Medii de cultura , isamantarea mediilor de cultura, caracterele culturii microbiene

Mediile de cultura = suporturi materiale si nutritive, sterile, care servesc la cultivarea bacteriilor . Sunt amestecuri de substante care ofera microorganismelor sub o forma direct asimilabila toate substantele necesare nutritiei si cresterii sale. Cultura microbiana = totalitatea microorganismelor ce se dezvolta pe suprafata mediilor de cultura. Insamantarea produselor patologice pe mediile de cultura in practica de laborator urmareste 3 principii: 1. Cresterea si izolarea tuturor bacteriilor prezentr in produsul patologic 2. Identificarea bacteriei ce determina infectia, precum si a bacteriilor contaminante 3. Obtinerea unui numar suficient de colonii care sa permita identificarea si caracterizarea bacteriei. Toate microorganismele au nevoie de: O sursa de energie: majoritatea microorganismelor sunt heterotrofe (isi obtin energia prin consum de molecule organice, in urma ruperii acestora eliberandu-se energia continuta in legaturile chimice) O sursa de carbon suprapusa de obicei cu sursa de energie ( carbohidratii : glucoza, maltoza, lactoza, sucroza, etc.) O sursa de azot ( sulfatul de amoniu ) Substante minerale

-

Pentru a permite dezvoltarea microorganismelor, orice mediu de cultura trebuie sa indeplineasca anumite conditii : Sa contina substante nutritive necesare metabolismului bacterian (C, N, apa, substante minerale, energie, substante nutritive, factori de crestere) PH-ul sa fie adaptat in functie de specia care dorim sa o identificam (majoritatea bacteriilor se dezvolta la un pH alcalin 7,2 – 7,4) Sa asigure dupa caz conditii de aero/anaerobioza Sa fie sterile

1

sol.Medii complexe. sange) sau zaharuri (glucoza. Dupa scopul utilizarii: .Medii solide (geloza nutritiva.se folosesc pentru mentinerea tulpiniilor bacteriene in laborator si pentru evidentiarea motilitatii . eprubete. zaharoza) la mediile simple. care nu necesita o prelucrare speciala (lapte.Medii pentru germeni anaerobi (mediul Veillon.Medii naturale. apa peptonata) – se folosesc in special ca medii de imbogatire si pentru efectuarea antibiogramelor .Scopurile utilizarii mediilor de cultura : Obtinerea de cultura pura si izolarea microorganismului de interes Identificare Diagnostic si tratament (orice identificare trebuie finalizata cu o antibiograma) Producerea industriala a unor substante (vaccinuri) Controlul sterilitatii sau incarcaturii microbiene a unor elemente din mediu (apa. agar Columbia. Se folosesc pentru cultivarea speciilor mai pretentioase sau pentru punerea in evidenta a unot proprietati (utile pentru 2 . ser.Medii artificiale. Dupa consistenta: . .Medii lichide (bulion. alimente. Levine. pentru care este obligatorie o prelucrare prealabila 3. bila. Chapman. etc.Medii semisolide (geloza semimoale) .) Sterilizare Controlul sterilizarii si calitatii mediului CLASIFICAREA MEDIILOR DE CULTURA 1. pe care se dezvolta majoritatea germenilor : apa peptonata. cu adaos de lichide organice (ser. Dupa provenienta : .agar (geloz) sau gelatin 2. Tarozzi. etc. lactoza. bulion nutritiv. Dupa necesrul de oxigen: . simple.Medii uzuale. etc) Consistenta mediilor este data de includerea in compozitia lor a unei substante inerte . cartof) . bulion cu acid thioglicolic) 4. ) Prepararea mediilor de cultura trebuie sa tina cont de : Respectarea proportiilor si ordinii indicate in amestecul ingredientelor Determinarea si ajustarea pH-ului Repartizarea in recipiente adecvante (placi Petri.Medii pentru germeni aerobi – majoritatea mediilor . geloza sange.

antibiotice) care nu afecteaza bacteria de interes. in timp ce bacteriile L( -) vor forma colonii transparente. Colistin si Nistatin. - 3 . dar pot fi nocivi pentru restul bacteriilor.  Mc. agar chocholat. mediul Loffler.  Exemple: Uriselect – mediu cromogen Medii selectiv diferentiale = le cuprinde pe cele doua (selective si diferentiale) la un loc.  Chapman . gonorrhoeae) contine Vancomicina. Medii selective (exemple)  Thayer Martin – utilizat pentru izolarea gonococului ( N. In timp ce mediile selective au in compozitie agar. NaCl. Ex. geloza lactozata.- stabilirea diagnosticului de laborator). Bacteriile L (+) vor forma colonii de culoare roz. agar sange. Medii selective si de imbogatire = permit dezvoltarea bacteriilor de interes in timp ce inhiba cresterea bacteriilor comensale sau contaminante. Conkey – utilizat pentru identificarea enterobacteriilor si clasificarea lor in Lactozo + (degradeaza lactoza) si Lactozo – (nu degradeaza lactoza).mediu cu manitol si sare (10 %) utilizat pentru identificarea stafilococului auriu (Staphylococcus aureus)  McConkey – pentru izolarea enterobacteriilor (contine cristal violet ce inhiba cresterea bacteriilor gram pozitive)  Mediu cu telurit de potasiu – pentru identificarea bacilului difteric (Corynebacterium diphteriae)  Sabouraud – pentru fungi (contine antibiotice si astefel este inhibata cresterea bacteriana) Medii de imbogatire (exemple) – intotdeauna lichide  OCST (ou-cisteina-ser-telurit) – mediu de imbogatire pentru bacilul difteric  Chapman lichid – pentru stafilococ  Apa peptonata alcalina – pentru vibrionul holeric  Mediu cu selenit – pentru Salmonella  Lowenstein-Jensen – pentru Mycobacterium tuberculosis - Medii diferentiale = sunt astfel facute incat bacteriile pot fi recunoscute in functie de culoarea coloniilor sau in functie de modificarea culorii initiale a mediului. Orice mediu cu agar poate deveni selectiv prin adaugarea unor agenti inhibitori (bila. mediile de imbogatire sunt medii lichide.

 Formare de grunji pe peretele eprubetei – Streptococcus pyogenes 4 . Tehnici de insamantare:  Tehnica insamantarii prin epuizare => obtinerea de colonii izolate  Insamantarea prin intepare in profunzimea mediilor solide  In mediile lichide inocularea se poate face cu ansa bacteriologica sau pipeta Pasteur. Hektoen – contine saruri biliare pentru a selecta becteriile gram negative (in special enterobacteriaceaele) si compusi cu sulf care pun in evidenta proprietatea de a forma hidrogen sulfurat (Salmonella)  ACDL (Leifson) – pentru Shigella si Salmonella Medii pentru efectuarea testelor biochimice = sunt folosite pentru identificarea bacteriilor pe baza proprietatiilor biochimice  TSI (triple sugar iron)  MIU ( mobilitate – indol – uree)  Mediu cu citrat  Mediu cu bila-esculina Medii de transport  Stuart  Amies  Cary . Pe mediile lichide :  Tulburare uniforma a mediului – E.Blair - INSAMANTAREA MEDIILOR DE CULTURA Insamantarea este punerea in contact a unei culturi bacteriene sau produs patologic cu mediile de cultura. CARACTERELE CULTURII MICROBIENE Se studiaza aspectul macroscopic al culturiilor bacteriene pe mediile lichide si/sau solide. Cultura bacteriana reprezinta totalitatea bacteriilor crescute in/pe suprafata unui mediu de cultura. Izolarea reprezinta replicarea unei singure colonii pe alte medii de cultura cu scopul de a obtine cultura pura. coli  Dezvoltarea unei pelicule la suprafata mediului – Pseudomonas spp.

Reprezinta forma normala pentru majoritatea bacteriilor Colonii de tip “R” (rough) .Suprafata neteda.Cu tendinta de curgere si confluare . Corynebacterium diphtheriae Colonii de tip “M” .Colonii neregulate . Mycobacterium tuberculosis. uscate .Aspect mucos .Suspensionate in solutie salina (ser fiziologic) produc suspensii omogene (tulbura uniform mediul) .Plate.Caracteristice bacteriilor care poseda capsula (Klebsiella)   Fenomenul de catarare : apare la Proteus mirabilis care pe mediile simple creste sub forma unui val care acopera toata suprafata mediului (nu apar colonii) Fenomenul de hemoliza Este dat de hemolizine.Colonii rotunde.Suprafata zbarcita . translucida .Foarte mari .Pe mediile solide :  Tipul coloniilor: Colonii de tip “S” (smooth) .Foarte lucioase .Usor detasabile de pe mediu .Aderente la mediu .In solutii saline produc suspensii neomogene . enzime bacteriene ce lizeaza hematiile Prezenta acestei enzime se evidentiaza pe mediul geloza – sange Principalele tipuri de hemoliza sunt : o Alfa – apare ca o zona verzuie in jurul coloniei o Beta – sangele este descompus total. transparenta o Gamma – fara hemoliza 5 . in jurul coloniei este o zona clara. bombate .Foarte bombate .Margini regulate .Este caracteristica in general bacteriilor nepatogene cu exceptia : Bacillus anthracis.

Permite lasificarea enterobacteriilor in lactozo pozitive (L+) si lactozo negative (L-) Producerea de hidrogen sulfurat – medii ce contin compusi cu sulf Pigmentul coloniilor in functie de mediul utilizat 6 .   Fermentarea lactozei – pe mediile ce contin lactoza.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful