INMUNOLOGIA BASICA ANEXO PARA EL TP N2: PRUEBAS DE INTERACCION PRIMARIA INMUNOCROMATOGRAFA (CROMATOGRAFIA DE FLUJO LATERAL) La inmunocromatografa es un tipo de prueba

de interaccin primaria que se utiliza en ensayos sencillos y de lectura rpida. En esta prueba uno de los componentes est marcado con nanopartculas coloreadas, por ejemplo con metales pesados (oro o selenio coloidal, generando bandas de color rosa o azul respectivamente). Otros marcadores pueden ser partculas de ltex coloreadas o de carbn. La reaccin se lleva a cabo sobre una tira de un material poroso (por ejemplo, nitrocelulosa). En las tiras reactivas se pueden distinguir 5 zonas: 1. 2. 3. 4. 5. Zona de siembra de la muestra Zona del conjugado Zona de deteccin Zona de control Regin absorbente

El procedimiento es muy sencillo: la muestra con el Ag a analizar se coloca en la zona de siembra de la muestra, y fluye por capilaridad hasta la zona del conjugado, en donde el Ac especfico marcado (conjugado) se encuentra inmovilizado. Al pasar la muestra solubiliza al conjugado, y en caso de haber Ag en la muestra forma inmunocomplejos. Estos inmunocomplejos formados siguen migrando lateralmente hasta la zona de deteccin, en la cual se hallan fijados a la membrana Acs especficos contra otro epitope del Ag, de manera que los inmunocomplejos son fijados en esta zona de deteccin, formando una banda coloreada, rosa o azul dependiendo del metal utilizado en el conjugado. La muestra fluye por capilaridad hasta la zona de control. Aqu el exceso de conjugado es capturado por un Ac anti-conjugado, formndose una banda coloreada tanto si el Ag est presente en la muestra como si no lo est. Este control indica que la prueba ha sido realizada correctamente y todos los reactivos funcionan bien. Finalmente el resto de la muestra es absorbida en la regin absorbente (ver figura 1). Esta prueba puede ser utilizada tambin para la deteccin de Acs. En este caso, el conjugado es el Ag especfico marcado. En la zona de deteccin est fijado un Ac anti Ig (dependiendo de la especie en la cual se buscan los Acs), el cual capturar los complejos inmunes formados si la muestra posee Acs especficos. En la zona de control un Ac especfico para el conjugado (en este caso el Ag marcado) captura el exceso de Ag solubilizado por la muestra. Aplicaciones: En medicina humana se utiliza este test para detectar la gonadotrofina corinica (test de embarazo)

En medicina veterinaria se utiliza para detectar antgenos (Virus de la leucemia felina, parvo y rotavirus, parsitos como dirofilaria immitis, y bacterias) o anticuerpos (anticuerpos anti- virus de la leucemia felina).

Zona de la muestra

Zona del conjugado

Zona de deteccin

Zona de control

Fig 1: Esquema de una prueba de inmunocromatografa para deteccin de antgeno. En la parte superior se esquematiza la prueba positiva, dando una banda en la zona de deteccin y una segunda banda en la zona de control. En la parte inferior, se esquematiza la prueba negativa, donde slo se observa reaccin en la zona de control.