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Diseo de tapa Fabin Zubrinic Diseo y Diagramacin: Luciana Barchini Alejandra Cavallotti Autora: Ing. Adriana G.

Corzo Jefe de trabajos prcticos de qumica orgnica y biolgica Facultad de Ciencias Forestales Universidad Nacional de Santiago del Estero Av. Belgrano Sur 1.912 4200 Santiago del Estero Argentina e-mail: acorzo@unse.edu.ar

Ctedra de Qumica Orgnica y Biolgica

Guas de Trabajos Prcticos

INTEGRANTES DE LA CTEDRA Ing. Rodolfo Ledesma Ing. Luis Manfredi Ing. Adriana Corzo Alumna Graciela Hoyos

Ahora debemos ver el misterio de la existencia con nuevos ojos, pues como hijos orgullosos de la ciencia y la razn, hemos quedado hurfanos de sabidura.

Deepak Chopra

Prlogo
Con frecuencia los estudiantes de Qumica Orgnica se muestran abrumados por el nmero de compuestos, nombres, reactivos y mecanismos que confrontan, y se preguntan si podrn ser capaces de aprender todo ello en un solo semestre. La mayor parte de la qumica orgnica consiste en unos cuantos principios fundamentales y un gran nmero de extensiones y aplicaciones en esos principios. El estudiante requerir, por lo tanto, de poca memorizacin si se interioriza de cada concepto principal y desarrolla flexibilidad para aplicarlo. Al ser la Qumica una ciencia experimental, considero de fundamental importancia para el alumno que pueda trasladar al laboratorio, los conceptos tericos impartidos en el aula, donde podr visualizar los mismos a travs de las diversas prcticas presentadas por el docente. En las mencionadas clases prcticas se incentivar al estudiante a aplicar y desarrollar su capacidad de observacin, de relacionar lo que est haciendo con la teora y con asignaturas correlativas, de elaborar conclusiones y de establecer postulados en base a los resultados obtenidos. En el presente libro se presentan algunas pautas sobre normas de seguridad y las precauciones que se deben tener en u laboratorio de qumica. Se incluye tambin el significado de los smbolos presentes en los rtulos y etiquetas de los frascos de los reactivos, para su manejo correcto y seguro. A continuacin se presentan las Guas de Trabajos Prcticos de Laboratorio de la asignatura. Cada una de las cuales cuenta con una introduccin terica que presenta al estudiante los contenidos tericos que va a necesitar para encarar el trabajo de laboratorio, la parte experimental propiamente dicha y finalmente una serie de actividades o cuestionarios que deber responder a fin de evaluar si logr comprender, de manera completa y profunda, las experiencias realizadas. Las tcnicas experimentales consisten en mtodos de obtencin de algunos compuestos orgnicos y en la determinacin de las propiedades fsicas y/o qumicas de los mismos, induciendo al alumno a relacionar dichas propiedades entre las distintas familias de compuestos. En cuanto a las prcticas de la parte biolgica de la asignatura, se introduce al alumno e el manejo de la cromatografa, una de las tcnicas mas utilizadas en el anlisis de compuestos, tanto orgnicos como biolgicos. Tambin se apunta a verificar la influencia de diversos factores, tanto fsicos como qumicos, sobre la estructura y, por lo tanto, sobre la actividad de dos de los compuestos biolgicos de mayor importancia para la clula viva como son las protenas y enzimas. Incluidos en la parte biolgica, se presentan adems, dos prcticos que permiten al estudiante verificar el efecto que producen las variaciones de las condiciones ambientales en que se llevan a cabo dos procesos metablicos fundamentales para la vida de la clula vegetal. La fotosntesis y la respiracin. Finalmente se incluyen tres terico prcticos con el objeto de incentivar en el alumno el espritu de investigacin bibliogrfica y seleccin de contenidos, habilidades que considero de suma importancia para su formacin.

La Autora

ndice
Normas de seguridad Prcticos de Laboratorio Prctico de Laboratorio N 1: Hidrocarburos no saturados OBJETIVOS FUNDAMENTOS TEORICOS Alquenos 17 Alquinos 18 PARTE EXPERIMENTAL Obtencin de etileno 19 Obtencin de acetileno 20 ACTIVIDADES INDIVIDUALES PARA EL ALUMNO

17 17 19 20 21 21 22 23

Prctico de Laboratorio N 2: Alcoholes y Fenoles OBJETIVOS FUNDAMENTOS TERICOS Alcoholes 21 Fenoles 22 PARTE EXPERIMENTAL ACTIVIDADES INDIVIDUALES PARA EL ALUMNO

Trabajo Prctico N 3: Aldehdos y Cetonas. Preparacin de etanal a partir de etanol OBJETIVOS FUNDAMENTOS TERICOS Aldehdos 24 Cetonas 24 Mtodos de preparacin: Oxidacin de alcoholes 24 Propiedades qumicas 25 PARTE EXPERIMENTAL ACTIVIDADES INDIVIDUALES PARA EL ALUMNO Prctico de Laboratorio N 4: cidos Carboxlicos Obtencin de cido Benzoico OBJETIVOS FUNDAMENTOS TERICOS Propiedades fsicas 29 Sales de cidos carboxlicos 29 Mtodos de obtencin 30 Oxidacin de la cadena lateral de un alquilbenceno 30 PARTE EXPERIMENTAL CUESTIONARIO PARA EL ALUMNO EJERCICIOS

24 24

26 27

28 28

30 32 33 35 35

Prctico de Laboratorio N 5: Hidratos de carbono OBJETIVOS FUNDAMENTOS TERICOS

PARTE EXPERIMENTAL ACTIVIDADES PARA EL ALUMNO Trabajo de Laboratorio N 6: Extraccin y caracterizacin de hidratos de Carbono en mistol OBJETIVOS FUNDAMENTOS TERICOS PARTE EXPERIMENTAL Terico Prctico N 1: Cromatografa Prctico de Laboratorio N 7: Cromatografa de aminocidos en papel OBJETIVOS FUNDAMENTOS TERICOS Definicin 40 Interacciones 40 Clasificacin 40 Cromatografa de reparto 41 Cromatografa en papel 41 PARTE EXPERIMENTAL Preparacin del cromatograma 42 Prctico de Laboratorio N 8: Protenas OBJETIVOS FUNDAMENTOS TERICOS PARTE EXPERIMENTAL ACTIVIDADES PARA EL ALUMNO GRFICOS Prctico de Laboratorio N 9: Enzimas OBJETIVOS FUNDAMENTOS TERICOS Definicin 48 Estructura 48 Caractersticas 48 Mecanismo de accin enzimtico 49 Grficos de la ecuacin de Michaelis- Menten 49 Factores que afectan la actividad cataltica de las enzimas PARTE EXPERIMENTAL

36 37

38 38 38 39 40 40

41 43 43 45 46 46 48 48

49

50

Catalasa 50 Deshidrogenada 51 Polifenol-oxidasa 51 ACTIVIDADES PARA EL ALUMNO Terico Prctico N 2: Integracin de conceptos tericos sobre Compuestos Biolgicos Aminocidos 53 Protenas 54 Enzimas 55 cidos nucleicos 55

52 53

Prctico de laboratorio N 10: Fotosntesis OBJETIVOS FUNDAMENTOS TERICOS PARTE EXPERIMENTAL Efecto de la intensidad luminosa 58 Efecto de la concertacin de CO2 58 Efecto de la temperatura 58 ACTIVIDADES PARA EL ALUMNO Prctico de Laboratorio N 11: Respiracin OBJETIVOS FUNDAMENTOS TERICOS

57 57 57

58 59

59

PARTE EXPERIMENTAL ACTIVIDADES PARA EL ALUMNO Prctico de Laboratorio N 12: Propiedades qumicas del almidn OBJETIVOS FUNDAMENTOS TERICOS PARTE EXPERIMENTAL Terico Prctico N 3: Integracin de conceptos tericos sobre aspectos metablicos ATP y bioenergtica celular 62 Respiracin 62 Fotosntesis 62 Metabolismo de lpidos 63 Metabolismo de protenas y ciclo del n2 63 Bibliografa

60 60 61 61 61 61

62

64

ndice de figuras
Figura 1: Equipo para la obtencin de etileno Figura 2: Equipo para la obtencin de acetileno Figura 3: Equipo para la obtencin de etanal

19 20 26 31 46

Figura 4 Equipo para la obtencin de acido benzoico Figura 5: Esquema del Trabajo Prctico

42 46

Figura 6: Estructura terciaria de lmina plegada de una protena fibrosa. (Protena de la seda) Figura 7: Estructura cuaternaria de protena tetramrica (hemoglobina) Figura 8: Estructura terciaria de

-hlice de protena fibrosa

47

a) modelo espacial con todos los enlaces b) esqueleto de la

-hlice
47

Figura 9: Estructura terciaria de una protena globular

a) Representacin en forma esquemtica de las fuerzas estabilizadoras. b) Representacin espacial de una protena globular (enzima de la levadura). Figura 10: Efecto de la [E] y de [S] sobre la actividad enzimtica

49 50 57 60

Figura 11: Variacin de la actividad enzimtica en funcin de la temperatura Figura 12: Dispositivo para actividad de catalasa

51

Figura 13: Dispositivo para observar efecto de factores ambientales sobre la fotosntesis Figura 14: Dispositivo para observar la actividad respiratoria de semillas en germinacin

Normas de seguridad en laboratorio

Normas de seguridad
El trabajo en el laboratorio implica el peligro potencial de accidentes, debido a la naturaleza de las sustancias y elementos que se utilizan. Adems, existe la posibilidad de errores humanos al realizar la experimentacin. Entre los accidentes ms comunes podemos mencionar: incendios, explosiones, cortes, quemaduras, intoxicaciones, etc. Existen ciertas reglas que deben tenerse en cuenta al realizar trabajos en el laboratorio; su cumplimiento disminuye los riesgos, y muchas veces, logran evitar accidentes. La primera regla que todo aquel que trabaja en el laboratorio debe cumplir es la siguiente: el lugar de trabajo debe estar en perfecto orden. Recuerde que el orden es fundamental para evitar accidentes. Mantenga el rea de trabajo ordenada, sin libros, abrigos, bolsas y cosas innecesarias o intiles. Mantenga las mesas y vitrinas extractoras siempre limpias. Se tienen que limpiar inmediatamente rodos los productos qumicos derramados. Limpie siempre perfectamente el material y equipos despus de su uso. Otras normas bsicas son las siguientes: Siga todas las indicaciones que el instructor o responsable del laboratorio le indique. Est siempre equipado con delantal y anteojos de proteccin. No utilice lentes de contacto, ya que estos no pueden quitarse con la rapidez necesaria si ocurrieran proyecciones de lquidos a los ojos. Por otro lado, las lentes blandas pueden absorber los vapores orgnicos. Nunca debe comer, fumar o beber en el laboratorio; tampoco apoye comida sobre la mesada. Estudie cada experiencia antes de cada prctico y, si es posible, disee un esquema de la tcnica que utilizar. De esta manera ahorrar tiempo, podr consultar especficamente lo que dude, y as evitar errores y accidentes innecesarios. En caso de accidente, por pequeo que parezca, comunquelo inmediatamente al instructor o ayudante de laboratorio. Trabaje con la mayor ventilacin posible. Si tiene el pelo largo, debe recogrselo. En el armado de equipos, asegrese de usar soportes que tengan un buen apoyo, y controle el funcionamiento de los mismos. Nunca caliente un sistema cerrado. Si calienta un tubo de ensayo, no mire hacia el interior del mismo; tampoco apunte la boca del tubo hacia un compaero. Manipule las sustancias corrosivas con mximo cuidado. No fuerce los tapone o uniones de ltex en los tubos de vidrio o cualquier material quebradizo. Utilice detergente o glicerina que facilitan la tarea de quitarlos. No use nunca equipo de vidrio agrietado o roto. Deposite el material de vidrio roto en un contenedor para vidrio, no en una papelera. En el laboratorio nunca debe trabajar solo, para poder recibir ayuda en caso de accidentes.

Trabaje sin prisas, pensando cada momento en lo que est haciendo. Nunca corra en el laboratorio.

Dada la gran toxicidad de muchas sustancias con las que trabajar en el laboratorio debe tener en cuenta las siguientes precauciones. Evite ingerir, inhalar o tocar compuestos orgnicos (muchos de estos son rpidamente absorbidos por la piel y resultan tan txicos como si fueran inhalados). Por esto se recomienda: No arroje residuos slidos insolubles en la pileta. No mezcle sustancias orgnicas que puedan generar compuestos txicos. No mueva los reactivos del rea designada para su manejo y medida. Debe transportar las botellas o frascos de reactivos tomndolos por el fondo, nunca de la tapa No pruebe ninguna sustancia (slida o en solucin) a menos que sea especficamente indicado por el instructor. Si debe oler una sustancia, hgalo a una distancia de 12 a 20 cm. De la nariz, mueva lentamente la mano hacia la nariz y aspire con precaucin. Si no detecta ningn olor. Mueva un poco el recipiente que lo contiene, y huela ms fuertemente. Nunca inhale. Evite derramar productos qumicos sobre la mesada. Si sucediera esto, avise al instructor o ayudante de laboratorio; pero sobre todo, trabaje con precaucin para evitar ese accidente. Evite contaminar el aire: Coloque las tapas en los frascos inmediatamente despus de usarlos. No slo reducir la evaporacin, sino que tambin evitara la contaminacin de los reactivos. No traslade las sustancias qumicas del rea designada para su manejo y medida. Use bao de hielo cuando destile lquidos con punto de ebullicin inferiores a 40 C. Evite una condensacin incompleta. Lo conseguir asegurndose que el agua fluya por el refrigerante cuando destile o caliente a reflujo. Precauciones para el uso de cidos y bases fuertes: Use las cantidades especificadas en la tcnica correspondiente. Para preparar mezclas de cido con agua y alcohol, agregue el cido al agua o alcohol lentamente, agitando y enfriando. Si se trata de una mezcla de dos cidos, aada en porciones, y con sumo cuidado, el ms concentrado sobre el menos concentrado, agitando y enfriando. Recuerde: No hay que darle de beber al cido. Proteja los ojos cuando trabaje con sustancias corrosivas. Lave con grandes cantidades de agua la piel si la misma hubiera tomado contacto con sustancias corrosivas. Luego, siga el tratamiento correspondiente para cada caso.

Peligros del fuego: No acerque nunca recipientes que contengan lquidos voltiles a una llama. No encienda ninguna llama en el laboratorio si detecta olor a gas. No vuelque sodio en las piletas. La reaccin es violenta y puede provocar un incendio. Si arden pequeas cantidades de disolvente, cubra con arena. Para grandes cantidades, use extinguidores. Primeros auxilios Quemaduras Trate las quemaduras como se indica a continuacin y luego llame por atencin especializada. Con lcalis: En la piel: despus de lavar la zona afectada con agua, trate con solucin de cido actico al 5%. En los ojos: despus de lavar repetidas veces con agua, trate con solucin de cido brico al 1%. Con cido: En la piel: despus de lavar con agua, trate con solucin de bicarbonato de sodio al 5%. En los ojos: despus de lavar con agua, trate con solucin de brax al 5%. Con bromo: Trate inmediatamente con glicerina. Con fuego, agua hervida o superficies metlicas calientes. Trate inmediatamente con hielo durante 30 minutos. Envenenamiento por ingestin: cidos: suministre 100 a 200 g de magnesia diluida en leche o huevo batido con agua (vomitivos). lcalis: trate con limonada, vinagre en leche (vomitivos). Cianuros: inmediatamente suministre 1 g de tiosulfato de sodio por va venenosa. Inhale oxgeno (antdoto) Etiquetas de solventes y reactivos No debe utilizar un reactivo sin haber ledo previamente toda la informacin contenida en su etiqueta; preste especial atencin a los smbolos de peligrosidad y a las recomendaciones para su correcto manejo. Se detalla a continuacin la clasificacin de las sustancias qumicas segn la ONU (Organizacin de las Naciones Unidas).

Clasificacin de sustancias qumicas segn la ONU


Explosivos: Son sustancias slidas o lquidas, o mezclas de ellas, que por sis mismas son capaces de reaccionar qumicamente produciendo gases a tales temperaturas, presiones y velocidades que pueden ocasionar graves daos en los alrededores. Gases Inflamables: Son sustancias que pueden incendiarse

fcilmente en el aire cuando se mezclan en proporciones inferiores o iguales al 13% en volumen. Ej.: propano, aerosoles. Gases no Inflamables: Son sustancias no txicas; pueden ser asfixiantes u oxidantes. Ej.: nitrgeno. Lquidos inflamables: Son lquidos o mezclas de ellos, que pueden contener slidos en suspensin o solucin, y que liberan vapores inflamables por debajo de 35 C (punto de inflamacin). Por lo general son sustancias que se transportan a temperaturas superiores a su punto de inflamacin, o que siendo explosivas se estabilizan diluyndolas o suspendindolas en agua o en otro lquido. Ej.: gasolina, benceno y nitroglicerina en alcohol. Slidos inflamables: Son aquellos que bajo condiciones de transporte son combustibles o pueden contribuir al fuego por friccin. Ej.: fsforos. Slidos espontneamente combustibles: Son aquellos que se calientan espontneamente al contacto con el aire bajo condiciones normales. Ej.: Bisulfito de sodio. Slidos que emiten gases inflamables al contacto con el agua: Son aquellos que reaccionan violentamente con el agua o que emiten gases que se pueden inflamar en cantidades peligrosas cuando entran en contacto con ellas. Ej.: metales alcalinos como socio, potasio. Sustancias oxidantes: Generalmente contiene oxgeno y causan la combustin o contribuyen a ella. Ej: agua oxigenada (perxido de hidrgeno), nitrato de potasio.

Perxidos orgnicos: Sustancia de naturaleza orgnica que contienen estructuras bivalentes O-O-, que generalmente son inestables y pueden favorecer una descomposicin explosiva, quemarse rpidamente, ser sensibles al impacto o la friccin, o ser altamente reactivas con otras sustancias. Ej.: perxido de benzolo, perxido de metiletilcetona. Sustancias txicas: Son lquidos o slidos que pueden ocasionar daos graves a la salud o la muerte al ser ingeridos, inalados, o al entrar en contacto con la piel. Ej.: cianuros, sales de metales pesados. Materiales infecciosos: Son aquellos microorganismos que se reconocen como patgenos (bacterias, Hongos, parsitos, virus e incluso hbridos o mutantes) que pueden ocasionar a los animales o a las personas una enfermedad por infeccin. Ej.: ntrax, HIV, E. Coli. Sustancias Corrosivas: Corresponde a cualquier sustancia que por reaccin qumica puede causar daos severos o destruccin a toda superficie con la que entra en contacto incluyendo la piel, los tejidos, metales, textiles, etc. Causa quemaduras graves, y se aplica tanto a lquidos o slidos que tocan las superficies, como a gases y vapores que en cantidad suficiente provocan fuertes irritaciones en las mucosas. Ej.: cidos y custicos. Sustancias nocivas: Son aquellas que por inhalacin, ingestin o absorcin cutnea pueden provocar daos agudos o crnicos a la salud. Posibles sensibilizantes por inhalacin. Ej.: eugenol, estireno, xileno, tolueno. Sustancias irritantes: Sin ser corrosivas pueden producir

inflamaciones en la piel o las mucosas, por contacto breve, prolongado o repetido. Peligro de sensibilizacin por contacto. Ej.: etilhexilacrilato, carbonato de sodio, cido clorhdrico 0,1N.

Trabajos prcticos de laboratorio

Ctedra de Qumica Orgnica y Biolgica Gua de Trabajos Prcticos Facultad de Ciencias Forestales

Prctico de Laboratorio N 1

Tema: Hidrocarburos no saturados

OBJETIVOS Interpretar las propiedades fsicas y qumicas de los alquenos y alquinos en base a su estructura molecular y electrnica. Diferenciar los hidrocarburos saturados de los no saturados. Obtener etileno a partir de etanol, acetileno a partir de Ca C2 y preparar con este ltimo, acetiluros de Ag y de Cu.

FUNDAMENTOS TEORICOS A ALQUENOS Se caracterizan por la presencia de una doble ligadura, y su nomenclatura se indica con la terminacin eno. Su formula general es Cn H2n y el primer termino de la serie es el etileno (nombre comn), cuya formula es CH2 = CH2. En sus reacciones qumicas los alquenos se comportan como bases de Lewis (dadores de e-), debido a la presencia de par de e- , los cuales originan el segundo enlace caracterstico de esta familia de compuestos. Este par de e- restringe tambin la rotacin alrededor del doble enlace, esto a su vez, permite que los alquenos existan en dos formas ismeras (cis-trans) denominados ismeros geomtricos y le confiere mayor reactividad a estos hidrocarburos. Propiedades Fsicas Con respecto a los estados fsicos de los alquenos, el etileno es un gas incoloro con un sabor ligeramente dulce, poco soluble en agua, pero mas soluble en alcohol y ter. EL propileno y los tres butilenos son igualmente gases en condiciones normales y las olefinas de cinco mas tomos de carbono son liquidas. Los puntos de ebullicin de los alcanos y alquenos del mismo nmero de carbonos difieren muy poco y se eleva con el aumento de tomos de carbono en la cadena. Los alquenos son someros de conformacin de los cicloalcanos, pero difieren en sus propiedades qumicas, pues el cambio de una cadena abierta a una cerrada modifica las propiedades de los compuestos. Propiedades Qumicas Los alquenos presentan dos importantes tipos de reacciones: de oxidacin y de adicin. - Reacciones de oxidacin 1- Combustin: los alquenos queman en el aire con una llama mas luminosa que la de los alcanos debido al mayor porcentaje de carbono de su molcula ( a causa de la no saturacin) 2Cn H2n + 3 n O2 2 n CO2 + 2 n H2 O

2- Reaccin de Baeyer para la no saturacin: Una solucin diluida de KMnO4 oxida a las olefinas, primero a glicoles, los que pueden continuar su oxidacin. Esta reaccin no la dan los alcanos, por lo tanto constituye un ensayo til para diferenciar ambos tipos de 3- Ozonlisis: Las olefinas se combinan con el ozono para dar, luego de una hidrlisis, y reduccin intermedias, molculas de aldehdos y cetonas. Esta reaccin permite localizar el 4- Epoxidacin: los alquenos reaccionan con cidos peroxicarboxlicos para dar 1,2 epxidos.

hidrocarburos. doble enlace.

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- Reacciones de adicin 1- Adicin de Hidrgeno: adicionan H2 en presencia de Nquel Pt para dar parafinas. 2- Adicin de Halgenos (X2): de esta reaccin se obtienen alcanos dihalogenados. Tambin adicionan cido sulfrico y cido hipocloroso. Lo interesante de estas reacciones es que siguen la regla de Markownikoff que dice: el grupo negativo de un cido se une al tomo de carbono que tiene el menor nmero de tomos de hidrgeno; cabe destacar que en la adicin de HBr a una olefina en presencia de luz ultravioleta, oxgeno perxido, esta regla se invierte por el

efecto perxido.

B ALQUINOS El acetileno, C2H2 que da su nombre a la familia de hidrocarburos caracterizados por una triple ligadura, fue descubierto por Edmundo Davy, al agregar agua a una masa negra obtenida calentando fuertemente una mezcla de cremor trtaro y carbn de lea. Esta masa probablemente contena carburo de potasio el cual liberaba acetileno al reaccionar con el agua. Ciertos carburos metlicos producen acetileno por hidrlisis y actualmente se usa el carburo de calcio en gran escala con ste propsito. Los hidrocarburos de la serie acetilnica tiene como carcter distintivo un triple enlace covalente entre dos tomos de carbono. De ah que su frmula gral. Sea Cn H2n-2 Propiedades fsicas: Los miembros inferiores de la serie del acetileno son gases a temperatura ambiente, y a medida que aumenten el nmero de carbonos se tornan lquidos y elevan su punto de ebullicin. Con respecto al acetileno, es un gas incoloro, ms liviano que el aire. Al estado puro no tiene olor y si lo tuviera es etreo. Sin embargo, al ser preparado en el laboratorio presenta impurezas que le confieren un olor desagradable, aliceo. Las mencionadas impurezas son compuestos sulfurados y fosforados, tales como SH2 y fosfamina. El etino es soluble en agua, alcohol y benceno, y es muy soluble en acetona. Licua con facilidad a 48 atm. Y 1C ( a 25 atm. Y a 25C). Al estado lquido es mvil, incoloro y muy inestable, razn por la cual es altamente explosivo (pero puede almacenarse sin peligro disuelto en acetona, a 12 atm de presin en tubos de acero con tierras de infusorios). La razn de este comportamiento es el alto contenido de energa de la molcula de acetileno, como lo demuestra el alto valor negativo de su calor de formacin (el acetileno es una combinacin endotrmica). 2C + H2 C2H2 -54,8 Kcal/mol

Al estado gaseoso forma mezclas detonantes con aire y el oxgeno. Arde en el aire con llama fuliginosa (acompaada con humos negros) reaccin que se produce con desprendimiento de calor. Con el oxgeno produce la llama oxiacetilnica, que alcanza una temperatura de 2700 a 3000C. Razn por la cual se lo utiliza para fundir hierro y acero en el soplete oxiacetilnico (soldadura autgena). Propiedades Qumicas Los alquinos dan dos tipos principales de reacciones qumicas:

Reacciones de adicin

Estos hidrocarburos son muy similares a los alquenos en cuanto a su comportamiento qumico, por lo cual adicionan la mayora de los reactivos qumicos que se adicionaban a aquellos, la diferencia radica en que un mol de alquino reacciona con el doble de reactivo que un mol de alqueno. Los hidrgenos del acetileno tiene propiedades ligeramente cidas, sin llegar a enrojecer al tornasol. Esto significa que pueden llegar a producir sales, denominadas acetiluros, con metales alcalinos, alcalino-trreos y pesados. Los acetiluros de metales alcalinos y alcalino-terreos son estables al calor, pero se descomponen con agua con desprendimiento de acetileno. Los de cobre y plata son altamente explosivos al estado seco, detonando violentamente por choque (por ello se lo usa en industria de los explosivos).

Formacin de acetiluros

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Esta propiedad de producir acetiluros se emplea para el reconocimiento de alquinos con triple enlace terminal ya que no la darn los otros alquinos y alquenos (ni mucho menos los alcanos). PARTE EXPERIMENTAL A | Obtencin de etileno: Deshiratacin de Alcoholes Ecuacin de la Reaccin CH3-CH2OH Etanol Reactivos necesarios: - Alcohol etlico de 96. - cido sulfrico conc. - Soluc. Diluida de KMnO4. - Soluc. De NaOH.
H2SO4

180C

CH2=CH2 Etileno

+ H2O

Materiales de laboratorio: - Baln de 250 cc. - Ampolla de decantacin. - Tela de amianto, mechero. - Soporte y pinzas de sostn. -Tubos de ensayo y gradilla.

Tcnica: Armar un aparato como el indicado en la figura N1. Colocar 20 ml de cido sulfrico en la ampolla de decantacin y 10 ml de alcohol en el baln. Dejar caer lentamente el cido y evitar el aumento de la temperatura, enfriando. Se deja enfriar y se aade un poco de arena para evitar la formacin de espuma. A continuacin, calentar con cuidado y paulatinamente el baln. Este ltimo debe tener adems adosado un termmetro para el control de la temperatura, la cual debe permanecer alrededor de 180C.

Figura 1: Equipo para la obtencin de etileno a. Reaccin de Baeyer: preparar tres tubos de ensayo conteniendo, c/u de ellos una solucin, muy diluida de KMnO4. Tubo N1: alcalinizar con unas gotas de solucin de NaOH. Tubo N2: acidular con unas gotas de H2SO4. Tubo N3: dejarlo neutro para control. Cuando comience a producirse etileno, hacerlo burbujear en los tres tubos y observar lo que sucede en cada uno de ellos.

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b. Inflamabilidad: aproximar una llama a la boca de un tubo que contenga etileno. Se puede mantener la llama sobre la boca del tubo aadindole continuamente agua mientras arde. Observar si la llama es luminosa no. B Obtencin de acetileno Reactivos necesarios: - Carburo de Calcio. - Agua destilada. - Agua acidulada con HCI H2SO4. Materiales de laboratorio - Frasco de dos bocas de 500 ml. - Frasco lavador. - Tubo de seguridad: 2 - Tubos acodados: 2 - Cmara hidroneumtica.

Tcnica: En un frasco de dos bocas de 500 ml de capacidad se colocan unos 250ml de agua destilada. La boca del frasco lleva un tapn atravesado por un tubo de vidrio lo mas ancho posible, el cual debe llegar hasta cerca del fondo del frasco. La otra boca comunica con un frasco lavador que contiene agua acidulada con HCI H2SO4. Este frasco posee, adems, un tubo de seguridad y un tubo lateral que conduce el gas a la cuba hidroneumtica. Por el tubo de vidrio conectado a 1 primer frasco, se agrega peridicamente pedacitos muy pequeos de carburo de calcio, los cuales reaccionarn vivamente con el agua del frasco desprendiendo el acetileno y con desarrollo de calor. A causa de esto debe operarse con precaucin. El esquema del aparato descripto es el siguiente:

Acidez del C2H2 a. Reaccin con CuSO4 amoniacal: se hace burbujear el acetileno obtenido en dos ml de solucin de sulfato de cobre amoniacal, contenido en un tubo de ensayo. Se observa la formacin de ppdo.rojo de acetiluro curposo. Filtrar y calentar, con mucho cuidado, este precipitado. b. Reaccin con AgNO3 amoniacal: hacer burbujear el acetileno obtenido en 3 ml de solucin de nitrato de plata amoniacal, hasta observar la formacin de un precipitado blanco de acetiluro de plata. Separar este precipitado por filtracin y calentarlo cuidadosamente, en el papel de filtro, sobre una tela de amianto. ACTIVIDADES INDIVIDUALES PARA EL ALUMNO Elabore un cuadro comparativo que ponga de manifiesto las similitudes y las diferencias en las propiedades qumicas de los alcanos, de los alquenos y de los alquinos.

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Prctico de Laboratorio N2

Tema: Alcoholes y fenoles


OBJETIVOS Verificar el comportamiento fsico y qumico de los alcoholes y fenoles, justificandolo en base a la estructura molecular de los mismos. Identificar y diferenciar los alcoholes 1,2 y 3. Identificar y diferenciar los alcoholes alifticos y aromticos de los fenoles.

FUNDAMENTOS TEORICOS A ALCOHOLES Estos pueden ser representados por la formula gral. CnH2n+2O , simblicamente, como R-OH. El grupo funcional de los mismos es: | C OH | carbinol

Tienen carcter tanto cido como bsico, lo cual explica en parte su tendencia a asociarse a travs de puentes de hidrgeno, razn por la cual los alcoholes hierven a temperaturas superiores a la de los alcanos equivalentes. Las molculas de alcoholes se asocian tambin con molculas de agua a travs de puentes de hidrgeno. Esto permite que los trminos inferiores sean completamente miscibles con ella. Carcter cido de los alcoholes: Reaccionan con los metales activos, como el Na, con desprendimiento de H2. En este tipo de reacciones, en las que solamente se elimina el H2 del OH dejando al O el par de e- a travs del cual estaban unidos originalmente, la velocidad de la reaccin vara de la siguiente manera: R-OH 1 2 3 (los alcoholes 1 reaccionan mas rpido que los secundarios y estos mas que los alcoholes terciarios). 2CH3 - OH +2Na 2CH3- ONa + H2

Carcter bsico de los alcoholes: los R-OH aceptan un protn de los cidos minerales ms fuertes para formar iones de alquil-oxonio, similares al H3O+ (ion hidronio). Segn las condiciones de la reaccin, especialmente la temperatura, la protelisis puede ir seguida de alguna de las siguientes reacciones: a. Deshidratacin total, produciendo un alqueno. b. Deshidratacin parcial, produciendo un ter c. Desplazamiento de la molcula de agua del ion alquil-oxonio por un anin, para dar, por ejemplo, un haluro de alquilo, un nitrato de alquilo, un sulfato de cido, etc. En este tipo de reacciones la velocidad de las mismas vara de la siguiente forma: R-OH 3 2 1. Oxidacin de los alcoholes: los 1 y 2 son reductores moderados y son oxidados por los oxidantes habituales. La estructura de los alcoholes 3 hace muy difcil su oxidacin, para lo cual se deben dar condiciones muy enrgicas.

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(O)

(O)

Alcohol 1 Alcohol 2

-R-OH R | H C OH | R R | R C OH | R
(O)

aldehdo

cido

cetona

Alcohol 3

(O) fuerte

Cetona (con un tomo de carbono menos)

B FENOLES Estos pueden clasificarse en mono, di y polifenoles, de acuerdo al nmero de grupos OH unidos al anillo aromtico. El trmino que posee un solo OH es el ms tpico, es un slido incoloro que funde a los 41C y hierve a los 82C. Es poco soluble en agua a temperatura ambiente, pero su solubilidad aumenta con la temperatura hasta serlo en todas proporciones a 63,5C. El fenol es ligeramente cido y se disocia en ion fenxido e hidrgeno. DIFERENCIAS ALCOHOLES FENOLES Son neutros Son cidos y disuelven lcalis Oxidan a aldehdos y cetonas Oxidan produciendo complejos coloreados Reaccionan con halogenuros de cido (HX) No reaccionan con (HX) dando halogenuros de alquilo Con FeCl3 no dan reacciones coloreadas Con cloruro frrico dan reacciones coloreadas PARTE EXPERIMENTAL Reactivos necesarios: -Alcohol n-butlico -Alcohol ter-butlico -Alcohol sec-butlico -Fenol -Resorcina -cido saliclico -Solucin de NaOH al 5% -Na Metlico -Reactivo de Lucas -Solucin de KMnO4 al 3% -Mezcla sulfocrmica -Solucin de FeCl3 al 1% -Reactivo de Tollens Tcnica: a- Solubilidad en agua y en soluciones alcalinas. Materiales de laboratorio -Gradilla con 4 tubos de ensayo -Pipeta de 5 y 10 ml. -Vaso de precipitado para bao mara -Mechero, trpode y tela de amianto -Pinza de madera y esptula metlica

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Colocar separadamente en 3 tubos de ensayo alrededor de 10 gotas de c/u de las siguientes sustancias: alcohol n-butlico, alcohol ter-butlico y fenol. (Evite el contacto del fenol con la piel, pues produce quemaduras muy molestas!) Agregar 5 ml. de agua a cada tubo mezcle y observe la solubilidad en fro. A continuacin coloque todos los tubos en un bao mara y caliente hasta 65C. Ensaye con una gota de c/u de las muestras sobre papel tornasol. Repetir la experiencia usando, en vez de agua, una solucin de NaOH al 5%. b- Los alcoholes como cidos: reaccin con Na metlico. Colocar en 3 tubos de ensayo diferentes, 3 ml. de los siguientes alcoholes: butlico, sec-butlico y terbutlico. A cada tubo agregar un trozo pequeo de Na metlico y observar la reaccin hasta que todo el Na se halla disuelto. Si es necesario agregue ms alcohol para destruir el exceso de Na. (nunca

coloque Na metlico directamente en agua!).

c-Los alcoholes como base: reaccin con el reactivo de Lucas. En cada uno de 3 tubos de ensayo coloque 1 ml de reactivo de Lucas. Agregue 4-5 gotas de lo alcoholes a ser ensayados, mezcle bien y controle el tiempo necesario para que la reaccin d comienzo. Luego de 5 minutos caliente aquellos tubos en los que no se observ ninguna reaccin. d- Oxidacin de los R-OH 1- con KMnO4 a diferentes ph: so coloca en un tubo de ensayo 5 ml. de una mezcla formada por 5 ml. de alcohol metlico y 15 ml. de agua y se la alcaliniza con una gota de una solucin al 10% de NaOH. Se coloca igual cantidad de la mezcla alcohol-agua en otros 2 tubos de ensayo acidulando 1 de ellos con una gota de solucin al 10% de H2SO4 dejando neutro el 3. A cada tubo se le aade 2 gotas de una solucin de KMnO4 al 3% y se deja en reposo durante 2 minutos. Entonces, si es necesario, se calienta para que la reaccin se produzca. Repetir todo con un R-OH 2 y uno 3. 2- con K2 CrO7/ H2SO4: en un tubo de ensayo se colocan 10 ml. de la solucin oxidante (dicromato de potasio en agua y en cido sulfrico) y se le adicionan 2 ml. de R-OH n-butlico. El tubo se agita y se observa si se produce alguna elevacin de la temperatura cambio de color. El ensayo se repite en otros tubos con 2 ml. de alcoholes sec y ter-butlico respectivamente. e- Reacciones del fenol y otros compuestos fenlicos 1- ensayo del cloruro frrico (Fe Cl3): preparar unos ml. de soluciones de fenol, resorcina y cido salcilico, disolviendo unos cristales de cada uno de ellos en 5 ml. de agua. Agregar a cada tubo unas gotas de solucin de FeCl3 al 1%. Ensaye la misma reaccin con alcohol butlico y ter-butlico. Anote e interprete los resultados. 2- Poder reductor del fenol: disolver 0,2 gr. De fenol en 10 ml. de agua y ensayar su poder reductor con el reactivo de Tollens. ACTIVIDADES INDIVIDUALES PARA EL ALUMNO 1- A qu se deben las diferentes solubilidades observadas con los reactivos empleados y las condiciones en que se realiz la experiencia? 2- Escriba la ecuacin qumica que representa la reaccin de los alcoholes con el Na metlico y explique las diferentes velocidades observadas para la misma, en funcin de la estructura molecular y electrnica de cada una de ellos. 3- Escriba las ecuaciones para la reaccin de cada tipo de alcohol con el reactivo de Lucas y explique las diferencias de velocidades que se manifiestan. 4- Plantee las ecuaciones qumicas para la oxidacin de cada tipo de alcohol. 5- A que se debe las coloraciones producidas por los fenoles en el cloruro frrico? 6- Elabore un cuadro comparativo con los resultados obtenidos en todas las reacciones efectuadas.

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Trabajo Prctico N 3

Tema: Aldehdos y Cetonas. Preparacin de etanal a partir de etanol


OBJETIVOS Obtener etanal a partir de etanol, interpretando la reaccin involucrada en la transformacin. Realizar e interpretar algunas reacciones de diferenciacin de aldehdos y cetonas.

FUNDAMENTOS TERICOS ALDEHDOS Son compuestos que resultan de la deshidrogenacin u oxidacin suave de los alcoholes primarios. El trmino aldehdo proviene de alcohol dehidrogenatus, o sea que proviene de un alcohol primario que ha perdido una molcula de H2.

CH3 CH2 OH O || RCH

H2

CH3CHO

Frmula gral. de aldehdos

CETONAS Son compuestos que se forman por la oxidacin de un alcohol secundario, dicha reaccin se realiza con oxidantes fuertes a diferencia de la de los aldehdos.

O || RCR

Frmula gral. de cetonas

A Mtodos de preparacin: Oxidacin de alcoholes. Uno de los mtodos ms directos de obtencin de un aldehdo es la oxidacin de un alcohol primario. Los alcoholes terciarios son resistentes a la accin de soluciones diluidas de de agentes oxidantes. El agente mas usado en el laboratorio es una solucin de dicromato de sodio y cido sulfrico. Es necesario evitar un exceso de agente oxidante, dado que el aldehdo se sigue oxidando con facilidad hasta cido. Afortunadamente los aldehdos de bajo peso molecular tienen tambin bajo punto de ebullicin y se pueden eliminar tan rpidamente como se van formando. Sin embargo la produccin de cido no puede ser evitada totalmente. La ecuacin que representa esta reaccin es: 3 CH3CH2OH + Cr2O7= + 8 H+ O 3 CH3C
etanal

alcohol etlico

2 Cr+++

7H2

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B Propiedades qumicas Los aldehdos y cetonas son compuestos de una gran reactividad qumica, la cual est determinada por la presencia en ambos del siguiente grupo funcional:
carbonilo

C=O

Presentan tres tipos de reacciones: Adicin: con y sin prdida de una molcula de agua. Sustitucin: del H de los aldehdos por un tomo de Cl. Condensacin: polimerizacin, aldolizacin y crotonizacin. Entre ellas, y a los fines del prctico, fijaremos nuestra atencin en algunas reacciones de adicin de oxgeno reacciones de oxidacin, de una suma importancia para la diferenciacin de los aldehdos y las cetonas, las cuales se basan en el uso de ciertos reactivos muy especficos. Ellas son las reacciones de Fehling, Tollens y Benedict (*). La accin de estos reactivos se basa en la facilidad de oxidacin del grupo carbonilo de los aldehdos, por encontrarse estructuralmente ms expuestos a la accin de estos oxidantes suaves, los que se reducen una vez concretada la reaccin. Por esta razn se dice que, a travs de estos reactivos, se verifica el poder reductor de los aldehdos. Las cetonas, como es de esperarse, no dan estas reacciones, pues al encontrarse su grupo carbonilo rodeado de dos radicales alquilo, su oxidacin necesita condiciones enrgicas. Adems realizaremos otro tipo de reaccin de adicin, la de Shiff. (*) Reactivo de Fehling: est compuesto por dos soluciones - Fehling A: solucin de sulfato cprico en agua, - Fehling B: solucin de NaOH y tartrato doble de sodio y potasio (sal de Rochelle) Cuando se mezclan cantidades iguales de estas dos soluciones se forma un complejo soluble de intenso color azul de tartrato de cobre, que es considerado frecuentemente como una solucin de xido de cobre II. Al poner en contacto esta mezcla con un aldehdo y sometindolos al calor por unos minutos, el reactivo se reduce produciendo un ppdo. rojo ladrillo de xido cuproso, y el aldehdo se oxida a cido. Estas reacciones se pueden visualizar en las siguientes ecuaciones: CuSO4
Fehling A

2 Na OH
Fehling B

Na2SO4

Cu (OH)2

complejo con sal de Rochelle (azul intenso)

O
||

O
||

RC | H
aldehdo

Cu (OH)2

RC | OH
cido

CuO
ppdo. rojo ladrillo

Reactivo de Tollens: Este reactivo consiste en una solucin de Ag NO3 a la cual se le ha agregado NH3 hasta la desaparicin del ppdo. pardo formado. Solucin incolora. Cuando se agregan unas gotas de este reactivo a cualquier aldehdo y se calienta la mezcla hasta ebullicin, la solucin se ennegrece y la plata se deposita en las paredes del tubo formando un espejo de plata. Las ecuaciones correspondientes a esta reaccin son:

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AgNO3 O || RC |
aldehdo
H

NH4OH

NH4NO3 O || RC |

Ppdo. pardo

Ag (OH)

2 Ag (OH)

H2O

2 Ag
Espejo de plata

cido

OH

Reactivo de Benedict: Es semejante al de Fehling pero contiene citrato de sodio, en lugar de sal de Rochelle, y carbonato de sodio en lugar de hidrxido de sodio. Reactivo de Shiff: Es una solucin de fucsina bsica (colorante rojo violeta) que ha sido decolorada por una corriente de SO2 (dixido de azufre). Cuando se la pone en contacto con un aldehdo la fucsina recobra su color original, debido a la capacidad de aquellos de adicionar HSO2. Esta reaccin no es exclusiva de los aldehdos. Algunas cetonas la dan con menor intensidad. PARTE EXPERIMENTAL Materiales de laboratorio: - Baln de destilacin de 1 lt. - Ampolla de decantacin - Refrigerante a bolas - Matraz y recipiente adecuado para bao de agua Reactivos: - H2SO4 conc. .................... 12 ml. - Etanol... 50 ml. - K2Cr2O7.... 15 gr. - Agua destilada. 70 ml.

* Preparacin de la mezcla sulfocrmica: Disolver 15 gr. de K2Cr2O7 en 70 ml. de agua, poco a poco, con agitacin. Una vez disuelto todo el dicromato y con la solucin enfriada, aadir con cuidado 12 ml. de cido sulfrico concentrado enfriando en bao de agua si es necesario. Tcnica: - Obtencin de etanal: Se prepara un dispositivo como el de la figura siguiente:

Figura 3: Equipo para la obtencin de etanal

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El baln se tapa con un buen corcho que debe dar paso a la ampolla de decantacin y su tubo de desprendimiento se comunica con el refrigerante. Este conduce a un tubo biselado (que contiene en su parte central una bolita para evitar las reabsorciones) que desemboca en un matraz que se encuentra sumergido en una mezcla frigorfica (hielo, sal y agua). Se colocan 50 ml. de alcohol en el baln, se lo tapa y se le adosa la ampolla de decantacin conteniendo 50 ml. de mezcla sulfocrmica. Se dispone el refrigerante en marcha tranquila, y se rodea el matraz que recibir el etanal con el bao de hielo. El baln debe estar sumergido en un bao de agua a temperatura ambiente. Se deja caer gota a gota la mezcla sulfocrmica en el baln. La reaccin es espontnea y exotrmica. Al cabo de unos minutos, se observa el cambio de color rojo naranja del dicromato, al verde por formacin de sulfato crmico. Si luego de agregada toda la mezcla sulfocrmica se debilita la reaccin, se puede calentar con precaucin el bao de agua del baln. Conviene recordar que el refrigerante debe tener una marcha tranquila y que la temperatura del mismo debe ser inferior a 25 30 C, porque estando a reflujo debe garantizar la condensacin de vapores del etanal. El destilado es una mezcla de etanal, etanol y cido etanoico, en la cual el aldehdo est en mayor proporcin. Ecuaciones:

- Reacciones de diferenciacin:
a) Reaccin de Fehling: a 3 ml. de solucin de Fehling A se le aaden lentamente 3 ml. de Fehling B, hasta que el precipitado azul de hidrxido de cobre (primeramente formado) se haya disuelto y se forme, al agitar, el complejo azul oscuro de ion tartrato. Se aaden 3 gotas del etanal obtenido y la mezcla se hierve a bao mara durante 2 minutos aproximadamente. Se repite el ensayo con formaldehdo y acetona. Observar y anotar los resultados. Tubo 1: Fehling A + Fehling B + etanal Tubo 2: Fehling A + Fehling B + formaldehdo Tubo 3: Fehling A + Fehling B + acetona bao mara Observar

b) Reaccin de Tollens: en un tubo de ensayo limpio se vierte 5 ml. de reactivo de Tollens y se aaden unas gotas de etanal. Calentar el tubo directamente sobre la llama del mechero hasta ebullicin y formacin del espejo de plata en las paredes del tubo. Repetir con formaldehdo y acetona. Observar y anotar los resultados. Tubo 1: Tollens + etanal Tubo 2: Tollens + formaldeh Tubo 3: Tollens + acetona calor directo Observar

c) Reaccin con reactivo de Shiff: a 4 ml. de reactivo de Shiff se aaden unas gotas de solucin diluida de acetaldehdo (etanal). Repetir el ensayo con formaldehdo y acetona observando los resultados en cada caso. ACTIVIDADES INDIVIDUALES PARA EL ALUMNO - Sintetice en un cuadro de doble entrada los resultados del prctico.

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Prctico de Laboratorio N 4

Tema: cidos carboxlicos. Obtencin de cido benzoico


OBJETIVOS Obtener cido benzoico por oxidacin de un alquil-benceno, interpretando cada etapa de la reaccin. Verificar una de las propiedades qumicas de los cidos carboxlicos: Sustitucin nucleoflica de cilo Visualizar la diferencia de la solubilidad entre un cido y sus sales.

FUNDAMENTOS TERICOS Los compuestos que contienen al grupo carboxilo son cidos y se llaman cidos carboxlicos. O || COH
grupo carboxilo (contraccin de carbonilo e hidroxilo)

O || RCOH
cido carboxlico

R COOH
estructura condensada

es uno de los miembros ms importantes de esta serie de compuestos y El cido cetico, ha sido conocido desde la antigedad en forma de vinagre. Muchos de los homlogos del cido actico de formula general Cn H2n+1 COOH pueden obtenerse por hidrlisis de las grasas y, en consecuencia, son conocidos como cidos grasos. El actico no se produce a partir de las grasas sin , tpica embargo se clasifica como un cido graso debido a que tiene la frmula general de tales cidos. Se clasifican de acuerdo con el sustituyente unido al grupo carboxilo. Un cido aliftico tiene un grupo alquilo unido al grupo carboxilo, mientras que un cido aromtico tiene un grupo arilo. El que tiene un protn unido al carboxilo se llama cido frmico.

cido frmico

Un cido carboxlico cede protones, por ruptura heteroltica del enlace O-H, dando un protn y un in carboxilato.

cido propanico (cido aliftico)

cido benzoico (cido aromtico)

Aunque los cidos los cidos

cido carboxlico

carboxlicos no son minerales (ni

in carboxilato

tan fuertes como siquiera como el

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H2CO3), son mucho ms cidos que otros grupos funcionales ya estudiados. Por ejemplo, los alcoholes tienen valores de pka en el rango de 16 a 18. El cido actico (pka=4,74) es unas 1011 veces mas cido que los alcoholes mas cidos. En efecto el cido actico concentrado produce quemaduras graves cuando se pone en contacto con la piel. PROPIEDADES FSICAS Puntos de ebullicin: hierven a temperaturas muy superiores a las de los alcoholes, cetonas y aldehdos de pesos moleculares semejantes. Esto se debe a la formacin de un dmero estable, unido por puentes de hidrgeno, que duplica efectivamente el peso molecular del cido correspondiente.

Dmero del cido

Puntos de fusin: los cidos carboxlicos que contienen ms de ocho tomos de carbono por lo general, son slidos a menos que posean dobles enlaces. Estos (especialmente dobles enlaces cis), en una cadena larga impiden la formacin de una red cristalina estable, lo que ocasiona un punto de fusin mas bajo. Los puntos de fusin de los cidos dicarboxlicos son muy altos. Teniendo dos carboxilos por molcula, las fuerzas de los puentes de hidrgeno son especialmente fuertes y se necesitan temperaturas muy altas para romperlos y fundir el cristal. Solubilidades: estos cidos forman puentes de hidrgeno con el agua, y los de peso molecular mas pequeos (hasta cuatro tomos de carbono) son miscibles en ella. A medida que aumenta la longitud de la cadena carbonada, disminuye la solubilidad en agua y aumenta en alcoholes, con los cuales tambin forman puentes de hidrgeno. SALES DE CIDOS CARBOXLICOS Una base fuerte puede desprotonar y neutralizar completamente un cido carboxlico. Los productos son el in carboxilato, el catin que queda de la base y el agua. La combinacin del in carboxilato con el catin constituye la sal de un cido carboxlico.

cido carboxlico

base fuerte

sal del cido

EJEMPLO

cido actico

acetato de sodio

Como los cidos minerales son ms fuertes que los cidos carboxlicos, la adicin de un cido mineral convierte la sal de uno carboxlico en el cido original.

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Los cidos carboxlicos y sus sales tiene propiedades muy diferentes y, como se interconvierten con facilidad, estas sales son derivados tiles de los cidos. Se puede usar la formacin de sales para identificar y purificar los cidos. Las sales de cidos carboxlicos son slidos inoloros que, por lo general, funden a altas temperaturas, y con frecuencia se descomponen antes de alcanzar sus puntos de fusin. Las sales de metales alcalinos (Li+, Na+, K+) y de amonio son bastante solubles en agua, pero insolubles en solventes orgnicos no polares. El jabn es un ejemplo comn de una sal de cido carboxlico, que consiste en sales de sodio, relativamente solubles, de los cidos grasos de cadena larga. Las sales carboxlicas de la mayor parte de los dems iones metlicos son insolubles en agua. MTODOS DE OBTENCIN Adems de las fuentes naturales, se han visto tres mtodos sintticos de preparacin de cidos carboxlicos: 1) oxidacin de alcoholes y aldedos 2) ruptura oxidativa de alquenos 3) oxidacin de la cadena lateral de un alquilbenceno. Se har hincapi en el tercero, que es el que se emplear en el presente prctico OXIDACIN DE LA CADENA LATERAL DE UN ALQUILBENCENO Un anillo aromtico imparte estabilidad al tomo de carbono ms cercano de sus cadenas laterales. El anillo aromtico y un tomo de carbono de una cadena lateral pueden sobrevivir a una oxidacin vigorosa con permanganato o con cido crmico caliente, para formar una sal del cido benzoico. Como esta oxidacin necesita de condiciones muy fuertes de reaccin, solo sirve para obtener derivados del cido benzoico sin sustituyentes oxidables en el anillo aromtico.

PARTE EXPERIMENTAL Materiales de Laboratorio - Baln de boca ancha de 250 cc. - Refrigerante - Soporte Bunsen - Trpode y tela de amianto - Mechero - Papel de filtro y embudo de vidrio - Embudo Bchner - Kitasato - Pipeta de 5 ml. - Papel de tornasol Tcnica: Obtencin de cido benzoico En un baln de boca ancha de 250 cc. de capacidad, se disuelven 2 g. de permanganato de potasio en 40 ml. de agua, se alcaliniza con 2 ml. de NaOH al 10 % y se aaden 2,5 ml de tolueno (1). Se adapta un refrigerante a reflujo, cuidando que el corcho cierre muy bien el baln, agregar 1 2 pedacitos de piedra pmez (del tamao de una cabeza de alfiler) y se calienta durante 2 hs. (2). Reactivos - Tolueno - K Mn O4 - Agua destilada - Piedra pmez o arena - Sol. De H2SO4 diluida 1:1

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A medida que progresa la reaccin, la solucin se va decolorando (3), si lo hace antes del tiempo indicado, se deja de calentar, se espera que cese el reflujo, se destapa y rpidamente se aade 0,5 gramos ms de permanganato de potasio y se sigue calentando. Es conveniente durante el calentamiento, mantener una suave agitacin de la mezcla, para evitar proyecciones violentas (4). Cumplido el tiempo, se suspende el calentamiento, se deja enfriar un poco y an caliente se filtra por Bchner (5). El lquido filtrado se deja enfriar y se acidifica con 2 ml de H2SO4 dil. 1:1 (6) cerciorndose que el medio quede cido con tornasol; el precipitado de cido benzoico se separa por filtracin y si es necesario se recristaliza en agua caliente.

Figura 4 Equipo para la obtencin de acido benzoico

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ECUACIN FUNDAMENTAL

C6H5CH3 C6H5CH3 2 KMnO4 C6H5CH3

+ + + +

2 KMnO4 3 (O) H2O 2 KMnO4

2 MnO2 C6H5COOH 2 MnO2 2 MnO2 2 MnO2

+ + + + + MnO2 C6H5COO-

C6H5COOK H2O 2 KOH C6H5COOH C6H5COOK + + +

KOH + H2O

+ + +

3 (O) 2 KOH KOH + H2O

(MnO

+ + +

2 H+ 2 OH2 MnO-4

3 e-

2 OH- ) X 2 5 H+ + 6 e2 MnO2 + H+ H2O + 2 OH+ OH-

C6H5CH3 C6H5CH3

C6H5COO-

CUESTIONARIO PARA EL ALUMNO 1) Por qu la oxidacin se hace en medio alcalino? 2) Por qu se calienta a reflujo? 3) Para qu se calienta? 4) Por qu se agita? 5) a) Por qu es conveniente filtrar an en caliente? b) Qu productos quedan retenidos en el filtro y cules pasan con el lquido? 6) Por qu acidifica en fro y con cido diluido? 7) Calcular el rendimiento obtenido de cido benzoico teniendo en cuenta que la densidad del tolueno es 0,866 grs/ml.

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EJERCICIOS 1) Escriba los nombres de los siguientes grupos qumicos: a) CH3 CH2 b) CH3 | CH3 C CH2 | H CH3 | CH3 C | CH3 h) CH2 O | e) c) CH3 | CH3 C CH2 CH2 | H f)

d) CH3 CH3 g)

CH

i) H2C = CH

j) H2C CH = CH2

k) C CH

O || CH3 C

l)

2) Efectos orientadores de los sustituyentes en el anillo bencnico para la sustitucin electroflica. Clasifique los grupos sustituyentes. COOH | CH3 | | H | | C1 | |

NO2 |

NH2 |

3) Escriba la estructura correcta de los siguientes compuestos: a) c. 3- clorobutanoico e) c. 3- fenil propanoico b) c. hexanoico f) c. Cis- 2 pentenoico g) c. cloro- -Bromo propinico c) c. - metoxivalrico d) c. ciclopentano carboxlico h) c. 3 bencil butanoico

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4) D los nombres de IUPAC y comunes de los siguientes compuestos:

CH3 | CH3 CH2 CH CH2 COOH

CH3 (CH2)8 COOH

(CH3) 3COOH

COOH

Cl - CH2 COOH OH | CH3 CH2 C COOH | H OCH3 | CH3 C CH2 COOH | H

5) Escribir las frmulas estructurales de todos los cidos pentanoicos (valerinicos) ismeros. Nombrar por IUPAC.

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Prctico de Laboratorio N 5

Tema: Hidratos de carbono


OBJETIVOS Identificar glcidos en general. Diferenciar los distintos tipos de monosacridos entre s: pentosas de hexosas; y aldosas de cetosas.

FUNDAMENTOS TERICOS Los hidratos de carbono, sacridos o glcidos se definen sencillamente como polihidroxialdehdos polihidroxicetonas y las sustancias que los den por hidrlisis. Muchos poseen la frmula emprica (CH2O)n que daba a entender, en un comienzo, que se trataba de hidratos de carbono. Aunque existan otros compuestos que sin serlo, tambin respondan a la misma frmula. Los hidratos de carbono (carbohidratos), pueden clasificarse en: Monosacridos: tambin llamados azcares sencillos, estn constituidos por una sola unidad de polihidroxialdehdo o polihidroxicetona, en el primer caso se llaman aldosas y en el segundo, cetosas. El monosacrido mas abundante en la naturaleza es la D- glucosa, que tiene 6 tomos de carbono; de este se originan muchos otros carbohidratos. La D- glucosa es el combustible principal para la mayor parte de los organismos y es tambin la unidad estructural bsica de los polisacridos ms abundantes, tales como el almidn y la celulosa. Oligosacridos: (del griego pocos), contienen de 2 a 10 unidades de monosacridos unidas mediante enlaces glicosdicos. Polisacridos: contienen muchas unidades de monosacridos enlazados, formando cadenas lineales o ramificadas. Estos desempean dos funciones biolgicas principales: - almacenadotes de combustible (almidn) - elementos estructurales (celulosa) En la biosfera hay, probablemente ms cantidad de glcidos que de toda la dems materia orgnica junta, y esto se debe en gran parte, a la abundancia de dos polmeros de la D- glucosa: el almidn y la celulosa. El almidn es la principal forma de almacenamiento de combustible en la mayor parte de los vegetales, mientras que la celulosa es el componente extracelular fundamental de las paredes celulares rgidas y de los tejidos fibrosos y leosos de los mismos. El glucgeno, que se parece al almidn en su estructura, es el principal glcido de reserva en los animales. Otros polisacridos son los componentes principales de las paredes celulares de las bacterias. *Enlace glicosdico: es la unin entre dos o mas monosas (unidades de monosacridos) por medio de un oxgeno. De acuerdo a la posicin en que se produzcan los enlaces, las sustancias sern: - reductoras: si el enlace deja libre un grupo carbonilo potencial. Ej.: maltosa, glucosa, etc. - no reductoras: si los grupos carbonilo han sido empleados en enlace glicosdico; por lo tanto no quedan libres. Ej.: sacarosa, rafinosa, etc.

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PARTE EXPERIMENTAL Materiales de Laboratorio: - 5 tubos de ensayo por grupo - gradilla - pipeta para cada reactivo - vaso de precipitado (bao mara) - mechero Bunsen - Tela de amianto Reactivos necesarios: - solucin alcohlica de - naftol al 15% - solucin alcohlica de timol al 15% - HCl concentrado - reactivo de Bial: HCl, orcina, sol. de FeCl3 - react. de Seliwanoff: sol. de HCl 12%, resorcina - reactivo de Fehling - reactivo de Tollens - soluciones de: glucosa, arabinosa, fructosa, sacarosa, ribosa, maltosa.

Tcnica: A Reacciones generales de los glcidos: estas permiten su identificacin. Entre ellas aplicaremos las siguientes: - Reaccin de Molisch: a una solucin de un glcido cualquiera se le adicionan unas gotas de soluc. alcohlica de - naftol y agitar el tubo. Luego, inclinndolo, hacer resbalar por las paredes 10 o 20 gotas de cido sulfrico conc., evitando la agitacin, de manera que se formen dos capas de lquido. En el punto de contacto entre ambas aparecer un color violceo. Si se usa timol, la coloracin ser roja. La reaccin se debe a que el cido sulfrico forma por deshidratacin del glcido, un compuesto furfrico que al condensarse con los compuestos fenlicos ( - naftol o timol), produce una coloracin variable segn la naturaleza de los mismos. Esta reaccin sirve incluso, para identificar glcidos combinados con otras sustancias. B Reacciones de diferenciacin de glcidos: estas permiten individualizar los distintos tipos de glcidos. Entre ellas: - Reaccin de Fehling: diferenciacin de glcidos reductores y no reductores: en un tubo de ensayo se unen las soluciones de Fehling A y B (coloracin azul intenso), luego se agregan unas gotas de solucin de un glcido. Repetir para otros glcidos y calentar a bao mara si es necesario. - Reaccin de Tollens: tambin para diferenciacin de glcidos reductores y no reductores: se produce igual que en el caso de aldehdos y cetonas. (Trabajo prctico N..3.) - Reaccin de Bial: caracterizacin de pentosas. El reactivo de Bial es una solucin clorhdrica de orcina, en presencia de algunas gotas de solucin de cloruro frrico. Calentando una solucin de pentosa con este reactivo, durante 5 minutos en bao mara a 40 50 C, produce una coloracin verde brillante. Es especfica de las pentosas, pues estas forman, por accin del cido clorhdrico, furfural que condensa con la orcina. El producto formado, en presencia de sal frrica toma color verde. La sensibilidad de la reaccin disminuye mucho si se encuentra presente simultneamente una hexosa. - Reaccin de Seliwanoff: diferenciacin entre aldosas y cetosas. El reactivo de Seliwanoff consiste en una solucin de resorcina en cido clorhdrico concentrado. Al calentar una solucin de cetosa con este reactivo, se produce una coloracin roja. El derivado furfrico formado se condensa con resorcina, determinando la reaccin. Los oligosacridos y polisacridos que contienen fructosa dan una reaccin positiva. Las aldosas no dan la reaccin porque producen derivados furfricos con muy pequeo rendimiento y en condiciones ms severas que las cetosas. Se toman tres tubos de ensayo. En uno se coloca solucin de glucosa, en otro de fructosa y en el tercero una solucin de glcido a analizar. Agregar a cada tubo 1 ml. de reactivo de Seliwanoff y llevar los tres tubos a bao mara hirviendo durante 20 a 30 segundos. Observar lo que sucede y determinar si el tercer tubo contena una aldosa o una cetosa.

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ACTIVIDADES INDIVIDUALES PARA EL ALUMNO Completar el siguiente cuandro marcando con una cruz la caracteristica que corresponda a cada tipo de glcido

Glcido sacarosa almidn arabinosa xilosa celulosa glucosa maltosa rafinosa ribosa lactosa fructosa xilano

Tipo de Hidrato de Carbono Monosac. Oligosac. Polisac.

Reductor

No Reductor

Reacciones caractersticas

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Trabajo de Laboratorio N 6

Tema: Extraccin y caracterizacin de Hidratos de carbono en Mistol


OBJETIVOS Aplicar las reacciones qumicas de identificacin y diferenciacin de los hidratos de carbono en un producto de origen natural. Caracterizar los hidratos de carbono presentes en los frutos de la especie Zizyphus mistol.

FUNDAMENTOS TERICOS El mistol es un rbol muy ramificado y espinoso perteneciente a la familia de las Ramnceas, que se encuentra distribuido en el centro y norte de la Argentina. Su madera tiene diversos usos y sus frutos (drupceos) comestibles son tiles en la elaboracin de dulces y bebidas. La importancia de esta especie radica en que no slo produce madera, sino que tambin sirve para alimentacin humana, cuyos beneficios nutricionales estn en estudio. El uso integral del mistol concuerda con lo que indica el Programa Forestal de la FAO, el que manifiesta que se deben utilizar rboles, bosque y recursos que produzcan, para mejorar las condiciones econmicas de la poblacin, garantizando al mismo tiempo, la supervivencia del recurso para poder hacer frente a las necesidades de las futuras generaciones. PARTE EXPERIMENTAL Materiales (por grupo): Reactivos necesarios: - 1 vaso de ppdo. de 150 a 200 ml. - acetona - 1 erlenmeyer - reactivo de Fehling - 1 embudo y papel de filtro - reactivo de Seliwanoff - trpode, tela de amianto y mechero - reactivo de Bial - 1 gradilla con 5 tubos de ensayo - 1 pipeta y 1 varilla de vidrio - 4 pipetas de 10 ml. c/u (en comn para los grupos), una para cada reactivo Tcnica: 1 - Desmenuzar el fruto y colocarlo en un vaso de ppdo. con H2O. 2 - Calentar, agitando continuamente, durante por lo menos media hora. 3 - Filtrar la mezcla caliente. 4 - Colocar 5 ml. de filtrado en un tubo de ensayo y agregarle 1 ml. de acetona. 5 - En otro tubo de ensayo preparar el reactivo de Fehling con 1 ml. de cada uno de los reactivos y aadirle 1 ml. de muestra y observar la reaccin. La muestra contiene sustancias reductoras o no reductoras? 6 - En un tercer tubo de ensayos hacer Seliwanoff y observando la reaccin analizar si hay presencia de aldosas o cetosas. 7 - Por ltimo, experimentar la reaccin de Bial y comprobar si en la muestra se encuentran pentosas o hexosas.

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Terico Prctico N 1

Tema: Cromatografa

Responda, luego de investigar en la bibliografa sugerida. 1- Cmo podra definir a la tcnica analtica denominada cromatografa? 2- Enuncie el principio o fundamento general que rige el desarrollo de las tcnicas cromatogrficas. 3- Cmo puede clasificar las distintas tcnicas cromatogrficas de acuerdo al tipo de elementos o material en el que se llevan a cabo? 4- Segn su estado fsico, cmo puede ser la fase mvil? Y la fase estacionaria? 5- Diga como puede clasificar las distintas tcnicas cromatogrficas, en base a los diferentes mecanismos de separacin por el cual se desarrollan. Explique cada una de ellas. 6- Defina el coeficiente Rf, diga en que tipo de cromatografa se aplica y para qu sirve. 7- Cul es el mecanismo de separacin que rige la cromatografa en papel?

Para responder el temario precedente, puede consultar la siguiente Bibliografa, disponible en la Ctedra y en la Biblioteca Central de la UNSE:
Bioqumica: Bohinski. Quinta Edicin. Edit. Addison Wesley Iberoamericana. 1991 Bioqumica: L. Stryer. Tercera Edicin. Edit. Reserte S.A. Bioqumica General: Torres Carminatti, Cardini. Edit. El Ateneo. 1983 Bioqumica: Metzler. Edit. Omega S.A. 1981 Bioqumica: Lehninger. Segunda Edicin. Edit. Omega S.A. Bioqumica Molecular de la clula: Alberts, Bray y otros. Segunda Edicion. Ediciones Omega S.A. 1992

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Prctico de Laboratorio N 7

Tema: Cromatografa de aminocidos en papel


OBJETIVOS Conocer las distintas tcnicas cromatogrficas y diferenciar los distintos fenmenos a travs de los cuales se efectan las separaciones en dichas tcnicas. Realizar la separacin cromatogrfica de una mezcla de aminocidos desconocidos.

FUNDAMENTOS TERICOS A DEFINICIN La cromatografa puede definirse como la tcnica de separacin, identificacin y cuantificacin de los componentes de una mezcla de solutos, basndose esta separacin en la diferente velocidad con que se mueve cada uno de los solutos a travs de un medio poroso (soporte inerte), arrastrado por un disolvente en movimiento (fase mvil). Soporte inerte: sustancia slida que no interacta con ninguna fase, ni con los solutos. Su funcin es la de sostener la fase estacionaria. Fase estacionaria: sustancia lquida o slida con la cual interactan los distintos solutos, de acuerdo a una serie de fenmenos fsicos y qumicos que permiten la separacin de estos solutos. Fase mvil: es un disolvente (inmiscible en la fase estacionaria), que contiene la mezcla que se va a separar. B INTERACCIONES Las interacciones principales que ocurren entre la muestra, la fase estacionaria y la fase mvil son: - Adsorcin: por existencia de efectos superficiales de polaridad de la fase estacionaria respecto a los solutos. - Intercambio inico, con interacciones de tipo cido-base. - Solubilizaciin o particin en los disolventes estacionario o mvil. - Reactividad, entre grupos qumicos funcionales especficos. - Tamizado y exclusin debido a los tamaos y formas moleculares. C CLASIFICACIN De acuerdo al tipo de tcnica: en papel: en la que las separaciones se llevan a cabo (principalmente por reparto) sobre tiras de papel. en columna: en la que la mezcla de sustancias a separar sufren interacciones de polaridad con el slido adsorvente en capa fina: en la cual los fenmenos de adsorcin son predominantes sobre los efectos posibles de reparto. De acuerdo al tipo de interaccin entre fase mvil y fase estacionaria: Cromatografa de adsorcin a) en columna b) en capa fina

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Cromatografa de intercambio inico Cromatografa de afinidad Cromatografa de filtracin en gel Cromatografa de reparto D CROMATOGRAFA DE REPARTO Como su nombre lo indica, est basada en la separacin de una mezcla de sustancias mediante el reparto existente entre la fase mvil y la fase estacionaria soportada sobre un slido adecuado. El disolvente puede ser lquido (cromatografa lquido lquido) o un gas (cromatografa gas lquido). En la autntica cromatografa de reparto, el nico factor que influye en el movimiento de un compuesto a lo largo del papel es la solubilidad relativa de este en la fase mvil y estacionaria. Las sustancias que son solubles slo en el disolvente emigran a la misma velocidad que la parte frontal de ste, mientras que las que son solamente solubles en agua permanecern en el origen de la cromatografa. Uno de los mas importantes aspectos de la cromatografa es que, en un sistema cromatogrfico dado, el movimiento de relativo de las sustancias respecto al disolvente es constante y caracterstico de cada uno. E CROMATOGRAFA EN PAPEL Es una de las tcnicas cromatogrficas ms simples y de las ms antiguas. Las muestra se aplican sobre papel cromatogrfico (Whatman N 1) en forma de solucin. Para esto, los slidos se disuelven en una pequea cantidad de disolvente adecuado. DESARROLLO: una vez secas las manchas sobre el papel, se procede a efectuar el desarrollo, nombre que se da al proceso en el que un disolvente fluye a travs del papel, produciendo la separacin. El desarrollo se puede llevar a cabo permitiendo que el disolvente suba por el papel (tcnica ascendente) o que descienda por l (tcnica descendente) a) Tcnica descendente: el disolvente que ha de fluir se pone en un depsito que est colocado en la cubeta cromatogrfica. En el fondo de la cubeta se pone tambin disolvente para asegurar que la atmsfera interior est saturada de vapor. El papel se suspende en el disolvente y se tapa hermticamente la cubeta. b) Tcnica ascendente: el disolvente se coloca en el fondo de la cubeta y el papel se suspende en la parte superior. SECADO DE PAPEL: cuando el disolvente ha recorrido la distancia requerida, se saca el papel y se seca. REVELADO: cuando se realiza la separacin, interesa, naturalmente, localizar la posicin de la sustancia en el papel. Si las sustancias son coloreadas no presenta dificultad, pero muchos compuestos son incoloros y en este caso se puede hacer unos de varios mtodos. Los mtodos fsicos, como fluorescencia y radiactividad tienen aplicacin muy limitada. El mtodo mas generalmente usado es el de hacer reaccionar a las sustancias a revelar con algn agente qumico con el que forman algn compuesto coloreado. PARTE EXPERIMENTAL Materiales: - matraces aforados - tubos de ensayo (3 por grupo) - pipetas de 5ml. - 2 cubas cromatogrficas de vidrio con tapa - micropipetas - papel Whatman N 1 N 4 Reactivos: - muestra: solucin de aminocidos al 0,1% - solvente: n-butanol, cido Actico glacial, H2O (6:1:2) - revelador: solucin ninhidrina
TCNICAS:

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Preparacin del cromatograma: Para el cromatograma se usa papel de filtro, al que se maneja por los bordes. Con un lpiz se traza una lnea recta a 1,5 cm. del borde. Esta lnea representa la lnea de base o punto de partida del cromatograma. Dibuje puntos de siembra en la lnea de base y en cada uno de ellos con una micropipeta coloque una gotita de la solucin de cada aminocido. Se deja secar y se repite dos o tres veces la misma operacin. Se puede ayudar usando secador de cabello. La tira se suspende verticalmente en la cmara cromatogrfica que es un recipiente que contiene el solvente y est vestida con un papel de filtro humedecido con el solvente y saturado de vapores. Se tapa y se deja correr hasta que el frente del solvente alcance una altura distante a 2 cm. del borde superior del papel. Luego se saca el papel de la cmara y se lo deja secar a temperatura ambiente. Cuando el papel est seco, se roca el cromatograma con el reactivo de ninhidrina que se usa para revelar las manchas. Se deja secar de nuevo y se pone el cromatograma en la estufa a 80 C durante 5 min. Se produce una reaccin de descarboxilacin oxidativa por calentamiento, entre el aminocido y la ninhidrina, seguida por una condensacin de la hidrindamina formada con una segunda molcula de ninhidrina. El aminocido es oxidado a un aldehdo que contiene un tomo de carbono menos. En los lugares a donde haya aminocidos, el papel tomar color prpura. Figura 5: Esquema del Trabajo Prctico 1. Preparacin del papel de filtro
a) Se dibuja la lnea de siembra a 1.5 cm. del borde inferior

b) Se dibuja sobre la lnea los puntos de siembra.

2. Siembra de los aminocidos

3. Preparacin de la cuba cromatogrfica

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Prctico de Laboratorio N 8

Tema: Protenas

OBJETIVOS Conocer la composicin qumica de una protena. Identificar y diferenciar los distintos niveles de la estructura proteica. Realizar e interpretar algunas reacciones de coloracin que ponen en evidencia la presencia de enlaces peptdicos y de ciertos grupos atmicos que permiten estimar la composicin aminoacdica de la protena en cuestin. Efectuar reacciones de precipitacin y coagulacin y, explicar estos fenmenos desde la ptica de la conformacin espacial proteica.

FUNDAMENTOS TEORICOS DEFINICIN Todas las protenas son polmeros compuestos de aminocidos, monmeros que se unen sucesivamente entre s a travs de enlaces peptdicos. Una sustancia compuesta de aminocidos as unidos se conoce como polipptido, o simplemente pptido. Cuando un polipptido est compuesto por 50 o ms unidades de aminocidos se coloca en la categora de protena. Por lo tanto, bsicamente las protenas estn constituidas elementalmente por C, H, O y N lo que les vali la denominacin de sustancias cuaternarias. La proporcin cuantitativa en que se encuentran estos elementos es: Carbono.55% Oxigeno.20 24% Nitrgeno..16 20% Hidrogeno..7% Algunas contienen tambin otros elementos como S, P, I, Fe.

Clasificacin de acuerdo a:

La funcin catalticas estructurales respiratorias hormonales de almacenamiento etc.

La composicin qumica - protenas conjugadas - protenas no conjugadas

La estructura tridimensional - fibrosas - globulares

1- Funcional: Segn este criterio se clasifican en: catalticas (enzimas), estructurales (colgeno), respiratorias (citocromos), hormonales (regulan las actividades celulares), de almacenamiento (utilizadas como energa nutricional y de almacenamiento de aminocidos, especialmente en las semillas vegetales, etc.) 2- Composicin qumica: de acuerdo a ella existen dos categoras generales: a) protenas conjugadas: son las que constan de un grupo no peptdico orgnico o inorgnico llamado grupo prosttico, en asociacin con el material polipeptdico.

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De acuerdo a la naturaleza del grupo prosttico se identifican las siguientes subclases: - glicoprotenas (carbohidratos) - metaloprotenas (un ion metlico) - fosfoprotenas (un fosfato) - lipoprotenas (un lpido) b) protenas no conjugadas: son aquellas que carecen de grupo prosttico. 3- Estructura tridimensional total: segn la conformacin de la o las cadenas polipeptdicas las protenas pueden ser: a) fibrosas: sus molculas tienen una forma muy alargada, semejante a un hilo. Tienen a menudo pesos moleculares muy elevados y muchas estn compuestas de dos o ms cadenas polipeptdicas, siendo por lo general insolubles en agua. b) globulares: tienen una estructura mucho mas compacta debido a una serie de pliegues y torsiones muy ordenados a lo largo de la cadena polipeptdica. Su forma vara desde una esfera casi perfecta, hasta una elipse. Algunas pueden contar con una o varias cadenas diferentes. Son mucho ms solubles en agua que las fibrosas. Todas las enzimas son protenas globulares.

Estructura

Primaria
Se refiere caractersticas aminocidos constituyentes a de las los

Secundaria
Tipo de orientacin en el espacio de una cadena polipeptdica.

Terciaria
Determina que una protena sea fibrosa o globular.

Cuaternaria
Se refiere a las protenas que existen como agregados de dos o ms cadenas polipeptdicas.

En al mayora de las protenas es posible identificar cuatro tipos o niveles de estructura. 1- Estructura primaria: se refiere a la identidad de los aminocidos que la constituyen, la cantidad relativa de cada uno de ellos y la secuencia de los mismos en la/s cadena/s polipeptdica/s. La identidad y cantidad de cualquier grupo prosttico, si es que lo hay, se incluye en este nivel estructural. 2- Estructura secundaria: el tipo particular de orientacin adquirida en el espacio por la cadena polipeptdica es el resultado de la posibilidad de rotacin libre alrededor de los enlaces simples de la cadena que comprenden a los tomos de carbono , implicados en el enlace peptdico. Como consecuencia de ello es posible encontrar tres tipos principales de orientacin de las cadenas polipeptdicas de existencia natural: a) helicoidal b) laminar c) al azar. 3- Estructura terciaria: es la que determina que una protena sea fibrosa o globular. En las protenas fibrosas las cadenas polipeptdicas se encuentran enteramente en una conformacin laminar o helicoidal, originando una estructura superenrollada, la cual es estabilizada por gran cantidad de enlaces hidrgeno intercadenas, adems de algn enlace cruzado covalente. As la estructura es rgida e inflexible. En las protenas globulares, el mantenimientote de los masivos pliegues, giros y torsiones depende de diversos tipos de fuerzas estabilizadoras encontrndose, por lo general, los siguientes tipos de interacciones no covalentes: a) fuerzas de atraccin ion ion b) enlaces de H entre uniones no peptdicas c) enlaces de H entre enlaces peptdicos d) interacciones hidrofbicas e) interaccin con el grupo prosttico.

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4- Estructura cuaternaria: este nivel de estructura se refiere a las protenas que existen como agregados de dos o ms cadenas polipeptdicas unidas entre s slo por fuerzas de atraccin no covalente. Las protenas de este tipo se conocen como oligmeros, siendo los mas comunes dmeros, trmeros y tetrmeros. Si las cadenas son idnticas se denominan oligmeros homogneos, y si son diferentes, oligmeros heterogneos. Los tipos de interacciones estabilizadoras de estos agregados son enlaces electrostticos y enlaces de hidrgeno entre cadenas laterales ( R ), localizadas cerca de la superficie de cada monmero. PARTE EXPERIMENTAL Reactivos necesarios: Alc. Etlico de 96 HCl H2SO4 Sol. Saturada de (NH4)2SO4 Sol. de c. Tricloroactico (10 20%) Sol. de dicloruro de mercurio acetato de plomo HNO3 conc.; sol. de NaOH NaOH al 4% y CuSO4 al 1% Reactivo de Molisch Reactivo de Millon Sol. De albmina de huevo Materiales de laboratorio: - Gradilla con 3 o 4 tubos de ensayo - 5 pipetas de 5 o 10 ml. - 1 vaso de precipitado de 200 ml. - Mechero, trpode y tela de amianto - Papel de filtro y embudo

Tcnica: 1) Accin del calor: diluir una parte de suero de clara de huevo en 10 partes de agua y hervir durante unos minutos. Luego de ello, dejar enfriar y tratar de redisolver el cogulo formado con exceso de agua. 2) Accin del alcohol: colocar en un tubo de ensayo 10 ml. de alcohol etlico de 96, aadir una gota de HCl y luego un poco de la sol. de la protena. Observar los resultados. 3) Precipitacin por sales neutras: a 3 ml. De suero aadir el mismo volumen de sol. saturada de sulfato de amonio. Filtrar el precipitado obtenido para utilizarlo luego en alguna de las reacciones de coloracin. 4) Precipitacin por los cidos: adicionar a unos 3 ml. de la solucin proteica algunas gotas de solucin reciente de c. Tricloroactico al 20%. Al precipitado obtenido tratar de redisolverlo en agua. 5) Accin de las sales de metales pesados: agregar gota a gota, solucin de acetato de plomo o Cl2Hg a 3 ml. Del suero proteico. Tratar de redisolver el precipitado obtenido. 6) Reacciones de coloracin: Xantoproteica: en un tubo de ensayo, colocar 3 ml. de suero proteico y verter 1 ml. de HNO3 conc. Al precipitado blanco formado hervirlo durante 1 minuto y observar lo que sucede. Finalmente alcalinizar con NH3 o sol. de NaOH. de Biuret: a 3 ml de la solucin proteica aadir 1 cc de solucin de NaOH al 40% y despus incorporar una gota de CuSO4 al 1%. de Molisch: poner en un tubo de ensayo 5 ml de solucin diluida de protena y adicionar 3 a 4 gotas de solucin alcohlica de -naftol (reactivo de Molisch). Agitar y luego verter por las paredes, tratando que no se mezclen, 2 ml de H2SO4 conc. Observar lo que sucede en la interfase. de Million: calentar la protena con el reactivo de Million (solucin de nitrato y nitrito de mercurio en una mezcla de HNO3 y HNO2). Observar la reaccin.

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ACTIVIDADES INDIVIDUALES PARA EL ALUMNO 1) Explique claramente la diferencia entre los fenmenos de precipitacin y coagulacin de las protenas, en base a la estructura molecular de ellas. Cul de los dos es reversible? 2) D los fundamentos de la accin de los distintos reactivos ensayados sobre el estado fsico de las sustancias proteicas. 3) Indique el motivo de la aparicin de los distintos colores observados con los reactivos utilizados para tal fin. 4) Realice representaciones grficas sencillas de cada uno de los cuatro niveles estructurales.

GRFICOS

Figura 6: Estructura terciaria de lmina plegada de una protena fibrosa. (Protena de la seda)

Figura 7: Estructura cuaternaria de protena tetramrica (hemoglobina)

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Figura 8: Estructura terciaria de hlice de protena fibrosa. a) modelo espacial con todos los enlaces. b) esqueleto de la -hlice

Figura 9: Estructura terciaria de una protena globular. a) Representacin en forma esquemtica de las fuerzas estabilizadoras. b) Representacin espacial de una protena globular (enzima de la levadura).

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Prctico de Laboratorio N 9

Tema: Enzimas
OBJETIVOS Visualizar y explicar la accin de diversas enzimas: catalasa y deshidrogenasa en papa, y polifenol-oxidasa en manzanas y pepinos. Verificar el efecto de la temperatura sobre la actividad de las enzimas mencionadas. FUNDAMENTOS TERICOS A DEFINICIN Las enzimas son catalizadores biolgicos de naturaleza proteica. Por lo tanto su funcin es aumentar la velocidad de la reaccin disminuyendo la energa de activacin de la misma. B ESTRUCTURA Todas las enzimas son protenas globulares, cada una con una funcin especifica debida a su estructura caracterstica. Sin embargo la actividad ptima de muchas enzimas (no de todas) depende de la presencia en su molcula de sustancias no proteicas llamadas cofactores.
Covalente o no covalente Protena Protena cofactor Holoenzima: Forma Activa
Apoenzima: inactiva o Menos activa iones simples e inorgnicos Coenzimas: molcs. orgs. de diversa naturaleza

Cofactor

Hay un lugar particular en la topografa molecular de la enzima que es donde se lleva a cabo, efectivamente la reaccin entre la enzima y la sustancia sobre la cual esta acta (sustrato S). Este lugar se denomina sitio activo, que es un conjunto de unos pocos grupos R (y posiblemente un cofactor) de aminocidos, ordenados espacialmente de una manera muy especfica. Este sitio activo es el que le confiere a la molcula de enzima la capacidad de unir y orientar las molculas de sustrato en un mismo lugar del espacio, de manera de maximizar la probabilidad de una reaccin positiva. C CARACTERSTICAS Las enzimas tienen tres propiedades bien definidas e inigualables que las hacen mucho ms efectivas que los catalizadores no biolgicos: 1) Eficiencia: en cantidades micromoleculares aceleran la velocidad de la reaccin en millones de veces. Esta caracterstica esta representada por la actividad molecular (o nmero de recambio) de la enzima, que se define como los moles de sustrato transformados por mol de enzima y por unidad de tiempo (min. seg.). Adems por los trminos unidad enzimtica (U.I): n de moles, miliomoles o micromoles de S transformados por min., y la actividad especifica que es el n de unidades enzimticas por mg. de protena (mide el grado de pureza de una enzima). 2) Especificad: puesto que son capaces de distinguir entre sustratos estrechamente relacionados. Puede ser absoluta cuando acta sobre un determinado S (sustrato) para dar un solo producto. Adems algunas poseen estereoespecificidad. 3) Regulacin: son capaces de cambiar de un estado de baja actividad a otro de alta actividad.

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MECANISMO DE ACCIN ENZIMTICO Aun cuando el mecanismo de accin es nico para cada enzima, todas operan en general de la misma manera. La primera clave en cuanto al comportamiento enzimtico lo aportaron V. Henri (1903) y posteriormente L. Michaelis y Menten propusieron bsicamente el mismo modelo, pero los ltimos basaron el suyo en datos recogidos a partir de experimentos cuidadosamente diseados. El modelo de Henri- Michaelis- Menten sobre la accin enzimtica es aun el fundamento de la cintica enzimtica. Ellos propusieron que la enzima E poda combinarse reversiblemente con el sustrato S para formar en complejo intermediario, ES, entre la enzima y el sustrato, que luego puede descomponerse dando productos (s) P y la enzima libre en su forma original. E + S ES P + E

La validez de este modelo se estableci mediante la derivacin de una ecuacin matemtica compatible con los datos experimentales, que se conoce como ecuacin cintica de MichaelisMenten: Vo = V max [S] / (Km + [S]) Vo: velocidad inicial de la reaccin medida inmediatamente despus que la reaccin comienza. Vmax: velocidad mxima es una expresin de la eficiencia del funcionamiento enzimtico, y dicha eficiencia es representada por el nmero de recambio, la unidad enzimtica y la actividad especifica de la enzima. Km: representa la cantidad de S requerido para unirse con la mitad de la enzima disponible, produciendo la mitad de la velocidad mxima. Tiene unidades de concentracin y se conoce como constante de Michaelis- Menten (de ah la m) E GRFICOS DE LA ECUACIN DE MICHAELIS- MENTEN
Figura 10: Efecto de la [E] y de [S] sobre la actividad enzimtica

Vo Actividad Enzimtica Actividad Enzimtica

Vo Vmax

Vmax

Efecto de la concentracin de enzimas

[E]

Km

Efecto de la concentracin del sustrato

FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD CATALTICA DE LAS ENZIMAS

El estudio de los factores que afectan la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas corresponde a la cintica enzimtica.

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La concentracin de la enzima FACTORES La concentracin de ligandos (sustrato, productos, cofactores, inhibridores y activadores) El pH La fuerza inica La temperatura A los fines del presente prctico, concentraremos nuestra atencin en el ltimo de los factores mencionados. Efecto de la temperatura: la mayora de las reacciones qumicas proceden a mayor velocidad a medida que aumenta, a temperatura. Un incremento de la temperatura imparte mayor energa cintica a las molculas reaccionantes, dando lugar a un mayor numero de colisiones productivas por unidad de tiempo. Las reacciones catalizadas por enzimas se comportan de forma similar hasta cierto punto. La actividad cataltica de una enzima depende de su estructura terciaria altamente organizada y compleja, la cual es mantenida por un gran numero de uniones no covalentes dbiles (por Ej. puente de hidrogeno). Si la molcula absorbe demasiada energa, por ejemplo en forma de calor, la estructura terciaria puede romperse y la enzima se desnaturaliza perdiendo su actividad. Por esto, a medida que la temperatura aumenta, el esperado incremento de velocidad que resultara de un mayor nmero de colisiones por unidad de tiempo, es frenado por la desnaturalizacin de la enzima. Si se grafica la velocidad en funcin de la temperatura se observa un pico que se toma como temperatura optima

para la actividad de la enzima.

Figura N 11: Variacin de la actividad enzimtica en funcin de la temperatura


100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 10 20 30 40 50 60

actividad %

Temperatura

PARTE EXPERIMENTAL Materiales requeridos (por grupos): - 2 tubos de ensayo - probeta de 50 ml. - 2 vasos de ppdo. de 100 ml. - mechero con trpode y tela de amianto - manguera y tapn perforado con tubo en ngulo recto - 1 papa
1- CATALASA

Reactivos: - H2O2 de 20 vol.

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Procedimiento

Adems de visualizar la produccin de burbujas, que indican la gran actividad de la catalasa, colectar el gas desprendido por desplazamiento de agua en una probeta graduada invertida, como se muestra en la Fig 12.

Hacer un rallado de papa cruda, despus de pelarla y colocarla en un tubo de ensayo en el cual se agregan unas gotas de H2 O2 de 20 vol. y observar. Hervir un trozo de papa durante 5 minutos, dejarlo enfriar. Se obtiene un raspado que se coloca en un segundo tubo. Agregar el H2 O2 en igual cantidad que en el anterior y observar.

Figura 12: Dispositivo para actividad de catalasa

2- DESHIDROGENASA Materiales requeridos (por grupo) - 2 tubos de ensayo chicos - vaso de ppdo. de 100 ml. - mechero con trpode y tela de amianto - cuchillo, pinzas y papel aluminio - 1 papa - lpiz de cera o etiquetas

Reactivos: - Sol. de azl de metileno al 0,025 %

Procedimiento Pelar una papa y cortar varios palitos finos iguales; colocar la mitad de ellos en un tubo de ensayo y cubrir con sol. De cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolo al 5%. Envolver con papel aluminio para darle oscuridad, dejarlo unos 15 min. Al cabo de los cuales observar el desarrollo de color rojo al reducirse el compuesto. Hervir durante 5 min. Los restantes trozos de papa en un vaso con agua, despus de los cual proceder a tratarlos igual que a los otros. Una alternativa es usar sol. De azul de metileno al 0,025% como indicador; en este caso el tubo debe quedar totalmente lleno (sin aire) y tapado por 24 hs. Al cabo de las cules se los saca y se los deja al aire para observar cambio de color. 3- POLIFENOL-OXIDASA Materiales por grupo: - Gradilla con 4 tubos de ensayo - Cpsula de Petri - Vaso de precipitado de 100ml. - Manzana var. deliciosa (o papa) - Pepino (o rbano) - 2 pipetas de 10 ml - Mechero, trpode y tela - Lpiz de cera o etiquetas Reactivos: - sol. de guayacol al 3% - sol de bisulfito de Na al 1%

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Procedimientos Cortar tiras delgadas de manzana y papa que sean de igual tamao (raspar un poco los bordes para destruir ms clulas) y distribuirlas de la siguiente manera: Colocar una tira de cada tejido al aire en una cpsula abierta, sumerja otra pareja de tejidos en sol. de bisulfito sdico contenido en un tubo de ensayos y un tercer par en otro tubo al que se le agrega sol. de guayacol al 3% hasta cubrirlos. Repetir los 3 tratamientos usando esta vez tiras de los mismos vegetales, pero previamente hervidas en agua 5 min. Esperar 15 min. Y observar la posible manifestacin de un color caf- parduzco en el tejido o en la solucin de los diversos tratamientos.

ACTIVIDADES PARA EL ALUMNO 1) Explique cul es la funcin de la catalasa en la clula y escriba la ecuacin qumica que representa su accin. 2) Explique cual es la funcin de la deshidrogenasa en la clula y escriba una ecuacin qumica sencilla que la represente. 3) dem para la polifenol oxidasa 4) Sumner aisl de la soja una sustancia cristalina que denomin ureasa. si tuviera una muestra de esta sustancia, Cmo determinara si est compuesta enteramente por protena? Qu caractersticas de las enzimas aprovechara para saber si esta sustancia es una de ellas (enzima)? esta es una cuestin abierta que puede tener varias respuestas correctas. 5) En la tabla 9 -3 del Lehninger se muestra la clasificacin internacional de las enzimas, que se basa en el tipo de reacciones que catalizan. Determinar el tipo de reaccin y de enzima que catalizan las siguientes transformaciones: a) ADP1/2 O PO3- - + glucosa (ATP) O || b) ATP + CH3 - C = OH 6 fosfato de glucosa + ADP O || AMP + PP + CH3 C S - CoA

+ Co A SH

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Terico Prctico N 2

Tema: Integracin de conceptos tericos sobre compuestos biolgicos


OBJETIVOS Que el alumno afiance su conocimiento de la estructura de los compuestos con actividad biolgica que integran la clula viva. Que interprete la reaccin existente entre la estructura y la funcin de los mismos. Que la presente gua sirva al alumno de base para el estudio de los temas incluidos en el primer parcial de la asignatura.

AMINOCIDOS 1) Una disolucin de 0,283 gr/ml de un aminocido desconocido gira el plano de la luz polarizada 2,12 en un tubo de 1 dm de largo. Qu valor tiene la rotacin especfica? De qu aminocido podra tratarse? (Tabla 5-2 del Lehninger). 2) Las cuatro familias de grupos de R de los aminocidos pueden clasificarse en hidrfilas e hidrfobas. Qu propiedad de los grupos R determinan esta clasificacin? Clasifique cada familia como hidrfila o hidrfoba. 3) La fenilalanina tiene dos grupos funcionales: uno amino y uno carboxilo. Cuando se intenta fundir la fenilalanina cristalina, esta se descompone a 283 C, antes de alcanzar el punto de fusin. Sin embargo otros compuestos estructuralmente relacionados, que contienen solo un grupo amino o un grupo carboxilo (por ejemplo la bencilamina y el cido fenilactico), tienen puntos de fusin mucho menores. Qu explicacin puede elaborar para este hecho?

Fenilalanina (se descompone a 283)

cido Fenilactico (P.F.= 155 C)

Bencilamina (liq. a Temp. amb.)

4) La fenilalanina es diprtica. Escriba los equilibrios qumicos correspondientes a las dos reacciones de ionizacin. 5) Clasifique a cada uno de los siguientes aminocidos como polar o apolar: a) H2N(CH2)3-CH(NH2)-COOH b) CH3(CH2)5-CH(NH2)-COOH CH-CH3 || c) HOOC-C-CH2-CH(NH2)-COOH d) CH3-CH(NH2)CH2-CH(NH2)-COOH

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6) Una pequea muestra de cierta sustancia pura fue sometida a una cromatografa en papel. El aspecto del cromatograma, despus del revelado, es el mostrado en la figura. Cul es el valor del Rf de esta sustancia?

Frente del solvente

Origen

PROTENAS 1) El peso molecular promedio de los aminocidos estndar es 128. Cul es el peso molecular de una protena compuesta por 100 de estos aminocidos? 2) Defina los siguientes trminos: grupo prosttico, proteasa, enlace peptdico, protena oligomrica, desnaturalizacin, conformacin nativa, exopeptidasa. 3) Utilizando las caractersticas de las protenas fibrosas y globulares y, teniendo en cuenta la clasificacin de las mismas segn sus principales funciones biolgicas, diga cuales sern predominantemente fibrosas y cuales globulares, justificando su eleccin. 4) En base a los datos dados, sealar cuales de los siguientes pares de protenas podran separarse mejor por medio de una cromatografa por filtracin en gel: a) hemoglobina humana y seroalbmina humana b) ribonucleasa de pncreas bovino y deshidrogenasa del glutamato de hgado bovino - PM de la deshidrogenasa: 1.000.000 Datos: - PM de la hemoglobina: 64.500 - PM de la seroalbmina: 68.500 - PM de la ribonucleasa: 12.640 5) La toxina botulnica, uno de los txicos mas poderosos que se conocen, se produce ocasionalmente debido al crecimiento de la bacteria Clostridium botulinum en alimentos conservados incorrectamente. La ingesta de la toxina puede ser fatal, pero los alimentos contaminados pueden ser desintoxicados llevndolos a ebullicin durante 15 a 20 minutos. Debido a qu sucede esto? 6) El anlisis de dos muestras de protenas, una procedente de hgado de pollo y la otra de hgado de pavo, demostr que tenan la misma composicin en aminocidos. Es este un dato suficiente para afirmar que ambas protenas son idnticas? Justifique su respuesta. 7) Un estudiante pretende haber aislado los dos derivados de la N-acetil-glicina, cuyas estructuras se muestran abajo. Es razonable esta afirmacin? Explique su respuesta.

8) Diga si las siguientes afirmaciones son ciertas o falsas: a) Los ismeros de configuracin pueden Inter. Convertirse mediante rotacin alrededor de un enlace simple. b) La rotacin alrededor de los enlaces peptdico est restringida y estos son rgidos y planos

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c) La conformacin en hlice y la lmina son resultado directo de la composicin y secuencia de aminocidos en las cadenas polipeptdicas. e) La hlice y la lmina se mantienen gracias a la existencia de enlaces de hidrgeno Inter. E intracatenarios respectivamente. ENZIMAS 1) Sumner aisl de la soja una sustancia cristalina que denomin ureasa. Si tuviera una muestra de esta sustancia, Cmo determinara si est compuesta enteramente por protena? Qu caracterstica de las enzimas aprovechara para saber si se trata de uno de esos compuestos biolgicos? Esta es una cuestin abierta que puede tener varias respuestas correctas. 2) La hexoquinasa es una enzima que cataliza la transferencia de un grupo fosfato desde el ATP hacia la glucosa: ATP + glucosa ADP + D - glucosa 6 fosfato

El tratamiento de la hexoquinasa con urea 6 M destruye su actividad cataltica, la mayor parte de la cual puede recuperarse dializando cuidadosamente la muestra de protena. Explique esta observacin. 3) Escriba la ecuacin de Michaelis Menten y deduzca la forma matemtica que adquirir en las siguientes condiciones: a) cuando [S] = KM b) cuando [S] es mucho mayor que KM c) cuando [S] es mucho menor que KM Con los resultados obtenidos, proponga la forma que tendr el grfico de velocidad vs. [S]. 4) Determinar si las siguientes afirmaciones son ciertas o falsas: a) - Las enzimas tienen, en general, un tamao comparable al de los sustratos que transforman. b) Las enzimas se clasifican de acuerdo al tipo de reaccin que catalizan. c) Las enzimas afectan el equilibrio de las reacciones que catalizan. d) En presencia de la enzima apropiada la energa de activacin de una reaccin qumica determinada disminuye. e) Cuando la [S] es baja, la velocidad inicial de una reaccin aumenta linealmente con el aumento de la [S]. f) Cuando una cantidad dada de enzima esta saturada, el aumento de la S aumenta la velocidad inicial de la reaccin. CIDOS NUCLICOS 19)- las hebras de ADN y de ARN tienen una polaridad especfica y se escriben, por convenio, con el extremo 5 a la izquierda y el extremo 3 a la derecha. Qu grupo funcional hay en cada extremo? 20)- Una muestra de ADN determinada contiene aproximadamente un 28,9% de adenina. Cules son los porcentajes aproximados, en moles, de timina, guanina y citosina? 21)- Escribir la hebra antiparalela complementaria de la siguiente secuencia de nucletidos: pATCGCAGTTCGCTAC 22)- Cul de las molculas helicoidales de dos hebras de ADN siguientes tiene un punto de fusin mas alto? Por qu? a) T-T-C-T-C-T-G-A-A-A-A-G A-A-G-A-G-A-C-T-T-T-T-G b) C-T-C-A-G-G-G-G-A-C-C-T G-A-G-T-C-C-C-C-T-G-G-A

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23) El ADN est estrechamente asociado, en la cromatina, con protenas denominadas histnas. Qu fuerzas son responsables de esta asociacin? 24)- Cul es el peso molecular promedio, aproximado, del ADN de dos hebras necesario para codificar la deshidrogenasa del fosfato de glicerladehdo? PM= 40.000. Dato: el PM promedio de cada par de nucletidos es de, aproximadamente: 650. (Respuesta: 708.000). 25)- Una muestra de ADN, obtenido a partir de hojas de tabaco, contiene un 20,0% en moles de citosina. Suponiendo que solo se encuentran las cuatro bases principales, calcular el porcentaje aproximado de residuos de purinas de este ADN.

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Prctico de laboratorio N 10

Tema: Fotosntesis
OBJETIVOS Observar el efecto de la intensidad luminosa sobre el proceso fotosinttico. Verificar la influencia de la variacin de la concentracin del CO2 disponible en el proceso fotosinttico. Observar y analizar el comportamiento del proceso fotosinttico ante la variacin de la temperatura a la cual se desarrolla. FUNDAMENTOS TERICOS Fotosntesis: La energa que posibilita la vida de la gran mayora de los seres vivos en la tierra procede directa o indirectamente del sol a travs del proceso fotosinttico; en lneas generales este consiste en la reduccin del CO2 atmosfrico por medio del H+ del agua obtenido con la energa proveniente de las radiaciones electromagnticas como energa potencial qumica en los componentes orgnicos. La sustancia que absorbe la energa radiante que incide en la planta es la clorofila, molcula pigmento incluida en la unidad estructural del tilacoide. Existen diferentes tipos de clorofilas los cuales estn basados en la estructura qumica de las mismas, as tenemos clorofilas a, b, c y d. Adems de la clorofila a y b, en el cloroplasto de plantas superiores hay otro grupo de pigmentos, los carotenoides con las carotinas y xantofilas. En algas, junto a la clorofila a, se encuentran otras como la c la d y pigmentos accesorios: fucoxantinas y ficoeritrinas. En las clulas de los vegetales superiores pueden encontrarse otros pigmentos denominados antocinicos que determinan en especial el color de las flores y algunos matices en hojas y otras estructuras. El cloroplasto, rgano celular donde se localiza el proceso, posee adems un sistema enzimtico que cataliza la reduccin del dixido de carbono atmosfrico utilizando la energa capturada. As el proceso fotosinttico, como cualquier otro proceso fisiolgico, es afectado por las condiciones del medio ambiente en el cual ocurre. Algunos factores ambientales como intensidad y calidad de la luz, cantidad de dixido de carbono presente y temperatura tiene importancia fundamental en la intensidad del proceso. Donde mejor se pueden controlar estos factores es en invernculos, viveros y en el laboratorio. En general resulta difcil la cuantificacin del proceso fotosinttico por su coexistencia con el respiratorio, de funcin antagnica en cuanto a intercambio gaseoso. Por lo tanto los valores medidos corresponden a fotosntesis aparente y deben corregirse por medio de los valores de respiracin, para tener la fotosntesis verdadera. PARTE EXPERIMENTAL El efecto de los factores propuestos en el proceso fotosinttico puede medirse utilizando el mtodo de los micromoles de CO2 consumidos, o el mtodo de burbujeo. Para este ltimo mtodo, introduzca una ramita de elodea con el borde recin cortado hacia arriba (como indica la figura) en varios tubos de ensayo con agua.

Figura 11: Dispositivo para observar efecto de factores ambientales sobre la fotosntesis

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1- Efecto de la intensidad luminosa Cuente el nmero de burbujas por minuto que salen del tallo al iluminar las platas con una lmpara especial y compare lo que sucede con el tubo colocado en condiciones inferiores de luminosidad y con el que esta en la oscuridad. Para el conteo de las burbujas deje que se regularice el burbujeo durante 5 minutos aproximadamente. 2- Efecto de la concertacin de CO2 Coloque ramitas de elodea en un tubo conteniendo agua, en otro conteniendo NaHCO3 1M y en otro con NaHCO3 0, 1M y compare el burbujeo de la misma manera que en el caso anterior. 3- Efecto de la temperatura Para comprobar el efecto de la temperatura, se colocan los tubos en hielo, en agua a temperatura ambiente, y a bao mara a 50 C y se realiza conteo de la misma manera que en el caso anterior.

ACTIVIDADES PARA EL ALUMNO 1. Explique brevemente en que consiste el proceso de fotosntesis 2. En que parte de la plata o de la hoja se realiza el proceso? 3. Enumere los factores y explique como influyen en la intensidad fotosinttica

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Prctico de Laboratorio N 11

Tema: Respiracin
OBJETIVOS Observar el proceso de la respiracin aerbica en semillas de poroto germinado Visualizar la produccin de CO2 y H2O generados durante este proceso

FUNDAMENTOS TERICOS El mantenimiento de la vida requiere un continuo gasto de energa. En el caso de las platas, la mayor parte de la energa esta almacenada en los enlaces qumicos de las molculas orgnicas generadas por fotosntesis. Para su utilizacin todas las clulas vivientes de los diversos organismos han desarrollado mecanismos que permiten oxidar estos compuestos o sus derivados, rompiendo los enlaces, para dejar libre dicha energa. Esta oxidacin biolgica de los compuestos orgnicos que se desarrollan en las clulas de los organismos vegetales se denomina comnmente, respiracin. Se define como la oxidacin de una fuente energtica con ayuda de un aceptor de electrones. El tipo mas general involucra al oxigeno molecular determinado con una oxidacin aerbica, pero en general se sabe que requiere la activacin del H2 y del O2. Al igual que la fotosntesis, la respiracin es un proceso con mltiples pasos catalizados por numerosas enzimas. Un hecho importante en la respiracin es que la energa liberada en los enlaces qumicos del azcar u otro sustrato, se incorpora en enlaces qumicos rpidamente utilizables como ATP (adenosin trifosfato) que es el aceptor-protn universal de energa: ADP + Fosfato + energa ATP

El ATP, gracias a sus enlaces de alta energa, proporciona la energa que se utilizan en una enorme variedad de trabajos metablicos: sntesis de grasas y protenas, reduccin de nitratos y sulfatos, acumulacin de iones, transporte de sustancias, etc. En los organismos aerbicos se utiliza O2 y se produce CO2 en la respiracin, en los tejidos fotosintticos, sin embargo, este intercambio es obvio solo en ausencia de luz, puesto que generalmente la fotosntesis se desarrolla ms intensamente que la respiracin, consumiendo todo el CO2 producido. Aun ms se ha detectado que con luz intensa ocurre una respiracin adicional a travs de un mecanismo diferente conocido como fotorrespiracin y que ocurre en un organelo celular especial: el peroxisoma. La respiracin aerbica tpica esta formada por tres secuencias de reacciones bien definidas: 1- Gliclisis: ocurre en el citoplasma y se inicia con una fosforilacin que da por resultado final la conversin en dos molculas de cido pirvico (a partir de una glucosa), ms H que se une a NAD+. Esta etapa es comn a lo procesos de respiracin aerbica y fermentacin. 2- Oxidacin: se realiza a travs del ciclo de Krebs o del cido ctrico. El cido pirvico ingresa convertido en acetil- CoA, descomponindose en CO2 y H+. En este ultimo se transfiere a aceptores de H como NAD+ (nicotinamin-adenina dinucletido), NADP+ (nicotinamin-adenina dinucletido fosfato oxidado), FAD (flavinadenina dinucleotido). 3- Fosforilacin oxidativa final: a travs de un sistema de transporte constituido por los citocromos y ocasionalmente por otras oxidasas. Aqu los electrones de los aceptores de hidrogeno reducidos o protones son transferidos a otros aceptores, de nivel energtico cada vez mas bajos. La energa que por esto queda libre permite sintetizar ATP; esta es una forma de energa rpidamente disponible que si se utiliza es hidrolizado a ADP. En algunos organismos inferiores, como bacterias y hongos, se realiza respiracin anaerbica ya que las oxidaciones ocurren sin el uso de O2. Los vegetales superiores tambin pueden presentarla ocasionalmente y por tiempos variables, cuando carecen de O2 (ejemplos: races en suelos anegados, frutos de cubierta impermeable, etc.)

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La intensidad de la respiracin en las plantas varia enormemente segn las especies, tipo y edad del tejido y condiciones ambientales, entre estas ultimas se destaca la temperatura que, por la naturaleza bioqumica del proceso es decisiva y generalmente limitante; la presencia de O2 que llega a ser determinante del cambio metablico por su participacin directa en el proceso; el agua, que provee las condiciones de hidratacin adecuada a la accin enzimtica y muchos otros de menor importancia. Al igual que con las mediciones de fotosntesis, la respiracin se basa fundamentalmente en cuantificar el intercambio gaseoso por los mtodos tradicionales. Tambin se puede medir la produccin de calor o la prdida de peso seco en estructuras definidas como, por ejemplo, semillas. PARTE EXPERIMENTAL Materiales - vasos de precipitados - 3 tubos de ensayo de igual tamao - 3 varilla de agitacin - 5 a 10 semillas de poroto germinado - pipeta graduada - algodn Procedimientos: En 2 de los tubos de ensayo coloque 5 semillas de poroto completamente embebidas e inserte una mota de algodn, hmedo, no compacto. Al tercer tubo pngale solamente el algodn hmedo. A dos de los vasos de precipitados agrgueles igual cantidad (aproximadamente 20 ml.) de NaOH al 20% y al otro solo agua en igual cantidad. Luego invierta uno de los tubos con semillas en un vaso que contenga NaOH y el otro dentro del vaso con agua; el tubo sin semillas colquelo en uno con NaOH. Reactivos: - solucin de NaOH al 20 % - agua destilada

Figura 12: Dispositivo para observar la actividad respiratoria de semillas en germinacin

ACTIVIDADES PARA EL ALUMNO 1. A qu se denomina respiracin en las plantas? 2. Cules son las etapas que constituyen la respiracin aerbica? 3. En que consiste la fotorespiracin?

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Prctico de Laboratorio N 12

Tema: Propiedades qumicas del algodn


OBJETIVOS Verificar e interpretar la reaccin del almidn con iodo. Realizar y comprobar la hidrlisis qumica y enzimtica del almidn. FUNDAMENTOS TERICOS El almidn es la principal fuente de carbohidratos de reserva en las plantas. Es un polmero de glucosa, formado por dos tipos de estructuras macromoleculares diferentes: amilosa y amilopectina. La amilosa es el componente minoritario, representa el 20% del total del almidn y es un polmero lineal formado por unidades de glucosa unidas por enlaces glucosdicos (1-4). La amilosa es soluble en agua caliente y da lugar a la formacin de una estructura secundaria caracterstica de forma helicoidal. Esta estructura permite que el ion I3 se ubique en el interior de la hlice dando a la disolucin un color violeta intenso. Este color desaparece cuando la disolucin se calienta, debido a la prdida de la estructura helicoidal. El color se recupera por enfriamiento lento de la disolucin. La amilopectina constituye el 80% del almidn y es un polmero no lineal de glucosa que est formado principalmente por unidades de glucosa unidas por enlace (1-4), y en las posiciones de ramificacin, por enlaces (1-6). Es insoluble en agua caliente y da un color rojizo con yodo. Ambas presentas propiedades no reductoras, ya que cada macromolcula solo contiene una unidad glucosa reductora. El almidn puede ser hidrolizado en medio cido, o bien por la accin de enzimas especificas como la amilasa, que rompe los enlaces (1-4) formando glucosa, maltosa y dextrinas. PARTE EXPERIMENTAL Materiales y reactivos necesarios: Bao a 100% C. CIH concentrado Reactivo de Fehling Disolucin de almidn al 1%: disolver un gr de almidon en un poco de agua fra y aadir lentamente y con agitacin a 100 ml de agua hirviendo. Disolucin de I3: mezcla de iodo con IK en agua, aproximadamente 1mM, iodo en KI /30 g/l); ha

de tener color rojizo.

Tcnica - Reaccin del almidn con iodo: tomar 3 ml de la disolucin de almidn en un tubo de ensayos y agregar 1 ml de la disolucin de iodo. Observar la coloracin. Calentar el tubo y, a continuacin, dejar enfriar lentamente. Comentar los resultados. - Hidrlisis qumica y enzimtica: a 50 ml. De una disolucin de almidon aadir 5 ml de CIH concentrado y calentar en bao de agua a 100 C. A intervalos de 5 min., durante media hora, tomar dos alcuotas de 2 ml cada una y, una vez fras, ensayar la coloracin con iodo y la presencia de azcares reductores por el mtodo de Fehling. A un tubo de 10 ml de almidon aadir unas gotas de saliva, agitar y tomar una alcuota de 2 ml a la que rpidamente se le adiciona 1ml de la disolucin de iodo. Esperar 5 min y tomar una nueva alcuota de 2 ml a la que se le realiza el ensayo con el iodo. Anotar los resultados.

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Terico Prctico N 3

Integracin de conceptos tericos sobre aspectos metablicos


ATP Y BIOENERGTICA CELULAR Problema N 1: A pesar de que los mamferos producen una cantidad sustancial de calor, este calor no constituye una fuente de energa utilizable para las clulas vivas. Explica por qu. Problema N 2: Qu clase de energa utiliza la clula, si no utiliza la energa trmica? Por qu necesitan esa clase de energa? RESPIRACIN Problema N 3: En la gluclisis hay dos reacciones que precisan una molcula de ATP, y otras dos que producen una molcula de ATP. Siendo esto as Cmo puede la gluclisis ofrecer, en la degradacin de la glucosa a lactato, una produccin neta de dos molculas de ATP por cada una de glucosa? Problema N 4: De dnde proviene la energa necesaria para producir fosfoenolpiruvato de sper energa elevada? Problema N 5: La cantidad celular total de NAD (suma del NAD+ y del NADH) es prcticamente constante, y mucho menos que la de glucosa que pasa por minuto por la gluclisis. En consecuencia el NAD+ utilizado en la reaccin de la deshidrogenasa del gliceraldehdo 3- fosfato ha de ser reciclado. Cuando se aporta oxigeno abundante de la clula, el NADH2 se recicla por medio de una oxidacin dependiente del O2. Cmo se recicla cuando no hay oxgeno? Problema N 6: Aunque el oxgeno molecular no participa directamente en el Ciclo del cido Ctrico, este solamente funciona cuando el oxgeno est presente. Por qu? FOTOSNTESIS Problema N 7: Theodore de Saussure observ, en 1804, que la suma del peso de oxgeno y de materia orgnica seca producidos por las plantas es mayor que el CO2 consumido durante la fotosntesis. De donde proviene la diferencia? Problema N 8: Los fragmentos de cloroplastos que se iluminan en presencia de agua y CO2 producen O2 molecular. Dos experimentos realizados con H2O y CO2 marcados con 18O dieron los siguientes resultados: MOLECULA MARCADA CO2 marcado con 18O - H2O no marcada CO2 no marcado H2O marcada con 18O PM DEL O2 PRODUCIDO 32,00 36,00

Que indican estos resultados acerca de la fuente del oxgeno molecular que se produce durante la fotosntesis? Problema N 9: Producen O2 las clulas de las hojas de las plantas verdes tanto durante el da como durante la noche? Problema N 10: Qu caracterstica estructural de la molcula de clorofila es la responsable de su capacidad de absorber la luz visible eficientemente?

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Problema N 11: La clorofila no es soluble en el agua pero se disuelve fcilmente en los disolventes orgnicos. Qu significado tiene esta propiedad para la funcin de la clorofila? Problema N 12: Los fotosistemas 1 y 2 estn ligados por medio de una serie de transportadores. Qu funcin cumplen dichos transportadores? METABLISMO DE LOS LPIDOS Problema N 13: Pueden los cidos grasos ser metabolizados directamente, o necesitan alguna modificacin estructural previa? Explquela. Problema N 14: Esquematice el proceso de la biosntesis de los cidos grasos saturados en los vegetales. Problema N 15: Explique el mecanismo aerobio de la biosntesis de los cidos grasos monetilnicos. Problema N 16: Qu mecanismos oxidativos de degradacin de los cidos grasos ocurren en las plantas? Problema N 17: Cmo se lleva a cabo la degradacin de los lpidos en los vegetales? METABOLISMO DE PROTENAS Y CICLO DEL N2 Problema N 18: Por qu se puede considerar que el metabolismo del N2 confiere a los vegetales un papel especial en la economa de la naturaleza? Problema N 19: Esquematice de manera sencilla el Ciclo del N2 en la naturaleza y explique de cuantas maneras pueden fijar este elemento los vegetales a travs del mismo. Problema N 20: Menciona y explica las reacciones ms importantes involucradas en la degradacin metablica de los aminocidos. Problema N 21: Escribe la estructura de los productos que se obtienen por transferencia del grupo amino del Aspartato y de la Alanina hacia el cetoglutarato. Problema N 22: Qu destinos pueden tener los esqueletos carbonados de los aminocidos, luego de la eliminacin del grupo amino?

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Bibliografa
L.G. WADE, JR.: QUMICA ORGNICA. 2da edicin. Editorial Prentice Hall Hispanoamericana (1.993) MORRISON Y BOYD: QUMICA ORGNICA. 5ta Edicin. Editorial Addison Wesley Longman de Mxico S.A. de C.V. (1.998) MC. MURRY: QUMICA ORGNICA. 3ra Edicin. Grupo Editorial Iberoamericana (1.994) BREWSTER R.-MC EWEN W.:"QUMICA ORGNICA. 2da Edicin en espaol Editorial Mdico Quirrgica, Buenos Aires (1.963) BREWSTER, R.Q.; VANDERWERF, C.A. y Mc. EWEN, W.E.: CURSO PRCTICO DE QUMICA ORGNICA 2da Edicin. Editorial Alambra S.A. Madrid (1.999) ALCAIZ, E. de J.: LA SEGURIDAD EN LOS LABORATORIOS DE PRCTICAS. Comisin de seguridad y salud laboral, Universidad de Alcal, Espaa (1.995) GUZMN, B.; IBARRA, M.A.; y otros: PRCTICAS DE LABORATORIO EN QUMICA ORGNICA. Primera Edicin, Ctedra de Qumica Orgnica I, Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia. U.N.T. (2.004) BLANCO, A.: QUMICA BIOLGICA. 6ta Edicin. Editorial El Ateneo (1.993) LEHNINGER, A.: PRINCIPIOS DE BIOQUMICA. 2da Edicin. Omega Ediciones S.A.. Barcelona (1.993) ALBERTS, B., BRAY, D.: BIOLOGA MOLECULAR DE LAS CELULAS 2da Edicin. Ediciones Omega S.A. Barcelona (1.992) CURSTIS, H.; BARNES, S.: BIOLOGA Editorial Mdica Panamericana (1.993) SIVORI, E.; MONTALDI, E.; CASO, O.: FISIOLOGA VEGETAL 1ra Edicion. Editorial Hemisferio Sur S.A. (1.980) ABBOTT, D.: INTRODUCCIN A LA CROMATOGRAFA COLLINS, C.H.; BRAGA, G.L., BONATO, P.S.: INTRODUCCIN A METODOS CROMATOGRAFICOS. Apuntes de ctedra sobre Curso de Postgrado realizado en 1.997