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Instituto Politécnico Nacional Escuela Nacional De Ciencias Biológicas Hospital Infantil de México “Federico Gómez”

DETERMINACIÓN FENOTIPICA Y GENOTIPICA DE LOS GENES phzA, mexAB y BIOPELICULA EN CEPAS DE Pseudomonas aeruginosa panresistentes AISLADAS DE PACIENTES PEDIÁTRICOS
Presentado por: eQBP Jiménez Perrusquia Laura Brisia Asesores de Tesis: Dra. en C. Norma Velázquez Guadarrama, Dra. En C. Silvia Giono Cerezo INTRODUCCIÓN Las infecciones nosocomiales son causa una fuente importante de morbilidad y mortalidad. El entorno hospitalario favorece la adquisición de agentes patógenos oportunistas, resistentes a antibióticos lo que complica el tratamiento de estas infecciones (1). La presión selectiva ejercida por el uso intenso de antibióticos promueve la resistencia a estos. Si bien se ha logrado progresar en la prevención de las infecciones nosocomiales, el mayor problema añadido a estas enfermedades es la aparición de resistencia a los antibióticos de uso común (2). Esta resistencia es debida principalmente a la abusiva, y en ocasiones inadecuada utilización de los antibióticos. La presencia de microorganismos multirresistentes tiene importantes repercusiones para los pacientes y el sistema sanitario. Pseudomonas aeruginosa se caracteriza por expresar una resistencia natural o adquirida adaptativa a diversos agentes antimicrobianos debido a que se encuentra en alta frecuencia en pacientes de alto riesgo produciendo una elevada morbilidad y mortalidad. La resistencia es comúnmente causada por ………….y bombas de expulsión activa, de entro de ellas, la bomba MexAB-OprM pertenece a la familia de las ….. Además, dicha bomba está implicada en la expulsión de un gran número de factores de virulencia como ……. estructurales (capsula exopolisacarida, adhesinas, pili¸ pigmentos difusibles, endotoxinas, sistemas de expulsión, formación de biofilm), toxigenicos y enzimáticos. (Giskeet al., 2008).3 En el Hospital Infantil de México Federico Gómez (HIMFG) se identificaron entre los años 2007-2010, 60 casos de IN producidas por P. aeruginosa en niños hospitalizados por diferentes padecimientos, cuya tasa de mortalidad alcanzó el 36.59%. De las cepas analizadas 34 fueron panresistentes y 10 sensibles. JUSTIFICACIÓN HABLA PRINCIPALMENTE DE LA RESISTENCIA DADA POR LAS BOMBAS DE EXPULSIÓN ACTIVA Y COMO ESTAS, ESTÁN INVOLUCRADAS EN LA EXPULSION DE FACTORES DE VIRULENCIA, QUE EN CONJUNTO PUEDEN AGRAVAR LA SITUACIÓN DEL PACIENTE Y COMO LA EVALUACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE LA BOMBA EN CONJUNTO DE GENES DE VIRULENCIA COMO EL DE LA PIOCIANINA Y LA FORMACIÓN DE BIOPELICULA PUEDEN SER LA DIFERENCIA EN LAS CEPAS SENSIBLES Y RESISTENTES.La resistencia a los antimicrobianos es uno de los principales problemas de la terapéutica actual, debido a que P. aeruginosa presenta diversos mecanismos de resistencia, así como una elevada capacidad para adquirir nuevas formas de la misma (4). La incidencia de aislamientos de la bacteria, su caracterización como cepas pan resistentes y la elevada mortalidad de los pacientes infectados, propicia la necesidad de tipificar o caracterizar dichos aislamientos con el fin de establecer la presencia, ausencia y nivel de expresión de ciertos genes que estén en relación con la resistencia a antibióticos. Estos genes están relacionados con las bombas de expulsión (MexAB-OprM), la producción de piocianina (phzM/A) y la formación de biofilm.

OBJETIVO GENERAL  ANALIZAR LA Determinar la expresión fenotípica y genotípica de LA BOMBA DE EXPULSION ACTIVA los genes MexAB-OprM, PIOCIANINA Y BIOPELICULA EN phzM/A, así como determinar la formación de biofilm en cepas panresistentes de Pseudomonas aeruginosa RESITENTES Y SENSIBLES. OBJETIVOS PARTICULARES  ANALIZAR LA EXPRESIÓN FENOTIPICA DE LA PIOCIANINA Y BIOPELICULA EN Pseudomonas aeruginosa RESITENTES Y SENSIBLES.  ANALIZAR LA EXPRESION GENOTIPICA DE LA PIOCIANINA Y BIOPELICULA EN Pseudomonas aeruginosa RESITENTES Y SENSIBLES MATERIALES Y METODOS Se determinará la expresión de los genes phzM/A y MexABOprM mediante la técnica de RT-PCR. Para cuantificar la expresión del gen phzM será mediante diferencia de expresión con un gen constitutivo, mientras que para la cuantificación de la expresión del gen MexAB-OprM mediante

Gniadkowski M. 2000.Principles and Practice of Infectious Diseases. Dolin R. Navarro F. REFERENCIAS [1] Pollack M. 2310-27 [2]Organización Mundial de la Salud. . Pseudomonas aeruginosa. Estrategia mundial de la OMS para contener la resistencia a los antimicrobianos. Malamou´Lada E. Rossolini GM. Giskee CG.PCR en tiempo real. 2001. 2002. [3] Miriagou V. [4] Livemore D. Nordmann O. 5thed. Bennett JE. Edelstein M. Pouraras S. Multiple mechanisms of antimicrobial resistance in Pseudomonas aeruginosa: Our worst nightmare? Clinical Infection Disease 634-640. Galani I... En el caso de la formación de biopelicula se realizara por retención de cristal violeta. Cornaglia G. Martinz –Martinez. Mandell GL. peixe L.