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CUANTIFICACIN DE MICRONCLEOS EN CLULAS DE SANGRE PERIFRICA DE MOTOTAXISTAS QUE TRABAJAN EN LA CIUDAD DE CARTAGENA DE NDIAS

LILIANA PATRICIA CARRANZA LPEZ Cdigo: 598934

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA FACULTAD DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE TOXICOLOGIA CONVENIO CON LA UNIVERSIDAD DE CARTAGENA BOGOTA D.C. 2011

CUANTIFICACIN DE MICRONCLEOS EN CLULAS DE SANGRE PERIFRICA DE MOTOTAXISTAS QUE TRABAJAN EN LA CIUDAD DE CARTAGENA DE NDIAS

LILIANA PATRICIA CARRANZA LPEZ Cdigo: 598934

Trabajo de investigacin presentado como requisito para optar al ttulo de: Magister en Toxicologa

DIRECTOR: Ph.D. JESS OLIVERO VERBEL

Lnea de Investigacin: Biologa Molecular Grupo de Investigacin: Qumica Ambiental y Computacional

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA FACULTAD DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE TOXICOLOGIA CONVENIO CON LA UNIVERSIDAD DE CARTAGENA BOGOTA D.C. 2011
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FORMATO UNICO PARA ENTREGA DE LOS TRABAJOS DE GRADO CUANTIFICACIN DE MICRONCLEOS EN CLULAS DE SANGRE PERIFRICA DE MOTOTAXISTAS QUE TRABAJAN EN LA CIUDAD DE CARTAGENA DE INDIAS QUANTIFICATION OF MICRONUCLEI IN PERIPHERAL BLOOD CELLS OF MOTORCYCLE DRIVERS WORKING IN THE CITY OF CARTAGENA DE INDIAS RESUMEN Introduccin. Cartagena de Indias es una ciudad con abundante trfico donde las emisiones de motores de vehculos representan una de las fuentes principales de contaminacin del aire. Esta ciudad est experimentando el fenmeno conocido como mototaxismo, caracterizado por el transporte pblico de personas empleando motocicletas. La exposicin de estas personas a la contaminacin del aire es extensa y no existe ninguna informacin sobre el impacto de esta actividad sobre la salud humana. Objetivo. Evaluar la frecuencia de microncleos (MN) en clulas de sangre perifrica de mototaxistas que trabajan en la ciudad de Cartagena de Indias. Materiales y mtodos. En este estudio participaron 109 individuos varones, 73 mototaxistas y 36 controles. Recoleccin de informacin sociodemogrfica, as como anlisis hematolgicos y evaluacin de microncleos en clulas de sangre perifrica fueron realizados a cada individuo. Comparaciones entre medias fueron realizadas usando el T-test y asociaciones entre variables mediante anlisis de correlacin. Resultados. El promedio error estndar (EE) de MN en eritrocitos de sangre perifrica de mototaxistas de Cartagena fue de 0.02 0.004 por 1000 clulas, mientras que para el grupo control fue de 0.002 0.002 por 1000 clulas, con diferencias estadsticamente significativas entre estos grupos (p<0.05). No hubo correlaciones estadsticas entre variables socio-demogrficas y la presencia de MN en los grupos de estudio. Conclusiones. Los mototaxistas de la ciudad de Cartagena tienen un mayor nmero de MN en los eritrocitos de sangre perifrica que personas dedicadas a otros trabajos.

Palabras clave: Microncleos, trfico, genotxico, contaminacin, Colombia.


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Abstract Introduction: Cartagena de Indias is a city with abundant traffic, where vehicle engine emissions represent one of the main sources of air pollution. This city is experiencing the phenomenon known as mototaxismo, characterized by the public transportation of people using motorcycles. The exposure of these people to air pollution is extensive, and no information is available regarding the impact of this activity on human health. Objective: To evaluate the frequency of micronucleus (MN) in peripheral blood cells of motorcycle drivers that work in the city of Cartagena de Indias. Materials and methods: In this study participated 103 male individuals, 73 motorcycle drivers and 36 controls. Collection of sociodemographic information, as well as hematological assays and micronucleus evaluation in cells from peripheral blood were performed for each participant. Comparisons between means were executed using the T-test, and relationships between variables were explored by correlation analysis. Results: The average standard error (SE) of MN in erythrocytes of peripheral blood of motorcycle drivers from Cartagena was 0.02 0.004 per 1000 cells, whereas for the control group it was 0.002 0.002 per 1000 cells, with statistical differences between these groups (p<0.05). Statistical correlations were not found between socio-demographic variables and the presence of MN in the studied groups. Conclusions: Motorcycle drivers from Cartagena have greater number of MN in erythrocytes from peripheral blood than people having different job.

Keywords: Micronuclei, traffic, genotoxic, pollution, Colombia.

FIRMA DEL DIRECTOR_____________________ LILIANA PATRICIA CARRANZA LPEZ, 1971

Nota de aceptacin:

El trabajo titulado Cuantificacin de microncleos en clulas de sangre perifrica de Mototaxistas que trabajan en la ciudad de Cartagena de Indias, presentado por el estudiante Liliana Patricia Carranza Lpez, como requisito parcial para optar al ttulo de Magister en Toxicologa, fue evaluado y calificado por los evaluadores:

Firma del director del trabajo

Firma del jurado

__________________________________ Firma del jurado

DEDICATORIA

A mi familia y muy especialmente a mi adorada abuelita Oty y a mi pequen William Andrs.

AGRADECIMIENTOS

A Dios por permitirme la oportunidad y darme la fortaleza para sostenerme este proyecto.

A mi familia, a mis maravillosos padres y hermana por sus oportunas palaras de estimulo y apoyo en momentos muy difciles, gracias por creer en m.

A mi querido Gerardo por su comprensin, paciencia y apoyo incondicional

A mis compaeros, integrantes del grupo de Qumica ambiental y computacional por su colaboracin, especialmente Berthy, Karencita, Nerlys, Doctora Anglica, muchas gracias.

A la Doctora Brbara Arroyo Salgado por ser mi luz, mi amiga, mi madre, por sus palabras y todo su tiempo, mil gracias.

A mi director de tesis, modelo a seguir, Doctor Jess Olivero Verbel por su orientacin, apoyo y dedicacin.

A las personas de la facultad que enfermera que voluntariamente aceptaron participar en el estudio.

A la Doctora Miriam Gutirrez por su empeo en pro de la superacin profesional.

A todas las personas de la facultad de Ciencias Farmacuticas que de una u otra forma colaboraron con este propsito.

CONTENIDO

Pg.

RESUMEN ............................................................................................................. 13 ABSTRACT ............................................................................................................ 15 INTRODUCCIN ................................................................................................... 16 1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ............................................................. 18 2. JUSTIFICACIN ............................................................................................. 20 3. OBJETIVOS .................................................................................................... 22 3.1 OBJETIVO GENERAL ..................................................................................... 22 3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS ............................................................................ 22 4. HIPTESIS ..................................................................................................... 23 5. MARCO TERICO Y ESTADO DEL ARTE ................................................... 24 5.1 MOTOTAXISMO .............................................................................................. 24 5.2 CONTAMINACIN AMBIENTAL EN ZONAS URBANAS ................................ 26 5.2.1 Enfermedades asociadas a la contaminacin ambiental .............................. 32 5.2.1.1. Enfermedad pulmonar obstructiva crnica (EPOC). ................................. 32 5.2.1.2. Enfermedades cardiovasculares. .............................................................. 32 5.2.1.3. Alergia. ...................................................................................................... 33 5.3. MICRONUCLEOS .......................................................................................... 35 5.3.1. Formacin de microncleos. ........................................................................ 36 5.3.2. Criterios para identificar microncleos. ........................................................ 39 5.3.3. Utilidad del ensayo de microncleos. 5)....................................................... 40 5.3.4. Deteccin de alteraciones genticas. ......................................................... 42 5.3.5. Biomarcadores para contaminacin ambiental. .......................................... 42 6. METODOLOGA ................................................................................................ 45 6.1. POBLACIN EN ESTUDIO ............................................................................ 45

6.1.1. Criterios de inclusin. ................................................................................... 45 6.1.2. Criterios de exclusin ................................................................................... 46 6.2. OBTENCIN DE LA MUESTRA DE SANGRE. .............................................. 46 6.3. EXTENDIDO DE SANGRE PERIFRICA Y EVALUACIN DE LA

PRESENCIA DE MICRONCLEOS EN ERITROCITOS. ...................................... 47 7. ANLISIS ESTADSTICO. ................................................................................. 48 8. RESULTADOS................................................................................................... 50 8.1. CONDICIONES LABORALES Y SOCIOECONMICAS DE LOS INDIVIDUOS PARTICIPANTES EN EL ESTUDIO. ..................................................................... 50 8.2. RESULTADO EVALUACIN DE LA DE LOS EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFRICA Y PRESENCIA DE MN. ..................................................... 54

8.3. ASOCIACIONES ENTRE LA FRECUENCIA DE MICRONCLEOS Y FACTORES SOCIODEMOGRFICOS Y LABORALES DE LOS MOTOTAXISTAS EN CARTAGENA DE INDIAS. ............................................................................... 58 9. DISCUSIN ....................................................................................................... 61 CONCLUSIONES .................................................................................................. 66 RECOMENDACIONES .......................................................................................... 67 REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS....................................................................... 68 ANEXOS ................................................................................................................ 88

LISTA DE TABLAS

Tabla 1. Descripcin de los principales contaminantes atmosfricos qumicos y sus fuentes. ...27 Tabla. 2. Criterios de identificacin de microncleos. 40 Tabla 3. Caractersticas laborales y socio-demogrficas de individuos expuestos y no expuestos a contaminantes ambientales de la ciudad de Cartagena de Indias52 Tabla 4. Aspectos relacionados con los parmetros respiratorios, drmicos y oftalmolgicos de la poblacin de mototaxistas de la ciudad de Cartagena de Indias53 Tabla 5. Parmetros hematolgicos en controles y expuestos..55 Tabla 6. Asociaciones entre la frecuencia de microncleos y factores sociodemogrficos y laborales de los mototaxistas de Cartagena de Indias .60

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LISTA DE FIGURAS

Figura 1. Formacin de microncleos....37 Figura 2. Posibles mecanismos de formacin de microncleos ..38 Figura 3. Hallazgos de la observacin de los extendidos de sangre48 Figura 4. Comparacin recuento de microncleos en serie Roja..56 Figura 5. Comparacin recuento celular de la serie Blanca...57 Figura 6. Comparacin recuento celular de la serie Roja58

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LISTA DE ANEXOS

Anexo A. Encuesta. Datos generales para la cuantificacin de microncleos en sangre perifrica de mototaxistas que trabajan en la ciudad de Cartagena de indias Anexo B. Consentimiento informado

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RESUMEN

Introduccin. Cartagena de Indias es una ciudad con abundante trfico donde las emisiones de motores de vehculos representan una de las fuentes principales de contaminacin del aire. Esta ciudad est experimentando el fenmeno conocido como mototaxismo, caracterizado por el transporte pblico de personas empleando motocicletas. La exposicin de estas personas a la contaminacin del aire es extensa y no existe ninguna informacin sobre el impacto de esta actividad sobre la salud humana.

Objetivo. Evaluar la frecuencia de microncleos (MN) en clulas de sangre perifrica de mototaxistas que trabajan en la ciudad de Cartagena de Indias.

Materiales y mtodos. En este estudio participaron 109 individuos varones, 73 mototaxistas y 36 controles. Recoleccin de informacin sociodemogrfica, as como anlisis hematolgicos y evaluacin de microncleos en clulas de sangre perifrica fueron realizados a cada individuo. Comparaciones entre medias fueron realizadas usando el T-test y asociaciones entre variables mediante anlisis de correlacin.

Resultados. El promedio error estndar (EE) de MN en eritrocitos de sangre perifrica de mototaxistas de Cartagena fue de 0.02 0.004 por 1000 clulas, mientras que para el grupo control fue de 0.002 0.002 por 1000 clulas, con diferencias estadsticamente significativas entre estos grupos (p<0.05). No hubo correlaciones estadsticas entre variables socio-demogrficas y la presencia de MN en los grupos de estudio.

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Conclusiones.

Los mototaxistas de la ciudad de Cartagena tienen un mayor

nmero de MN en los eritrocitos de sangre perifrica que personas dedicadas a otros trabajos.

Palabras clave: Microncleos, trfico, genotxico, contaminacin, Colombia.

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ABSTRACT

Introduction: Cartagena de Indias is a city with abundant traffic, where vehicle engine emissions represent one of the main sources of air pollution. This city is experiencing the phenomenon known as mototaxismo, characterized by the public transportation of people using motorcycles. The exposure of these people to air pollution is extensive, and no information is available regarding the impact of this activity on human health. Objective: To evaluate the frequency of micronucleus (MN) in peripheral blood cells of motorcycle drivers that work in the city of Cartagena de Indias. Materials and methods: In this study participated 103 male individuals, 73 motorcycle drivers and 36 controls. Collection of sociodemographic information, as well as hematological assays and micronucleus evaluation in cells from peripheral blood were performed for each participant. Comparisons between means were executed using the T-test, and relationships between variables were explored by correlation analysis. Results: The average standard error (SE) of MN in erythrocytes of peripheral blood of motorcycle drivers from Cartagena was 0.02 0.004 per 1000 cells, whereas for the control group it was 0.002 0.002 per 1000 cells, with statistical differences between these groups (p<0.05). Statistical correlations were not found between socio-demographic variables and the presence of MN in the studied groups. Conclusions: Motorcycle drivers from Cartagena have greater number of MN in erythrocytes from peripheral blood than people having different job.

Keywords: Micronuclei, traffic, genotoxic, pollution, Colombia.


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INTRODUCCIN

En la actualidad la contaminacin ambiental constituye uno de los principales factores que determina la salud de las personas (1). Cuando las variables

ambientales interaccionan con los aspectos socio-econmicos, el impacto sobre la salud es an ms severo (2). Por ejemplo, a nivel global la contaminacin atmosfrica ha sido asociada a importantes cifras de morbilidad y mortalidad y a un incremento en la rata de enfermedades respiratorias en humanos (3).

Este proceso igualmente ocurre en Colombia, generado, entre diversas causas, por la combustin de derivados del petrleo y el transporte en carretera. Este factor sumado al desempleo y la violencia forzada, cuyas cifras han aumentado a travs de los aos, segn los reportes realizados por el CODES (Consultora para los Derechos Humanos y el Desplazamiento), probablemente estn disminuyendo la posibilidad de bienestar para las familias, con implicaciones econmicas, sociales, familiares y de salud en particular para las familias en donde la supervivencia depende de trabajos poco remunerados y con muy baja estabilidad, como es el caso de los mototaxistas. El mototaxismo constituye hoy da una fuente de empleo para miles de familias de bajos recursos, los cuales, tras la experiencia del desplazamiento del campo a la ciudad, la falta de oportunidades, entre otras causas, han visto en esta forma de trabajo, la nica posibilidad de salir adelante. Sin embargo esta actividad presenta diversos riesgos ambientales y de salud pblica, derivados de la contaminacin ambiental y la poca cultura ciudadana existente en la ciudad.

Hasta el momento no existe ninguna estadstica en relacin con la salud de los mototaxistas. No obstante, es claro que estas personas estn expuestas a multitud de contaminantes atmosfricos frecuentes en los centros urbanos, tales como

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material particulado (4), hidrocarburos aromticos polinucleares (5), xidos de nitrgeno y agentes oxidantes, entre otros, los cuales pueden estar afectando su salud por ser compuestos con conocida actividad genotxica, mutagnica y/o carcinognica (Barale et al., 1991; Guimaraes et al., 2000; Pope et al., 2002).

Dada la presencia de algunos contaminantes en el aire urbano, la hiptesis de esta investigacin es que los mototaxistas presentan mayor ndice de genotoxicidad, medido por la presencia de microncleos en sangre perifrica, en relacin con personas que se dedican a otras actividades como empleados de oficina.

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1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Uno de los graves problemas que enfrenta la poblacin mundial actualmente es la contaminacin ambiental, situacin que preocupa a toda la comunidad internacional si se tiene en cuenta que las grandes ciudades industrializadas son las ms contaminadas (Zhang and Wen, 2008; Wan et al., 2011; Zhang et al., 2010) Sin embargo, esta contaminacin se extiende hasta lugares lejanos no industrializados, con lo que afecta al hombre y a animales (Lazar et al., 2010), por tal motivo la causa de una alarmante y creciente lista de enfermedades en el hombre se le atribuye a la contaminacin ambiental (Miller et al., 2009).

La contaminacin ambiental est asociada con las emisiones de gases generados por la actividad humana, que estn cambiando el clima del planeta, incrementando de esta manera la concentracin atmosfrica de gases (Zhang et al., 2010a; Zhang et al., 2010b) De estos gases uno de los que mayor concentracin presenta en el medio ambiente es el dixido de carbono (CO2), procedente

fundamentalmente del consumo de combustibles fsiles (carbn, petrleo y gas) y la tala y quema de bosques, a esto tambin se suman actividades industriales como produccin de cemento, utilizacin de caliza (diferente a la usada en la elaboracin de cemento), pavimentacin asfltica, industrias de pulpa y de papel, alimentos y bebidas (Hunt et al., 2010). La acumulacin de altas emisiones de estos gases en pases desarrollados, trajo una preocupante situacin de manejo de residuos lquidos que se producen de manera incontrolable (Feo et al., 2009).

De la misma manera, el transporte es considerado una de las principales causas de emisin de contaminantes, debido a que genera muy altos niveles de (CO) monxido de carbono, en menor escala, pero de igual importancia, NOx (xidos de nitrgeno), SOx (xidos de azufre), PM(10) y PM(2) (material particulado) (Barale et al., 1991; Guimaraes et al., 2000; Pope et al., 2002; Zhang et al,.2010), COVNM
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(compuestos orgnicos voltiles diferentes al metano) entre otros, resultado de actividades industriales, por la transformacin la materias primas mediante procesos qumicos y fsicos; no obstante, el crecimiento de la cifra de vehculos y motos en los ltimos aos ha sido continuo, igual a las proyecciones de tendencia de crecimiento de la poblacin. Adems, una mayor poblacin implica una mayor demanda de transporte pblico, un incremento en el nmero de viajes y kilmetros recorridos y por lo tanto, mayor cantidad de contaminantes emitidos a la atmsfera (Moreno, 2008).

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2. JUSTIFICACIN

Hasta el momento no son conocidos los efectos que pueda ocasionar sobre la salud, el trabajo denominado mototaxismo, el cual constituye una fuente importante de ingresos para un porcentaje alto de la poblacin que habita en el norte de Colombia. Por ello, este trabajo ser el primero en generar una aproximacin a lo que puede estar sucediendo con la salud de estas personas. Dado el incremento en el nmero de ciudadanos que viven de este trabajo, y que por lo tanto estn expuestos a gases contaminantes por largos perodos de tiempo, tales como los hidrocarburos aromticos polinucleares (Kishida et al., 2008), metales (Zhang et al., 2010), partculas, CO, NOx, SO2, y productos resultantes de actividades industriales (COVNM), entre otros. Por lo anterior, es coherente inferir que la salud de estas personas est siendo impactada ocupacionalmente, y por tanto el conocimiento de la problemtica es crtico para intentar ayudar en el bienestar de estas personas.

Es claro que diversos componentes presentes en el aire de las ciudades puede conducir a daos en el ADN. Por ejemplo, existe evidencia que seala a los constituyentes de material particulado 2.5 (PM 2.5), como responsable de daos oxidativos sobre el ADN en los humanos (Wei et al., 2010), al igual que partculas presentes en el aire urbano han estado asociadas con efectos adversos sobre la salud (Price et al., 2010), a nivel pulmonar y cardiovascular, como es el caso de Enfermedad pulmonar obstructiva crnica, y enfermedades cardiovasculares, respectivamente. Los hidrocarburos aromticos tambin son considerados agentes potencialmente cancergenos. (D Villarejo et al., 2009).

Uno de los marcadores de importancia relacionados con la presencia de daos en el ADN o a nivel cromosomal es la presencia de microncleos en clulas

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sanguneas (Torres et al., 2010; Au et al., 2010; Rubes et al., 2010; Wei et al., 2010., Pavanello et al., 2010). Por lo anterior, y considerando adems que no existe evidencia que sugiera un cambio en las actividades econmicas de los mototaxistas a mediano plazo, es claro que este trabajo presenta una justificacin coherente por cuanto pretende detectar un enlace entre los problemas de contaminacin por exposicin al aire urbano y los posible efectos de los mismos sobre las clulas sanguneas. Lo anterior ofrecer herramientas para propender por que los mototaxistas puedan ser integrados a un sistema de salud que permita garantizar un impacto mnimo de su actividad sobre la calidad de vida de los mismos.

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3. OBJETIVOS

3.1 OBJETIVO GENERAL Evaluar la frecuencia de aparicin de microncleos en clulas de sangre perifrica de mototaxistas de la ciudad de Cartagena de Indias.

3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Determinar las condiciones laborales y socioeconmicas de una muestra de mototaxistas que laboran en la ciudad de Cartagena de Indias.

Cuantificar la frecuencia de aparicin de microncleos en clulas de la serie blanca como en clulas de a serie roja, en sangre perifrica de mototaxistas que trabajan en la ciudad de Cartagena de Indias, comparando dichos valores con los obtenidos en personas que se dedican a trabajos diferentes.

Establecer asociaciones entre la frecuencia de microncleos y factores socio-demogrficos y laborales de los mototaxistas

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4. HIPTESIS

Los mototaxistas de la ciudad de Cartagena de Indias presentan mayor frecuencia de microncleos en las clulas de sangre perifrica que personas dedicadas a otras actividades.

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5. MARCO TERICO Y ESTADO DEL ARTE

5.1 MOTOTAXISMO

Desde hace ms de una dcada, el mototaxismo ha sido una realidad extendida a lo largo y ancho de nuestro pas, no solo en las grandes ciudades, sino tambin en los pueblos y veredas de nuestra geografa. Ante la falta de oportunidades, el desempleo y los bajos niveles de escolaridad de la poblacin, ser mototaxista se ha convertido en la solucin para poder sobrevivir. Sin embargo, a pesar de que este oficio le trae beneficios a quienes viven de l, o a quienes lo tienen para su uso personal, esta modalidad de trabajo informal ha trado problemticas como el aumento de accidentes, congestin vehicular y contaminacin del medio ambiente (Snchez, 2011); (El Heraldo.co. Junio 1 de 2011).

Los inicios del mototaxismo en Colombia, segn varias fuentes, tiene lugar en Cotorra, municipio perteneciente al departamento de Crdoba, extendindose luego al departamento de Sucre, ms tarde Bolvar, y tomando fuerza hasta la mayora de las capitales de la costa Caribe Colombiana (El Espectador.com. Julio 8 de 2011) y de igual forma, gran parte del pas. Es de esta manera como puede evidenciarse que para el ao 2000 en Colombia, el parque automotor de motocicletas registr cifras de 1.123.764 unidades, presentando para el 2003 un aument de 89.000 unidades; con un incremento consecutivo hacia los aos 2004 con 150.943 y 2005 con 248,741 unidades respectivamente. De acuerdo con estos datos puede apreciarse un incremento del 59% de unidades de motocicletas partiendo del ao 2000 al 2005. Respecto al crecimiento del parque automotor de motocicletas en Colombia, el crecimiento ha sido de 64.8% aproximadamente, segn anlisis recientes (Fuente fondo de prevencin vial).

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No existen estadsticas concretas del nmero de mototaxistas que hay en la actualidad en el pas, pero se cuenta con algunos censos y estudios que se han publicado en algunas regiones. Segn cifras oficiales de la secretara de trnsito y transporte municipal de Sincelejo, el servicio del mototaxismo es prestado en la ciudad por una cifra de 20.000 personas aproximadamente (Snchez, 2011).

Esta forma de trabajo informal que surge por la necesidad de un bienestar, en la actualidad es una actividad comn en muchas ciudades, la cual representa una seria competencia para el transporte pblico, razones, entre otras, por las que vienen realizndose estudios al respecto, como puede sealarse las

investigaciones sobre este fenmeno del mototaxismo a cargo de varias universidades y censos de alcaldas, en seis capitales de la Costa atlntica, que muestran que en tres aos (2005 - 2008), el mototaxismo aument de 33 mil a 86 mil mototaxistas (El Tiempo.com. Abril 14 de 2008).

La Alcalda de Montera realiz un censo de mototaxistas en la ciudad que arroj un nmero de 2.700 personas dedicadas de tiempo completo a esta actividad (El Tiempo.com. Febrero 10 de 2009). En Cartagena, a pesar de que estn matriculadas oficialmente 12.000 motos aproximadamente, se estima que en la ciudad puede haber ms de 50.000 de estos vehculos, muchos de los cuales se usan para mototaxismo. En el estudio denominado, el Sexto Estudio Sociodemogrfico de los Usuarios de Motos en Colombia, es revelado que el 67% bolivarense compran moto para ganar un sustento (El Universal.com.co. Junio 6 de 2011).

Aunque el mototaxismo constituye la nica fuente de ingresos para muchas familias, las personas dedicadas a este oficio deben permanecer en las calles durante muchas horas al da, expuestos a radiacin solar y a diversidad de contaminantes ambientales, generados por el trfico urbano (Chien and Huang

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2010; Mills et al., 2011). A continuacin son presentados los aspectos de mayor relevancia dentro de la contaminacin atmosfrica en las ciudades.

5.2 CONTAMINACIN AMBIENTAL EN ZONAS URBANAS Una de las definiciones de contaminacin es la presencia de elementos en la atmsfera que alteran su composicin y que afectan a cualquier componente del ecosistema. Desde un punto de vista antropocntrico la contaminacin atmosfrica se refiere a los contaminantes que afectan la salud o el bienestar humano
(Morales 2006). En la actualidad, el resultado del desarrollo y progreso tecnolgico

ha originado diversas formas de contaminacin, las cuales alteran el equilibrio fsico y mental del ser humano. Debido a esto, la actual contaminacin se convierte en un problema ms crtico que en pocas pasadas, (Wan et al., 2011). La contaminacin del aire en las ciudades desarrolladas se debe a los escapes o emisin de gases de los motores del trfico por quema de combustibles fsiles, a los aparatos domsticos al igual que las industrias por combustin, liberados a la atmsfera en forma de gases, vapores o partculas slidas capaces de mantenerse en suspensin, en concentraciones superiores a las normales, perjudicando la salud del ser humano como animales y plantas (Mills et al., 2011). El aire que respiramos est compuesto principalmente de nitrgeno y oxgeno, as como de otros gases en pequeas concentraciones. Entre estos, se encuentran gases que contaminan el aire y que se consideran potencialmente txicos como el ozono (O3), monxido de carbono (CO), dixido de azufre (SO2), xidos de nitrgeno (NOx), hidrocarburos aromticos polinucleares (HAPs) (Kishida et al., 2008), compuestos orgnicos voltiles (COV), Algunos de estos compuestos carcingenos, como el benceno y el butadieno (D Villarejo, 2009), metales pesados y aerosoles y material particulado respirable (PM 2,5 y PM 10) (Reed et al., 2008). Debido a la diversidad de compuestos presentes en la contaminacin del aire, podran generarse efectos agudos y crnicos en la salud humana, afectando diferentes sistemas y rganos (Kampa and Castaas, 2008).
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Tabla 1. Descripcin de los principales contaminantes atmosfricos qumicos y sus fuentes


CONTAMINANTE Partculas en suspensin (PM): PM10 y Humos negros FOMACIN Primaria y secundaria ESTADO FSCO Slido, Lquido FUENTE Vehculos, procesos industriales, humos de tabaco

Dixido de azufre (SO2) Dixido de Nitrgeno (NO2)

Primaria Primaria y secundaria

Gas Gas

Procesos industriales, vehculos Vehculos, estufas de gas

Monxido de Carbono (CO)

Primaria

Gas

Vehculos, humos de tabaco, combustiones de interiores Vehculos, industria, humos de tabaco, combustin de interiores Vehculos, industria Vehculos (secundario a fotooxidacin de NOx y compuestos orgnicos voltiles).

Compuestos orgnicos voltiles (COVs)

Primaria, secundaria

Gas

Plomo (Pb) Ozono 8(O3)

Primaria Secundaria

Slido (Partculas finas) Gas

PM10: Partculas con dimetro inferior a 10 mm; NOx: xidos de Nitrgno Fuente: Ballester, 2005.

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Los contaminantes ambientales son llamados primarios y secundarios Primarios cuando se encuentran tal y como fueron emitidos y secundarios, cuando son formados a partir de los primarios como consecuencia de transformaciones reacciones qumicas y fsicas. Ejemplos de estos ltimos son el O 3, los cidos sulfrico y ntrico, derivados de la contaminacin fotoqumica y la acidificacin del medio, respectivamente (Ballester, 2005; Oyarzun, 2010; Morales 2010). As mismo, muchos COVs han sido identificados mediante espectrometra de masas y cromatografa de gases en muestras urbanas estudiadas, incluyendo alcoholes, carbonilos, alcanos y aromticos, en donde el etanol aparece como el principal actual COV (Chung et al., 2010). Las caractersticas de los principales contaminantes qumicos y sus fuentes ms importantes son presentadas en la Tabla 1.

Los HAPs

son compuestos semivoltiles (Zhang et al., 2011) que contienen

hidrgeno (H) y carbono (C), entre los que puede mencionarse el metano, acetileno, benceno, tolueno, etc. (Zhang, Eddings and Sarofim, 2008), su importancia radica en que son considerados cancergenos, principalmente los que tienen cinco anillos (Dichut et al, 2000) y son producidos durante la combustin incompleta de combustibles fsiles mediante un proceso piroltico (Sanderson y Farant, 2000).

Pueden producir efectos perjudiciales sobre la salud a diferentes escalas, existen los que no representan ningn riesgo para la salud, otros, que pueden comportase como poco txicos y que por la razn de contribuir a la formacin de otras sustancias como el ozono se consideran como contaminantes a tener en cuenta en cualquier control de emisiones; y por ltimo est un grupo que en general, son contaminantes muy txicos, y se encuentran ampliamente distribuidos en el medio ambiente (Bolognesi et al.,1997); La exposicin a HAPs por inhalacin, produce efectos distintos dependiendo del tipo de hidrocarburo en estudio. Los hidrocarburos aromticos: benceno y tolueno, son los ms irritantes, pudiendo

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causar lesiones importantes en las membranas mucosas si sus vapores son inhalados. Los hidrocarburos no saturados son los ms peligrosos por su facilidad de reaccionar con la radiacin solar originando el conocido smog fotoqumico (Wang, Du and Ge., 2009), adems los HAPs son considerados agentes potencialmente cancergenos (D, Villarejo et al., 2009), estudios han demostrado que los HAPs pueden interactuar con el material gentico, sobre las cadenas de cido desoxirribonucleico (ADN), provocando un incremento en los errores durante la mitosis y hasta muerte celular (Caldern-Segura et al., 2004).

En el medio ambiente se han estudiado ms de 3.000 compuestos qumicos, identificados en la atmsfera ambiental, de los cuales una variedad de agentes son mutagnicos y/o carcinognicos, como HAPs, aminas aromticas y compuestos heterocclicos. Existen reportes de asociaciones positivas entre marcadores citognicos y niveles de HAPs en el aire, mediante estudios experimentales y humanos. (Bolognesi et al., 1997).

Algunos HPAs como Benz[a]antraceno (BA), dibenz[a]ntraceno

(DBA) y

dibenzo[a]pirenos se han encontrado en productos fsiles de combustin incompleta y otros materiales orgnicos, lo cual podra tener influencia sobre la poblacin que labora a nivel industrial, es decir, que la relacin de los trabajadores con el medio, puede ser un factor de exposicin a los qumicos por inhalacin. (Zhong et al., 1995).

Otro compuesto aromtico policclico es el fenantreno (PHE), considerado uno de los PAHs prioritarios para la Agencia de Proteccin Ambiental (EPA) de los Estados Unidos, el cual se encuentra en el ambiente acutico debido a fuentes tanto petrognicas como pirognicas, y se ha comprobado su efecto txico en varias especies marinas (Albers 2003). Por su gran distribucin, los organismos acuticos, como los peces, pueden absorber estos compuestos del agua travs

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de las branquias y mediante la ingestin de sedimentos o alimentos contaminados (Hick et al., 2007).

El aire urbano tambin est constituido por partculas denominadas

material

particulado (PM), el cual ha sido asociada con una variedad de efectos adversos para la salud. Estas partculas que se encuentran suspendidas pueden encontrarse de diferentes dimetros a saber, de 10 m , 2.5 y las ms pequeas con un dimetro de 0.1 m. Las de un dimetro menor o igual a 10 m (PM10) son llamadas respirables por su capacidad de introducirse en las vas respiratorias; Las partculas finas con dimetro aerodinmico 2.5 m alcanzan fcilmente los bronquolos terminales y los alvolos, desde donde pueden ser fagocitadas por los macrfagos alveolares y atravesar la barrera alvolo-capilar para ser transportadas hacia otros rganos por la circulacin sangunea. Por ltimo las partculas denominadas ultrafinas o nanopartculas por su menor dimetro, 0.1 las cuales pueden pasar directamente desde los alvolos al torrente circulatorio (Morales 2010; Oyarzun, 2010).

Existen muchos reportes de estudios sobre material particulado relacionados con disfuncin respiratoria han sido realizados en Estados Unidos y Europa (Crebelli et al., 1995; Viras et al., 1991; Isidoro et al., 2003), por lo cual se cree en la actualidad que las partculas ms pequeas, ultrafinas o nanopartculas suelen ser las ms perjudiciales, es decir, cuanto menor sea el dimetro de la partcula, mayor capacidad tendr por penetrar al rbol respiratorio, razn por las que se le atribuye su efecto ms grave sobre la salud (Price et al., 2010).

No obstante, en el ambiente pueden encontrarse presentes otros compuestos tales como el dixido de azufre, el cido sulfrico y los sulfatos, los cuales producen un efecto irritante sobre las mucosas del tracto respiratorio, pudiendo ocasionar enfermedades crnicas del sistema respiratorio, como bronquitis y enfisema pulmonar (D Villarejo, 2009).

30

Este efecto daino de los xidos de azufre puede incrementarse al estar presentes en una atmsfera con partculas suspendidas, por la razn de que el dixido y el cido sulfrico paralizan los cilios del tracto respiratorio y de esta manera, las partculas de polvo penetran en los pulmones arrastrando tambin los compuestos azufrados, originando entonces graves daos, e incluso la muerte (D Villarejo, 2009).

El ozono es considerado igualmente un gas contaminante, generado a nivel troposfrico, capaz de provocar efectos nocivos para el hombre, animales y plantas, produciendo tos, flema, dolor al respirar e inflamacin en el tejido pulmonar. Reduce la capacidad respiratoria, disminuye la capacidad mucociliar, y debilita las defensas naturales del aparato respiratorio (D Villarejo, 2009).

El dixido de nitrgeno (NO2) como es uno de los principales gases contaminantes atmosfricos ya que puede formar cido ntrico y cido nitroso, componentes de la lluvia cida por reaccin con agua, lo que produce irritacin de los alvolos pulmonares y puede llegar a ser mortal en altas concentraciones. Los efectos txicos del NO2 dependen de su concentracin ambiental. Estudios demuestran que la formacin de ozono est influenciada por la emisin de contaminantes que actan como precursores (como los xidos de nitrgeno emitidos en rea urbana precedentes de complejos de refinera) y por condiciones meteorolgicas (Borrego et al., 2010).

La fuente principal de emisin de monxido de carbono (CO), lo constituye los motores de combustin interna, el cual no produce efectos txicos, pero a elevadas concentraciones puede afectar seriamente el metabolismo respiratorio, debido a la alta afinidad de la hemoglobina por este compuesto, de tal manera que las emisiones de CO en un rea cerrada, pueden causar la muerte por insuficiencia cardaca (D Villarejo, 2009).

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5.2.1 Enfermedades asociadas a la contaminacin ambiental El hombre es en gran parte responsable de que la calidad del aire reaccione como un producto nocivo (Flores et al., 2010). Numerosas enfermedades han sido relacionadas con la contaminacin ambiental, teniendo en cuenta que la salud de los seres vivos se ve influenciada en forma importante por el entorno en el cual viven. Entre estas, las ms frecuentes y que presentan fuerte asociacin con la contaminacin son enumeradas a continuacin:

5.2.1.1. Enfermedad pulmonar obstructiva crnica (EPOC). Los contaminantes atmosfricos contribuyen tambin en la disminucin de la funcin pulmonar y al aumento de la reactividad bronquial, en la disminucin de la tolerancia al ejercicio y al aumento del riesgo de bronquitis obstructiva crnica, enfisema pulmonar, exacerbacin del asma bronquial y cncer pulmonar, entre otros efectos (Oyarzun, 2010). La enfermedad pulmonar obstructiva crnica (EPOC) se define desde el punto de vista clnico como la obstruccin crnica y poco reversible al flujo areo (Almagro et al., 2010). Es una entidad caracterizada por limitacin progresiva del flujo espiratorio que no es completamente reversible derivada de dao bronquiolar y enfisema pulmonar, asociada a una respuesta inflamatoria anormal del pulmn a la inhalacin de gases y partculas nocivas (Morales et al., 2010) Se calcula que incrementos de 10 mg/m 3 en los niveles atmosfricos de ozono y de 1 mg/m3 en los de monxido de carbono se asocian con una aumento de los ingresos hospitalarios del 6,1 y del 3,9%, respectivamente (Ballester et al., 2005).

5.2.1.2. Enfermedades cardiovasculares. De acuerdo con estudios, reportes en la literatura internacional refieren una mayor frecuencia de hospitalizaciones y muertes de origen cardiovascular durante los perodos de elevada concentracin de partculas contaminantes, como ocurre en la estacin invernal (Zanobetti, Schwartz y Dockery, 2000; Peters et al., 2001). Entre estas enfermedades cardiovasculares, el colesterol elevado, hipertensin o alta presin sangunea, y las enfermedades del corazn, afectan el corazn al estrechar las arterias y al

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reducir el flujo sanguneo que recibe el corazn, lo que hace que el corazn trabaje ms. Con base en estudios poblacionales, hay indicios de que la exposicin a la compuestos qumicos del aire por como partculas finas y ultrafinas, hidrocarburos aromticos policclicos, aldehdos, y los metales podran a elevar el riesgo de ECV asociado a aterognesis, trombosis, o regulacin de la presin arterial, aumentando el riesgo de morbilidad y mortalidad cardiovascular (O'Toole, Conklin y Bhatnagar, 2008) Durante el episodio de smog (compuesto por altas concentraciones de dixido de sulfuro y humo negro) de Londres de 1952 fue observado que la mortalidad por causa cardiopulmonar fue duplicado (Iniesta et al., 2009).

5.2.1.3. Alergia. El aire contiene contaminantes biolgicos, que pueden ser de dos tipos: Microorganismos que pueden ser transmitidos por el aire, aunque no puedan desarrollarse en l. Son virus, bacterias u hongos que causan enfermedades infecciosas. Sustancias o partculas procedentes de animales o plantas, como las heces de algunos artrpodos o el polen de determinadas plantas. Pueden producir enfermedades respiratorias o alergias.

El polen de las plantas anemgamas (que utilizan el viento como medio de polinizacin), como gramneas (trigo, cebada, centeno, etc), oleceas (olivos) y urticceas (ortigas), es el principal contaminante biolgico del aire, aunque sus efectos se limiten al periodo de floracin.

No obstante, la salud es afectada por el polen, presentando como principal efecto el desarrollo de sntomas alrgicos: asma, rinitis y conjuntivitis. Estudios a nivel internacional, como sucede en Espaa, sealan que la alergia al polen afecta a un 20% de la poblacin, aunque esta cifra va en aumento. Por otra parte, la contaminacin atmosfrica, que afecta a las vas respiratorias, y los hbitos

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higinicos en los pases desarrollados, lo cual favorece el desarrollo del sistema inmunitario, parecen ser las causas de la cada vez mayor incidencia de este tipo de afecciones (http://www.bioygeo.info/pdf/04_Contaminacion_Atmosferica.pdf)

Cambios notorios en la elevacin de la temperatura y el aumento de la humedad ambiental incrementan la produccin de polen de abedules, as mismo en el caso de otros tipos de plenes, como el de la artemisa, han sido relacionados con un incremento en la produccin de ambientes con altas concentraciones de dixido de carbono (Iniesta et al.,2009).

Dado que entre los contaminantes atmosfricos existen varios que pueden generar dao al ADN o los cromosomas, varios autores han mostrado que los efectos de la contaminacin del aire puede ser monitoreada evaluando marcadores de toxicidad indirectos, dentro de los cuales estn: anlisis de la concentracin de contaminantes usando sensores, xido ntrico en el asma (De Diego, 2010) y medicin de partculas suspendidas (Flores et al., 2010).

Como es evidente, la contaminacin ambiental es un tema de gran preocupacin, especialmente para los investigadores, razn por la cual, estos, a travs de los aos, buscaron la forma de implementar pruebas que permitieran determinar si estos compuestos que se encuentran en el medio ambiente, podan causar efectos sobre la salud del ser humano, especialmente, sobre el material gentico (ADN) del mismo. Bajo este contexto, los individuos estn expuestos a la

contaminacin de aire de manera directa que podra afectar su genoma. Una forma relativamente sencilla de analizar alteraciones en la integridad gentica es el ensayo de microncleos. Esta prueba es aplicada a muchos estudios y es empleado con mucha frecuencia en investigacin ambiental.

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5.3. MICRONUCLEOS Durante la divisin celular, el material gentico contenido en el ncleo celular, se replica y divide equitativamente dando lugar a dos clulas hijas idnticas; este proceso puede producirse de manera errnea debido a alteraciones durante la replicacin y posterior divisin del ADN, a roturas cromosmicas y al efecto de radiacin y de sustancias genotxicas, producindose perdida cromosmica y haciendo que el reparto del material gentico no sea equitativo (Zalacan et al., 2005). Al ocurrir esto, el material gentico que se desprende y, por tanto, queda excluido y no se incorpora correctamente al ncleo de la clula hija, origina un nuevo ncleo de menor tamao que el primero denominado microncleo (MN), visible fcilmente al microscopio ptico, el cual se originan de fragmentos cromosmicos acntricos o cromosomas enteros que han quedado rezagados en la anafase durante la divisin nuclear (Zalacain 2005; Fenech 2006, 2007).

Entre las definiciones planteadas, los microncleos son masas de cromatina que tienen un aspecto similar al del ncleo principal y se ven como pequeos ncleos en el citoplasma de las clulas interfsicas (Venegas et al. 2002). Se describe como un ncleo ms pequeo, comparado con el presente normalmente la clula, fcilmente identificable por microscopa de luz luego de la obtencin de la muestra respectiva, previa preparacin y tincin del frotis, haciendo posible evidenciar el nmero de microncleos presentes en los eritrocitos y policromticos (Samanta y Dey, 2010).

Durante el evento biolgico de maduracin del eritroblasto, este se transforma a eritrocito o clula madura, donde el ncleo principal es expulsado, mientras que el microncleo puede ser conservado en el citoplasma. A nivel molecular es generada una perturbacin expresada a travs de los microncleos, que se forman por condensacin de fragmentos cromosomales o cromosomas enteros que no fueron incorporados en el ncleo hijo durante la mitosis (anafase), debido tanto a rupturas como a mala segregacin cromosmica. De tal forma que pueden

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observarse en el citoplasma separados del ncleo principal, (Heddle et al. 1991; Gudi et al.1992 en Palm & Krause 1995; Al-Sabti & Metcalfe 1995; Gauthier et al. 1998; Chung et al. 2002; Alay et al. 1994 en Gaviln 2003, Adams 2002).

Varios factores podran ocasionar esta perturbacin, as por ejemplo, la exposicin a residuos contaminantes, como, pesticidas, con conocidas propiedades genotxicas y clastognicas lo cual genera respuestas a distintos niveles en los organismos vivos (Martnez y Gmez, 2007).

5.3.1. Formacin de microncleos. Entre los investigadores involucrados pueden destacarse Countryman y Heddle en 1976, por ser los primeros investigadores que de manera independiente propusieron el ensayo de microncleos (MN), como una prueba alternativa y simple para determinar el dao cromosmico en poblaciones celulares en divisin (Arencibia y Rosario, 2009). Del mismo modo, Heddle (1973) y Schmid (1975) en Al-Sabti & Metcalfe (op cit.), quienes expusieron que los microncleos son formados en el citoplasma a travs de los siguientes eventos:

1) En la anafase, una cromtida cntrica y fragmentos cromosomales rezagados con retraso cuando los elementos cntricos van hacia los polos del huso. Los microncleos se presentan de fragmentos cromosomales o cromosomas acntricos que no son incorporados en el ncleo hijo en la mitosis porque carecen de centrmero.

2) Los elementos rezagados pueden ser incluidos en el ncleo de las clulas hijas, pero una proporcin de una o varios ncleos secundarios los cuales son mucho ms pequeos que los ncleos principales (1/5 o 1/20), y son por lo tanto llamados microncleos. Los cuales no pueden ser observados hasta despus del primer ciclo celular. (Figura1).

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Figura 1. FORMACIN DE MICRONCLEOS

Fuente: Heddle, 1973 y Schmidt, 1975.

Por otra parte los MN pueden formarse de fragmentos acntricos y por cromosomas enteros que derivan de fragmentos acntricos se forman por ruptura directa del ADN, replicacin del ADN daado e inhibicin de la sntesis de ADN, en tanto que, los que se originan de cromosomas enteros se forman por alteraciones del huso mittico, del cinetocoro, dao en las subestructuras del cromosoma u otras partes del huso mittico y alteraciones en la fisiologa celular (Albertini 2000). (Figura 2).

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Figura 2. Posibles mecanismos de formacin de microncleos

(2N+MN) + 2N 2N + (2N+MN)

(2N+MN) + (2N-1)

2N+ ((2N-1)+ MN)

(2N+MN) + 2N 2N + (2N+MN)

(2N-1+MN) + (2N-1)

(2N-1+MN) + (2N-1)

Metafase

Anafase

Metafase

Anafase
(2N+MN) + (2N-1)

B
2N + 2N
(2N+1) + (2N-1)

2N+ ((2N-1)+ MN)

(2N-1+MN) + (2N-1) (2N+MN) + (2N-1) 2N+ ((2N-1)+ MN)


(2N+MN) + (2N-1) 2N+ ((2N-1)+ MN)

(2N-1+MN) + (2N-1)

Metafase

Anafase
Replicacin tarda

E
Metafase

(2N-1+MN) + (2N-1) (2N-1+MN) + (2N-1)

Modificaciones epigenticas

Metafase

Anafase

Anafase

Diagrama que representa la formacin mecanismos propuestos en la formacin de MN. A. Rompimiento de ADN que originan fragmentos cromosomales acntricos. B. Alteraciones en la fijacin de las fibras de tubulina del huso acromtico con los cinetocoros de los centrmeros cromosomales. C. Despolimerizacin de la tubulina. D. Defectos centromricos asociados a alteraciones en los cinetocoros. E. Replicacin tarda del DNA y modificaciones epigenticas de las histonas (hiperacetilacin, metilacin y fosforilacin). Fuente: Kirsch et al 2002; Mateuca et al 2006; Fenech et al 2011; Kirsch et al 2011.

Estudios demuestran que estos microncleos envueltos en la membrana nuclear, se forman por piezas de ADN retrasados despus de la segregacin de los cromosomas homlogos durante la anafase, como resultado de cromosomas que no poseen centrmero acntricos, con apariencia de fragmentos cromosomales o provocado por agentes denominados

cromosomas

fenmeno

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clastognicos o porque la formacin del huso o enlace es interrumpido, producto de la intervencin de un agente aneugnico (Adams 2002).

Mediante estudiados ha sido posible identificar compuestos involucrados en desencadenar este efecto. Gudi et al. (1992) y Palm and Krause (1995) sealan que agentes que inducen aneuploida (venenos de huso mittico) inducen microncleos con centrmeros, mientras clastgenos inducen microncleos sin centrmeros (Norppa et al., 1993). As Nepomuceno et al., (1997) sealan que los microncleos son indicadores de efectos clastognicos y aneugnicos.

Entre las ventajas del ensayo de MN podran mencionarse que: estas estructuras son fcilmente detectados mediante observacin en microscopio ptico o por fluorescencia en la placa porta objetos con ADN (muestra) teido; Provee ndices de genotoxicidad, requiere no ms de un microscopio, no necesita complejos laboratorios, sin embargo la enumeracin al microscopio de muchas clulas consume tiempo (Adams 2002).

Para la medicin de los MN en un extendido en placa, estudios iniciales realizados en animales, segn reportes de la literatura, han utilizado eritrocitos policromticos jvenes procedentes de la mdula sea de mamferos de laboratorio que fueron expuestos, por vas apropiadas, a una sustancia determinada. Luego de extraer la mdula sea, fueron realizados los extendidos, coloreados, posteriormente vistos al microscopio ptico y finalmente cuantificado el nmero de microncleos presentes en los eritrocitos policromticos y normocromticos. (Arencibia., et al 2011).

5.3.2. Criterios para identificar microncleos. Mediante estudios se han formulado criterios para la identificacin de estructuras donde incluyen los MN, que tratan sobre las caractersticas necesarias para ser reconocidos como tal y permitan un recuento fiable y objetivo a partir de criterios de seleccin de las

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clulas binucleadas (BN) y de los MN, (Fenech, 2000; Fenech et al., 2003; Zalacain 2005), definidos con base en

http://ehs.sph.berkeley.edu/holland/humn/projects/lymphocy tes/ variability.

La Tabla 2 muestra

los criterios para la identificacin de MN.

Tabla. 2. Criterios de identificacin de microncleos definidos por el HUMAM-project

El dimetro del MN debe tener una medida entre 1/16-1/3 del dimetro del ncleo principal (menos de una mitad del ncleo principal). No refractarios Intensidad de tincin similar a el ncleo principal No unidos a el ncleo de la clula de origen Pueden tocar el ncleo de la clula de origen pero no superponerse con l y su membrana debe verse con claridad
Fuente: Fenech, 2000; Fenech et al., 2003.

5.3.3. Utilidad del ensayo de microncleos. Han sido descritos los usos de la tcnica de recuento de MN, como medida de dao cromosmico sobre cultivos de linfocitos humanos, propuesta por primera vez por Countryman y Heddle en 1976, cuyo nico requisito era la eleccin de tipos celulares con gran actividad mittica. Este ensayo de genotoxicidad fue mejorado por Fenech y Morley, ms tarde, en 1985, tras lograr detener el proceso de divisin celular cuando la clula slo hubiese sufrido una divisin mittica, avance que fue posible con el desarrollo de la tcnica del bloqueo de la citocinesis (CBMN: cytokinesis-block micronucleus) cuyo fundamento es la utilizacin de un agente qumico denominado citocalasinaB cuya funcin es impedir la citocinesis celular (Fenech y Morley, 1985).

Partiendo del concepto que el ensayo de MN es una herramienta para evidenciar efectos clastognicos y aneugnicos (Norppa and Falck, 2003), de la misma manera, la prueba ha sido utilizada para la determinacin de respuestas

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genotxicas, en todo tipo de organismos incluso en animales, como los peces por ejemplo (Carrasco et al. 1990; Pacheco y Santos 1997, 1998). Mediante estos estudios iniciales en animales, fue posible demostrar que para hallar los MN en una muestra, la clula analizada debe cumplir una condicin, es decir, se requiere una divisin celular despus del dao para que puedan formarse los microncleos y ser visualizados (Fenech y Morly, 1985) por lo que stos proporcionan un ndice til y confiable de la ruptura y prdida de (Koppe and Starling 2001).

Esta prueba de microncleos ha sido considerada como un ensayo in vivo a corto plazo destinado a descubrir las lesiones cromosmicas o del aparato mittico inducidas por sustancias qumicas. Es as como los estudios realizados en animales con este ensayo, se basan en un aumento del nmero de microncleos en los eritrocitos policromticos y normocromticos de los animales tratados respecto de los animales testigo (Koppe and Starling 2001).

Con base en las razones anteriores, el Test o ensayo de microncleos es considerado como una de las metodologas existentes para el anlisis de biomarcadores realizado a travs de la evaluacin de respuestas biolgicas ante algn contaminante o la suma de estos, fenmeno que ocurre durante la mitosis como respuesta ante la perturbacin a nivel celular (Arcand-Hoy and Metcalfe 2000).

El uso de este Test como indicador biolgico de la exposicin a contaminantes qumicos genotxicos es apoyado por varios autores (Hoofman and de Raat, 1982; Manna et al. 1985; Hose et al. 1987; Brunetti et al. 1988; Metcalfe 1988; Long & Buchman 1989 en Carrasco et al. 1990 y Koppe and Starling 2001) y se fundamenta en la accin clastognica que tienen algunos compuestos qumicos sobre el ADN cromosmico (Alay et al. 1995).

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La metodologa del ensayo de microncleos se ha puesto en prctica en diferentes campos de la investigacin, bien sea para estudios en animales, plantas, incluso el ser humano. En 1999, la prueba fue validada y considerada a nivel mundial como biomarcador efectivo del dao de ADN (Zalacain et al., 2005), y desde entonces ha sido ampliamente utilizada como marcador de dao genotxico (Olgun et al., 2007, Bloching et al., 2008; Palacio et al., 2009; Fortin et al., 2010).

5.3.4. Deteccin de alteraciones genticas. En la actualidad varias tcnicas son utilizadas para la deteccin de anormalidades celulares ocasionadas por agentes xenobiticos. Entre las que puede mencionarse el anlisis del cariotipo, el cual ha sido tradicionalmente utilizada para detectar desrdenes genticos, lo cual es valorado como un aspecto relevante para el diagnstico de casos de cncer, considerndose el factor pronstico ms importante en los pacientes que padecen esta enfermedad (Slovak et al., 2000; Byrd et al., 2002).

Otras de las tcnicas relacionadas con las alteraciones genticas son la hibridacin in situ con fluorescencia (FISH) y la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), las cuales son habitualmente empleadas, a nivel no slo

diagnstico, sino en el seguimiento de pacientes con neoplasias, especficamente en la deteccin de translocaciones (Calasanz, 2001), siendo la PCR, la tcnica actual de deteccin estndar para estos desrdenes (Zelenetz et al., 1991).

5.3.5. Biomarcadores para contaminacin ambiental. Un biomarcador es un indicador de la respuesta biolgica de un organismo frente a la agresin de un xenobitico o sustancia qumica, generalmente un txico, o los metabolitos que resulten de su biotransformacin, cuya determinacin en los lquidos biolgicos, tejidos o aire exhalado permita evaluar la intensidad de exposicin o riesgo para la salud. Por otro lado, el uso de los biomarcadores resulta de gran ayuda en la evaluacin del riesgo de exposicin como una relacin causa efecto y, particularmente para controlar riesgos (World Health Organization).

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Los marcadores biolgicos, biomarcador o indicador biolgico de exposicin a un compuesto, como se les conoce ,puede ser el propio compuesto, los productos procedentes de reacciones de conjugacin, aductos formados por reaccin del compuesto o por sus metabolitos caractersticos respectivamente, igualmente, para cada una de las tres posibilidades, con macromolculas, interferencias bioqumicas o enzimticas medibles, etc. (Periago, 2003). Estas seales actan como respuestas fisiolgicas que reflejan una exposicin, una respuesta celular precoz, o una susceptibilidad inherente o adquirida (Silberged y Davis, 1994).

Existe una variedad de biomarcadores utilizados para valorar eventos por exposicin a txicos, entre los principales y de acuerdo con el propsito pueden definirse como biomarcadores de exposicin y biomarcadores de efecto. Los primeros son respuestas que indican la exposicin a qumicos, pero no provee conocimiento de los efectos adversos en algn nivel del organismo. El biomarcador de efecto es el parmetro que refleja la interaccin del compuesto qumico con los receptores biolgicos de un organismo, provocando alteraciones que anteceden al dao estructural, su deteccin permite la identificacin precoz de exposiciones excesivas o peligrosas y tomar medidas preventivas. Estos biomarcadores pueden producir reacciones como nefrotoxicidad, hepatotoxicidad, neurotoxicidad y genotoxicidad principalmente (World Health Organization).

El uso de los biomarcadores de exposicin presentan la ventaja de tener en cuenta aspectos por individual en una poblacin, evalan la vulnerabilidad laboral en estudios epidemiolgicos, el tratamiento para respuestas a la exposicin y contribuyen al conocimiento del metabolismo del xenobitico (Barret, 1997).

Durante las ltimas dcadas, han sido usados biomarcadores en diferentes tipos de estudios, como es el caso de dao cromosmico, la inestabilidad del genoma y el riesgo de cncer, (Bolognesi, 2003; El-Zein et al., 2006; Iarmarcovai et al., 2008; Olivero 2008), anlisis de varios tipos celulares, tales como linfocitos,

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eritrocitos normocromticos y policromticos y clulas epiteliales exfoliadas (Koppe and Starling 2001; Diler and Celik, 2011; Dertinger et al., 2011; Fenech et al., 2011; Pandey y Rizvi, 2011).

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6. METODOLOGA

En este estudio participaron 109 individuos varones, 73 mototaxistas y 36 controles. Recoleccin de informacin sociodemogrfica, as como anlisis hematolgicos y evaluacin de microncleos en clulas de sangre perifrica fueron realizados a cada individuo. Comparaciones entre medias fueron realizadas usando el T-test y asociaciones entre variables mediante anlisis de correlacin.

La propuesta metodolgica para el desarrollo de ste proyecto, estuvo enmarcada en las etapas descritas a continuacin:

6.1. POBLACIN EN ESTUDIO El presente estudio de tipo descriptivo fue realizado en la ciudad de Cartagena de Indias, en el Departamento de Bolvar-Colombia, (10 26 N 75 30 0) con la participacin de setenta y tres (73) individuos varones, los cuales laboran como mototaxistas en la extensin de la cuidad, as mismo, treinta y seis 36 individuos de sexo masculino que se desempean en otras labores o trabajos de interior, residentes en la ciudad de Cartagena, quienes fueron incluidos en el estudio como grupo control.

6.1.1.

Criterios

de

inclusin.

La

participacin

de

los

individuos

que

voluntariamente accedieron a hacer parte de este estudio estuvo enmarcada dentro de los siguientes criterios de inclusin: Haber trabajado como mototaxista por un perodo mnimo de dos aos a la fecha de estudio. Trabajar mnimo cuatro horas al da. Tener una edad comprendida entre 20 y 40 aos. Tener buen estado de salud.
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6.1.2. Criterios de exclusin No tener historia personal de cncer. No haber estado expuesto previamente a radiaciones o haber recibido radioterapia o tratamiento con medicamentos quimioteraputicos. No presentar enfermedades infecciosas en el momento de inclusin al estudio o en los tres meses previos. Poseer un buen estados de salud, sin enfermedades crnicas tales como diabetes, presin arterial, problemas cardacos, visuales, respiratorios, drmicos, VIH-SIDA, infecciones de transmisin sexual.

Para los trabajadores sin exposicin directa o grupo control, fueron aplicados los criterios anteriores, excepto: Haber trabajado como mototaxista.

Antes de la toma de muestra, cada individuo recibi informacin detallada (Anexo 1) relacionada con el proyecto, as como el respectivo consentimiento informado (Anexo 2), el cual fue ledo en voz alta. Una vez firmado y por tanto aceptada la participacin del voluntario en el estudio, le fue extrada la muestra de sangre.

6.2. OBTENCIN DE LA MUESTRA DE SANGRE. Una muestra de cuatro mililitros 4 mL de sangre perifrica fue obtenida de cada voluntario por puncin venosa, usando tubos vacutainer con cido

etilendiaminotetracetico (EDTA) como anticoagulante. La muestra fue llevada en un tiempo no mayor a dos horas, al laboratorio de Ecotoxicologa, del Grupo de Qumica Ambiental y Computacional de la Facultad de Ciencias Farmacuticas de la Universidad de Cartagena y almacenada a 18C hasta el momento de su anlisis (Ruiz, 2005).

46

6.3. EXTENDIDO DE SANGRE PERIFRICA Y EVALUACIN DE LA PRESENCIA DE MICRONCLEOS EN ERITROCITOS. El procedimiento del extendido de sangre fue realizado colocando una gota de sangre sobre una lmina portaobjetos, la cual fue extendida tomando precaucin en que esta fuera delgada para su posterior tincin. Para este proceso fue utilizada la coloracin de Wright, colorante especial para teir clulas sanguneas, permitiendo observar su morfologa. Culminado el tiempo de la tincin, el portaobjetos fue enjuagado con agua, secado al aire y finalmente realizada la lectura al microscopio (Daz y Gonzlez, 1999).

El anlisis de los microncleos en la sangre perifrica de los mototaxistas y controles estudiados fue realizado utilizando cinco (5) placas de extendido preparadas con anterioridad mediante recuentos celulares en diez (10) campos microscpicos en objetivo de inmersin 100X (aumento 1000X de magnificacin), contando un nmero de 1000 clulas correspondientes a la serie roja (SR), es decir, eritrocitos maduros y eritrocitos policromticos. Por cada placa fueron contadas en el microscopio 1.000 clulas. La fraccin de clulas sanguneas con microncleos () fue reportada como la media error estndar por las cinco lecturas realizadas por individuo (Hick et al, 2007).

En la Figura 3 aparecen hallazgos de la observacin de los extendidos de sangre perifrica al microscopio.

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7. ANLISIS ESTADSTICO.

Todos los datos fueron presentados como medias error estndar (EE), adems, fueron realizados, T test y pruebas de normalidad y homogeneidad de varianza. Las asociaciones entre variables fueron revisadas por anlisis de correlacin mediante la prueba de Pearson. Valores de P<0.05 fueron considerados como estadsticamente significativos. El anlisis estadstico fue realizado usando el software Prisma 5.0 (GraphPad Prism 5 Demo).

Figura 3. Hallazgos de la observacin de los extendidos de sangre

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Fotografas de MN y estructuras celulares presentes en extendidos de sangre perifrica. A y B presencia de microncleo (MN) en glbulo rojo (GR). C eosinfilo (EOS) y glbulos rojos (GR). D neutrfilo (NEU) Y microncleo (MN) en glbulo rojo policromtico (POLIC). E monocito (MON). F linfocitotos (LIN). Fuente: Autor

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8. RESULTADOS

Los resultados de este trabajo fueron organizados teniendo en cuenta las etapas de su elaboracin, a continuacin son detallados en ese orden.

8.1.

CONDICIONES

LABORALES

SOCIOECONMICAS

DE

LOS

INDIVIDUOS PARTICIPANTES EN EL ESTUDIO. De acuerdo con la encuesta realizada a 109 participantes de la ciudad de Cartagena de Indias, 73 (67%) corresponden a trabajadores con exposicin directa a contaminantes ambientales (en su labor como mototaxistas) y 36 (33%) fueron considerados como no expuestos. La media de la edad del grupo evaluado fue de 30.2 aos (rango 20 - 44), siendo para los trabajadores expuestos 31.4 2.5 y para los no expuestos 29.05 2.85 aos. El peso promedio de los individuos en general fue de 73.8 Kgs. siendo para grupo expuesto fue 75.5 3.9 y para el grupo control 72.2 3.2 Kgs.

Del total de los participantes con nmero de hijos en rango de 0 a 2 se aprecia que el 74% y 91.7 % corresponden a individuos expuestos y controles respectivamente. Es de especial inters que el 45.2% correspondiente a los

individuos expuestos han laborado durante el periodo de 4-7 aos y un 39.7% entre 0-3 aos. Los individuos fueron estratificados de acuerdo a la localizacin del sitio de residencia, el grupo expuesto con un 56.2% fue localizado en el estrato 1, y el grupo control estuvo distribuido en su mayor porcentaje (47.2%) en el estrato 3. Con respecto al estado civil se tiene que para los expuestos 37.0% son casados y para el grupo control 50% son solteros.

Sobre el dato de afiliacin a salud entre los expuestos, 91.8%, poseen el servicio activo del SISBEN (Sistema de Identificacin de Potenciales Beneficiarios de
50

Programas Sociales), contrario al grupo control que el 100% est afiliado a fondos pblicos y privados nacionales de salud . Con respecto a la escolaridad, del total de participantes expuestos, 64.4% han cursado la secundaria, mientras tanto el 94% del grupo control se encuentran en el rango universitario. Del total de los individuos expuestos, el 32,9% tiene el hbito de fumar, y un 66.7% fuman de 0 2 cigarrillos por da con un total de aos consumiendo cigarrillos de 54.2%.

Del total de los individuos expuestos, de forma cualitativa pudo observarse que los utensilios de proteccin de seguridad de uso regulatorio por el DATT (Departamento Administrativo de Trnsito y Transporte) para el ejercicio de este trabajo informal, no es el adecuado. En efecto, durante las horas laborales los mototaxistas utilizan poca proteccin, representada en artculos, tales como,

casco protector de la cabeza en mal estado y carente de buenas normas higinicas, gafas protectoras de los ojos, guantes industriales y en algunos casos de manera inapropiada el uso de guantes de tela para la proteccin de los antebrazos por el contacto directo de los rayos solares.

Con relacin a los parmetros de salud, fueron estratificados en parmetros respiratorios, drmicos, oftalmolgicos presentes en los individuos expuestos. En el caso de los parmetros respiratorios la presencia de signos, sntomas y enfermedades perse manifestados por la poblacin de estudio fueron dificultad respiratoria (17.8%), alergias (16.4%), y ausencia de Bronquitis y Asma.

Desde el punto de vista de los parmetros drmicos los sntomas de mayor frecuencia referidos por los trabajadores objeto del estudio tales como seales en la piel, seales en la cara y cambios en las seales fueron 2.7%,21.9% y 5.4% respectivamente. Para los parmetros oftalmolgicos, los individuos que laboran en el mototaxismo presentaron signos tales como ardor en los ojos (28.8%),

lagrimeo (9.6%), irritacin visual (17.8%), dificultad para leer (8.2%), dificultad para la visin cercana (6.8%), y visin lejana (5.4%). Es relevante anotar que el tiempo

51

de exposicin para los individuos expuestos correspondiente al 45.2% comprendido en un periodo de 4-7 aos de labor y un 39.7% entre 0-3 aos probablemente actu como un factor predisponente para la generacin de afecciones respiratorias 45.2% correspondiente a los individuos expuestos han laborado durante el periodo de 4-7 aos y un 39.7% entre 0-3 aos.

No se reportaron antecedentes de enfermedades crnicas como diabetes, hipertensin, cardiopatas, cncer, ni antecedentes de tratamientos de radioterapia o quimioterapia. El resumen, respecto a los resultados de las caractersticas relacionadas con los aspectos socioeconmicos, laborales, parmetros de salud, tales como

respiratorios, drmicos y oftalmolgicos, para los dos grupos en estudio son mostrados en la Tabla 3 y 4.

Tabla 3. Caractersticas laborales y socio-demogrficas de individuos expuestos y no expuestos a contaminantes ambientales de la ciudad de Cartagena de Indias.
REFERENCIA (%) Muestras (n) EDAD AOS 20-24 25-29 30-34 35-39 40-44 Media EE PESO Menor de 75 Kg Mayor de 75 Kg Media EE HIJOS 0a2 3a5 Ms de 5 AOS LABORADOS 0a3 4A7 8 a 11 0.0 0.0 0.0 39.7 45.2 15.1 91.7 8.3 0.0 74.0 23.2 2.7 55.6 44.4 72.2 3.2 45.2 54.8 75.5 3.9 36 44.4 13.9 11.1 13.9 16.7 29.1 2.85 73 9.4 34.2 15.1 31.5 9.6 31.4 2.5 MOTOTAXIS (%)

52

ESTRATO 1 2 3 4 ESTADO CIVIL Soltero Casado Unin libre Separado AFILIACIN Si No ESCOLARIDAD No estudi Primaria Secundara Tcnico Universitario FUMA Si No CIGARRILLOS/DA 0-2 3-5 6-8 TIEMPO/FUMADOR 0-2 3-5 6-8 42.8 57.1 0.0 54.2 33.3 12.5 57.1 42.9 0.0 66.7 16.7 16.6 19.4 80.6 32.9 67.1 0.0 0.0 0.0 5.6 94.4 1.4 27.4 64.4 6.8 0.0 100 100 91.8 8.2 50.0 19.4 25.0 5.6 24.7 37.0 35.6 2.7 25 11.1 47.2 16.1 56.2 28.8 11.1 4.1

Tabla 4. Aspectos relacionados con los parmetros respiratorios, drmicos y oftalmolgicos de la poblacin de mototaxistas de la ciudad de Cartagena de Indias.
REFERENCIA (%) MOTOTAXISTAS (%)

PARAMETROS SALUD

Dificultad respiratoria Nunca Poco Bronquitis Nunca Alergia Nunca Poco Asma Nunca Seales de piel Nunca Poco Seales en la cara

100 0.0 100 100 0.0 100

82.2 17.8 100 83.6 16.4 100

PARAMATROS DERMICOS

100 0.0

97.3 2.7

53

Nunca Poco Cambio en seales Nunca Poco Ardor de los ojos Nunca Poco Lagrimeo Nunca Poco Irritacin visual Nunca Poco Dificultad para leer Nunca Poco Visin cerca Nunca Poco Visin lejana Nunca Poco

100 0.0 100 0.0

78.1 21.9 94.5 5.4

100 0.0 100 0.0 100 0.0 100 0.0 100 0.0 100 0.0

71.2 28.8 90.4 9.6 82.2 17.8 91.8 8.2 93.2 6.8 94.6 5.4

PARAMETROS OFTALMOLGICOS

Carcter: Nunca, Poco, Moderado, Mucho (Los caracteres que no se exponen en la tabla corresponden a cero).

8.2. RESULTADO DE LOS EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFRICA Y EVALUACIN DE LA PRESENCIA DE MN.

El promedio de MN en eritrocitos de sangre perifrica de mototaxistas de Cartagena, fue de 0.02 0.004 por 1000 clulas, mientras que para el grupo control fue de 0.002 0.002 por 1000 clulas, con diferencias estadsticamente significativas entre estos grupos (P<0.05). No hubo correlacin estadstica entre las variables del estudio y la presencia de MN en los grupos de estudio. Los parmetros hematolgicos de todos los participantes de este estudio son presentados en la Tabla 5.

54

Tabla 5. Parmetros hematolgicos en controles y expuestos

Referencia (n = 36) Media EE

Mototaxistas (n = 73) Media EE

Microncleos en SR (%) Microncleos en SB (%) Plaquetas (%) Policromticos (%) Microcitos (%) Linfocitos (%) Neutrfilos (%) Eosinfilos (%) Monocitos (%) Basfilos (%)

0.0019 0.0019 0.0 7.19 0.15 0.08 0.00 0.06 0.00 42.90 1.3 50.03 0.95 3.70 0.35 5.23 0.21 3.11 0.14

0.0166 0.0039* 0.14 0.11 6.64 0.13* 0.09 0.00 0.04 0.00* 50.00 0.6* 43.63 0.67* 7.07 0.25* 6.23 0.18* 2.00 0.11*

* Diferencia estadsticamente significativa.

55

Para el anlisis comparativo de recuento celular con respecto al grupo control el nmero promedio de microncleos detectados por cada 1000 clulas de SR de sangre perifrica evaluada en una muestra de referencia y en mototaxistas de la ciudad de Cartagena de Indias, es presentada en la Figura 4. Existe una diferencia estadsticamente significativa entre las medias de los dos grupos evaluados (P<0.05), siendo mayor el nmero de microncleos en el grupo expuesto.

Figura 4. Microncleos en clulas de la serie roja (SR) en una muestra de referencia y una de mototaxistas de la ciudad de Cartagena. La media el error estndar para cada grupo aparece en corchetes. *. Diferencia estadsticamente significativa al comparar las medias de los grupos (P<0.05)

Microncleos en SR ()

0.06

[0.0166 * 0.0039]

0.04

0.02

[0.0019 0.0019]

0.00

Referencia Grupo

Expuesto

Los resultados de los conteos para linfocitos, neutrfilos, eosinfilos, monocitos y basfilos de la SB en los extendidos de sangre perifrica para los dos grupos en estudio aparecen en la Figura 5.

56

Figura 5. Polimorfonucleares de la SB en los extendidos de sangre perifrica en los grupos de referencia y de mototaxistas de la ciudad de Cartagena, A (%) Linfocitos; B (%) Neutrfilos; C (%) Eosinfilos; D (%) Monocitos; E (%) Basfilos. La media el error estndar para cada grupo aparece en corchetes. *. Diferencia estadsticamente significativa al comparar las medias de los grupos (P<0.05).

A
Linfocitos en SB (%)

B
Neutrfilos en SB (%)
60

[ 50.0 * 0.6 ] [ 42.9 60 1.3 ]


40

[50.03 0.95]

[43.63 * 0.67]

40

20

20

Referencia

Eosinfilos en SB (%)

Monocitos en SB (%)

10 8 6 4 2 0

Grupo [7.07 * 0.25]

ExpuestoC

10 8

Referencia Grupo
[5.23 0.21]

Expuesto D

* 0.18] [6.23

[3.70 0.35]

6 4 2 0

Referencia
Basfilos en SB (%)

Expuesto Grupo
5 4 3 2 1 0

Referencia

Grupo

Expuesto

[3.11 0.14]

* 0.11] [2.00

Referencia

Grupo

Expuesto

Los resultados de los conteos para plaquetas, policromticos, y microcitos de la SR en los extendidos de sangre perifrica para los dos grupos en estudio aparecen en la Figura 6.

57

Figura 6. Clulas de la SR en los extendidos de sangre perifrica en los grupos de referencia y de mototaxistas de la ciudad de Cartagena, A (%) Plaquetas; B (%) Policromticos; C (%) Microcitos; La media el error estndar para cada grupo aparece en corchetes. *. Diferencia estadsticamente significativa al comparar las medias de los grupos (P<0.05).

Plaquetas en SR (%)

10 8 6 4 2 0

Policromticos en SR (%)

A
[7.19 0.15]

B
0.15

[6.64 * 0.13]

[0.09 0.00]
0.10

%)

[0.08 0.00]

0.05

0.00

Referencia

Grupo

Expuesto
[0.06 0.00]

Referencia

Expuesto Grupo

Microcitos en SR (%)

0.10 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00

C
%)
[0.04 * 0.00]

Referencia Grupo

Expuesto

8.3. ASOCIACIONES ENTRE LA FRECUENCIA DE MICRONCLEOS Y FACTORES SOCIODEMOGRFICOS Y LABORALES DE LOS

MOTOTAXISTAS EN CARTAGENA DE INDIAS.

Segn los resultados obtenidos no se observ correlacin entre la frecuencia de MN y las variables tratadas en el estudio, es decir, no existe correlacin con significancia estadstica.

58

Respecto a los parmetros hematolgicos, en cuanto a la serie blanca la correlacin entre los valores del hematocrito, hemoglobina y microncleos en clulas de la serie blanca no fue significativa (R = -0.1341 P=0.2582); (R= -0.1341 P =0.2582) respectivamente.

Para los parmetros hematolgicos, en cuanto a la serie roja la correlacin entre los valores del hematocrito, hemoglobina y microncleos en eritrocitos y

policromticos no fue significativa (R = 0.0406 P=0.7333); (R =0.0394 P =0.7405) respectivamente. Los resultados de correlacin entre la presencia de microncleos y algunas de las variables en estudio aparecen en la Tabla 6.

59

Tabla 6. Asociaciones entre la frecuencia de microncleos y factores sociodemogrficos y laborales de los mototaxistas de Cartagena de Indias.

EDAD EDAD PESO ESTRATO TIEMPO/AC TIVIDAD MNERIT MNLEUC Hto % Hb mg/dL FUMA TIEMPO /FUMAR 1 **0.9378 **0.8202 **0.9322

PESO *0.0000 1 **0.8697 **0.9475

ESTRATO AOSLAB MNERIT MNLEUC *0.0000 *0.0000 1 **0.9310 *0.0000 *0.0000 *0.0000 1 *0.6869 *0.6407 *0.9184 *0.9016 *0.0948 *0.2598 *0.2862 *0.9016

Hto % *0.0000 *0.0000 *0.0000 *0.0000

Hb mg/dL *0.0000 *0.0000 *0.0000 *0.0000

FUMA *0.0000 *0.0000 *0.0000 *0.0000

AO /FUM *0.0000 *0.0000 *0.0000 *0.0000

**0.0480 **-0.1970 **0.9284 **0.9274 **0.8006 **0.6678

**0.0555

**-0.0122

**-0.0147 **-0.1236 **0.8411 **0.8410 **0.6987 **0.8422

1 **-0.0834 **0.0406 **0.0394 **0.0468 **-0.0124

*0.4832 1 **-0.1341 **-0.1341 **-0.0584 **-0.0924

*0.7333 *0.2582 1 **0.9997 **0.8160 **0.5765

*0.7405 *0.2582 *0.0000 1 **0.8193 **0.5748

*0.6940 *0.6235 *0.0000 *0.0000 1 **0.3853

*0.9171 *0.4369 *0.0000 *0.0000 *0.0000 1

**-0.1336 **-0.1265 **0.9010 **0.9004 **0.7491 **0.8263 **0.6868 **0.6860 **0.5275 **0.8861

P= 0.05 * Valor de R aparece a la izquierda de la diagonal ** Valor de P aparece a la derecha de la diagonal

60

9. DISCUSIN

El mototaxismo, es considerado una prctica de transporte pblico que empez hace ms de 10 aos y que se ha ido extendiendo a 26 de los 32 departamentos de Colombia, convirtindose en un problema social de gran impacto en la salud pblica. Aproximadamente 400.000 colombianos laboran en esta actividad informal. A pesar de la intervencin del Congreso de la Repblica, el Programa de las Naciones Unidas para el Desarrollo (PNUD), las universidades y el propio Gobierno, este ejercicio laboral se realiza diariamente debido a la necesidad en los municipios y muchas ciudades intermedias especialmente en barrios marginales y zonas rurales, ya que los vehculos no pueden transitar por las condiciones de las vas.

En el ejercicio del mototaxismo se generan problemas en la salud, de los cuales los ms preocupante estn relacionados con enfermedades que se manifiestan a mediano y largo plazo: tales como respiratorias, del aparato patologas de la columna, enfermedades masculino (Tielsch et al., 2009),

reproductor

oftalmolgicas y a largo plazo lesiones precancerosas y cncer de la piel (Ramos et al. 2004; Snchez-Laorden et al., 2009), por la exposicin a rayos (Crebelli et al., 1995; Viras et al., 1991; Isidoro et al., 2003). En Cartagena, en promedio los habitantes realizan 480.000 viajes diarios, de los cuales en un 10% se utiliza la moto, situacin que es similar en otras ciudades y municipios de Colombia tales como como Ccuta, Valledupar, Quibd, Montera, Riohacha, Barranquilla,

Buenaventura, Popayn, Puerto Inrida (Guaina), Tierralta (Crdoba) o Riosucio (Caldas), donde el mototaxismo es tambin una fuente bsica de empleo.

Esta nueva modalidad de trabajo y el uso del parque automotor de motocicletas, aumentan el impacto negativo generado por la excesiva contaminacin del aire y

61

del ambiente. Es as, como se plantea que en los ambientes urbanos se encuentran presentes una gran variedad de compuestos contaminantes emitidos por fuentes estacionarias y mviles, entre los que pueden destacarse, las partculas atmosfricas, consideradas como unos de los contaminantes

atmosfricos ms importantes, debido a que contienen compuestos con conocida actividad genotxica, mutagnica y/o carcinognica, como los hidrocarburos aromticos policclicos (HAPs) y sus derivados, metales pesados, xidos de azufre y de nitrgeno (Barale et al., 1991; Pope et al., 2002; Guimaraes et al., 2000). La mayora de estos compuestos, una vez emitidos al aire, condensan y son adsorbidos sobre las superficies de partculas de holln y cenizas, de este modo se trasladan e ingresan a los pulmones de animales y seres humanos. Estudios recientes al respecto, han demostrado que los HAPs pueden interactuar con las cadenas de ADN, provocando un incremento en los errores durante la mitosis y hasta muerte celular (Caldern-Segura et al., 2004).

Estudios epidemiolgicos han demostrado que el incremento en la exposicin a partculas atmosfricas puede provocar un aumento en la morbilidad y mortalidad por manifestaciones de compromiso cardiaco y respiratorio principalmente (Stlzel et al., 2007). La mayor parte de los efectos adversos del material particulado (MP) se producen por la presencia de partculas cuyo dimetro es inferior a 10 m (PM10) ya que, por su tamao, pueden penetrar ms profundamente en el tracto respiratorio e incluso llegar a depositarse en los alvolos pulmonares. Ms an, estudios recientes demuestran que existen efectos adversos producidos por accin de MP a niveles que es frecuente encontrar en ambientes urbanos (Pope et al., 2002).

Existen numerosos mtodos que han sido establecidos como herramientas para la monitorizacin de poblaciones ocupacional o medio ambientalmente expuestas a un agente mutagnico conocido o sospechado (Anwar, 1997), algunos emplean biomarcadores de efecto, como la aberraciones cromosmicas en cultivo de

62

linfocitos, tcnicas para medicin del dao del ADN y test de microncleos (MN). (Anwar, 1997; Hallberg et al., 1997; Anwar and Kamal, 1988. Au et al., 2010).

En el presente estudio fueron comparadas la presencia de microncleos y varios parmetros sociodemogrficos, hematolgicos, drmicos, oftalmolgicos en los mototaxistas que trabajan en la ciudad, que podran estar expuestos a contaminantes del aire urbano. Aunque diferentes estudios han demostrado que la exposicin directa a estos contaminantes ambientales podran producir un

aumento en el numero de microncleos en sangre perifrica de individuos expuestos, en este trabajo, los resultados hallados estn fuera del rango normal de la poblacin general tomando como referencia los trabajos realizados por da Silva et al., (1997) y Fenech y Morley (1985), donde la prevalencia de MN en individuos sanos no expuestos a agentes genotxicos es de 0.8%. Aunque podra limitarse este valor debido a que este es el primer estudio de esta naturaleza. As mismo este dato es relevante puesto que estara indicando nuevas acciones que podran ser tomadas en cuenta para reducir el impacto negativo y fijar lmites de exposicin ambiental en estudios de biomonitoreo en humanos. Sin embargo, este resultado positivo es similar a los datos reportados por estudios sobre policas de trnsito que trabajan en la ciudad de Lanzhou, que proporcionan realmente uno de los primeros informes de un aumento significativo en la frecuencia de MN en este contexto, apoyados en datos de Zhao et al., (1998). No obstante hay otros estudios en esta misma poblacin con la presencia negativa de MN expuestos a concentraciones de benceno (Bolognesi et al., 1997; Merlo et al., 1997; Carere et al., 2002; Leopardi et al., 2003).

Con relacin a las variables sexo, edad, estrato social, tiempo de exposicin y el hbito de fumar, no hubo correlacin entre estas variables y la presencia de los MN. Igualmente en la correlacin de los parmetros hematolgicos, drmicos y oftalmolgicos. Esto podra ser debido a que estos daos son producidos a largo plazo.

63

Segn la informacin obtenida de los mototaxistas en las encuestas, la gran mayora de los mototaxistas de la ciudad de Cartagena, presentan un buen estado de salud, lo que se refleja en los parmetros hematolgicos, esto concuerda con reportes que indican que la ingesta de protenas y vitaminas podran ayudar a prevenir el aumento de alteraciones citogenticas (Singh et al., 1988; Carere et al., 2002). Existen datos importantes acerca de folatos y vitamina B12, los cuales son importantes en el metabolismo del ADN, las deficiencias de estos micronutrientes ha estado relacionado con incrementos en la formacin de microncleos en humanos (Fenech 1993; Fenech et al., 1999; Fenech, 2001; Fenech y Crott 2002). En el presente estudio la presencia de microncleos en la poblacin expuesta, al no presentar un incremento significativo, podra relacionarse con el hecho de que no hay deficiencia de las anteriormente mencionadas, (folatos y vitamina B12) comparado con la hemoglobina normal de los expuestos.

Por otra parte, reportes en la literatura han explicado que la exposicin a la contaminacin del aire de combustin, relacionado con el trfico en el entorno urbano es comn y se ha asociado con efectos adversos para la salud humana, manifestndose en morbilidad y mortalidad con alteraciones de tipo respiratorio, cardiovascular y cncer (Brunekreef y Holgate, 2002; Schwartz, 2004; Sram et al., 2005; Raaschou -Nielsen y Reynolds, 2006; Vineis et al, 2007). Por otro lado, estudios epidemiolgicos sobre otros compuestos como el benceno proporcionan una fuerte evidencia de que a altos niveles de exposicin estn asociados con un mayor riesgo de leucemia en los seres humanos (Agency for Toxic Substances and Disease Regustry (ATSDR); Hayes et al., 2001).

En contraste otros estudios han mostrado que el aumento de la frecuencia de MN en patrulleros de la polica no tenan alteracin de parmetros hematolgicos, este efecto podra explicarse en parte por la compleja actividad de muchos contaminantes como por ejemplo los metabolitos del benceno, cuya toxicidad est

64

relacionado con el metabolismo de xenobiticos en la mdula sea (Bruckner y Warren, 2001; Snyder, 2002).

Caso similar ocurre para los parmetros drmicos y oftalmolgicos debido a que los individuos expuestos en la ciudad de Cartagena, por las altas temperaturas de la ciudad, las comunes revisiones por parte del DATT (Departamento administrativo de Trnsito y transporte) utilizan ropa informal, pero de manera permanente el casco de seguridad, gafas y guantes en los antebrazos de tela. Estas discrepancias encontradas podran ser atribuidas a variaciones en el perfil de exposicin de las diferentes poblaciones de estudio, por ejemplo, con respecto niveles locales de contaminacin, reas especficas del trabajo, la duracin del turno de trabajo (Bolognesi et al., 1997).

En esta investigacin no se estudi la identificacin de los contaminantes especficos responsables de la induccin de microncleos. De hecho, el ambiente de las zonas urbanas recibe la contribucin de las fuentes de contaminacin diferentes, en combinacin con los complejos procesos fotoqumicos, lo que hace casi imposible aislar la participacin de agentes txicos in en la patognesis del dao al ADN (Mariani et al., 2009).

65

CONCLUSIONES

1. Existe diferencia estadsticamente significativa entre las medias de las frecuencias de microncleos en eritrocitos de sangre perifrica de mototaxistas de Cartagena en comparacin con personas dedicadas a otras actividades.

2. La frecuencia de microncleos no present correlacin significativa con factores sociodemogrficos y laborales de los mototaxistas que laboran en la ciudad de Cartagena de indias.

3. La presencia de microncleos puede ser considerada como un biomarcador de efectos clastognicos y aneugnicos del material gentico.

66

RECOMENDACIONES

Realizar estudios epidemiolgicos en el gremio de mototaxistas de la ciudad de Cartagena de Indias, correlacionando esta informacin con parmetros de contaminacin del aire, flujo de trfico y tiempo de exposicin.

67

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Bruckner J.V, Warren D.A. Toxic effects of solvents and vapors, in: C.D. Klaassen (Ed.), Casarett & Doulls Toxicology the Basic Science of Poisons, McGraw-Hill, USA, 2001, 2001; 869916.

Snyder R. Benzene and leukemia. Critical Reviews in Toxicology. 2002; 32(3):155210.

DEPARTAMENTO Cartagena de

ADMINISTRATIVO D.T. y C.

DE

TRANSITO

TRANSPORTE

Indias

2005:

info@transitocartagena.gov.co

Mariani RL, Jorge MP, Pereira SS, Melione LP, Carvalho-Oliveira R, Ma TH, Saldiva PH. Association between micronuclei frequency in pollen mother cells of Tradescantia and mortality due to cancer and cardiovascular diseases: a preliminary study in Sao Jos dos Campos, Brazil. Environmental pollution. 2009; 157(6):1767-70.

SISBEN. Sistema de Identificacin y Clasificacin de Potenciales Beneficiarios para los programas sociales. http://www.sisben.gov.co/

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ANEXOS

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ANEXO A

CDIGO ___________________________

UNIVERSIDAD DE CARTAGENA FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS GRUPO DE QUMICA AMBIENTAL Y COMPUTACIONAL CARTAGENA, COLOMBIA DATOS GENERALES PARA LA CUANTIFICACIN DE MICRONCLEOS EN SANGRE PERIFRICA DE MOTOTAXISTAS QUE TRABAJAN EN LA CIUDAD DE CARTAGENA DE INDIAS.

INFORMACIN GENERAL Da ___ Mes ___ Ao ___ Municipio ________________ Ciudad G ________________ Nombre __________________________________________________________ Direccin _________________________________________________________ Edad ___________ Sexo M ( ) F ( ) Estatura ____________ Peso ___________ Hijos ____________________ Ocupacin ________________________________________________________ Aos de Trabajo ___________________________________________________ Grado de escolaridad: Ninguna ___ Primaria ___ Secundaria ___ Tcnico ___ Universidad ________________________________________________________ Estrato ________ Estado civil _________________________ Afiliacin a servicios de salud ___________________________ Cuntas horas al da trabaja: 0 - 4 ____ 4 - 8____ 8 - 12____ En qu horario: Maana ____ HBITOS DE SALUD GENERAL Fuma: Si __ No __ N de Cigarrillos al da _____ Si ___ No___ Tiempo fumando _________ Tarde____ Noche____

Ingiere bebidas alcohlicas: __________________

Cuales ______________,

N de das a la semana que ingiere alcohol:

0 -2____

2-4 ____

4-6___

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SINTOMATOLOGA Presenta algn sntoma respiratorio como: Bronquitis ____ Asma ____ Alergias___

Dificultad respiratoria ____

Ha notado alteraciones en su piel como: Lunares que se oscurecen ____

Aumento en tamao de lunares ____

Aparicin de sombras en la cara o en otro lugar ____

Ha notado en sus ojos: Lagrimeo____ Irritacin visual____

Ardor ____

Aparicin de manchas o tejido en los ojos_____ Dificultad para leer____ Dificultad para visualizar a corta distancia____

PARMETROS DE EXCLUSIN Presenta problemas de presin arterial _____ Presenta problemas de diabetes _____ Presenta problemas del corazn _____ Es positivo para VIH _____ Presenta usted alguna enfermedad de transmisin sexual_____ OBSERVACIONES ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________

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ANEXO B CONSENTIMIENTO INFORMADO Titulo de la Investigacin CUANTIFICACIN DE MICRONCLEOS EN SANGRE PERIFRICA DE MOTOTAXISTAS QUE TRABAJAN EN LA CIUDAD DE CARTAGENA DE INDIAS

Estimado participante: El grupo de Qumica Ambiental y Computacional de la Universidad de Cartagena est realizando un estudio el cual tiene por objeto establecer las posibles alteraciones en la integridad del material gentico, asociadas con la exposicin a radiacin solar que experimentan los mototaxistas en la ciudad de Cartagena. Por favor lea cuidadosamente este documento o solicite al investigador que se lo lea en voz alta. Usted puede realizar todas las preguntas que considere pertinentes relacionadas con el estudio. Consideraciones generales del estudio Este documento que usted est leyendo es el consentimiento informado que explica en forma escrita el propsito, beneficios y riesgo de este estudio. Esta investigacin es realizada con el propsito de determinar si los mototaxistas de la ciudad de Cartagena presentan alteraciones en su material gentico. Usted es libre de participar en este estudio porque usted es voluntario. 2. Importancia de este estudio El mototaxismo constituye uno de las principales actividades econmicas para un grupo importante de la poblacin cartagenera. Las personas dedicadas al mototaxismo estn permanentemente expuestas a radiacin solar y diversos contaminantes ambientales que pueden estar alterando la integridad de su material gentico, y por tanto, afectando negativamente la salud de los mismos. Este estudio le permitir conocer al participante la magnitud del dao gentico presente en sus clulas sanguneas, y a la Universidad de Cartagena, evaluar por primera vez los posibles efectos que sobre la salud de las personas, genera la actividad econmica del mototaxismo. 3. Investigadores encargados de este estudio Esta investigacin es realizada bajo la direccin del Profesor Jess Olivero Verbel, Ph.D, Director del Grupo de Qumica Ambiental y Computacional de la Universidad de Cartagena, y Liliana Patricia Carranza Lpez, estudiante de maestra en Toxicologa, Universidad Nacional de Colombia-Universidad de Cartagena. 91

4. Descripcin de la participacin de los voluntarios en el estudio Las personas que voluntariamente accedan a participar en el estudio sern entrevistadas para colectar informacin general relacionada con la edad, sexo, peso, ocupacin y enfermedades de las que padezca, entre otros aspectos. Una vez llenado este formulario, el participante donar una muestra de sangre de 2 mL, la cual ser obtenida por la Bacteriloga Liliana Patricia Carranza Lpez, con tarjeta profesional 401 y de registro 341010. La muestra ser colectada de una vena del brazo del donante, utilizando jeringa estril, la cual ser abierta en presencia del mismo, mediante el procedimiento de venopuncin utilizando el sistema Vacutainer, de acuerdo a lo establecido en el artculo 40 del decreto 1571 de 1993 referente a que La recoleccin de la sangre deber hacerse de forma asptica, mediante el uso de elementos estriles, libres de pirgenos, conservando el sistema cerrado. Esta muestra ser utilizada exclusivamente para realizar el ensayo conocido con el nombre de Evaluacin de microncleos en un extendido de sangre perifrica. Una vez utilizada la muestra, el volumen de sangre restante ser destruido y por tanto la misma no ser utilizada para realizar ningn otro tipo de estudio diferente al mencionado con anterioridad. 5. Riesgos y posible inconformidad en los participantes El proceso de extraccin de sangre venosa es simple y ser realizado siguiendo los lineamientos estandarizados para la investigacin en salud, por un profesional calificado, encargado de tomar la muestra. De acuerdo con la Resolucin 008430 1993, expedida por el Ministerio de Salud, el procedimiento de extraccin de sangre al que ser sometido voluntariamente el donante es clasificado como de riesgo mnimo. El voluntario podr experimentar un dolor leve asociado a la penetracin de la aguja sobre el sitio donde se tomar la muestra. 6. Beneficios Los resultados obtenidos con este estudio sern entregados directamente a los voluntarios, y por tanto cada participante podr conocer la magnitud del dao en el material gentico que presentan sus clulas sanguneas. Esto le permitir incrementar las medidas de prevencin pertinente, de tal forma que pueda proteger su salud. 7. Participacin voluntaria La persona que participa voluntariamente en este estudio, lo hace bajo su propio criterio, sin ningn tipo de presin u obligacin para con el mismo. Usted puede realizar cualquier pregunta a los investigadores de este estudio cuando considere conveniente o retirarse del mismo cuando as lo crea pertinente. 8. Derechos de autor y confidencialidad Todos los datos generados en este estudio sern propiedad de la Universidad de Cartagena. Los voluntarios participarn en el mismo, con la confidencialidad tal que su nombre no ser publicado bajo ninguna circunstancia, pero si los cdigos asociados con cada voluntario.

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9. Consentimiento del participante Con el presente documento se pretende informar a usted sobre el procedimiento que se le practicar por lo que le solicitamos diligenciar con su puo y letra los siguientes espacios en blanco. Yo ___________________________________________de la ciudad de Cartagena y con C.C. N ______________________de_______________________ manifiesto, DECLARACIN DE CONSENTIMIENTO INFORMADO PARA PARTICIPACIN EN ESTUDIO Que Liliana Carranza Lpez identificado con C.C. N 25.914.684 de Chin, Crdoba, ha sido claro y preciso en suministrarme la informacin sobre la toma de muestra para el proyecto Cuantificacin de microncleos en sangre perifrica de mototaxistas que trabajan en la ciudad de Cartagena. Estoy de acuerdo en participar en esta investigacin donando 2 mL de sangre. Responda SI o NO en los espacios en blanco He recibido informacin del procedimiento en un lenguaje claro y sencillo: Si___ No___ Se me ha permitido todas las observaciones y preguntas al respecto: Si___ No___ Tambin comprendo que sin necesidad de dar ninguna explicacin puedo revocar este consentimiento, por ello manifiesto que estoy satisfecho con la informacin recibida y que comprendo el alcance del procedimiento a realizar. En tales condiciones, ACEPTO PARTICIPAR EN EL PROYECTO: Cuantificacin de microncleos en sangre perifrica de mototaxistas en la ciudad de Cartagena. 10. Firma Su firma abajo significa que usted ley y entendi este documento y que usted accede voluntariamente a participar en este estudio. Firma _______________________ Fecha ______________________

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