ESCUELA POLITÉCNICA DEL EJÉRCITO DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA INMUNOLOGÍA Integrantes: Alejandro Olmedo, Andrea Vaca

Fecha: 12 – 09 – 2013

Informe de Laboratorio Nº1

Práctica 1 TEMA: Células del linaje inmunológico, inmunidad natural

OBJETIVO Diferenciar el sistema de defensa del organismo humano, desde su origen hasta el foco de infección o el encuentro con el antígeno FUNDAMENTOS Los leucocitos son células que circulan por la sangre con la función de combatir infecciones o cuerpos extraños. Son parte de las defensas inmunitarias del organismo, pero en ocasiones pueden afectar los tejidos normales de cuerpo. Existen dos grupos, los granulocitos, dentro de ellos los neutrófilos, basófilos y eosinófilos; y granulocitos así como los monocitos y linfocitos. Los neutrófilos defienden el organismo contra bacterias y otros microorganismos. Se les puede denominar neutrófilos en banda o segmentados, dependiendo de si presentan o no divisiónes de su núcleo en 3 a 5 lóbulos. Si el núcleo es mayor, se habla de neutrófilos hipersegmentados. Los basófilos poseen gránulos de heparina e histamina, mediadores de la inflamación. Actúan en estados de hipersensibilidad retardada. La liberación masiva del contenido de unos gránulos puede causar choque anafiláctico, mortal si no es controlado. Los eosinófilos poseen una actividad fagocítica: Se “comen” los agentes extraños. Sus gránulos tienen sustancias que degradan lo fagocítado sobre todo las larvas de parásitos. Además, inician y regulan las reacciones alérgicas. Los monocitos poseen una actividad fagocítica bactericida. Ante estímulos químicos pueden seguir a los neutrófilos. Pueden fijarse a tejido de bazo, hígado y pulmón, dando lugar a macrófagos que forman el sistema retículo-endotelial encargado de remover material extraño circulante en sangre. Los linfocitos B constituyen la minoría del pool linfocitario circulante 10-20%. Maduros, pasan de la médula ósea a la sangre y se dirigen hacia los órganos linfáticos periféricos para ubicarse en los folículos linfoides. Bajo estimulo antigénico, se activan y proliferan formando el centro germinal en el interior del folículo linfoide. Pueden seguir un proceso de estimulación hasta

encargadas de la trasmisión de señales a otras células. pero informe 4.transformarse en inmunoglobulinas. Leer en el microscopio de bajo objetivos de 10X. se deslizará la gota sin hacer presión. 2007). La eosina tiñe los componentes ácidos de rojo y el azul de metileno tiñe de azul los componentes ácidos (Carr y Rodak. Ejercen sus efectos mediante la liberación de proteínas solubles. Poner una gota de sangre sobre un portaobjetos y con otro portaobjetos limpio. citocinas. Y estos en células plasmáticas secretoras de Pueden también regresan del estado quiescente de pequeño linfocitos B con memoria inmunológica. trastornos y deficiencias que pueden afectar el número y tipo de células sanguíneas producidas. la tinción Wright-Giemsa es la más utilizada la cual contiene eosina y azul de metileno. Mezclar la sangre durante tres minutos 2. para pasar a formar parte del manto o corona. su función y su esperanza de vida (Newland. o bien mediante interacciones directas con otras células. 40 X y 100X 7. Un frotis de sangre periférica se utiliza frecuentemente para clasificar e identificar las condiciones que afectan a uno o más tipos de células sanguíneas. ada una de estas c lulas posee una misión específica fundamental. Enjuagar el portaobjetos 6. Hay muchas enfermedades. Identificar las células y anotar los resultados RESULTADOS Y DISCUSIÓN La sangre es un fluido ue contiene una serie de c lulas en mu diferente proporción. Entre el adulto normal oscila entre 65% y 75% con variaciones según la edad. Son los gló ulos ro os eritrocitos o ematíes los gló ulos lancos leucocitos las pla uetas trom ocitos (Belmonte. 2007). Realizar un frotis sanguíneo 3. inmunoblastos. 2010). MUESTRA Sangre venosa con anticoagulante EDTA (tubo morado) Material Agujas Jeringas Torundas Torniquetes Alcohol Microscopio óptico MÉTODO 1. Los linfocitos T forman una población mayoritaria. Dejar secar y cubrir con el reactivo de Tinción de Wrigth por diez minutos 5. Para reconocer e identificar las células y examinar fácilmente la morfología es necesario teñir el frotis. Según Carr y Rodak (2010) en un recuento normal de leucocitos con el lente de 100x según la forma de los núcleos se pueden encontrar neutrófilos con un núcleo que tiene dos lóbulos Portaobjeto Tinción de Wrigth Aceite de inmersión Papel para microscopio .

los basófilos también poseen histamina y otra sustancias como la heparina. sustancia quimio táctica del eosinófilo. linfocitos con núcleo redondo figura 2. estos se convierten en macrófagos después de aumentar su tamaño de 5 a 10 veces.Monocitos Figura 4. Glóbulos rojos. como se muestra en la figura 5 (Departamento de Ciencias Fisiológicas. no posee núcleo ni organelas. con núcleo plurilobular.conectados y otros en forma de c o s figura 1. Además se observaron plaquetas que son células diminutas de forma ovalada que carece de núcleo.Linfocitos Figura 3. estas células provienen de la medula ósea. que actúa como factor activador de plaquetas con un tamaño de 10 a 14 um como se puede ver en la figura 4. Su función principal es liberar oxigeno por los tejidos. monocitos con un núcleo irregular como en la figura 3. la kalicreina. blancos y plaquetas . los neutrófilos maduros presentan núcleos lobulados en 3 o 4 partes y poseen un tamaño de 10 a 12 um.Neutrófilos Figura 2. éstas junto con los factores de coagulación forman coágulos para cerrar las heridas y glóbulos rojos los cuales son discos bicóncavos en los cuales tienen una depresión central. Figura 1. gracias a una proteína rica en hierro llamada hemoglobina. también se podría observar en ellos gránulos de color rojo-anaranjado ricos en histamina la cual participa en procesos de alergias. 2002).Eosinófilos y basófilos Figura 5. eosinófilos tienen el núcleo en forma de dos lóbulos conectados.

4 * 1000/µl 1. Causas de trombocitopenia Este trastorno es asociado con el sangrado anormal.5-1 % Los valores normales de células sanguíneas en adultos mayores a 50 años disminuyen en comparación a los valores normales en un adulto de mediana edad.3 * 1000/µl 0. Disminución de Leucocitos por debajo de 4000/L .0 * 1000/µl 0. Esta cantidad anormal de plaquetas puede estar relacionada con la producción insuficiente de células en la médula ósea.) Cite 5 enfermedades asociadas a las células leucocitarias 1.5 * 1000/µl 0.5-6-5 * 1000/µl 0. cirrosis. cáncer. 2012. en el bazo o en el hígado.6 * 1000/µl 0.5-8. 2013) Valores normales: Niños 4 -11 k/ul 22-44% 0-7% 40-70% 0-4% 0-1% Recuento total de leucocitos 1 año Linfocitos Monocitos Granulocitos Neutrófilos Eosinófilos Basófilos (Díaz & Bastidas.0-10. respecto a los valores normales.5 * 1000/µl 1. Leucopenia. (Dr. debido a una baja concentración de plaquetas.5-1 % 1.5-8.CUESTIONARIO Valores normales en sangre de adultos niños y de avanzada edad de las células sanguíneas Valores normales: Adultos Recuento total de leucocitos Linfocitos Monocitos Granulocitos Neutrófilos Eosinófilos Basófilos (Chemocare. mayor descomposición de estas en el torrente sanguíneo. Tango. también influyen factores como el sexo y la situación geográfica. deficiencia de folato o vitamina b12 o mielodisplasia. se debe considerar también que los valores de estas aparte de verse afectados por la edad.2 * 1000/µl 0. 2004) 6-11 años 4. Estos cambios están ligados a anemia.

Es un cáncer que inicia en las células plasmáticas en la médula ósea. Monocitos: son células mononucleares cuyo núcleo tiene forma arriñonada. causada por el crecimiento apresurado de células inmaduras que originan un cierto tipo de glóbulo blanco. Eosinófilos: poseen gránulos con proteínas básicas que se ligan a pigmentos ácidos como la eosina. Enfermedad inflamatoria que puede aparecer después de una infección con las bacterias estreptococos del grupo A. Se presenta cuendo el cuerpo no tiene suficientes glóbulos rojos sanos. poseen gránulos rodeados de membrana que contienen proteoglucanos ácidos que se unen a pigmentos básicos y varios mediadores inflamatorios y antimicrobianos. Éstos expresan receptores para IgG y IgE. Poseen un diámetro de 9 a 12 um. 2012. En el mieloma múltiple. Fiebre reumática. Los glóbulos rojos proporcionan el oxígeno a los tejidos del cuerpo. su núcleo esta segmentado por 3 a 5 lóbulos conectados. los gránulos del citoplasma. los linfocitos B presentan antígenos a los linfocitos T que cooperan en los ganglios linfáticos y el bazo. este posee un tamaño de 10 a 15 um de diámetro. En su citoplasma podemos observar gránulos de lisosomas. estas células crecen fuera de control en la médula ósea y forman tumores en áreas de hueso sólido. Estos se dividen en dos grupos diferenciados por las proteínas de superficie. contienen enzimas lesivas para las paredes celulares de los parásitos e incluso para los tejidos del anfitrión. colagenasa y elastasa. Su diámetro puede variar entre 10 a 14 um con un núcleo voluminoso. vacuolas fagocíticas y filamentos citoesqueléticos. (Dr.2 . 5.Leucemia mielógena.) Describa las estructuras de las células leucocitarias Neutrófilos: son globulos blancos polimorfonucleares granulados. Basófilo: estos circulan en la sangre. y su citoplasma contiene gránulos con enzimas como la lisozima. Anemia aplásica. Cáncer de la médula osea. 2012. 4. Mieloma múltiple. su núcleo es esférico y ocupa la mayor parte de la célula. (Abbas A. Miden de 9 a 12 um.) . 3. Tango. Linfocitos: expresan receptores de antígeno distribuidos de forma clonal. con forma esférica y un tamaño de 12 a 15 um.

Haga la clasificación del origen de las células leucocitarias .

presentes en los carbohidratos por la acción del ácido peryódico. Negro B de Sudán . T c. es un poderoso agente oxidante.Evita el deterioro de la estructura celular Solución colorante I (Eosina G en tampón fosfato) . 2008) PAS La reacción de PAS o del ácido peryódico de Schiff rompe los enlaces -C-C. 2012. libera grupos aldehído que al combinarse con el reactivo de Schiff dan un compuesto de color rojo púrpura intenso. Se la utiliza en la diferenciación de diferentes tipos de leucemias linfoblásticas.) Que otras tinciones existen para observan células leucocitarias Set de coloración rápida para frotis sanguíneos Diff-Quik: Solución fijadora (Fast Green en metanol) . (Bioygeo. colaboradora Tk C.Tiñe de color azul-violeta oscuro los núcleos de las células y las granulaciones basófilas. Identifica al glucógeno en el citoplasma celular. dendrítica Progenitora de Progenitora de c. asesina natulas (NK) Progenitora linfoide C. en la eritroleucemia y en diversas mielodisplasias. dentritica Progenitora de granulocitos y monocitos Monocito Progenitora de Progenitora de eosinófilos basófilos Eosinófilos Basófilos Megacariocito Progenitora eritroide Eritrocito C.Celula madre hematopoyetic a autorrenovació n Progenitora mieloide C. B Neutrófilo Plauqetas Macrófago (Abbas A. B C.Tiñe de rosa pálido el citoplasma y las granulaciones acidófilas (eosinófilas) Solución colorante II (Tiazina en tampón fosfato) . T citotoxica Tc C. por tanto.

grado II: intensa actividad granular o actividad difusa distribuida por todo el citoplasma granulocítico. y las de tipo B o no-T-no-B suelen ser -. La mieloperoxidasa se sintetiza en el retículo endoplasmático rugoso.7 y 5. Los neutrófilos segmentados y sus precursores muestran unos gránulos gruesos en el citoplasma de color gris muy oscuro. de los cuales se liberan unos productos intermedios que combinados con una sal diazoica dan un precipitado coloreado. Se localiza sobre todo. en los gránulos primarios de los neutrófilos y precursores. bencidina. Fosfatasa alcalina La fosfatasa alcalina es una hidrolasa perteneciente al grupo de las fosfomonoesterasas. apareciendo un precipitado amarillo ocre en el lugar del citoplasma en donde se ha producido la reacción. en presencia de peróxido de hidrógeno. por tanto en un índice de actividad de FA podemos distinguir tres tipos de reacción: grado 0: sin actividad enzimática. El índice normal oscila entre 20 y 40. grado II=2. el cual libera unos productos intermedios que al unise con una sal diazoica se observa un precipitado de color rojo anaranjado en el citoplasma. El recuento se realiza sobre 100 granulocitos asignando a cada uno un grado.Es una coloración no enzimática útil en patología mieloide. La mieloperoxidasa se utiliza para discriminar entre celularidad blástica mieloide y linfoide. su pH óptimo de actuación está entre entre 4. hidroliza monoésteres del ácido fosfórico.5. actúa a un pH de 9. especialmente en la zona perinuclear. ya que los mieloblastos muy precoces sin estigmas de diferenciación mieloide ya pueden ser mieloperoxidasa positivos. así como en los gránulos de los eosinófilos y monocitos. grado I: con poca actividad enzimática en forma granular única o actividad débil difusa en una parte del citoplasma. ligeros ¯ de pH determinan una rápida inactivación de la enzima. colorea los gránulos azurófilos y determinados de los granulocitos y no disminuye su actividad con el tiempo.1 a 9. Tiñe los fosfolípidos y otros lípidos. Se encuentra actividad FA en algunas células maduras y semimaduras de la granulopoyesis neutrófila (bandas y segmentados). La actividad de la FA granulocítica se observa como un precipitado pardo negruzco ubicado en el citoplasma. La demostración citoquímica es la hidrólisis del substrato naftol-AS-Bifosfato.6. Fosfatasa ácida Es una enzima hidrolítica de las fosfomonoesterasas. La demostración citoquímica se basa en la hidrólisis de ciertos substratos. grado I=1. que tiene un valor mínimo de 0 y máximo de 200. Se suman los valores y el número obtenido es el índice de FAG. Existen varios grados de positividad. El 90% de las LAL de origen T dan una reacción + intensa de localización centrosómica. Se trata de una enzima de ubicación lisosómica. y a cada grado se la asocia un valor: grado 0=0. . y pasa a las cisternas del aparato de Golgi ubicándose esencialmente en la granulación 1ª o azurófila. . actúa sobre los ésteres del ácido fosfórico. Peroxidasa Su fundamento es la acción oxidante de la peroxidasa sobre el substrato.

. mientras que los individuos normales originan generalmente otros isotipos de Ig. (Abbas A. Séptima Edición. Inmunología celular y molecular. el cual se une a una sal diazoica y forma un azocolorante que se deposita sobre el sitio de actividad enzimática.. naftol-AS-D-acetato. BIBLIOGRAFÍA  Abbas A. lo que da lugar a reacciones contra las células y tejidos del cuerpo. 2012.las proteínas de la membrana de la plaqueta son atacadas por opsonización y fagocitosis lo que causa hemorragias en el cuerpo.- Esterasas Son enzimas lisosomales manifestadas en muchas células sanguíneas en cantidades variables.) Cuáles son las enfermedades autoinmunes y cuál es su causa Las enfermedades autoinmunes son aquellas causadas por la autoinmunidad del cuerpo.las proteínas de la membrana del eritrocito son atacadas por opsonización. 2012. que hidrolizados en presencia de una sal diazoica obtenemos precipitado insoluble en el lugar de la reacción. Se ha identificado más de 80 enfermedades de este tipo. Elsevier. Se pueden encontrar distintas variedades según el substrato empleado. de las cuales en su mayoría son hereditarias y atacan mas a mujeres que ha hombres. El antecuerpo IgE es responsable de la sensibilización de los mastocitos y proporciona el reconocimiento del antígeno en las reacciones de hipersensibilidad inmediata. (Abbas A. 2012. (Dr. esto se produce por el fallo de los mecanismos de tolerancia normales frente a lo propio.) CONCLUSIONES  Se pudo observar la presencia de células sanguíneas en el frotis realizado. Al utilizar como substrato el naftol-AS-C-cloroacetato (CAE) se detecta una esterasa que es específica de la granulopoyesis neutrófila en la que es + a partir del mieloblasto y se expresa en forma de un precipitado rojo anaranjado muy brillante. esto causa hemólisis y anemia. Como por ejemplo: Anemia hemolítica auntoinmune. Altafulla 2003) Que poblaciones celulares se encuentran aumentadas en alergias Los individuos atópicos producen cantidades elevadas de IgE en respuesta a alérgenos ambientales. como IgM y IgG. alfa-naftil-butirato. Ellas hidrolizan ésteres orgánicos y liberan el alcohol (naftol). Barcelona. Púrpura trombocitopénica autoinmune. y en poca cantidad IgE. alfa-naftil-acetato. España. fagocitosis y lisis mediada por el complemento. Se utiliza para reconocer células blásticas mieloides. si bien su aparición es más tardía que la de la mieloperoxidasa aunque iguala a ésta en especificidad. .  Algunas células comparten características en común por lo que no se pudo diferenciar todas las células existentes en el frotis sanguíneo. el sistema inmunológico no es capaz de diferenciar entre tejido sano y enfermo. Se utilizan 4 substratos: naftolAS-C-cloroacetato.

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