentes componentes del hidrocarburo y removerlos para la recuperación del suelo. aunque pocos".440 . no son cien por ciento eficaces. 432. CONCLUSION Todas las técnicas descritas sobre la biorremediacion de suelos contaminados por hidrocarburos. Biotecnología ambiental. que permite llegar a zonas de difícil acceso. en menos de un mes. para que penetren con mayor facilidad entre el petróleo. ya que esta última requiere de traslado de la contaminación al área de tratamiento. en donde nos enfocaremos a estudiar la capacidad de degradar hidrocarburos que poseen en su metabolismo algunos microorganismos. OBJETIVO Desarrollo y descripción de técnicas de biorremediacion de suelos contaminados por hidrocarburos.eliminarlo. También aludió a la posibilidad de "regar" nutrientes con cáscara de mejillón. ha logrado eliminar de las rocas parte del fuel. agregó Llamas. BIBLIOGRAFIA: FRANCISCO CASTILLO RODRIGUEZ.Estos microorganismos "se comen" poco a poco el petróleo hasta. también se tiene que tomar encuentra que el proceso in situ presenta más ventaja ecológica y económica sobre el proceso ex situ. pag. Entre las pruebas realizadas. Llamas concluyó que la biorremediación tiene como ventajas el respeto por la riqueza natural de la Costa da Morte y la diversidad de técnicas. el investigador citó el "riego" en un acantilado de Cuño con abono comprado en Muxía y con agua que desvían de un regato próximo y que. 2005. una acción que requiere "meses.

TESIS: evaluación de técnicas de biorremediacion de suelos contaminados con hidrocarburos derivados de petróleo. NUÑEZ DEL PADRO ZARATE. EWEIS. EPA 540-R-95-532. ARTICULO:La biorremediacion frente al vertido del Exxon Valdez BIBLIOGRAFIA de la BIORREMEDIACION DEL AGUA CONTAMINADO POR HIDROCARBURO: EDUARDO AYESA.. 2008. (1995). - JOSÉ LUIS RODRÍGUEZ GALLEGO. J et todo. Mac Graw Hill. (1999). Biorremediación de los desechos peligrosos. pag. director de la Unidad de Ingeniería Medioambiental del Centro de Estudios e Investigaciones Técnicas de Gipuzkoa. CEIT. L.- SIRVINS. AY TRAMIER.46-48 MOROMISATO RIVAS. Principios de biorrecuperación. 1993. Ed. . USEPA. La biodegradacion de los hidrocarburos.