UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente-ECAPMA Programa: Agronomía

e Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombres y Apellidos; Kevin Oñate Hernández Código: 1065629976 Tutora: Lina Monsalve; curso 352001 Fecha: 13/10/2013

ACTIVIDAD UREÁSICA EN MUESTRAS DE ORIGEN BIOLÓGICO
INTRODUCCIÓN La ureasa es una enzima que cataliza la hidrolisis de urea a dióxido de carbono y amoniaco dependiendo de las reacciones bioquímicas enzimáticas (RBE) en dichas reacciones las enzimas actúan sobre unas moléculas denominadas sustratos las cuales se convierten en moléculas diferentes llamadas productos. La ureasa se encuentra en varios tejidos vegetales lo cual puede ser usada en el análisis de alimentos y forrajes para la determinación de urea por el método de Kjeldhal o por titulación del hidróxido de amonio producido por la hidrolisis. Mentefacto ó diagrama conceptual

1.3.2 En Laboratorio 1. Pesamos 1.0g de harina, forraje o suelo (wm) 2. En un tuvo centrifuga adicionamos la muestra previamente pesada con 10ml de NaCl 3. Agitamos 4. Centrifugamos a 350 rpm(revoluciones por minuto) 5. Cojamos el volumen sobrenadante y lo vertimos a una proveta adicionándole 25ml de NaCl 6. Agitamos durante 30 segundos 7. Rotulamos el extracto de la muestra para actividad ureasica. 1.3.3.Diagrama de Flujo

FINALIZAR REGISTRAR DATOS TITULACIÓN COLOR AZUL VERDOSO muestra positiva (AU) adicionamos HCl COLOR ROSADOVIOLASEO EQ: NH4OH neutralizados por HCl

EXTRACCIÓN PESAJE DE LA MUESTRA(wm) mescla de reactivos

1. MATERIALES Y MÉTODOS 1.1. Materiales y equipos requeridos
Material / Equipo Tubos de ensayo con gradilla Pinzas para bureta Erlenmeyer pipetas Matraz aforado Baño termostato beaker bureta Soporte universal Características medianos Mango de palo 125ML 5 y 10 ml 100 ml Control de temperatura 400 ml 25ml

2. TABLA DE DATOS TUBOS TIPO DE MUESTRA B ST 1 2 3 4

ML GASTADOS DE HCL 0,1N

3. RESULTADOS ESPERADOS:  En la extracción de la muestra se espera que se torne una tonalidad azul verdosa lo que nos indica que es una muestra positiva para actividad ureasica. en caso contrario es necesario volver a hacer la extracción.  En el proceso de titulación al adicionar lentamente el HCl aparece un color rosado violáceo, lo cual indica que los equivalentes-gramo del hidróxido de amonio fueron neutralizados por los equivalentes- gramos de ácido clorhídrico (HCl).  Se determinara en cuál de las muestras existentes se presenta la mayor actividad ureasica. (suelo, forraje, harina.)

htm http://www.0 0. curso 352001 Fecha: 13/10/2013 1. sales hidrolíticamente activas. Es producida por bacteria.1% 7. El + pH indica la concentración de iones hidronio [H3O ] presentes en determinadas sustancias *Seleccionar 3 conceptos claves de la práctica y definirlos brevemente* BIBLIOGRAFIA *Según muestra el ejemplo.En campo: Se recolectaron en una finca las muestras indicadas en el protocolo. 1. buffer.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas.base que se produce al disolver determinadas sales en agua. relacionar 3 referencias de literatura utilizadas como consulta. Tienen la propiedad de mantener estable el pH de una disolución frente a la adición de cantidades relativamente pequeñas de ácidos o bases fuertes.5 cm Suelo: (250 g) a 20cm de profundidad el cual fue secado al aire. La reacción tiene lugar entre uno de los iones de la sal y el agua y.3 Procedimiento 1. Pecuarias y del Medio Ambiente-ECAPMA Programa: Agronomía e Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombres y Apellidos. La reacción ocurre de la siguiente manera: (NH2)2CO + H2O → CO2 + 2NH3 En 1926.1.2 Reactivos a utilizar Reactivo Fórmula ureasa En buffer fosfato De PH urea H2NCONH2 Cloruro de HgCl2 mercurio Ácidoclorhídrico HCl indicador de C15H14N3O2Na Tashiro + C16H18N3SCl . hay que tener en cuenta que se trata de una reacción de equilibrio. James Batcheller Sumner demostró que la ureasa es una proteína.com/Muestro%20Forrajes. PH: El pH es una medida de acidez o alcalinidad de una disolución.3.co/~esgeocien/doc* .gaqsa. hongos y varias plantas superiores. solución amortiguadora o solución reguladora es la mezcla en concentraciones relativamente elevadas de un ácido débil y su base conjugada. forraje:(250g) previamente picadoa un tamaño de 0. Hidrólisis: La hidrólisis es una reacción ácido . solución buffer Un tampón. de acuerdo a las normas APA http://www.1N GLOSARIO: Ureasa es una enzima que cataliza la hidrólisis de urea a dióxido de carbono y amoníaco.unalmed. Kevin Oñate Hernández Código: 1065629976 Tutora: Lina Monsalve. Todas estas muestras fueron sellados y rotulado con la descripción del lugar donde se tomaron las muestras.3H2O + C2H6O Concentración 0.edu.25 M 1% 0. Concentrado: (50g) previamente molido. es decir.

CAPACIDAD AMORTIGUADORA (β ) Y POTENCIAL AMORTIGUADOR (p (β ) ) DE MUESTRAS BIOLOGICAS 1.3.1 N.Probeta graduada Características Metálica De vidrio De 125ml. tabla concentración de hidrogeniones varia muy poco al añadirles de datos ácidos bases. De 10ml De 100ml . El objeto de su empleo. técnica potenciometrica.Potenciómetro .Pipetas graduada . curso 352001 Fecha: 13/10/2013 2.Agitador . es precisamente impedir o amortiguar las variaciones del pH. Soluciones buffer (amortiguadoras) excluyen Diagrama de Flujo ejemplos Lípidos y carbohidratos Bicarbonatos (HCO3-) Fosfatos (HPO4=) Hemoglobina (HbH) Aminoácido (proteínas) 1. . MATERIALES Y MÉTODOS 1. titulación volumétrica con Soluciones amortiguadoras son aquellas soluciones cuya NaOH 0.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas. Mentefacto ó diagrama conceptual ACIDO DEBIL + SAL Reguladores de pH Absorben excesos de iones H.y H+ propiedades Controlan metabolismo acido base Regulan metabolismo homeostático componentes Ácidos fuertes (ácidos minerales) . tanto en técnicas de laboratorio como en la finalidad funcional del plasma.2 En Laboratorio INTRODUCCIÓN Medida y rotulación de las muestras.Erlenmeyer. Kevin Oñate Hernández Código: 1065629976 Tutora: Lina Monsalve.Espátula . y por eso suele decirse que sirven para mantener constante el pH. registro de mL gastado.1 Materiales y equipos requeridos Material / Equipo . Pecuarias y del Medio Ambiente-ECAPMA Programa: Agronomía e Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombres y Apellidos. Vaso de precipitado de .

Fenolftaleína . Kevin Oñate Hernández Código: 1065629976 Tutora: Lina Monsalve. RESULTADOS ESPERADOS:  Cuantificar la capacidad amortiguadora de muestras biológicas mediante técnicas potenciometricas. BIBLIOGRAFIA Granados .Balanza . hormonas. y se medirá la capacidad amortiguadora de muestras biológicas: 5g de Concentrado pulverizado. Pág. vitaminas. orina. curso 352001 Fecha: 13/10/2013 . En campo: Se realizará un análisis comparativo del potencial bufferante de muestras biológicas: 20ml de Leche. un 7% de proteínas. y el 3% restante por grasa. Unidad 2. Pecuarias y del Medio Ambiente-ECAPMA Programa: Agronomía e Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombres y Apellidos. GLOSARIO:    Biocatalizador: es un catalizador de las reacciones bioquímicas de los seres vivos. 9-12. UNAD Granados.1. además de productos de desecho del metabolismo como el ácido úrico.Bureta . las hormonas y las vitaminas. Protocolo Prácticas de laboratorio. . es decir.Acido clorhídrico .3. oxígeno.Beaker .ECAPMA. J (2010). 5g de harina.Solución Buffer fosfato Fórmula Concentración 0. 5g de forraje picado. Se consideran biocatalizadores las enzimas. 2. se obtiene al dejar a la sangre desprovista de células como los glóbulos rojos y los glóbulos blancos.1N 3. TABLA DE DATOS Ta bla de da tos Datos potenciométric os para c apacidad amortiguadora de muestras biológicas Valores evaluados Digital Concentrado. gas carbónico y nitrógeno.  Realizar un análisis comparativo del potencial bufferante de muestras de origen biológico.Rojo de Metilo . Unidad 2.  Cuantificar la capacidad amortiguadora de muestras biológicas mediante titulación volumétrica. Plasma: es la fracción líquida y acelular de la sangre.Soporte universal. en presencia de los indicadores adecuados.Agua destilada .Equipo de titulación . Modulo Bioquímica Metabólica. 2. cap.Muestras Biológicas 250ml De 25 ml Metálico con pinza para bureta 2. glucosa. Desaminación: degradación de un aminoácido. Está compuesto por un 90% de agua. cap. J (2010). UNAD NaOH HCl C20H14O4 C15H15N3O2 H2O KH2PO4 + NaOH 1. sangre y forraje Muestras Wm (g) Conce ntra do Ha rina Forra je Sa ngre Orina Vm (ml) pH1 pH2 1.Hidróxido de sodio . .ECAPMA. 1ml de sangre y 20ml de orina.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas.2 Reactivos a utilizar Reactivo .3 Procedimiento 1.1 N 0. Bioquímica Metabólica.

Soporte universal 1. lleva a baño María por 3min. no estructurales.3. Tubos de ensayo Gradillas.5 2. en la cual la molécula de agua se divide y sus átomos pasan a formar parte de otra especie química. luego de este proceso. RESULTADOS ESPERADOS Que el elemento sea un patrón confiable para la cuantificación de carbohidratos no estructurales. GLOSARIO Carbohidrato: Compuesto químico formado por carbono. basándose en el contenido de almidones hidrolizables y azúcares solubles.1.2.1N Ureasa 0.1N C6H6O 5% Fenol 1.3. Harinas Braker de 400ml. Hidrólisis: Es una reacción química entre una molécula de agua y otra molécula.2 Reactivos a utilizar Reactivo Formula Concentración Cloruro de mercurio HgC12 1% Ácido clorhídrico HCI 0. Pinzas para Suelos bureta. Mentefacto conceptual 1.5 0. ajustando a 100% de Transmitancia (%T) y 0.1 Toma de muestra La muestra de concentrado para animales se toman 50g. hidrógeno y oxígeno. macerado.000 de Absorbancia (A).UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas.3.2 Mezcla de reactivos Reactivos (ml) 1.3 Procedimiento 1.0 H2SO4 1N 3. Erlenmeyer de 125ml. triturado o molido. mediante la ecuación : A =2.MATERIALES Y METODOS 1. Bibliografía .de los tubos st y m.0 0 FCN 0 0 2.5 0. TABLA DE DATOS 2.5 Agua destilada 1. sacar los tubos y agita 10 seg y dejar enfriar 1. se convierte estos valores a Absorbancia (A).2.0 0 0 Glucosa 100 ppm 0 1.Log %T 2.3.3 Lectura espectrofotométrica Se alista el espectrofotómetro a una ƛ=485nm y calibrar el aparato con el tubo blanco. Kevin Oñate Hernández Código: 1065629976 Tutora: Lina Monsalve. Materiales y equipos requeridos Materiales Equipos Forrajes Pipeta de 5 y 10ml.1 Datos Volumétrico 3.5 Se agita con cuidado x 20 seg.1N Hidróxido de sodio NaOH 0. Pecuarias y del Medio Ambiente-ECAPMA Programa: Agronomía e Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombres y Apellidos. por el método del fenol-ácido sulfúrico INTRODUCCION Es un método que determina la cantidad de carbohidratos totales. la cantidad de CNE en la muestra sean los necesarios y así ejecutar medidas por esta técnica 4.2. Leer el % de Transmitancia (T). curso 352001 Fecha: 13/10/2013 Título de la práctica: Determinación de carbohidratos no 1. está presente en los alimentos en diferentes formas y porcentajes. LABORATORIOS estructurales (CNE). Buretas de 25ml. empacado en bolsa negra y rotulada descripción y características de la muestra Tubos de ensayo B St M Fenol 5% 0. Matraz aforado de 100ml.5 3.

3 Procedimiento 1. con agitador de vidrio (3min) y centrifugar a 2500rpm. durante 5min Sacar el sobrenadante. al transformarse en agua y oxígeno.1Materiales y Equipos requeridos Materiales Concentrado Frutas Sangre Verduras Orina 1.1N gastado (ml) 1. pipeta graduada Probeta graduada beaker de 400Ml. Erlenmeyer). pinzas. Pecuarias y del Medio Ambiente-ECAPMA Programa: Agronomía e Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombres y Apellidos.3. que es participe en proceso de respiración vegetal .1 Toma de muestra Las frutas. bureta.8-7.MATERIALES Y METODOS 1.2 Reactivos a utilizar Equipos Montaje de titulación (soporte universal. medir su volumen. poner en baño de hielo 1.05M. tubos de ensayo con gradilla 1 2 3 4 5 6 3. verduras ó concentrados se pesan 2g de muestra picada ó pulverizada y se ubican en un tubo de centrifuga.06M Ácido sulfúrico 2N Permanganato de potasio 0. se adiciona 10mL de solución fría de buffer fosfato 0. de forma indirecta usando la enzima de muestras biológicas BIBLIOGRAFÍA Reactivo Peróxido de hidrogeno Formula H2O2 H2SO4 KMnO4 Concentración 0. rotular como: EVCAT(extracto de verdura para catalasa ) .3. agitar. curso 352001 Fecha: 13/10/2013 TITULO DE LA PRACTICA: Actividad de Catalasa(ACAT) en muestras de origen Biológico INTRODUCCION Estando libres lo radicales se asocian al desarrollo de enfermedades.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas. ó ECCAT (extracto de concentrado para catalasa). RESULTADOS ESPERADOS cuantificar la actividad catalasa en distintas muestras. TABLA DE DATOS Tubo B Tipo de muestra HCl 0. pero también muy importante en los organismos vegetales y animal Mentefacto conceptual EFCAT(extracto de fruta para catalasa). registrarlo como Vs y tomar 5 mL de éste y poner en un tubo de ensayo tapar.2. el peróxido de hidrogeno que puede metabolizarse a través de la enzima catalasa. pH=6. en el organismo un radical originado. LABORATORIOS 2.0.01M Extractos de catalasa ECAT 1. seguidamente. Kevin Oñate Hernández Código: 1065629976 Tutora: Lina Monsalve. pasarlo a una probeta.

Pecuarias y del Medio Ambiente-ECAPMA Programa: Agronomía e Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombres y Apellidos. Mentefacto conceptual 1. bureta.3 Procedimiento 1.ucam. BIBLIOGRAFIA http://www.2 Reactivos a utilizar Reactivo Ácido tricloroacetico Agua destilada Albumina 5% Reactivo de Biuret FNNP 3. es una mezcla entre aminoácidos libres y péptidos. y el remanente.3. almacenar en refrigeración a 4°C (Baño de hielo).5 varios aminoácidos mediante enlaces peptídicos. luego Rotular indicando la descripción del animal al cual se le tomó la muestra. pipeta m: muestra. curso 352001 Fecha: 13/10/2013 TITULO DE LA PRACTICA: Determinación de Nitrógeno No proteico (NNP) INTRODUCCION El 90 % del nitrógeno total (NT) se presenta en el contenido del líquido ruminal. st: estándar.1 Materiales y Equipos requeridos Materiales Suelo forraje Sangre Harinas 1. tubos de GLOSARIO Nitrógeno no proteico: Se denomina así a los compuestos de ensayo con gradilla nitrógeno que pueden ser convertidos en proteínas por algunos organismos vivos. graduada Probeta graduada beaker de 400Ml. por método espectrofotométrico de BiuretL owry Montaje de titulación (soporte a) Realizar la Mezcla de reactivos universal. MATERIALES Y MÉTODOS 1. y la más abundante en el ser humano.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas. esta se sintetiza en el hígado. se encuentra en forma insoluble. Erlenmeyer).edu/estudios/grados/nutricion-presencial/ . Amoniaco: Es un compuesto químico cuya molécula consiste en Formula Concentración un átomo de nitrógeno (N) y tres átomos de hidrógeno (H) de Cl3-C-COOH 10N acuerdo con la fórmula NH3. Albumina: Es una proteína que se encuentra en gran proporción en el plasma sanguíneo.3. pinzas. H2O Péptidos: Son un tipo de moléculas formadas por la unión de 0. Alistar 3 tubos de ensayo. Equipos 1.1 Toma de muestra Se toma la muestra de sangre animal se debe recolectar 5mL envasados en un tubo vacutainer. el cual contiene anticoagulante. LABORATORIOS 2. RESULTADOS ESPERADOS Cuantificar el Nitrógeno en el filtrado. Kevin Oñate Hernández Código: 1065629976 Tutora: Lina Monsalve. rotularlos así: B: blanco. siendo la proteína de la sangre.2. TABLA DE DATOS Tubos Materiales (ml) Tubos de ensayo B St M 1. El 10 % de éste corresponde a nitrógeno amoniacal (NNP).

curso 352001 Fecha: 13/10/2013 . Pecuarias y del Medio Ambiente-ECAPMA Programa: Agronomía e Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM Nombres y Apellidos.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas. Kevin Oñate Hernández Código: 1065629976 Tutora: Lina Monsalve.