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INFORME NO 9 ACTIVIDAD ENZIMTICA Y FERMENTACIN

1) INTRODUCIN Durante los procesos biolgicos y el constante intercambio con el medio, se generan especies qumicas conocidas como radicales libres, se caracterizan por presenta un electrn desapareado y por ser muy reactivas. Los radicales resultan de gran inters por la especies reactivas derivadas del oxgeno ( EROS ), los principales eros son aniones superoxido ( 02 ), radical hidroxilo ( OH ) y el perxido de hidrogeno ( H2 02 ) Estas especies radicales estn implicadas en el dao celular de forma tal que las agresiones oxidantes pueden dirigirse hacia la carcinognesis, enfermedades inflamatorias, senectud celular y enfermedades neurodegenerativas entre otros procesos patolgicos. En nuestro organismo existe un sistema de proteccin antioxidante, formado por enzimas y compuestos de bajo peso molecular. Una de las enzimas que intervienen en la proteccin y mantenimiento oxidante/antioxidante es la enzima CATALASA. La catalasa se encuentra en las clulas de tejido animal y vegetal. La funcin en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular se forma una molcula toxica que es el perxido de hidrogeno ( agua oxigenada ) donde la catalasa la descompone en agua y oxgeno. Su funcin es proteger a las clulas del efecto perxido de hidrogeno, el H202 es catalizado enzimticamente en organismos anaerobios por la catalasa y peroxidasas. todas estas reacciones se dan en la clula gracias a la accin de ciertas enzimas, pero Qu pasara si no poseeramos enzimas y las reacciones se dieran por si solas? Todos los grandes estudios realizados nos muestran que tardaran no menos de 2 millones de aos. Esto nos lleva a comprender mejor la gran importancia que tienen las enzimas en el organismo.

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2) MARCO TERICO Las enzimas son molculas de naturaleza proteica cuya funcin es catalizar reacciones qumicas, es decir que una reaccin qumica que es energticamente posible, pero que transcurre a una velocidad muy baja, sea cinticamente mucho ms favorable, es decir, transcurra a mayor velocidad que sin la presencia de la enzima. Las molculas sobre las cuales actan las enzimas se llaman sustratos y luego de la reaccin lo que quedan son los productos. Las enzimas no alteran el balance energtico de las reacciones en que intervienen, ni modifican, por lo tanto, el equilibrio de la reaccin, pero consiguen acelerar el proceso incluso, como se mencion anteriormente, millones de veces.

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Estructura de las enzimas Generalmente las enzimas son protenas globulares que presentan diversos tamaos, varan desde los 62 aminocidos hasta unos 2500 como la sintasa de cidos grasos. La actividad de una enzima est determinada por su estructura tridimensional. La gran mayora de las enzimas son ms grandes que sus sustratos. A pesar de poseer grandes cantidades de aminocidos, tan solo unos pocos ( 3 o 4 ) estn involucrados directamente en la catlisis. Funciones Biolgicas Son importantes en la transduccin de seales y en procesos de regulacin, usualmente a travs de quinasas y fosfatasas. Adems son capaces de producir movimiento, como es el caso de la miosina al hidrolizar ATP para generar la contraccin muscular el movimiento de vesculas por medio del citoesqueleto.70 Otro tipo de ATPasas en la membrana celular son las bombas de iones implicadas en procesos de transporte activo. Adems, las enzimas tambin estn implicadas en funciones mucho ms exticas, como la produccin de luz por la luciferasa en las lucirnagas. Los virus tambin pueden contener enzimas implicadas en la infeccin celular, como es el caso de la integrasa del virus HIV y de la transcriptasa inversa, o en la liberacin viral, como la neuraminidasa del virus de la gripe. Quiz el papel ms importante que cumplen las enzimas es en el sistema digestivo animal, enzimas como las amilasas y las proteasas son capaces de hidrolizar molculas grandes como las protenas y el almidn en simples aminocidos y monosacridos, ya que estas ltimas si pueden ser absorbidas por las clulas del intestino humano y las primeras no debido a su elevado peso molecular. Cofactores y Coenzimas Ciertas enzimas requieren la unin de molculas no proteicas llamadas cofactores para poder ejercer su actividad. Los cofactores pueden ser compuestos inorgnicos, como MANUEL GONDRA RAMOS Y SILVANA TEJEDA LAVADO3

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los iones metlicos y los complejos ferrosulfurosos, o compuestos orgnicos, como la flavina o el grupo hemo. Las coenzimas son pequeas molculas orgnicas que transportan grupos qumicos de una enzima a otra. La fermentacin es un tipo de proceso catablico de oxidacin incompleta, por lo cual no requiere oxgeno, siendo el producto final un compuesto orgnico. Los productos finales son diferentes, dependiendo del tipo de fermentacin. Fue descubierta por Louis Pasteur, la ms comn de la fermentacin es llevada a cabo por las levaduras. Tambin se utilizan algunos metazoos y protistas . El proceso de fermentacin es anaerbico esto quiere decir que se produce en ausencia de oxigeno; ello significa que el aceptor final de los electrones del NADH producido en la gluclisis no es el oxgeno, sino un compuesto orgnico que se reducir para luego reoxidar el NADH a NAD+. El compuesto orgnico que se reduce es un derivado del sustrato que se ha oxidado anteriormente. Tipos de fermentacin Fermentacin alcohlica: es el tipo de fermentacin en la cual a partir de los carbohidratos se obtiene un alcohol etanol y el dixido de carbono en forma de gas Fermentacin lctica: es un tipo de ruta metablica que se da en el citosol, en el cual la molcula de glucosa se oxida parcialmente con el fin de obtener energa, el producto final es el cido lctico. Fermentacin butrica: es la transformacin de los glcidos en cido butrico por accin de bacterias de la especie Clostridium butyricum en ausencia de oxgeno.

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3) OBJETIVOS Comprobar la presencia de enzima catalasa en tejidos animales y vegetales, observando la liberacin de oxgeno al agregar perxido de hidrgeno. Comprobar la desnaturalizacin de la enzima catalasa en los tejidos animales y vegetales, debida a la accin del calor.

4) MATERIALES Muestras: Papa, frutas, canelas, azcar, hgado de pollo Perxido de hidrogeno Estuche de diseccin, hojas de bistur Mortero y piln Agua destilada Mechero y fsforos Levadura Hisopos de madera Pipetas Tubos de ensayo

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5) PROCEDIMIENTOS Y RESULTADOS
5.1 Actividad enzimtica - En tubos de ensayo limpios colocar un trozo de papa, un trozo de hgado, hgado triturado, hgado triturado y cocido o dixido de magnesio. - Agregar gotas de perxido de hidrogeno a uno de los tubos. - Inmediatamente prender los palillos con ayuda de un mechero e introducirlos en el tubo. Observar que sucede con la llama. - Repetir el mismo procedimiento con el resto de los tubos. - Interpretar

EXPERIENCIA 1
Rotular 3 tubos de ensayo colocar un trozo de papa e hgado del mismo tamao de las siguiente manera :

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01 TUBO DE ENSAYO CON PAPA TRITURADA , 02 TUBO DE ENSAYO CON UN TROZO DE PAPA, 03 TUBO DE ENSAYO CON PAPA COCIDA
01 tubo de ensayo con hgado de pollo triturado ,02 tubo de ensayo con hgado de pollo y 03 tubo de ensayo con hgado de pollo cocido mediante un mechero por un minuto.

Se corta en trozos la papa y el hgado de pollo.

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se tritura en el mortero un 1 pedazo de hgado y 1 pedazo de papa para los tubos de ensayo.

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Se introducen en los tubos de ensayo los trozos de papa e hgado, asi mismo se introducen los trozos triturados de los mismos, en otros tubos.

Se proceder a echar gotas de PEROXIDO DE HIDROGENO ( agua oxigenada ) y se observara la reaccin.

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Se observa la reaccin en la muestra de la papa :

Se observa en la muestra 01 ( papa triturada ) que hay mucha efervescencia por la reaccin de la enzima catalasa, liberando oxigeno En la muestra 02 ( papa en trozos ) se observa menor cantidad de burbujeo por la demora de la accin de la enzima catalasa liberando oxigeno en menor proporcin. Se proceder a prender fuego mediante un mechero o contacto directo hacia el tubo de ensayo No se observa ninguna reaccin porque se ha desnaturalizado la enzima y ha perdido toda funcin de reaccin. Se proceder luego a prender fuego a los tubos de papa con diferentes reacciones

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Se observa que el tubo 01 ( papa triturada ) al introducirle el fuego y se encendio el tubo en menor cantidad entonces hubo reaccin de catalasa con desprendimiento de 02 y agua. De la misma forma el tubo 02 hubo liberacin de 02 y en el tubo 03 no hubo ningn tipo de reaccin porque ya se haba desnaturalizado

EXPERIENCIA 2 Rotular 3 tubos de ensayo colocar un trozo de hgado del mismo tamao de las siguiente manera :

01 TUBO DE ENSAYO CON HIGADO EN TROZOS, 02 TUBO DE ENSAYO CON UN TROZO DE HIGADO TRITURADO, 03 TUBO DE ENSAYO CON HIGADO COCIDO.

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Del mismo modo que en la papa se proceder a agregar PEROXIDO DE HIDROGENO a las muestras con higado.

Se observa la reaccin del higado de pollo en los diferentes tubos

. Se observa que el tubo 01 con higado en trozos reacciono en menor grado y el tubo 02 con higado triturado hubo una mayor reaccin con presencia de burbujas. MANUEL GONDRA RAMOS Y SILVANA TEJEDA LAVADO13

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En el tubo 02 e inclusive sube por las paredes del tubo de ensayo la reaccin y se nota una efervescencia mayor.

Ahora se proceder a prender fuego directo al tubo de ensayo con trozos de higado y se observa la reaccin.

Luego se proceder a agregarle PEROXIDO DE HIDROGENO varios ml, y se observa la reaccin.

Al tubo de ensayo con higado cocido no se observo nigun tipo de reaccin porque la muestra ya se haba desnatualizado

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6) INTERPRETACIN DE RESULTADOS 6.1 EXPERIENCIA 1 ( CONCLUSIONES )

TUBO 01 ( PAPA TRITURADA ) Existe un burbujeo abundante pero mas lento que el del higado. Hay liberacin de oxigeno. Existe una liberacin de oxigeno por lo que es una reaccin exotrmica. Reacciona en mayor proporcin que en los dems tubos de ensayo con papa

TUBO 02 ( TROZOS DE PAPA) Exsite una reaccin en menor proporcin que en el tubo de ensayo papa sanchada Exsite liberacin de oxigeno.por lo que es una reaccin exotermica

TUBO 03 ( PAPA COCIDA ) No existe ningn tipo de reaacion

6.2 EXPERIENCIA 2

( CONCLUSIONES )

TUBO 01 ( HIGADO DE POLLO EN TROZOS )

Se puede observar una pigmentacin, de color caf obscuro a uno ms claro, junto con burbujeo lento. Olor desagradable. Al termino de la reaccin se pudo sentir la presencia de calor, es decir, que esta reaccin es de tipo exotrmica. Las burbujas no fueron muy abundantes y el hgado de pollo sufri un cambio fsico evidente, se coci.
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Se verifico que el hgado posee catalasa observando como se liberaba una cantidad de burbujeo y se decoloraba el hgado, esto como producto de la reaccin entre el sitio activo del sustrato y la catalasa la cual se encarga de descomponer el perxido de hidrgeno en agua y oxgeno.

TUBO 02 ( HIGADO DE POLLO TRITURADO )

Hay pigmentacin, se aclara, empieza inmediatamente el burbujeo, an ms rpido, gran liberacin de oxgeno. El olor es ms fuerte que en la anterior. La abundancia de espuma permaneci aun despus del termino de la reaccin, tambin liber calor por lo tanto es una reaccin de tipo exotrmica. En este caso hay mayor burbujeo porque el sitio activo del sustrato est ms expuesto al macerar el trozo de hgado dando como resultado una mayor pigmentacin y burbujeo ms rpido.

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TUBO 03 ( HIGADO DE POLLO SANCOCHADO ) No se observa ninguna reaccin, esto se debe por lo mencionado anteriormente, hay desnaturalizacin por lo que no hay burbujeo ya que al hervir el hgado ya no permiti ningn tipo de reaccin. Al hervir el trozo de hgado lo que hicimos es que al exponer la enzima a una mayor temperatura se desnaturaliza, habiendo prdida en las propiedades biolgicas y como producto de la desnaturalizacin del sitio activo ya no se cumplir ninguna funcin y la reaccin no se llevara a cabo.

ESQUEMA DEL TRABAJO

1. reconocimiento de la catalasa:
La catalasa es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos animales y vegetales. La funcin de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular, se forma una molcula txica que es el perxido de hidrgeno, H2O2 (agua oxigenada). Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y oxgeno, por lo que se soluciona el problema. MANUEL GONDRA RAMOS Y SILVANA TEJEDA LAVADO17

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reaccin de la catalasa sobre el H2O2, es la siguiente:

La existencia de la catalasa en los tejidos animales, se provecha para utilizar el agua oxigenada como desinfectante cuando se echa sobre una herida. Como mucho de las bacterias patgenas son anaerobias (no puede vivir con oxigeno), mueren con el desprendimiento del oxigeno que se produce cuando la catalasa de los tejidos acta sobre el agua oxigenada. En los ejercicios siguientes se estudiar el funcionamiento de la catalasa. Esta enzima est presente en casi todas las clulas aerbicas y acta descomponiendo

perxido de hidrgeno (agua oxigenada) en agua y oxgeno, segn la siguiente


reaccin:

Para preparar los homogenados, corte en pedazos por separado las muestras de papa, hgado,

Usar el mortero, muela el material con un poco de agua hasta diluir parte de la muestra; no muela excesivamente para que no queden pedazos muy pequeos del material.

Colocar en el tubo de ensayo 1 varios trocitos de hgado,

MANUEL GONDRA RAMOS Y SILVANA TEJEDA LAVADO18 Aadir 5ml de agua oxigenada.

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2. Desnaturalizacin de la Catalasa:
Mediante esta experiencia vamos a ver una propiedad fundamental de protenas, que es la desnaturalizacin. Ya que la catalasa qumicamente es una protena, podemos desnaturalizarla al someterla a altas temperaturas. Al perder la estructura terciaria, perder tambin la funcin y como consecuencia su funcin cataltica, por lo que no podr descomponer el agua oxigenada y no se observara ningn tipo de reaccin cuando hagamos la experiencia anterior con muestras de tejidos hervidos.

Colocar en un tubo de ensayo varios trocitos de hgado.

Aadir agua para hervir la muestra. Hervir durante unos minutos.

Despus de este tiempo, retirar el agua sobrante.

Aadir 3ml de agua oxigenada.

La catalasa qumicamente es una protena, podemos desnaturalizarla al someterla a altas temperaturas.


Al perder la estructura terciaria, pierde tambin la funcin y como consecuencia su funcin cataltica.

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7) CUESTIONARIO 1. Qu es el sitio activo? El sitio o centro activo es la parte de la enzima en la que se realiza el sustrato para producir la catlisis y convertirlo en productos. La reaccin especfica que una enzima controla depende de un rea de su estructura terciaria. En el sitio activo ocurren las actividades con otras molculas. Por esta razn en el sitio activo solo se pueden unir ciertas molculas. Las molculas del sustrato se unen al sitio activo, donde tiene lugar la catlisis. La estructura tridimensional de ste es lo que determina la especificidad de las enzimas. Dentro del centro activo hay aminocidos que intervienen en la unin con los sustratos llamados residuos de unin, mientras que los que participan de forma activa en la transformacin qumica del sustrato se conocen como residuos catalticos. 2. Qu es un zimgeno? El zimgeno o llamado tambin pro enzima es un precursor enzimtico inactivo, es decir, no puede realizar ninguna reaccin de catalizacin. Para activarse, necesita de un cambio en su estructura para tener un sitio activo que le permita fijar sustratos. En ese momento, el zimgeno pasa a ser una enzima activa. El cambio bioqumico suele ocurrir en un lisosoma, donde una parte especfica de la enzima precursora se escinde del resto para activarla. La cadena de aminocidos que se libera por la activacin se llama pptida de activacin. 3. Qu enzimas son utilizadas en el diagnstico clnico? He aqu una lista de algunas enzimas utilizadas en un diagnstico clnico: Alfa glutamil - transferasa (alfa - GT). elevada en enfermedades hetatobiliares y en el alcoholismo. Es la utilizada para evaluar el funcionamiento heptico sobre todo en los pacientes alcohlicos. MANUEL GONDRA RAMOS Y SILVANA TEJEDA LAVADO20 Acetilcolinesterasa. disminuida tras la intoxicacin o envenenamiento con insecticidas o elementos organofosforados.

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Fosfatasa alcalina. elevada en las hepatopatas. La amilasa. Son enzimas que catalizan la hidrlisis de los polisacridos. Esta enzima es importante ya que si hay presencia de esta en la orina nos da un sntoma de diabetes Lactato deshidrogenado (LDH). Se encuentra en concentraciones elevadas en patologas musculares, cardacas, renales, hepticas y en anemias hemolticas. 7.4 Describa y de ejemplos de los tipos de fermentaciones Fermentacin alcohlica Es el tipo de fermentacin en la cual a partir de los carbohidratos se obtiene un alcohol etanol y el dixido de carbono en forma de gas La elaboracin del vino pasa por una fermentacin alcohlica de las uvas. Hay 2 etapas, la primera llamada fermentacin tumultuosa debido a gran ebullicin que produce durante un periodo de 10 das aproximadamente (llegando hasta aproximadamente unas dos semanas). Tras esta fermentacin principal se da una fermentacin secundaria que se produce en otros contenedores empleados en el trasiego del vino joven. La temperatura a la cual se da esta reaccin depende el tipo de vino, el vino blanco produce reacciones a una temperatura ms baja que el vino tinto. Fermentacin lctica Es un tipo de ruta metablica que se da en el citosol, en el cual la molcula de glucosa se oxida parcialmente con el fin de obtener energa, el producto final es el cido lctico. Un tipo de esta fermentacin es la acidificacin de la leche. Algunas bacterias al desarrollarse en la leche utilizan a la lactosa como su fuente de energa. Para producir energa se tiene que fermentar la lactosa, teniendo como producto el cido lctico que es eliminado. La coagulacin de la leche resulta de la precipitacin de las protenas y un cambio brusco de pH.

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CONCLUSIN

La catalasa es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos animales y vegetales. La funcin de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular, se forma una molcula txica que es el perxido de hidrgeno, H2O2 (agua oxigenada). Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y oxgeno evitando la toxicidad. la catalasa qumicamente es una protena, podemos desnaturalizarla al someterla a altas temperaturas. Al perder la estructura terciaria, perder tambin la funcin y como consecuencia su funcin cataltica, por lo que no podr descomponer el agua oxigenada y no se observara ningn tipo de reaccin el agua oxigenada Es un lquido transparente e incoloro; es agua con una molcula extra de oxgeno: H2O2.. Su nombre qumico es perxido de hidrgeno: El perxido de hidrgeno es uno de los productos del metabolismo celular en diversos organismos, pero dada su potencial toxicidad, es transformado enseguida por la enzima catalasa. El burbujeo intenso observado en ambas reacciones (papa-hgado), muestra el oxigeno liberado por la accin ejercida sobre el agua oxigenada gracias a la catalasa. Entre mas peroxisomas contenga un tejido, ya sea vegetal o animal, la reaccin con el agua oxigenada ser mayor. El hgado reacciono de manera ms rpida y ms notoria por que posee una cantidad mayor de peroxisomas en el tejido que la papa. La accin de la catalasa permite inhibir las propiedades oxidativas que pueda tener alguna sustancia. Esta las descompone en agua y oxigeno.

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El hgado posee ms catalasa en su clula que la papa, debido a que su funcin bsica del hgado es la destoxificacin.

La temperatura es otro factor importante en la actividad enzimtica. Se puede decir que a mayor temperatura aumenta la velocidad de la reaccin hasta que llega un punto en el que la velocidad disminuye con el aumento en el calor.

BIBLIOGRAFIA

ORTIZ R L Y. Guas de Laboratorio de Bioqumica. Facultad de Ciencias e Ingeniera. Unillanos

Hernndez Gil Rubn, PhD. Profesor de Fisiologa Vegetal, Departamento de Botnica, Facultad de Ciencias Forestales y Ambientales. Universidad de Los Andes - Mrida Venezuela. Libro Botnica Online ENZIMAS con la direccin: http://www.forest.ula.ve/~rubenhg/enzimas/index.html http://es.scribd.com/doc/38505205/Fermentacion-laboratorio-2 http://www.buenastareas.com/materias/fermentacion-y-actividadenzimatica-en-la-microbiologia-industrial-y-en-la-agricultura/0 http://es.scribd.com/doc/99153410/FERMENTACIONENZIMATICA www.juntadeandalucia.es/averroes. http://www.mhhe.com/physsci/chemistry/chang

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