1. Dada la Rx. genrica de la trayectoria enzimtica, K1= 1x107, K-1= 1x102 y Kp= 3x102.

Halle:

a. Ks b. Km c. Kp>>>K1??

2. Los sgtes. datos se obtuvieron de una reaccin de seguimiento de aldolasa en hgado:

1. 2 3. 4. 5.

[S] mM 6,25 x 10-6 7,5 x 10-6 1 x 10-4 1 x 10-3 1, 00 x 10-2

V (nm/l.s) 15 56,25 60 74,9 75

a) Calcule Vm y Km b) Calcule la velocidad a una [S] de 5 x 10-5 mM duplicando la concentracin de la enzima. 3. Elaborar un esquema de comportamiento hiperblico rectangular considerando valores de Km y la concentracin de [S] en unidades de Km y velocidad de %. 4. a. Qu fraccin de la Vm se observa a una [S] 4km? b. Cul es la tasa de concentracin de sustrato requerida para [S] 90%Vm/ [S] 10%Vm?

5. a. Se determin que el Km de una enzima era 2 x 10-3. Si la [S] era 1 x 10-5 al comienzo y al cabo de 1 min el 2% de sustrato haba pasado a producto. Calcule el % de sustrato que queda sin reaccionar despus de 3 min. b. Si la [S] inicial hubiese sido 0,25 M, Cunto P se forma en 4 min? c. Calcule Vm con las condiciones iniciales. d. Calcule el t1/2 en segundos. Cunto tiempo demora la formacin de 35% de P cuando la reaccin se inicia con una [S] 200 veces menor de Km? Haga la deduccin de la Ec. M-M con la hiptesis de la etapa estacionaria. Haga la deduccin del grafico para el clculo de Ki para una inhibicin No Competitiva. Haga la deduccin de la Ec. M-M de una Inhibicin Acompetitiva con la hiptesis de la etapa estacionaria. Determine el fundamento clnico de la Inhibicin producido por cada uno de los quimioteraputicos de la lectura. Qu relacin hay entre la act. Enzimtica afectada por la T y la E de activacin.

6. 7. 8. 9. 10. 11.

12. En un estudio de caracterizacin enzimtica disee el flujo de investigacin a seguir que usted recomendara para llegar a determinar fiablemente km y vm. 13. Describa y esquematice la activacin proteoltica que sucede en el tripsingeno. 14. Ahora para el quimiotripsinogeno. 15. Explique detalladamente la cascada de modificacin covalente que se produce en la coagulacin de la sangre, sustente porqu si se inicia el proceso de coagulacin, no nos coagulamos completamente.

Enzimologa Problemas Propuestos 1. Se obtuvieron los datos de cintica siguientes para el seguimiento de la reaccin de CO2 y agua para producir bicarbonato por accin de la anhidrasa carbnica: + CO2 + H20 HCO3 + H Determine Km y Vmx grficamente haciendo uso de los grficos L.B y H-W Compare la data obtenida y haga la discusin de resultados correspondiente -1 -1 [ CO2 ] moles.L 1/ V expresado en M . seg 2 1.25 36 x 10 3 2.5 20 x 10 3 5.0 12 x 10 3 20 6 x 10 2. El tejido embrionario de hgado contiene una enzima que cataliza la reaccin enzimtica de sntesis proteica por accin de la peptidil transferasa. El tejido heptico adulto tambin presenta actividad enzimtica para la misma reaccin. Al hacer seguimiento de la reaccin en ambos tipos de tejidos se obtuvieron los siguientes resultados: 1/[S] -1 expresado en M 0.60 x 10 5 0.30 x 10 5 0.14 x 10 4 1.00 x 10 4 0.66 x 10 4 0.60 x 10 4 0.50 x 10 4 0.33 x 10
5

1/ V expresado en L. min. milimoles Tejido heptico adulto Tejido heptico (E1) embrionario (E2) -2 -2 95.24 x 10 20.00 x 10 -2 -2 50.50 x 10 12.50 x 10 -2 -2 26.50 x 10 8.70 x 10 -2 -2 20.00 x 10 7.5 x 10 -2 -2 15.00 x 10 6.6 x 10 -2 -2 14.00 x 10 6.5 x 10 -2 -2 12.50 x 10 6.3 x 10 -2 -2 10.00 x 10 5.8 x 10

-1

a)Del grfico de Eadie Hofstee obtener valor de Km y Vmx b) Qu conclusiones puede sacar respecto a las dos enzimas? 3. Se hizo el seguimiento de la accin de las sulfas sobre la sntesis de cido para -aminobenzoico a fin de evaluar la actividad bacteriosttica de este medicamento Se evalu la velocidad de reaccin obtenida a diferentes concentraciones de sustrato y en ausencia de inhibidor, as como la velocidad de reaccin en las mismas condiciones pero cuando estaban presentes diferentes concentraciones de inhibidor. La data obtenida se resume en la siguiente tabla: 1/V -1 1/ [S] en uM [Inh] = 0 [Inh] = 1mM [Inh] = 2mM 0.20 0.15 0.10 0.05 0.02 0.00625 0.00515 0.00380 0.00250 0.00174 0.009009 0.007143 0.005464 0.003584 0.002500 0.013160 0.010530 0.078130 0.005314 0.003610

a) se desea saber qu tipo de Inhibidor es la sulfa para la accin de PABA (c. Para-amino benzoico) sintetasa b) Qu conclusiones puede sacar con respecto al efecto de la concentracin del inhibidor es una relacin lineal o inversamente proporcional? 4) . Se investig la accin de dos tipos de inhibidores de ureasa denominados Inhibidor Z23 y P45. Se desea saber cul es el mecanismo de accin de estos inhibidores y qu recomendaciones dara para mejorar la velocidad data obtenida. La tabla resume los valores encontrados 1/v (L.seg nanomoles ) 1/[S] expresado en uM
-1 -1

1/v (L.seg nanomoles ) [Inh] = Z 23 0.1mM

-1

1/v (L.seg nanomoles ) [Inh] = P45 0.1 mM 10 8.0 6.00 4.00 3.00 2.40

-1

[Inh] = Ninguno

4.0 3.0 2.0 1.0 0.5 0.2

5.0 4.0 3.0 2.0 1,5 1.2

7.75 6.10 4.35 2.60 1.80 1.30

5. Las velocidades inciales de hidrolisis de la N-acetil-fenilalaminamida a diversas concentraciones por el alfa-quimotripsina, estn indicadas en la tabla. Cul es la Km? Calcular por dos mtodos grafico, saque conclusiones de los grficos obtenidos Concentracion de velocidad inicial substrato (mM) 10.5 16.1 20 35 93.4 (milimoles de alamina min-1) 0.0333 0.0455 0.0556 0.0715 0.1

6) Una forma de expresar el grado de inhibicin es mediante el indicador de actividad relativa (Ar = Vel inh /vel sin inh) , cul sera la actividad relativa y elk grado de inhibicin porcentual (i% = 1 Ar)100) si una reaccin enzimtica transcurre en presencia de un inhibidor competitivo que se encuentra cuando la concentracin de sustrato es equivalente al Km y la concentracin de inhibidor competitivo es equivalente a 1 ki 7) Hacer un cuadro comparativo resumen de los grficos LB-HW-WAH y E-Scat para una reaccin sin inhibir , una inhibicin competitiva, no competitiva y acompetitiva.