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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA E.A.P ING.

AGROINDUSTRIAL

PRACTICA: Practica de Laboratorio N° 03 NOMBRE: Preparación de Medios de Cultivo ALUMNO: Dylan Paolo Alvarado Salgado DOCENTE: Eterio Alva Muñoz GRUPO: “B” ; IV Ciclo

fósforo y sales inorgánicas. La composición precisa del medio de cultivo dependerá del microorganismo que se quiera cultivar. Aunque los medios artificiales o sintéticos se pueden preparar a partir de sus componentes individuales. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas. El fabricante indica la composición. De acuerdo a su consistencia. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento.5 a 2% de agar en su formulación. los medios de cultivo pueden clasificarse en: Líquido: Se denominan caldos de cultivo y no tienen agar en su formulación. suero o sangre para crecer. y la cantidad que debe pesarse por cada litro a preparar e incluso como debe esterilizarse. se pueden adquirir comercialmente como medios deshidratados a los que solamente hay que añadir la cantidad de agua necesaria. Durante las prácticas se van a manejar medios de cultivo de composición muy variada y de tres tipos diferentes en cuanto a ingredientes. por ejemplo. Se utilizan para estudiar la movilidad de las bacterias (presencia o ausencia de flagelo).5% de agar en su formulación. por lo que las necesidades nutricionales tienden a variar de al tipo de microorganismo. Los medios de cultivo contienen como mínimo: carbono. Sólidos: Contienen de 1. Se disuelve completamente a 100°C y se solidifica al enfriarse a 42°C. Estos medios inmovilizan a las células. la caducidad. Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y deben estar exentos de cualquier microorganismo contaminante. nitrógeno. la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras. Semisólidos: Contienen 0. INTRODUCCIÓN El medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el desarrollo de los microorganismos el cual constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos. azufre. permitiéndoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias. El agar es el principal agente solidificante utilizado en los medios de cultivo.PRACTICA Nº3 Preparación de Medios de Cultivo I. Este último aspecto es importante a la hora de la preparación de los mismos. También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar. .

3.1. Manejar los instrumentos de uso rutinario.II.1. Reactivos para: Agar común. Caldo común y Agar Sabouraud. OBJETIVOS OBJETIVOS GENERALES   Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de los microorganismos in vitro. a la vez que imprescindibles. en el laboratorio de microbiología OBJETIVOS ESPECIFICOS      III. Preparar medios de uso general en el laboratorio Conocer los nutrientes en cada medio preparado y su función que ejerce cada uno.2. Material de vidrio   Balón de fondo plano Bureta 3.       Peptona Cloruro de sodio (NaCl) Extracto de carne Glucosa Agar Agar Agua destilada 3. MATERIAL 3.1.1. Equipo    Balanza Autoclave Cocina eléctrica .1. Identificar colonias bacterianas en forma macroscópica Conocer los materiales que utilizan en la preparación de medios de cultivo Conocer el modo de acción del autoclave y su funcionamiento MATERIAL Y MÉTODOS 3.

2.  Método explicativo: Dentro de este método están las exposiciones que cada grupo hacía de su trabajo asignado. METODOS  División de alumnos en grupos: Lo que aquí se hizo es dividir a los alumnos en dos grupos. hablaban de su trabajo en forma detalla pero de manera personalizada (solo explicaban a las personas que se les acercaban a preguntar).4 Otros      Algodón Pabilo Gasa Tijera Papel 3. y designo un trabajo específico para cada grupo.  Método observativo: En los pequeños momentos que se tenía libre cada alumno recorría a los demás grupos observando y haciendo los apuntes que creía conveniente de los trabajos que se estaban realizando. .1.3.

Guardar en el refrigerador para utilizar la siguiente práctica. Las cajas no pueden ser destapadas a menos que sea entre los mecheros o dentro de la campana de flujo laminar. La autoclave se abre desde atrás. 3. grupo y fecha de elaboración. Transcurridos los 15minutos. en caso contrario se hará automáticamente 5. 9. Otra modalidad consiste en repartir el medio en los tubos y esterilizar después. Si es que no tiene termostato. A partir de este momento. desconecta la autoclave. la inclinación que deben tomar al tiempo de ser empleados: la finalidad de esta inclinación es la de conseguir una mayor superficie de siembra. sacar el matraz. procurando que nadie quede de frente hacia donde se abre la tapa. PROCEDIMIENTO 1. .IV. calculando las cantidades en relación a los volúmenes requeridos. Vaciar el medio en las cajas de Petri estériles siguiendo la técnica aséptica. se cierran adecuadamente y se etiquetan con el tipo de medio. Tratándose de medios solidos se procede a licuarlos previamente en bañomaría. ¡Antes no ya que podría explotar! 6. ni se sacan del área de esterilidad. En este caso. 2. deberás tomar el tiempo de 15 minutos. nunca rebase los 20 lb/in2. Ya sólidas. Esto se puede controlar conectando y desconectando la autoclave. Las tapas no se tocan por dentro con los dedos. con ayuda del trapo. el reparto en tubos y placas Petri se hace cuando el medio se va a utilizar. Vaciar el agua de la autoclave con cuidado de no quemarse Los medios líquidos se reparten en tubos en ambiente estéril y siempre frente a una llama (Mechero de Bunsen o alcohol). Comienza a abrir la válvula para liberar el vapor y que la presión comience a bajar. Pesar las sustancias indicadas en las formulas respectivas. 7. equipo. y 250ºF o su equivalente de (15´ x 1atmósfera x 121ºC). 8. Deberás tener cuidado de que la presión de la autoclave. Disolverlas en la cantidad de agua destilada necesaria llevando a ebullición. 15 lb/in2. Prender la autoclave y esperar a que llegue a 250ºF y 15 lb/in2. ni está por debajo de los 15 lb/in2. Colocar los medios preparados dentro del autoclave pata esterilizarlos durante 15 minutos. ya que saldrá mucho vapor caliente que causa quemaduras. Una vez que se abrió con cuidado. Comprobar la esterilidad en estufa a 37ºC durante 24 horas. 4. La autoclave puede abrirse únicamente cuando el manómetro marque cero. También es usual esterilizar en frascos grandes y almacenar. En el caso de los medios sólidos se repartirá en placa Petri un promedio de 10cm y en tubo. se les dará antes de que enfríen y solidifique.

Por ser el Agar Comun un medio enriquecido permitirá el crecimiento de bacterias tanto patógenas como saprofitas. por esto es importante trabajar con las mayores condiciones de asepsia para garantizar que no hay crecimiento de microorganismos contaminantes que puedan ocasionar un resultado erróneo.3. Este medio es recomendado en el cultivo de hongos. Medio de cultivo color ámbar oscuro. Es un medio de uso general que permite el crecimiento tanto de gérmenes exigentes como no. El propósito general del agar es adaptar el medio para esas bacterias específicas. Es también un medio selectivo que impide en crecimiento de otro tipo de microorganismos. Es un Medio solido   AGAR SABORAUD  Medio para la detección y aislamiento de hongos en muestras mediante técnica de filtración por membrana.6).V. RESULTADOS  CALDO COMUN:      Este medio es bastante bueno para el cultivo de gérmenes que no presentan exigencias particulares. No es diferencial. Se ajusta el pH a 7. Para lograrlo de la manera más efectiva.  AGAR COMUN:    Es un medio de cultivo de uso general para microorganismos poco exigentes. Para que ocurra el crecimiento selectivo de hongos sobre bacterias en la muestra depende tan solo de la reacción ácida (pH 5. ya que su pH bajo favorece el crecimiento de éstos. es importante utilizar un medio de crecimiento que se asemeje lo más posible al medio natural. Es un MEDIO LIQUIDO Un color amarillo claro. El caldo de cultivo con agar se denomina agar nutritivo. Medio de cultivo color ámbar claro   . Se disolví rápidamente Los microbiólogos necesitan cultivar bacterias en el laboratorio por varias de razones para llevar a cabo experimentos sobre investigaciones.

.Como se puede apreciar en la imagen los tres medios de cultivo se tornan en distintos tonos amarillentos.

así como las condiciones que estos deben de reunir. durante y después de la preparación de un medio de cultivo. de acuerdo a esto se procedió a la preparación de dos medios siguiendo los requerimientos exigidos por estos. gracias a que proporcionan sustancias nutritivas.VI. de que materiales pueden ser hechos. El procedimiento para la preparación de cualquier medio de cultivo debe realizarse rigurosamente para no contaminar el medio. sus características principales. de Los medios de cultivos se pueden clasificar de acuerdo al porcentaje de Agar en tres grupos: medios sólidos. así como su clasificación. en otras ocasiones. DISCUSIONES o o o Los medios de cultivos permiten el crecimiento y desarrollo microorganismos. se obtuvo que los dos medios preparados. o VII. medios semi-sólidos y medios líquidos. los distintos tipos de cultivos que pueden desarrollarse en el laboratorio. la alteración resulta beneficiosa debido a la adquisición de nuevas propiedades fisicoquímicas de interés organoléptico o de conservación (que impidan la colonización por otros microorganismos). los distintos tipos que pueden servir para identificar diferentes bacterias.  El procedimiento que se llevo a cabo tuvo como objetivo aprender sobre la preparación adecuada de un medio de cultivo dependiendo de los nutrimentos básicos y factores físicos que requiere un microorganismo para su desarrollo. o Por el contrario. CONCLUSIONES  En esta práctica se aprendió la importancia de preparar medios de cultivo. Las siguientes prácticas se centran en la detección de microorganismos en el propio alimento y además se describen técnicas sencillas para estudiar el papel de los microorganismos en la producción de alimentos.  Se reconocieron los diferentes medios de cultivo existentes para el crecimiento de microorganismos aplicando conceptos básicos de nutrición y preparación de los mismos. . además se desarrollaron competencias que deben tenerse en cuenta antes.

1 Desempeñan importantes funciones catalizadoras en el metabolismo como cofactores enzimáticos. Los principales son glúcidos. Son indispensables para los diferentes procesos metabólicos de los organismos vivos y sin ellos morirían. proteínas. Es decir es lo que al cuerpo le falta lo que no hay demasiado. Este término se utiliza principalmente en el campo de la petrología ígnea. un elemento traza también puede ser referido como micronutriente. 1. un elemento traza en un compuesto químico que es necesario en cantidades ínfimas para el crecimiento. CUESTIONARIO a) Glosario: Define los siguientes términos: . Elemento traza: Un elemento traza puede hacer referencia a diferentes cosas. En los animales engloba las . Macronutrientes: Son aquellos nutrientes que suministran la mayor parte de la energía metabólica del organismo. En nutrición los macronutrientes que suministran la mayor parte de la energía en los alimentos de las cuales depende la vida son los nutrientes.1% de la composición de una roca. Micronutrientes: Se conocen como "micronutrientes" a las sustancias que el organismo de los seres vivos necesitan en pequeñas dosis. según el campo del saber en el que sea utilizado. al formar parte de la estructura de numerosas enzimas (grupos prostéticos) o al acompañarlas (coenzimas). o menor de 100 microgramos por gramo. En geoquímica. 2. un elemento traza es un elemento presente en una muestra que posee una media de concentración menor de 100 partes por millón. Se diferencian de los micronutrientes las vitaminas y minerales en que estos son necesarios en pequeñas cantidades para mantener la salud pero no para producir energía. desarrollo y fisiología de un organismo.VIII.1 En este campo. 3. Otros incluyen alcohol y ácidos orgánicos. En bioquímica. y lípidos. Estos proporcionan la energía y los materiales de construcción para las innumerables sustancias que son esenciales para el crecimiento y la supervivencia de las cosas vivas. un elemento traza es un elemento químico cuya concentración es menor de 1000 partes por millón ó menor del 0. En química analítica. realizando la medición en un contador atómico.

ciertas vitaminas y a veces carbohidratos. En la antigüedad. y en la industria quimicofarmaceutica y de la medicina. Para uso en laboratorio. Peptona: Las peptonas son polipéptidos formados durante la degradación enzimática de proteínas. algunos micronutrientes es suficiente con que se les suministre una vez en la vida. es comúnmente usada como condimento y conservante de comida. También es el mayor componente de la sal comestible. También era el salario de un esclavo ya que se entregaba una pequeña bolsa con sal. Es muy higroscópica y por tanto se altera con facilidad en contacto con aire húmedo. la peptona se presenta como un polvo amorfo. por ejemplo. por lo que la palabra asalariado tiene un significado etimológicamente peyorativo. Es soluble en agua e insoluble en etanol y éter. 4. esponjosas. o en su forma mineral halita. De hecho en países pobres se suministra a los niños una pastilla al año que cubre todas sus necesidades de vitamina A en ese periodo. Estos últimos se necesitan en una dosis aún menor. es un compuesto químico con la fórmula NaCl. por lo cual se dice que están purificados y son utilizados en laboratorios. Reactivo grado reactivo o químicamente puro: Son aquellos reactivos químicos cuyo grado de impureza es mínimo. Contienen aminoácidos libres y cadenas cortas de péptidos. 6. más conocido como sal de mesa. Son la principal fuente de nitrógeno en el medio orgánico para el cultivo de bacterias. con olor característico que recuerda al de la carne asada. Simplemente con el contenido de él que hay en la semilla. Para que se produzca deficiencia se deberían cultivar varias generaciones en ausencia de ese mineral. de color blanco amarillento o amarillo parduzco. seria mejor sumistrales una dosis cada 6 meses.vitaminas y minerales y estos últimos se dividen en minerales y oligoelementos.En plantas. El cloruro de sodio es una de las sales responsable de la salinidad del océano y del fluido extracelular de muchos organismos. el cloruro de sodio era muy apetecido como un bien transable y como condimento. 5. Cloruro de sodio: El cloruro de sodio.Los micronutrientes no siempre necesitan ser aportados diariamente. La vitamina A y D o la B12 pueden almacenarse en el hígado para cubrir las necesidades de periodos superiores al año. En algunos casos como el del sodio pueden ser aportados solo por tocar una hoja de una planta. . El sudor de los dedos contiene suficiente sal y hace el efecto de un abono foliar. o bien como escamas o masas irregulares. de sabor amargo (peptona pancreática) o amargo y salado (peptona pépsica). y se remuneraba en la época preclásica romana a los soldados que construían la Vía Salaria que empezaba en las canteras de Ostia hasta Roma con un generoso salarium argentum. Idealmente.

helados y algunos postres y como agente aclarador de la cerveza. gelatinas vegetales. Los polisacáridos de agar sirven como la estructura primaria de la pared celular de las algas. extractum carnis Liebig. Liebig se especializó en la clasificación de la comida y escribió un ensayo sobre cómo cocer la carne sin destruir su valor nutricional. en 1840 desarrolló un extracto de vaca concentrado. Es una forma de azúcar que se encuentra libre en las frutas y en la miel. gelatina japonesa. También es conocido por los siguientes nombres: gelosa. Su uso principal es como medio de cultivo en microbiología. Aunque ambas clases de polisacáridos comparten el mismo esqueleto de galactosa. lo que lo hacía demasiado caro. Extracto de carne: El extracto de carne es un caldo de carne muy concentrado. se necesitaban 30 kg de carne para producir 1 kg de extracto.7. si bien la D-glucosa es predominante en la naturaleza. es decir. normalmente de vacuno. El extracto de carne fue inventado por barón Justus von Liebig. 9. espesante para sopas. La aldohexosa glucosa posee dos enantiómeros. pero no para virus (aunque los virus bacteriófagos crecen frecuentemente en bacterias cultivadas en agar). etc. tales como sulfato y piruvato. Su rendimiento energético es de 3. Glucosa: La glucosa es un monosacárido con fórmula molecular C6H12O6. gelatina vegetal. gelatina china. para proveer de un sustituto barato y nutritivo de la carne a quienes no podían adquirirla. Por desgracia. y para elaborar consomés y sopas. el grupo carbonilo está en el extremo de la molécula (es un grupo aldehído). Es un isómero de la fructosa. contiene 6 átomos de carbono. En terminología de la industria alimentaria suele denominarse dextrosa (término procedente de «glucosa dextrorrotatoria») a este compuesto. otros usos son como laxante. 8. en realidad es una mezcla heterogénea de dos clases de polisacáridos: agaropectina y agarosa. que se utiliza en la mayoría de los medios de cultivo ya que además no tiene valor nutritivo para los microorganismos. Movido por ell deseo de ayudar a los desnutridos. la agaropectina está modificada con grupos ácidos. y es una aldosa. gelosina. Es una hexosa. el químico orgánico alemán del siglo XIX. El agar nutritivo es usado como medio de cultivo para el crecimiento de bacterias y hongos. . esto es.75 kilocalorías por cada gramo en condiciones estándar. Agar: Químicamente el agar es un polímero de subunidades de galactosa. Se usa para dar sabor a carne a diversas recetas. con diferente posición relativa de los grupos -OH y =O. Disuelto en agua caliente y enfriado se vuelve gelatinoso.

cosa que lleva a su destrucción.0 ±0.4 Peptona Glucosa Agar 10 40 15 1l 5. aunque varios se relacionan con la destrucción de los microorganismos con fines de conservación de alimentos. La palabra autoclave no se limita a los equipos que funcionan con vapor de agua ya que los equipos utilizados para esterilizar con óxido de etileno se denominan de la misma forma. una cocción o una esterilización con vapor de agua. equipos que funcionan por el mismo principio tienen otros usos.2 7.Extracto de carne .6±0. Su construcción debe ser tal que resista la presión y temperatura desarrollada en su interior.10. medicamentos. La acción conjunta de la temperatura y el vapor produce la coagulación de las proteínas de los microorganismos. La presión elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a los 100 °C. entre ellas las esenciales para la vida y la reproducción de éstos. y otros productos. b) Haz un diagrama de flujo del procedimiento a seguir en esta práctica: Agar común Ingredientes (g/L) .2-7.Peptona .2 . En el ámbito industrial.Agar Agua destilada pH Caldo común Agar Sabouraud 5gr Peptona 5 5gr NaCl 5 3gr extracto de Carne 3 15 1l 1l 7. Autoclave: Un autoclave es un recipiente de presión metálico de paredes gruesas con un cierre hermético que permite trabajar a alta presión para realizar una reacción industrial.NaCl .

25 gramos Extracto de carne AÑADIR AÑADIR En el mismo papel COLOCAR En papel En el mismo papel 0.15 gramos PESAR En la balanza COLOCAR En una fiola con 0.25 ml de agua destilada HECHAR Agua destilada por las paredes DISOLVER CALENTAR Para poder disolverlo hasta su ebullición .Pectona 0.3 gramos Cloruro de sodio 0.

15 gramos Agar 0.3 gramos Cloruro de sodio 0. AGAR COMUN Pectona 0.25 gramos Extracto de carne AÑADIR 0.75 gramos AÑADIR En el mismo papel AÑADIR En el mismo papel COLOCAR En papel En el mismo papel PESAR En la balanza COLOCAR En una fiola con 0.25 ml de agua destilada HECHAR Agua destilada por las paredes DISOLVER CALENTAR Para poder disolverlo hasta su ebullición .

5 gramos AÑADIR En el mismo papel COLOCAR En papel Agar 0.8 gramos AÑADIR En el mismo papel PESAR En la balanza COLOCAR En una fiola con 0. Agar sabouraud Glucosa 2 gramos pectona 0.25 ml de agua destilada HECHAR Agua destilada por las paredes DISOLVER CALENTAR Para poder disolverlo hasta su ebullición .

 Pectona  Cloruro de sodio  Extracto de caree  Colocarlo todo en la fiola para disolverlo.  Calentarlo hasta que se disuelva y llegue a su ebullición .

Edit.com/ensayos/Medios-DeCultivo/933305..casadelabuelasilvia.slideshare. E. M. México. 1991 Microbiología.A BRYAN y C. Bacteriología.com.html  http://www. BRYAN. Continental. BIBLIOGRAFÍA  BRYAN.C. LINKOGRAFÍA  http://www.  PELCZAR. D. CHAN.. 4ta. Principios Y prácticas. REID y E.G. J.S. Edit.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/ca tedraMicro/10_AgarSabouraudDextrosa.ar/index. Mac Graw-Hill. IX. España. A.VIII.buenastareas.ucv.pdf  http://www.php?option=com_ content&view=article&id=3408:caldo-comuncaldo&catid=62:sopas-pures-cremas . Ed. h: C.net/ESLAMA356/manual-de-practicas-2012  http://www. 1984.