You are on page 1of 53

Helicobacter pylori y su asociacin con enfermedad

Elvira Garza Gonzlez Departamento de Microbiologa Facultad de Medicina Universidad Autnoma de Nuevo Len
VI Congreso Regional de Qumicos Farmacuticos Bilogos Biblioteca Universitaria Ral Rangel Fras 25 27 de Agosto de 2004

Helicobacter pylori
Resea histrica Aspectos bacteriolgicos

Enfermedades
Diagnstico

Resea histrica
1893 1906 1939 1975 1983 Bizzozero Krienitz Doenges Observ espiroquetas en la mucosa gstrica de perros Observ espiroquetas en pacientes con cncer gstrico Espiroquetas en el estmago de humanos

Steer & Colin-Jones Bacterias en las clulas epiteliales de pacientes con lcera gstrica Warren & Marshall Cultivo de organismos espirales en biopsias gstricas

De Campylobacter a Helicobacter
Inicialmente se pens que poda ser una nueva especie del gnero Campylobacter. El anlisis de secuencias del cido ribonucleico ribosomal 16S (RNAr) permiti demostrar que Campylobacter y Helicobacter son dos gneros diferentes. Desde 1989 se le considera la especie tipo de un nuevo gnero: Helicobacter.

El descubrimiento de que H. pylori estaba implicado en diferentes patologas gstricas, represent UN CAMBIO CONCEPTUAL, ya que era la primera vez que una bacteria se consideraba causante de un proceso gstrico que anteriormente era tratado de forma PALIATIVA PERO NO CURATIVA

Helicobacter pylori
Bacilos Gram negativos espirales o curvos. Son catalasa, oxidasa y ureasa positivos. Son microaerofilos y mviles por mltiples flagelos monopolares.
Murray, P.R. 1999. Manual of Clinical Microbiology. ASM

Coloniza principalmente el antro del estmago, aunque tambin puede infectar el cuerpo, fondo o desplazarse al duodeno.

Fondo

Antro

Cuerpo

Clin. Micorbiol Rew. 1997. 10:720-41

INFECCIN POR Helicobacter pylori


Factores que permiten a la bacteria colonizar y permanecer en el hospedero: Movilidad: Presencia de H. pylori flagelos Enzimas: Mucinasa Adhesinas Ureasa Hemolisinas
NH3 Urea
Ureasa

Mucosa Epitelio

Hemoglobina

Hemolisinas

Clin. Micorbiol Rew. 1997. 10:720720-41 Murray, P. R.. et al. 1997. Microbiologa Mdica. 2a ed.

INFECCIN POR H. pylori Coloniza el epitelio gstrico. NO INVADE. Ocasiona una fuerte respuesta inflamatoria. Gastritis PERSISTENTE Y ASINTOMTICA en el 90% de los individuos. No se conoce que factores participan para que un individuo desarrolle sntomas y otro no.
Clin. Micorbiol Rew. 1997. 10:720-41

Presentaciones clnicas relacionadas con H. pylori


Gastritis H. pylori est presente en el 90% de las gastritis

lcera duodenal y gstrica H. pylori est presente en el 95% de los pacientes con lcera duodenal y en el 50-70%% de pacientes con ulcera gstrica.

Cncer gstrico

La infeccin por H. pylori representa un riesgo entre 6 veces mayor al desarrollo de cncer.

Prevalencia de la infeccin por H. pylori


Se estima que la mitad de la poblacin mundial adulta est infectada. En Mxico el 66% de la poblacin tiene anticuerpos IgG anti-H. pylori. La prevalencia en el Noreste de Mxico es del 67.8%
1997. Clin. Microbiol. Rew. 10:720-41. 1998. J. Infect. Dis. 178:1089.-94. 2003. Arch. Med. Res. 34: 60-63

PREVALENCIA DE LA INFECCIN POR H. pylori EN EL NORESTE DE MXICO


100 80 60 40 20 0 15-19 20-29 30-39 40-49 50-59 60-69 70-79 80-89 rango de edad

Frequencia (%)

2003. Arch. Med. Res. 34: 60-63

Factores de riesgo de infeccin por H. pylori


Edad Pas de origen Posicin socioeconmica
- Hacinamiento - Pobreza - Dormir en la misma cama - Familias de muchos miembros

Factores involucrados en la diversidad de las presentaciones clnicas


Medio ambiente: Dieta, tabaquismo..... Factores genticos del hospedero Factores de virulencia de H. pylori: cagA, vacA......

Representacin esquemtica de la estructura del gen vacA de H. pylori


vacA

Regin Seal s1a s1b s1c s2 N-Terminal Media m1 m2


J. Biol. Chem. 1995; 270:17771-7.

C-Terminal

Ciertos genotipos de vacA estn asociados con lugares geogrficos especficos El genotipo de vacA s1 est asociado al desarrollo de enfermedad

s1a s1b s1c s2


Norteamrica

Francia e Italia

Europa del Este y del Norte

Asia del Este

Australia Centro y SudAmrica Portugal y Espaa

Gastroenterology. 1999; 116:823-30

En un trabajo realizado en un centro hospitalario de la ciudad de Mxico:


El genotipo ms frecuente fue s1b. Las cepas s1 son ms virulentas

J.Clin. Microbiology. 1999; 37: 3001-4

OBJETIVO Determinar la prevalencia de los genotipos de vacA de Helicobacter pylori y su asociacin con expresin clnica.

MTODOS
Biopsias Biopsias de deantro antro

Cultivo Cultivo

Extraccin Extraccin DNA DNA por por el el mtodo mtodo de defenol-cloroformo fenol-cloroformo

Genotipifcacin Genotipifcacinde devacA vacApor por PCR PCR

Genotipifcacin de cagA y vacA por PCR vacA


Regin s1a s1b s2 m1 m2 Iniciador s1a-F s -R s1b-F s2-F m1-F m1-R m2-F m2-R

Secuencia (5 3') Producto de PCR (pb) GTCAGCATCACACCGCAAC 190 CTGCTTGAATGCGCCAAAC AGCGCCATACCGCAAGAG 187 GCTAACACGCCAAATGATCC 199 GGTCAAAATGCGGTCATGG 290 CCATTGGTACCTGTAGAAAC GGAGCCCCAGGAAACATTG 352 CATAACTAGCGCCTTGCAC Atherton et al. 1995. J. Biol. Chem. 270:17771-7.

Genotipifcacin de cagA y vacA por PCR


Mezcla de reaccin
Iniciadores DNA dNTPs Taq DNA polimerasa 25 pmol 100 ng de DNA genmico 100 M 1U

Condiciones de la PCR
(30 ciclos) Desnaturalizacin Alineacin Extensin 94C, 1 min 52C, 1 min 72C, 2 min

Deteccin de productos amplificados


Electroforesis en geles de agarosa al 2%, tincin con bromuro de etidio y deteccin por transiluminacin

Deteccin de vacAs1a
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 c- c+ 1000 bp 200 bp

Frecuencia de genotipos de vacA entre las cepas de H. pylori estudiadas


100 80 60 40 20 0
Frecuencia (%)

s1a

s1b

s2

m1

m2

genotipo de vacA

s1a s1b s1c s2


Norteamrica

Francia e Italia

Europa del Este y del Norte

Asia del Este

Australia Centro y SudAmrica


100 80 60 40 20 0

Portugal y Espaa

s2 s1a
s1b
1

Noreste de Mxico

Factores involucrados en la diversidad de las presentaciones clnicas

Factores de virulencia de H. pylori: cagA, vacA...... Medio ambiente: Dieta, tabaquismo..... Factores genticos del hospedero

Susceptibilidad del hospedero: Variaciones genticas en las citocinas que afectan (aumentan o reducen) su expresin y actividad y por lo tanto la intensidad de la respuesta.....
Xu et al., Nature 408, 111-115(2000)

H. pylori y cncer gstrico


FACTORES DE RIESGO Predisposicin gentica Predisposicin gentica (+ H. pylori) Factores nutricionales Tabaquismo (+ H. pylori) Alcoholismo OR Autor/ao 2.5 6.9 1.8 2.2 0.8 Vecchia 1992 Hansen 1999 Kaaks 1998 Siman 2001 Brenner 2001

Normal Normal
Gastritis Gastritiscrnica crnica activa activa Gastritis Gastritis atrfica atrfica Metaplasia Metaplasiaintestinal intestinal

?
Displasia Displasia

Carcinognesis gstrica de acuerdo a la hiptesis de Pelayo-Correa

Cncer Cncer

Patrones topogrficos comunes de gastritis crnica


cido cido

antral

de cuerpo

Gastritis lcera duodenal

lcera gstrica Cncer gstrico

H. pylori y el cncer gstrico


H. pylori y la secrecin de cido

Medicamentos

Interleucina-1 Antral predominantemente De cuerpo predominantemente

ANTECEDENTES
Cromosoma 2

Familia IL-1

IL-1RII IL-1RI

IL-1RN

IL-1B
31 TC

IL-1A

RELAVANCIA DE LA LOS POLIMORFISMOS DE LA FAMILIA IL-1B


La IL-1 es importante en el inicio y amplificacin de la respuesta inmune contra H. pylori y es adems un potente inhibidor de la secrecin de cido en el estmago

El-Omar et al. 2000

GENOTIPO PROINFLAMATORIO DE IL-1B


Poblacin de estudio 393 casos de cncer gstrico 430 controles Mtodo Genotipificacin de IL-1B-31*C Resultados Riesgo (razon de momios) 1.6

Genotipo IL-1B-31*C

IC 95% (1.2-2.2)

Gastroenterology 2000; 118: 22-30.

OBJETIVO
Estudiar el papel de los polimorfismos IL-1B-31, como factores de riesgo para el desarrollo de cncer gstrico distal en una poblacin mexicana.

MTODOS
Poblacin de estudio: 328 pacientes de Monterrey, Nuevo Len, Mxico.

Media edad Cncer gstrico distal (n= 61) Controles sin cncer (267) 58.4 50.8

F:M 0.65 1.36

METODOS
ENDOSCOPA: Obtencin de biopsias Examen histolgico SANGRE COMPELTA

Extraccin de DNA

Genotipificacin de IL-1B-31

DETECCIN DEL POLIMORFISMO DE 1L-1B

PATRONES DE PCR-RFLP PARA LA TIPIFICACIN DE IL-1B 31


C/C C/C C/C C/C C/C C/C C/C C/T C/T C/T C/T C/T C/T C/T C/T C/T T/T T/T M
1000 300 200 100
bp

ANLISIS COMPARATIVO ENTRE LOS CASOS Y LOS CONTROLES

Polimorfismo IL-1B-31*C

RM (IC 95%) 6.56 (1.5-40.9)

p <0.01

CONCLUSIN
Los genotipos de IL-1B-31 incrementan el riesgo al desarrollo de cncer gstrico distal en nuestra poblacin.

El cncer gstrico es una enfermedad multifactorial

Genetica

H.pylori Alimentos Tabaquismo Alcohol

Drogas

Principales mtodos de diagnstico utilizados en la infeccin por H. pylori


Invasivos (biopsia gstrica) Directos Cultivo Histologa Tcnicas moleculares: deteccin del DNA Indirectos Prueba rpida de ureasa Antgenos en heces Tcnicas moleculares: deteccin del DNA No invasivos

Prueba del aliento Deteccin de anticuerpos

Bsqueda de H. pylori: Cultivo


IDENTIFICACIN
Tincin de Gram

AISLAMIENTO

Oxidasa

Ureasa

Agar Columbia con sangre al 10% e incubacin en microaerobiosis a 37C por 3 a 5 das.

Catalasa

Bsqueda de H. pylori: Anlisis histolgico

Warthin-Starry Violeta de cresilo Hematoxilina y Eosina Giemsa

Principio de la Prueba rpida de ureasa


NH2 C NH2 Urea CLOtest Cambio de pH O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

Ureasa

Bsqueda de H. pylori: PRUEBA RPIDA DE UREASA

+ biopsia + ureasa de H. pylori

Urea + indicador de pH

NH3 pH Cambio de color

Bsqueda de H. pylori: Prueba del aliento

Deteccin de anticuerpos
ELISA Western-blot

El Consenso Europeo recomienda erradicar H. pylori en los siguientes casos:


Enfermedad lcero-pptica Gastritis graves Despus de reseccin de cncer gstrico

TRATAMIENTO DE LA INFECCIN POR H. pylori

IBP + Amoxicilina + Macrlido

You might also like