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BIOTECNOLOGIA Es evidente el enorme progreso que han experimentado las Ciencias Biológicas en los últimos años, que ha ido

ligado de manera directa a los avances experimentados por algunas de las ramas de la Biología como son la Genética, la Microbiología y la Biología molecular. No está lejos el día en que la denominada Ingeniería genética permita que por ejemplo un hemofílico pueda recibir factores de coagulación obtenidos por biotecnología, sin que tenga que correr el riesgo de una posible infección trasmitida por los posibles donantes. También es evidente el desarrollo experimentado por la agricultura, la farmacia, la alimentación o la protección del medio ambiente, no debemos olvidar la aparición de organismos transgénicos, el desarrollo de fármacos específicos o de hormonas, la gran variedad de productos comerciales obtenidos mediante procesos de fermentación en la denominada microbiología industrial o, por último, los avances en tratamientos de aguas residuales o la biodegradación del petróleo. Pero no todo lo relacionado con la Biotecnología es positivo, entra dentro de lo posible, en el campo negativo, que algunas empresas o compañías de seguros puedan disponer de información del genoma de las personas, lo que de alguna manera podría condicionar las relaciones laborales o las primas de esas compañías. La Biotecnología, por tanto puede presentar aspectos positivos o negativos, para evitar los segundos es necesario un profundo conocimiento de esta disciplina y de las consecuencias que su desarrollo y aplicación pueden tener, tanto de tipo social como de tipo ecológico. La Biotecnología es una disciplina que conecta la biología con la técnica, es decir es la ciencia que trata de la utilización de los microorganismos en los procesos industriales. Recientemente se prefiere definir como la disciplina que se basa en la utilización de seres vivos o de sus componentes para realizar determinados procesos químicos con finalidad industrial. Son conocidos, desde hace mucho tiempo, algunos procesos biotecnológicos como las fermentaciones alcohólica, láctica o butírica, alguna de las cuales se remonta a civilizaciones muy antiguas. En sentido actual la biotecnología se identifica frecuentemente con la aplicación industrial de la Ingeniería genética, que utiliza seres vivos modificados para producir compuestos como insulina humana, hormona humana del crecimiento, vacunas, enzimas, antibióticos etc., lo que implica la aplicación de procedimientos genéticos para crear nuevos organismos capaces de sintetizar esos productos específicos de elevado valor comercial. Como se deduce de lo anteriormente expuesto por definición la Biotecnología depende de la Ingeniería genética que es la ciencia que se ocupa de la manipulación (modificación) de los genes y consecuentemente, de los productos elaborados a partir de ellos. Los productos que se pueden obtener mediante Ingeniería genética tienen un enorme interés industrial, lo que ha impulsado un desarrollo, de impredecibles consecuencias, cuyo objetivo es aislar y patentar genes que puedan tener una aplicación terapéutica, los denominados “genes terapéuticos”. Así, los productos terapéuticos o las patentes génicas registradas aumentan de una manera constante. Los medicamentos del futuro se podrán diseñar específicamente. El conocimiento y secuenciación del genoma humano, también el de animales, plantas u otros organismos, permitirá diseñar productos que puedan usarse en la terapia frente a las enfermedades, en la mejora de los rendimientos agrícolas o ganaderos o en la lucha contra la contaminación. Microorganismos utilizados en biotecnología Los principales microorganismos utilizados en la Ingeniería genética son básicamente bacterias y hongos del tipo de los actinomicetos, las levaduras o los mohos; representan unos pocos centenares de especies que proporcionan productos de interés comercial como proteínas, enzimas, polisacáridos, etanol, ácido acético, acetona, vitaminas, antibióticos, hormonas etc.

Principales técnicas empleadas en biotecnología Además de las técnicas tradicionales basadas en las fermentaciones, en la actualidad las técnicas biotecnológicas se basan en el desarrollo de la ingeniería genética. La Ingeniería genética es una tecnología avanzada que permite modificar la composición genética de un organismo al introducir en él uno o más genes procedentes de otro organismo. Los organismos modificados mediante ingeniería genética se conocen como organismos transgénicos. Herramientas de la Ingeniería genética La Ingeniería genética se sirve de los avances de la Biología molecular que permiten utilizar células y moléculas como auténticas herramientas. Entre ellas tenemos que citar: Enzimas de corte o de restricción Un vehículo o vector Enzimas “de pegado” o ADN ligasas a) Enzimas de corte o de restricción, actúan como “tijeras moleculares” que cortan el ADN por secuencias específicas denominadas secuencias de reconocimiento. Posteriormente estos fragmentos de ADN podrán unirse a vectores de clonación que hayan sido cortados por el mismo procedimiento enzimático. En la actualidad se conocen varios cientos de enzimas de restricción.

b) Un vehículo o vector. Se utiliza para mover los genes. Los vectores más utilizados son plásmidos bacterianos, pequeñas moléculas circulares de ADN que incorporan con facilidad ADN foráneo (procedente de otro organismo) y que son fácilmente transferidos a otras células.

c) Enzimas “de pegado” o ADN ligasas. Unen fragmentos de ADN de distinta procedencia y originan un ADN híbrido, el denominado ADN recombinante. Etapas en la transferencia de genes El método utilizado por la Ingeniería genética se inicia con el aislamiento del gen que se desea transferir, y tiene como objetivo final la expresión de ese gen, es decir la síntesis de una determinada proteína. El proceso se desarrolla según las siguientes etapas: a) Obtención del ADN híbrido: Las enzimas de restricción cortan el ADN de la célula donadora en pequeños fragmentos entre los que se encuentra el gen de interés que se quiere transferir (por ejemplo el gen de la insulina). Con las mismas enzimas se cortan los plásmidos que se van a utilizar como vectores. Las ADN ligasas insertan en cada plásmido un fragmento de ADN foráneo. Los plásmidos híbridos penetran en las bacterias receptoras y algunas incorporan el gen de interés b) Clonación de genes. Se aíslan las bacterias modificadas genéticamente y se cultivan por separado para obtener clones. Cada clon de bacterias contiene un gen foráneo repetido infinidad de veces. El conjunto de clones obtenidos recibe el nombre de genoteca y representa la totalidad del genoma del organismo.

Para que el proceso concluya con éxito no basta con que la célula haya incorporado el gen foráneo, sino que además este tiene que expresarse, lo que se sabe si la célula fabrica la proteína deseada. Los clones así obtenidos pueden utilizarse en la industria para fabricar esa proteína, se detecta y selecciona el clon deseado a partir de la genoteca para posteriormente producir un gran número de células que contengan el clon buscado para su aislamiento y estudio.

Estructura del plásmido pBR332

Los plásmidos son útiles vectores de clonación debido a algunas de sus propiedades características: El ADN circular es altamente estable durante su aislamiento químico. Su pequeño tamaño facilita su aislamiento y manipulación. Presenta un origen de replicación independiente, fuera del control del cromosoma. Presenta zonas características denominadas marcadores en las que se localizan genes de resistencia a antibióticos lo que facilita la detección y selección de los clones. Además de los plásmidos también se usan como vectores de clonación algunos bacteriófagos, genomas modificados de adenovirus o cromosomas artificiales de levaduras etc. Huéspedes para vectores de clonación Para que la clonación génica tenga éxito, el huésped, debe presentar una serie de características: a) Capacidad de crecimiento rápido y en un medio de cultivo barato.

b) No ser dañino ni patógeno. c) Ser capaz de aceptar un ADN foráneo y que este permanezca estable en el cultivo. d) Debe contener las enzimas adecuadas que permitan la replicación del vector. Los huéspedes más útiles para la clonación son microorganismos que crecen bien y de los que se conoce bien su información genética, los más usados son Escherichia coli y Bacillus subtilis entre los procariotas y Sacharomyces cerevisiae entre los eucariotas. ADN sintético y PCR En la actualidad es posible clonar genes a partir de ARN-m e incluso la fabricación de ADN sintético. Una vez que se tiene es amplificado rápidamente mediante la técnica PCR (reacción en cadena de la ADNpolimerasa) que puede multiplicar moléculas de ADN hasta cien mil veces en un tubo de ensayo, es una técnica por tanto "in vitro" (en el laboratorio, no en el ser vivo) En el primer caso lo que se hace es obtener una hebra de ADN a partir de una cadena de ARN-m mediante una transcripción inversa. Posteriormente, a partir de la hebra de ADN obtenida y por acción de la ADN polimerasa, se obtiene una cadena doble de ADN que luego puede ser insertado (clonación) en un plásmido o en otro vector. Esta técnica presenta la ventaja de que al ARN-m no contiene intrones. Las siglas PCR indican la denominada reacción en cadena de la polimerasa, método de clonación que hace uso de la enzima ADN-polimerasa, la cual es capaz de copiar moléculas de ADN. Esta PCR puede multiplicar moléculas de ADN por cien mil veces en un tubo de ensayo. En resumen, la técnica PCR se desarrolla así: a)el fragmento de ADN a replicar se introduce en una disolución que contiene ADN-pol. b)se añaden desoxirribonucleótidos en cantidad y las moléculas de cebador sintetizadas. c)al calentar, se separan las hebras complementarias de los fragmentos de ADN. d)si se enfría, se unen los cebadores a las hebras simples de nucleótidos, lo cual es reconocido por la ADN-pol que comienza a añadir nucleótidos formando la hebra complementaria. e)calentando y enfriando alternativamente la solución, se pueden obtener millones de copias de ADN en períodos de tiempo cortos.

Esta técnica permite: a) Obtener grandes cantidades de genes para los procesos de clonación. b) También se usa esta técnica en estudios comparativos o evolutivos. Debido a su sensibilidad ha sido usada para clonar ADN de restos humanos momificados e incluso con restos de animales o plantas fósiles. c) También es muy útil en la práctica forense, pues permite amplificar cantidades muy pequeñas de ADN presentes en una muestra.

Aplicaciones de la ingeniería genética Entre las aplicaciones de la ingeniería genética podemos citar las siguientes: En el campo de la medicina se usan para la fabricación de gran cantidad de productos farmacéuticos (producción de insulina o de vacunas), tratamientos de terapia génica dirigidos a tratar de curar enfermedades genéticas humanas, utilización de animales transgénicos que se utilizan para producir proteínas humanas de gran valor farmacológico. En el campo de la agricultura y la ganadería se usan para conseguir plantas resistentes a herbicidas o al ataque de determinados insectos, mejoras de los productos o la protección frente a los ataques de cepas microbianas o de determinados virus. En la industria tradicional se usa la Biotecnología en todos los proceso de fermentación por ejemplo en la fabricación del vino. Son muy variados los productos que se obtienen en estos procesos de fermentación y que se comercializan, entre ellos: antibióticos, vitaminas y aminoácidos, hormonas esteroideas, gran variedad de enzimas, vinagre, conservantes y acidulantes alimentarios, levaduras, bebidas alcohólicas, alcohol etílico a granel etc. También debemos hablar de las aplicaciones medioambientales, como la biodegradación del petróleo, los tratamientos microbiológicos de aguas residuales o la remediación de vertidos tóxicos. Algunas de las aplicaciones de la biotecnología ya se han estudiado en el tema referente a microorganismos. Alimentación Es la biotecnología con mayor tradición en la historia de la civilización humana, y dada la gran competitividad de la industria alimentaria, son numerosos los proyectos de I + D que se dedican a estudiar cómo acelerar procesos de fermentación y de mejora de los alimentos primarios en los que las nuevas técnicas biotecnológicas desempeñan un papel crucial. Así se utilizan actualmente bacterias y levaduras genéticamente manipuladas para acelerar la elaboración de los procesos fermentativos que dan lugar al queso, yogurt, cerveza... Fabricación del pan: • Las levaduras de la especie Saccharomyces cerevisiae llevan a cabo una fermentación alcohólica, que emplea como sustratos los azúcares presentes en la harina de trigo. • Los productos resultantes son etanol, que se evapora en la cocción, y CO2, responsable de que la masa “suba”, es decir, aumente de volumen y se esponje. La reacción es la siguiente: C6H12O6  2 CH3 – CH2OH + 2 CO2 + 2 ATP Glucosa  2 Etanol + 2 CO2 + 2 ATP • La elaboración del pan consiste en mezclar, en un primer paso, harina, agua, sal y levadura. Al entrar en contacto con el agua, las amilasas presentes en la harina se activan e hidrolizan el almidón a mono y disacáridos, azúcares que son rápidamente fermentados por la levadura. El CO2 resultante queda atrapado en el interior de la masa y forma un gran nº de pequeñas burbujas que determinan el aspecto esponjoso del mismo. La cocción de la masa elimina el etanol producido en la fermentación y destruye las células de levadura. Asimismo, tiene lugar una importante reducción en el contenido de agua. Fabricación del vino y la cerveza Intervienen también levaduras de la especie Saccharomyces cerevisiae que llevan a cabo una fermentación alcohólica semejante a la del pan, pero usando como sustrato los azúcares presentes en el mosto, el zumo natural de las uvas, rico en fructosa y glucosa. La levadura se encuentra de forma natural en la piel de las uvas. Se obtiene etanol y CO2. El proceso de fabricación del vino se inicia con el prensado de las uvas para obtener el mosto. Las levaduras de la uva comienzan la fermentación rápidamente, aunque en la producción industrial del vino se añaden cepas de levaduras seleccionadas con el fin de acelerar el proceso y de incrementar el contenido de etanol. La fermentación dura unos pocos días. Durante este tiempo es necesario controlar la velocidad mediante la temperatura, ya que si ésta aumenta mucho puede llegar a destruir las levaduras. Cuando termina la fermentación, el vino se aclara (mediante filtrado y añadiendo compuestos que

facilitan la precipitación de los elementos en suspensión) y se embotella, si se desea obtener vinos jóvenes, o se somete a un proceso de maduración en barricas apropiadas, para envejecerlo. El vino blanco y el tinto se elaboran a partir del mosto de uvas blancas o negras. Para obtener vino tinto hay que dejar la piel de la uva negra (el hollejo) en el vino. El alcohol producido en la fermentación extrae los pigmentos del hollejo que son los que dan el color al vino. El CO2 resultante se evapora o se elimina artificialmente. En el caso de los vinos espumosos, se les añade una cantidad extra de azúcar para que se produzca una segunda fermentación alcohólica que se realiza a presión. En ella se libera el CO2 que constituye las burbujas. La obtención de cerveza es algo más complicada, pues se elabora a partir de cereales que contienen en sus granos almidón, que no fermenta directamente. Al germinar sus semillas producen amilasas, que convierten el almidón en glucosa. Así, la malta (granos de cebada germinados y tostados), cuando se muele con agua, libera las amilasas que hidrolizan al almidón a glucosa, que es el sustrato para la fermentación alcohólica, que dura de 5 a 10 días. El producto final se consigue mediante la incorporación de algunos aditivos, como las flores de lúpulo, responsables del sabor amargo de la cerveza. También se filtra y se pasteuriza, antes de que pueda ser bebida. Fabricación del queso y leches fermentadas En la elaboración del queso y productos como el yogur o la cuajada interviene las llamadas bacterias lácticas (pertenecientes a diversos géneros, como Streptococcus, Lactobacillus y Lactococcus), que fermentan azúcares sencillos para producir ácido láctico. La reacción de la fermentación láctica es la siguiente: C6H12O6 2 CH3 – CHOH – COOH + 2 ATP o a partir de lactosa Lactosa  2 glucosa  4 ácido láctico + 2 ATP Se utiliza leche entera, y como bacterias Streptococcus termophillus (realiza una fermentación heteroláctica dando ácido láctico y etanol) y_Lactobacillus bulgaricus (realiza fermentación homoláctica). El proceso es el siguiente: se incuba la leche y las bacterias durante unas 8 horas (a 35-40° C), y se produce la fermentación; para eliminar el olor característico debido al láctico y al acetaldehído, se añaden aditivos (aromatizantes) y sustancias con sabor a fruta. Las bacterias utilizadas son anaerobias pero tolerantes al oxígeno.

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La elaboración del queso se lleva a cabo en 3 etapas: 1) Adición a la leche de renina, también llamada cuajo, una enzima que se encuentra en el estómago de los rumiantes. En combinación con el ácido láctico producido por las bacterias lácticas de la leche, la renina precipita (coagula) las proteínas lácticas, formando un producto sólido, la cuajada, que se separa posteriormente del componente líquido, el suero lácteo. 2) Separación del suero y la cuajada, mediante un proceso de filtración, haciendo pasar el conjunto a través de telas limpias. A continuación se añade sal a la cuajada y se prensa para expulsar el agua. 3) Maduración del queso: Según el tipo de queso, en esta etapa final intervienen otras bacterias y mohos, responsables del sabor y el olor propios de cada variedad de queso. Los agujeros característicos de algunos de ellos son el resultado del CO2, desprendido durante la fermentación, que queda atrapado en la masa del queso y forma burbujas.

Procesos de interés ambiental • Como ya explicamos, algunos microorganismos son útiles en la lucha frente a la contaminación, un proceso denominado Biorremediación. • Actualmente se utilizan microorganismos capaces de consumir diversas sustancias tóxicas que pueden utilizarse para descontaminar áreas de la superficie, del subsuelo o de las aguas subterráneas. • La ingeniería genética está empezando a estudiar diversas bacterias procedentes de medios naturales, en las que se ha detectado la existencia de genes para la biodegradación de desechos

tóxicos, como pesticidas clorados, clorobencenos, naftaleno, tolueno, anilinas... Los genes deseados se aíslan de especies como Pseudomonas y Alcaligenes y posteriormente se clonan mediante plásmidos. Así se consigue aumentar su efectividad. Además de las aplicaciones ya estudiadas, se están potenciando mediante ingeniería genética la capacidad natural de muchas plantas para concentrar metales pesados, a fin de utilizarlas para recuperar suelos contaminados (p.e. en el caso del cauce del río Guadalquivir después del vertido de la balsa minera de Aznalcóllar). Actualmente se está procediendo a la selección de las formas adecuadas y a su experimentación.

Farmacia y Sanidad • Antibióticos: Son sustancias químicas, sintetizadas por microorganismos, que impiden el crecimiento de otros microorganismos o bien causan su muerte. El primero en descubrirse fue la penicilina, por Alexander Fleming en 1929. Desde entonces, muchos más han sido obtenidos en la industria farmacéutica, principalmente a partir de hongos filamentosos como Penicillium, o bacterias del grupo de los Actinomicetos, como el gén. Streptomyces. Actualmente se conocen unos 10.000 antibióticos, y se siguen descubriendo otros nuevos, aunque sólo unos 100 están comercializados. En algunos casos son muy específicos, mientras que otros son efectivos frente a un amplio nº de agentes infecciosos (antibióticos de amplio espectro) • Vacunas: Se obtienen con preparaciones de agentes patógenos muertos y atenuados, para inducir inmunidad frente al germen activo. Actualmente se obtienen mediante ingeniería genética, clonando los genes que codifican la proteína que actúa como antígeno. Luego esa proteína se introduce en bacterias no patógenas, que, al incorporar ese gen a su cromosoma, fabrican grandes cantidades del antígeno, que, una vez aislado y purificado, se utiliza directamente como vacuna y desarrollará la respuesta inmune, sin problemas de posibles infecciones, como sucede con las vacunas tradicionales en algunas ocasiones. Este tema se desarrollará más ampliamente en la unidad siguiente. • Hormonas: Se obtienen mediante ingeniería genética, introduciendo plásmidos recombinantes que portan el gen que codifica la hormona deseada en bacterias apropiadas. Una vez en el interior de la célula, los plásmidos se autorreplican al tiempo que las bacterias crecen y se dividen, obteniéndose una población de células idénticas (clon) que contienen el gen. Así se consigue, p.e., la insulina humana (proteína que permite que las células asimilen los glúcidos que circulan por la sangre), la hormona del crecimiento humana y la eritropoyetina (EPO) que se utiliza en diferentes tipos de anemias, pues estimula la producción de eritrocitos (glóbulos rojos). PREGUNTAS DE SELECTIVIDAD (PAU ANDALUCÍA)
Defina microorganismo [0’5]. Cite un ejemplo de relación beneficiosa [0’25] y otro de relación perjudicial [0’25] entre los microorganismos y la especie humana. Defina biotecnología [0’5]. Exponga en ejemplo de aplicación biotecnológica [0’5]. Microorganismo: ser vivo de pequeño tamaño que no puede ser percibido por el ojo humano sin la ayuda de un microscopio.......... 0,5 p Relación beneficiosa (directa o indirecta): producción de alimentos, medicamentos y vacunas; papel en los ciclos de la materia y cadenas tróficas, etc. Relación perjudicial: infecciones bacterianas, víricas y fúngicas, deterioro y putrefacción de alimentos, etc. (0,25 puntos cada una) .......0,5 p Biotecnología: conjunto de procesos industriales que utilizan microorganismos o células procedentes de animales o vegetales para obtener determinados productos.... 0,5 p Ejemplo de aplicación biotecnológica: obtención de hormonas, fermentaciones industriales, alimentos transgénicos, etc....... 0,5 p Defina microorganismo [0’5]. Cite un ejemplo de relación beneficiosa [0’25] y otro de relación perjudicial [0’25] entre los microorganismos y la especie humana. Defina biotecnología [0’5]. Exponga en ejemplo de ap licación biotecnológica [0’5]. Microorganismo: ser vivo de pequeño tamaño que no puede ser percibido por el ojo humano sin la ayuda de un microscopio .......... 0,5 p Relacion beneficiosa (directa o indirecta): producción de alimentos, medicamentos y vacunas; papel en los ciclos de la materia y cadenas troficas, etc. Relacion perjudicial: infecciones bacterianas, viricas y fungicas, deterioro y putrefaccion de alimentos, etc. (0,25 puntos cada una) .......0,5 p

Biotecnologia: conjunto de procesos industriales que utilizan microorganismos o células procedentes de animales o vegetales para obtener determinados productos.... 0,5 p Ejemplo de aplicacion biotecnologica: obtencion de hormonas, fermentaciones industriales, alimentos transgenicos, etc....... 0,5 p La leche pasteurizada “se corta” cuando se deja a temperatura ambiente en una tarde de agosto. No ocurre lo mismo cuando se guarda en el interior de un frigorífico. De una explicación razonada a este hecho [1]. La leche se contamina espontáneamente con las bacterias del ácido láctico. Cuando se expone a temperatura ambiente alta para la multiplicación de las bacterias, éstas proliferan rápidamente y fermentan la lactosa de la leche cortándola.......... 0,5 puntos En refrigeración, la proliferación de las bacterias está atenuada por la baja temperatura........ 0,5 puntos Suponga que desaparecieran todas las bacterias de la Tierra. Proponga de manera razonada cuatro argumentos que pongan de manifiesto el perjuicio que provocaría esta desaparición [1]. Desaparición de: productores de ecosistemas acuáticos, descomponedores, flora normal o habitual del cuerpo humano, flora gastro-intestinal de rumiantes, además no podrían obtenerse algunos productos elaborados industrialmente, etc., (0,25 puntos cada argumento) Explique el proceso general que permite la obtención de hormona del crecimiento humano a partir de microorganismos modificados genéticamente [0,9]. Indique tres ventajas que ofrezca el empleo de hormona obtenida por este método frente a la obtenida a partir de hipófisis de animales [0,6]. Debe describirse la clonación y expresión de un gen humano en un microorganismo ............... 0,9 puntos Ventajas: abaratamiento, se trata de la misma hormona humana, no produce reacciones alérgicas, se puede obtener sin contaminantes, esta forma de producción supone una mayor accesibilidad para los usuarios............. 0,6 puntos